应用IP-2D nano-HPLC-MALDI-TOF-TOF鉴定蛋白质泛素化修饰

近年来,在蛋白质研究中,特别是在蛋白质翻译后修饰(PTM)的研究中,生物质谱技术的应用越来越广泛,与纳升级HPLC的联合应用,使这一技术手段更加有效.针对泛素化在细胞功能调控中发挥关键作用的PTM的特点,将免疫沉淀、2Dnano-HPLC和基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱(IP-2D nano-HPLC-MALDI-TOF-TOF)有机整合,建立了天然状态下蛋白质泛素化位点的鉴定方法,并应用这一方法确定出K562细胞内具有酪氨酸激酶活性的蛋白c-ABL的泛素化位点.为定性鉴定生理和病理状态下内源性蛋白的泛素化修饰提供了借鉴.

IP-RP-HPLC法同时测定感冒清片中3种成分

目的建立离子对反相高效液相色谱(IP⁃RP⁃HPLC)法同时测定感冒清片(南板蓝根、大青叶、对乙酰氨基酚等)中3种成分的含有量。方法该药物25%甲醇提取物的分析采用Waters XTerra C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相甲醇⁃0.02 mol/L磷酸二氢钾,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长215 nm。然后,按照2015年版《中国药典》四部方法计算含有量均匀度。结果对乙酰氨基酚、盐酸吗啉胍、马来酸氯苯那敏分别在96.66~966.63μg/mL(r=0.9999)、95.48~954.80μg/mL(r=0.9998)、4.08~40.84μg/mL(r=1.0000)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.9%、99.5%、99.6%,RSD分别为1.2%、0.9%、1.2%。结论该方法简便、快速、准确,可用于感冒清片的质量控制。

IP—HPLC法测定食品中甜味剂的研究

通过用离子对试剂作流动相，测定安赛蜜、阿斯巴甜、糖精钠、甜蜜素四种甜味剂，方法简单，准确快速，对样品的前处理简单快速，不需要衍生即可应用于测定，在食品检验中具有实际应用价值。

复合维生素B注射液中四种水溶性维生素的离子对-HPLC法测定

复合维生素B注射液是多种维生素的复合制剂。主要成分是维生素B1(1)、维生素B2(2)、维生素B6(3)和烟酰胺(4)。临床常用于营养不良、食欲不振、脚气病。

反相离子对HPLC法测定晕宁贴膏中氢溴酸东莨菪碱的含量

目的 建立晕宁贴膏的含量测定方法。方法 采用ODSC18色谱柱 (2 5 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,以甲醇 -水 (含 0 .0 2 5mol·L-1庚烷磺酸钠及 0 .0 5mo1·L-1醋酸钠 ,以醋酸调pH =4 .6 ,) (4 5∶5 5 ) ,为流动相 ;流速 :1.0ml/min ;检测波长 :2 2 7nm ;柱温 :室温 ;外标法测定。结果 氢溴酸东莨菪碱在 1.32～ 13.2 μg范围内线性关系良好 (r =0 .9999) ;平均回收率 99.0 7% ,n =6 ,RSD为 0 .5 8% ;重现性试验RSD为 0 .5 0 %。结论 此方法简便、快速、准确 ,可作为晕宁贴膏的含量测定方法。

反相离子对-高效液相色谱法测定河豚毒素

目的 :建立了反相离子对 -高效液相色谱法测定河豚毒素含量的方法。方法 :选用 SHIMADZU ODS色谱柱 (15 0× 6 mm5 μm) ,以 0 .2 % (v/v)醋酸液为流动相 ,流速为 1.2 m L/m in,检测波长为 2 30 nm。结果 :河豚毒素线性范围 2 0～ 10 0 μg/m L,r= 0 .996 0 (n=5 ) ;回收率为 93.32 % ,RSD=5 .41% (n=5 ) ;日内精密度为 6 .10 % ,日间精密度为 7.42 % (n=5 ) :最低检测限5 0 ng。结论 :方法准确、快速、简便 。

离子对反相液相色谱-原子荧光光谱法测定畜禽肉中5种硒形态含量

建立了一种测定畜禽肉类中硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒酸根和亚硒酸根含量的离子对反相液相色谱-原子荧光光谱分析方法。样品中有机硒通过胰蛋白酶和蛋白酶(XIV,链霉蛋白酶)酶解提取,无机硒通过碘乙酰胺溶液提取,于55℃水浴200 r·min-1振荡提取20 h,提取液高速离心后再经超滤管离心净化,C18反相色谱柱分离,30 mmol·L^(-1)磷酸氢二铵、0.5 mmol·L^(-1)四丁基溴化铵和5%(V/V)甲醇为流动相,用20%(V/V)甲酸调节流动相溶液pH至6.0,离子对反相液相色谱-原子荧光光谱法测定样品溶液中5种硒形态含量。采用与标准样品对照法定性,峰面积外标法定量。保留时间定性,外标法峰面积定量。硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒酸根和亚硒酸根在5~200μg·L^(-1)范围内线性良好,相关系数均大于0.999,其检出限分别为0.89,0.78,0.55,0.94和0.70μg·L^(-1),加标回收率为76.8%~109%,批内精密度和批间精密度分别为2.7%~7.8%和3.5%~12.3%。本方法具有快速简便、灵敏和准确等优点,适用于畜禽肉类样品中硒形态分析测定。

反相高效液相色谱法测定二乙烯三胺五醋酸注射液的含量

目的:研究二乙烯三胺五醋酸三钠锌盐及三钠钙盐注射液的离子对高效液相色谱测定。方法:以ODS(5μm,5mm×150mm)为色谱柱,流动相为甲醇-0.05mol/L醋酸钠缓冲液(pH4.5)(5:95),内含5mmol/L四丁基碘化胺,内标物为乙二胺四乙酸二钠,二乙烯三胺五醋酸(DTPA)及乙二胺四乙酸,(EDTA)与Fe^(3+)螯合成DTPA-Fe(Ⅲ)和EDTA-Fe(Ⅲ)复合物,其检测波长为280nm。结果:二乙烯三胺五醋酸的线性范围在20～320μg/ml,其三钠锌盐和三钠钙盐注射液5次测定的平均回收率±RSD分别为(101.33±0.65)％和(100.59±0.58)％。结论:此法重现性好,灵敏、特异,消除了多种金属离子的干扰。

离子对色谱法同时测定吴茱萸中的辛弗林、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量

目的建立一种能同时测定吴茱萸中辛弗林、吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的离子对色谱方法。方法采用甲醇超声提取方法制备样品。以乙腈-含0.03%十二烷基磺酸钠(SDS)的2%醋酸为流动相,检测波长为260 nm。结果辛弗林、吴茱萸碱和吴茱萸次碱都获得了良好的分离效果,其平均回收率分别为101.4%、97.6%和98.5%,RSD分别为3.1%、1.6%和1.3%(n=6)。结论本法适用于吴茱萸药材中辛弗林、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的同时分析,为吴茱萸药材的质量评价提供了更好的技术手段。

反相离子对色谱法测定环维黄杨星D含量

目的:建立环维黄杨星 D 的含量测定方法。方法:采用 Apollo C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为5 mmol·L^(-1)庚烷磺酸钠溶液(内含0.15%的三乙胺,磷酸调节 pH 至3.1)-乙腈(73:27,v/v),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长203 nm。结果:环维黄杨星 D 主峰峰形对称,与杂质峰分离良好。在0.12～0.72 mg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9994),平均回收率(n=3)为98.4%～99.0%,RSD 为0.3%～0.9%。结论:本法操作简单、结果准确,具有良好的重复性,可用于环维黄杨星D的含量测定。

反相离子对高效液相色谱法测定硫酸羟氯喹片的含量

目的 :建立硫酸羟氯喹片含量测定的反相离子对高效液相色谱法。方法 :以ODS为固定相 ,0 .0 5mol·L-1磷酸二氢钾 (含 1.5 %三乙胺 ) 0 .0 0 5mol·L-1庚烷磺酸钠甲醇溶液 (1∶1.2 ,混合后用磷酸调节pH值为 7.2 )为流动相 ,流速 1.0mL·min-1,UV检测波长 343nm。结果 :硫酸羟氯喹在 8.0× 10 -2 ～ 5 .6× 10 -1mg·mL-1范围内呈良好的线性关系 ,r =0 .9999。平均回收率 99.4 4 % (n =6 )。结论 :本方法简便、快速、专属 ,结果准确可靠。

高效液相色谱法测定伤风止咳颗粒中三组分的含量

目的 建立离子对色谱法同时测定伤风止咳颗粒中盐酸异丙嗪、愈创木酚磺酸钾、枸橼酸喷托维林(咳必清)三组分的含量测定方法,为其提供质量标准。方法 采用Diamonsil(钻石)C18柱,以甲醇0. 05mmol/L庚烷磺酸钠溶液(加三乙胺0. 5mL/L,用磷酸调节pH至3. 0±0. 1) (50∶50)为流动相,流速为1. 0mL/min,于218nm处测定。结果 三组分的回收率分别为: 99. 24%, 99. 96%, 99. 00%;RSD分别为0. 44%, 0. 64%, 0. 37%。结论 该方法快速、简捷、重现性好,可以用于伤风止咳颗粒的质量控制。

反相离子对高效液相色谱法测定盐酸黄酮哌酯片的含量

目的:建立一种采用反相离子对高效液相色谱法测定盐酸黄酮哌酯片含量的方法。方法:用Shim-Pack vp-ODS柱(4.6mm×150mm,5μm),以0.05mol·L^(-1)磷酸二氢钾(含1％三乙胺,用磷酸调pH3.8)-0.0025mol·L^(-1)庚烷磷酸钠甲醇溶液(1:1.2)为流动相,流速1mL·min^(-1),UV检测波长241nm。柱温:室温,进样量20μL。结果:盐酸黄酮哌酯和前体杂质3-甲基黄酮-8-羧酸的保留时间分别为7.0min和5.0min,分离度为6.0,最低检测浓度分别为1.20μg·mL^(-1)和0.55μg·mL^(-1)。盐酸黄酮哌酯在0.119～0.834mg·mL^(-1)范围内呈良好的线性关系,r=0.9999。平均回收率(n=5)分别为99.04％(RSD=0.66％),99.36％(RSD=0.87％),99.64％(RSD=0.62％)。结论:本方法简便、快速、专属,结果准确可靠,能有效控制产品质量。

单磷酸阿糖腺苷的离子对色谱法测定

采用离子对色谱法测定单磷酸阿糖腺苷的含量。采用 Novapak C1 8(15 0× 3.9mm,4μm)反相柱 ,流动相为甲醇 -水 (含 10 m mol/ L氢氧化四丁基铵和 10 m mol/ L KH2 PO4) (15∶ 85 ) ,检测波长 2 5 8nm。本方法的平均回收率为99.97% ,RSD为 0 .6 3%。

反相离子对高效液相色谱法测定硝酸毛果芸香碱滴眼液的含量

目的:建立1种反相离子对高效液相色谱法测定硝酸毛果芸香碱滴眼液的方法。方法:用 Phenomenex-prodigy ODS 柱(4.6mm×250mm,5μm),含0.02mol·L^(-1)磷酸二氢铵和0.02mol·L^(-1)四丁基氢氧化铵的水溶液(用磷酸或稀氨水调 pH至7.7)-乙腈(80:20)为流动相,流速:1mL·min^(-1),UV 检测波长230nm,柱温:40℃。结果:该色谱条件下,毛果芸香碱和有关物质峰之间分离良好。毛果芸香碱在0.428～1.284mg·mL^(-1)范围内呈良好的线性关系,r=0.9998。平均回收率为98.7%(n=9)。结论:本方法简便、快速、准确,可有效控制产品质量。

离子对色谱法测定复方西吡氯铵含片中维生素C及有关物质

目的:采用反相离子对高效液相色谱法测定复方西吡氯铵含片中维生素C及有关物质。方法:采用Shimadzu CLC-ODS柱(150mm×6.0mm,5μm),以甲醇-水(含0.005mol·L-1十六烷基三甲基溴化铵和0.050mol·L-1磷酸二氢钾)(10:90)为流动相,流速为1.0mL·min-1,检测波长为254nm。结果:离子对高效液相色谱法测定的线性范围为5.0-200μg·mL-1,相关系数r=0.999 9;日内精密度为0.52％(n=6),日间精密度为0.86％(n=6);平均回收率为99.54％(n=9)。结论:采用反相离子对高效液相色谱法测定复方西吡氯铵含片中维生素C的含量及其有关物质,方法简便、快速、准确、专属性好。

离子对反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定三乙膦酸铝的含量

建立了以正丁胺为离子对试剂的反相高效液相色谱分析三乙膦酸铝含量的方法。采用Symmetry ShieldRP18色谱柱分离,以甲醇-0.5%正丁胺水溶液(冰乙酸调节pH5.0)(体积比为8∶92)为流动相,流速为0.8mL/min,蒸发光散射检测器(ELSD)检测。在上述条件下,三乙膦酸铝与其主要杂质亚磷酸盐、硫酸盐可以获得分离。在100～1 200mg/L范围内,进样质量与峰面积的双对数值呈良好的线性关系。100mg/L和1 000mg/L两种质量浓度添加水平的回收率分别为100.58%和99.53%,其相对标准偏差(RSD)分别为0.62%和0.49%。该方法简便快捷,为三乙膦酸铝的定量分析提供了更加有效可靠的方法。

反相离子对色谱法检测无水奶油中三聚氰胺方法的建立

目的:建立反相离子对色谱法检测无水奶油中三聚氰胺的含量。方法:采用盐酸-乙醚提取法对无水奶油中的三聚氰胺进行提取,利用反相离子对色谱法,以乙睛和柠檬酸缓冲液为流动相,用10 mmol/L辛烷磺酸钠为离子对试剂,在240 nm的波长下对提取的三聚氰胺进行定性、定量的检测。结果:峰面积与三聚氰胺的含量在0.1～10μg/ml浓度范围内呈良好线性关系,相关系数r=0.9996,回收率在95.86%～100.16%之间,测定相对标准偏差均小于2%。最低检出限为0.1μg/ml。结论:该方法操作简便、灵敏、结果准确可靠,适合无水奶油中三聚氰胺的检测。

离子对反相高效液相色谱分离几种常见的有机硒

建立的离子对反相高效液相色谱法(IP-RP-HPLC)成功的分离了五种常见的有机硒化合物:硒代胱氨酸(SeCys2)、硒代蛋氨酸(SeMet)、硒-甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、亚硒酸盐(SeO23-)及三甲基硒离子(TMSe+)。并对分离过程进行了优化,在优化的色谱分离条件下,五种硒化合物得到了完全分离,它们在C18上的保留时间分别为:280 s,1 800 s,540 s,160 s和820 s。

离子对反相液相色谱同时测定家兔血浆中的外源性磷酸肌酸及其代谢产物肌酸

建立了离子对反相高效液相色谱法(IP-RP-HPLC)同时测定家兔血浆中外源性磷酸肌酸(PCr)及其代谢产物肌酸(Cr)的方法,用于研究外源性PCr在家兔体内的药代动力学。以含离子对试剂四丁基硫酸氢铵(TBA)的磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相,在Kromasil-C18色谱柱上进行梯度洗脱。采用内标法定量、以基线扣除法计算外源性PCr和Cr的浓度。PCr和Cr的线性范围分别为10～7 500 mg/L和10～1 500 mg/L;日内和日间精密度均≤6.2%,准确度分别为99.7%～102.2%和96.5%～102.4%;萃取回收率均大于92%。静脉注射PCr后,血浆中PCr的消除为二室模型,消除半衰期为(20.4±2.7)min;表观分布容积为(0.179±0.037)L/kg;清除率为(0.019±0.002)L/(kg.min);静脉注射PCr后血浆中迅即出现降解产物Cr,其达峰时间为30 min;消除半衰期为(43.7±4.5)min。本方法的专属性强,准确度和精密度高,能特异性地测定家兔血浆中的PCr和Cr。实际应用结果表明,该方法完全符合PCr药代动力学生物分析方法学的要求。