基于IRS-1/PI3K信号轴探究补肺健脾方对COPD大鼠骨骼肌线粒体损伤的影响

目的探究补肺健脾方(Bufei Jianpi formula,BJF)通过调控IRS-1/PI3K信号轴对COPD大鼠骨骼肌线粒体损伤的影响。方法将60只SPF级SD大鼠随机分为空白(Control)组、COPD稳定期模型(Model)组、氨茶碱(Am)组、补肺健脾方(BJF)组、吡格列酮(PIO)组以及补肺健脾方+吡格列酮(BJF+PIO)组,10只/组。采用烟熏加鼻腔滴菌(肺炎克雷伯杆菌)的方法建立COPD稳定期大鼠模型,自第9周开始给药至20周结束后取材,每周给予大鼠体重测量。分别对肺组织和骨骼肌组织进行常规切片与HE染色,并于光镜下观察其相应的病理学改变。分别于第0、8、20周采用非束缚全身体积描记系统观察大鼠肺功能,包括VT、PEF、EF50。采用qPCR技术检测大鼠骨骼肌组织中IRS-1、PI3K、PGC-1α以及Leptin mRNA的表达。采用Western blot技术检测大鼠骨骼肌组织中IRS-1、PI3K、AKT、p-AKT、PGC-1α、TFAM和Leptin蛋白的表达。结果光镜观察显示与Control组比,Model组肺病理可见肺泡间质以及肺支气管存有大量的炎性细胞浸润,部分肺泡壁出现断裂并融合形成气腔、纤维网被破坏等;与Model组比,用药治疗后各组肺泡壁的断裂以及纤维网的破坏均得到改善,支气管中炎性细胞浸润减轻,其中以BJF组与Am组尤为明显。用药治疗后各组骨骼肌病理与Model组比,可不同程度改善肌纤维之间排列间隙、萎缩与断裂,肌细胞胞质染色不均一等,其中以BJF组疗效较为显著。与Control组比,Model组PEF、VT和EF50第8周起显著降低(P<0.01),BJF组、BJF+PIO组和Am组可以显著提高PEF、EF50(P<0.01)。与Control组比,Model组中IRS-1、PGC-1α和PI3K mRNA与蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Leptin mRNA与蛋白表达水平显著增高(P<0.01);与Model组比,BJF组IRS-1、PGC-1α、PI3K mRNA与蛋白表达水平显著增高(P<0.05,P<0.01);PIO组IRS-1 mRNA表达水平显著增高(P<0.01);BJF+PIO组PGC-1αmRNA水平显著增高(P<0.01),IRS-1、PI3K mRNA与蛋白水平显著升高(P<0.05,P<0.01);Am组中PI3K mRNA与蛋白表达水平显著增高(P<0.01);4个用药组中Leptin mRNA的表达水平均显著降低(P<0.01),除Am组外,其余3个用药组Leptin蛋白表达显著降低(P<0.01);与Control组比,Model组股四头肌组织中TFAM、p-AKT蛋白表达有明显的下降趋势,各治疗组的TFAM、p-AKT蛋白表达均有升高趋势,但无显著性差异(P>0.05)。结论补肺健脾方可通过调控IRS-1/PI3K信号轴,改善骨骼肌线粒体的损伤,同时提高PGC-1α与线粒体转录因子TFAM的表达,增强线粒体的生物合成,从而减轻肺与骨骼肌组织的病理性损伤。

葛根芩连汤通过IRS-1/PI3K/AKT通路对胃肠湿热型2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响

目的探究葛根芩连汤通过胰岛素受体底物-1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对胃肠湿热型2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响。方法将40只SD大鼠随机分为正常组(2 mL生理盐水灌胃)、造模组(2 mL生理盐水灌胃)、二甲双胍组(4.17 mg/100 g二甲双胍灌胃)和葛根芩连汤组(1 g/100 g葛根芩连汤灌胃),每组10只。采用高脂高糖饲料加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建2型糖尿病大鼠模型,随后喂食油脂、42°白酒及蜂蜜水构建胃肠湿热型2型糖尿病大鼠模型。测量各组大鼠不同时间节点体质量,血糖仪测定空腹血糖(FBG);ELISA检测空腹胰岛素(FINS)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化、计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色检测肝组织病理学变化;检测肝组织过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量变化。Western blot检测肝组织IRS-1、PI3K、p-PI3K、AKT及p-AKT蛋白变化。结果与正常组比较,造模组大鼠体质量、FBG、FINS及HOMA-IR、GSH-Px、CAT、SOD、IRS-1、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT水平均明显下降(P<0.05)、TG、TC、IL-6、TNF-α及MDA含量均显著升高(P<0.05),可见局灶性肝实质损失。与造模组比较,二甲双胍组及葛根芩连汤组大鼠体质量、FBG、FINS及HOMA-IR、GSH-Px、CAT、SOD、IRS-1、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT水平均明显升高(P<0.05)、TG、TC、IL-6、TNF-α及MDA含量均显著降低(P<0.05),显示正常的肝实质。结论葛根芩连汤可明显改善胃肠湿热型2型糖尿病糖脂紊乱,可能是通过IRS-1/PI3K/AKT通路发挥作用。

白虎汤联合中药石蜡疗法治疗2型糖尿病患者的临床疗效及对IRS-1/PI3K/Akt信号通路的影响

目的:探究白虎汤联合中药石蜡疗法对2型糖尿病患者的临床疗效及对胰岛素受体底物-1(IRS-1)/磷脂酰肌醇-3(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法:选取2021年9月~2022年12月在我院内分泌科接受治疗的132例2型糖尿病患者的临床资料进行回顾性分析,根据治疗方式分为对照组(n=64)和观察组(n=68),在基础治疗后对照组给予中药石蜡疗法,观察组给予白虎汤联合中药石蜡疗法。连续治疗8周,比较两组治疗疗效、糖代谢[空腹血糖(FBG)、餐后2小时血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)]、氧化应激水平[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)]、IRS-1/PI3K/Akt信号通路相关mRNA表达情况及不良反应发生率。结果:观察组治疗疗效高于对照组(85.29%vs 65.63%,P<0.05)。治疗后,两组FBG、HbA1c、OGTT、MDA含量较治疗前降低,且观察组显著低于对照组(P<0.05)。两组SOD、GSH及IRS-1、PI3K、Akt mRNA相对表达量较治疗前升高,且观察组显著高于对照组(P<0.05)。治疗过程中观察组不良反应发生率与对照组比较差异无统计学意义(3.13%vs 7.35%,P>0.05)。结论:白虎汤联合中药石蜡疗法能调节2型糖尿病患者糖代谢失衡,降低氧化应激水平,其作用机制可能与激活IRS-1/PI3K/Akt信号通路有关。

HSV-1即刻早期基因的5′UTR对报告基因mRNA翻译的影响

mRNA疫苗的5′非翻译区(5’untranslated regions,5′UTR)对其表达起着重要作用,报告基因增强绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)用于检测5′UTR调控mRNA表达已经是一个较为成熟的实验方法.为研究单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)即刻早期基因的5′UTR作为报告基因EGFP mRNA的5′UTR对其翻译的影响,本研究将4个即刻早期基因的5’UTR以及表达能力较强的人β珠蛋白基因(humanβGlobin,hBg)5′UTR插入报告基因EGFP 5’端,通过观察绿色荧光强度研究不同即刻早期基因5′UTR对mRNA翻译的影响.结果表明:经mRNA转染试剂和纳米脂质体颗粒分别递送进293T细胞和小鼠体内;RL2的5′UTR作为报告基因EGFP 5′UTR的表达水平与hBg 5′UTR相近,RS1、US1、US12表达水平明显弱于hBg 5′UTR.因此,RL2基因的5′UTR有潜力作为mRNA疫苗的5′UTR.

金合欢素调节IRS-1/PI3K/AKT信号通路对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响

目的探讨金合欢素调节胰岛素受体底物-1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路对糖尿病大鼠胰岛素抵抗(IR)的影响。方法选取6周龄,体质量220~235 g的SPF级SD雄性大鼠60只作为研究对象。随机选出12只大鼠作为对照组(NC组),其余48只大鼠构建2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,造模成功后随机分为糖尿病组、金合欢素组、MG53组、金合欢素+MG53组,每组12只。检测所有大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三脂(TG)水平。采用酶联免疫吸附试验检测空腹胰岛素(FINS)水平以及胰腺组织白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,计算胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);计算口服葡萄糖耐量实验曲线下面积(AUC);采用苏木精和伊红(HE)染色检测胰腺组织病理变化;采用Western blot法检测IRS-1/PI3K/AKT通路蛋白表达水平。结果与NC组相比,糖尿病组大鼠体质量、FBG、TC、TG、LDL水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组大鼠体质量、FBG、TC、TG、LDL水平均明显下降,而MG53组均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组大鼠体质量、FBG、TC、TG、LDL水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与NC组相比,糖尿病组FBG、FINS、HOMA-IR水平均明显升高,AUC明显增大,ISI水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组FINS、HOMA-IR水平均明显下降,AUC明显减小,ISI水平明显升高,而MG53组FINS、HOMA-IR水平均明显升高,AUC明显增大,ISI水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组FINS、HOMA-IR水平均明显升高,AUC明显增大,ISI水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与NC组相比,糖尿病组TNF-α、IL-1β水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组TNF-α、IL-1β水平均明显下降,而MG53组TNF-α、IL-1β水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组TNF-α、IL-1β水平均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,NC组大鼠胰腺组织染色清晰,结构正常,可以观察到明显的外分泌腺泡和胰岛、小叶内导管和小叶间导管;与NC组相比,糖尿病组观察到血管充血、腺泡和小叶内导管聚集有炎症细胞;与糖尿病组相比,金合欢素组炎症细胞浸润现象减少,而MG53组小叶内和小叶间导管中观察到重度炎症细胞聚集;金合欢素+MG53组胰腺结构与糖尿病组相似。与NC组相比,糖尿病组p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与糖尿病组相比,金合欢素组p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白水平均明显升高,而MG53组p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与金合欢素组相比,金合欢素+MG53组p-IRS-1/IRS-1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论金合欢素可能通过上调IRS-1/PI3K/AKT信号通路发挥减轻糖尿病大鼠IR的作用。

过表达miR-144-3p下调感染巨噬细胞 IL-6 mRNA抑制BCG的存活

探究miR-144-3p对巨噬细胞IL-6 mRNA表达量和巨噬细胞免疫能力的影响,为结核诊疗提供理论参考。方法(1)建立BCG感染THP-1巨噬细胞模型,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;(2)瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂来过表达/抑制miR-144-3p后,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;皮尔森相关系数分析miR-144-3p和IL-6 mRNA的相关性;(3)CCK-8检测瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂后,CCK-8检测BCG感染的巨噬细胞增殖能力;CFU检测BCG存活状态。结果显示:(1)巨噬细胞感染BCG后,miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升(P<0.05),miR-144-3p表达量在12 h达到峰值,IL-6 mRNA表达量在24 h达到峰值;(2)巨噬细胞感染BCG后,过表达miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著下降(P<0.01);抑制miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著上升(P<0.01);皮尔森相关系数分析结果显示两者存在负相关性;(3)过表达/抑制miR-144-3p不影响巨噬细胞增殖能力,但过表达miR-144-3p能抑制巨噬细胞中BCG的存活。结论:BCG感染巨噬细胞后miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升;过表达/抑制巨噬细胞miR-144-3p,miR-144-3p可能负调控IL-6 mRNA表达;过表达miR-144-3p能抑制BCG存活,进而增强巨噬细胞的先天免疫能力。

健脾化痰祛瘀法对肥胖2型糖尿病模型糖脂代谢及IRS-1/PI3K/Akt2信号通路的影响

目的:探讨健脾化痰祛瘀法对肥胖2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠的糖脂代谢作用及其机制。方法:通过高脂饮食联合小剂量链佐菌素诱导的T2DM大鼠,分组对照组、模型组、健脾化痰祛瘀方低剂量组、健脾化痰祛瘀方中剂量组、健脾化痰祛瘀方高剂量组。ELISA试剂盒检测血清中促炎细胞因子、生化指标和肝脏中与糖代谢相关的关键酶的活性。qPCR检测胰岛素信号通路关键靶点的mRNA水平。采用Western blot法检测肝脏中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)和葡萄糖转运蛋白2(Glut2)的表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠血清空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低。而与模型组相比,健脾化痰祛瘀方治疗显著降低了FINS、TG、TC、LDL-C和FFA水平,降低HDL-C水平。此外,与对照组相比,模型组血清CRP、IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-1β、NO水平明显升高。然而,与模型组相比,健脾化痰祛瘀方治疗后,这些促炎细胞因子明显下降。与对照组大鼠相比,模型组大鼠中PEPCK、FBPase、G6Pase和GP的活性增加,但通过健脾化痰祛瘀方治疗后这些酶的活性明显降低。此外,与对照组大鼠相比,模型组大鼠中IRS-1、p-PI3K、p-Akt2的表达增加,但通过健脾化痰祛瘀方治疗后IRS-1、p-PI3K、p-Akt2的表达明显降低。结论:健脾化痰祛瘀法可能通过激活IRS-1/PI3K/Akt2信号通路改善T2DM大鼠的糖脂代谢。

椎管内麻醉后CD老年患者S100β、H-FABP、NLRP3mRNA、Caspase-1 mRNA表达意义

目的分析老年髋关节置换术(THA)患者椎管内麻醉后认知功能障碍(CD)发生的危险因素及中枢神经特异蛋白(S100-β)、核苷酸结合寡聚化域受体蛋白3信使核糖核酸(NLRP3 mRNA)、中心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、天冬氨酸蛋白水解酶1信使核糖核酸(Caspase-1 mRNA)对其预测价值。方法将椎管内麻醉后发生CD的40例老年THA术患者纳入A组,另选取未发生CD的68例老年THA术患者纳入B组。比较两组临床资料、S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA,危险因素采用多因素Logistic回归分析法进行分析,S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA对老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的预测价值采用受试者工作特征(ROC)曲线进行分析。结果A组年龄大于B组,差异有统计学意义(t=13.674,P<0.05);有糖尿病、术中低血压的患者占比均高于B组,差异有统计学意义(χ^(2)=12.643、17.767,P<0.05)。A组血清S100-β、NLRP3 mRNA、H-FABP、Caspase-1mRNA表达均高于B组,差异有统计学意义(t=14.571、21.691、80.159、23.572,P<0.05)。老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的独立危险因素包括年龄大、糖尿病、术中低血压、血清S100-β、H-FABP、水平、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA高,差异有统计学意义(P<0.05)。S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA联合检查预测老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的曲线下面积(AUC)为0.915高于单一检测(P<0.05)。结论年龄大、糖尿病、术中低血压均为老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的独立危险因素,且S100-β、H-FABP、NLRP3 m RNA、Caspase-1 mRNA联合检测对CD的预测价值较高。

子宫内膜癌组织中IGF2BP1mRNA,PEG10mRNA表达及与增殖基因表达的相关性和预后研究

目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulinlike growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因10(patrilineal expression of genetic imprinting gene 10,PEG10)mRNA表达及与增殖基因表达的相关性及预后。方法选取2017年1月~2019年1月湖北理工学院附属妇幼保健院诊治的100例EC患者。实时荧光定量PCR检测EC癌组织和癌旁组织中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA,细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA,细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)mRNA表达。免疫组织化学检测IGF2BP1,PEG10蛋白表达。相关性采用Pearson相关分析。Kaplan-Meier曲线分析不同IGF2BP1,PEG10表达组EC患者的预后差异。COX回归分析EC患者的预后影响因素。结果EC癌组织中IGF2BP1 mRNA(1.84±0.33),PEG10 mRNA(2.12±0.40),PCNA mRNA(3.14±0.42),cyclinD1 mRNA(2.81±0.36),CDK4 mRNA(2.37±0.34)高于癌旁组织(0.78±0.21,0.91±0.25,0.74±0.13,0.67±0.21,0.59±0.18),差异具有统计学意义(t=25.652~54.588,均P<0.05)。癌组织中IGF2BP1(70.00%),PEG10(72.00%)蛋白阳性率高于癌旁组织(100%,9.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=75.000,82.363,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA表达与PCNA mRNA,cyclinD1 mRNA,CDK4 mRNA表达呈正相关(r=0.562~0.625,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA与PEG10 mRNA表达呈显著正相关(r=0.663,P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、并发淋巴结转移EC癌组织中IGF2BP1(86.49%,87.50%),PEG10(89.19%,90.63%)阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(60.32%,61.90%)、无淋巴结转移(61.77%,63.24%),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.863~8.608,均P<0.05)。IGF2BP1阳性组患者三年总体生存率70.00%(49/70)低于阴性组的90.00%(27/30);PEG10阳性组患者三年总体生存率为69.44%(50/72),低于阴性组的92.86%(26/28),差异具有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.133,5.491,P=0.042,0.019)。FIGO分期Ⅲ期(OR=1.449,95%CI:1.148~1.830)、并发淋巴结转移(OR=1.442,95%CI:1.124~1.850),IGF2BP1阳性(OR=1.637,95%CI:1.239~2.163)及PEG10阳性(OR=1.576,95%CI:1.136~1.187)是影响EC患者生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论EC中IGF2BP1,PEG10表达升高,两者与增殖基因表达呈正相关,是EC预后评估的肿瘤标志物。

一种新型1型单纯疱疹病毒mRNA疫苗的制备

制备用于防治1型单纯疱疹病毒感染的新型mRNA疫苗,并检测其免疫效果。利用同源重组技术构建HSV1糖蛋白gD胞外域(HSV1-gD^(Ectodomain))重组质粒,经PCR反应扩增HSV1-gD^(Ectodomain)基因模板,体外转录反应得到HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA,利用LNP包封HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA得到mRNA-LNP疫苗复合物,小鼠大腿肌肉接种mRNA-LNP疫苗复合物。ELISA法检测小鼠血清HSV1-gD抗体效价;TCID50法检测HSV1-gD血清中和效价。结果显示:经HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA疫苗接种后,小鼠血清抗体滴度达到1∶12800,中和实验表明抗体可保护Vero细胞不受HSV1病毒感染。成功制备一种新型HSV1 mRNA疫苗,用其接种小鼠可诱导产生特异性免疫应答,并具有良好的保护作用。

地奥心血康激活IRS-1/PI3K/Akt信号通路改善非酒精性脂肪性肝炎小鼠胰岛素抵抗的实验研究

目的:研究地奥心血康(DXXK)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠胰岛素抵抗的影响及作用机制。方法:C57BL/6J小鼠随机分为正常组和造模组,造模组高脂饲料饲喂16周后随机分为模型组、吡格列酮组(6.0 mg·kg^(-1)·d^(-1)),DXXK高、中、低(200、60、20 mg·kg^(-1)·d^(-1))剂量组,每组8只,灌胃给药连续8周。检测小鼠体质量、活动度、脂肪质量、空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及肝脏中的TC、TG含量;口服葡萄糖耐量实验(OGTT)、腹腔胰岛素耐量实验(IPITT),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI)、OGTT和IPITT的曲线下面积(AUC);HE染色观察肝脏病理、油红O染色观察肝脏脂质蓄积情况;Western blot法检测肝脏组织IRS-1/PI3K/Akt信号通路中相关蛋白及下游靶标甾醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)蛋白水平。结果:与模型组比较,DXXK组和吡格列酮组小鼠的体质量、脂肪质量、FBG、FINS、HOMA-IR、ISI、TC、TG、AST、ALT水平、OGTT和IPITT的AUC均显著降低(P<0.05,P<0.01),活动度显著升高,肝脏脂质沉积和肝功能异常明显改善(P<0.05,P<0.01),肝细胞脂肪变性和气球样变明显减轻,肝脏p-IRS-1/IRS-1、PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达显著上调,SREBP-1c蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论:DXXK可以改善NASH小鼠的胰岛素抵抗,其作用机制可能与激活IRS-1/PI3K/Akt信号通路有关。

基于mRNA高通量测序初探雷帕霉素联合鞭毛蛋白体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制

目的:利用mRNA高通量测序初步探讨雷帕霉素(Rapa)联合鞭毛蛋白(FliC)体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制。方法:将4T1乳腺癌细胞分为对照(control)组、Rapa组、FliC组、Rapa+FliC组等4组,CCK-8法与流式细胞术检测细胞活力、凋亡的变化情况。同时,通过mRNA高通量测序,对差异表达基因(DEGs)进行KEGG通路分析;此外,通过STRING分析Rapa+FliC组与Rapa组两组间的DEGs,构建DEGs的蛋白相互作用(PPI)网络、筛选Hub基因。结果:CCK-8和流式细胞术检测结果显示,Rapa+FliC对4T1乳腺癌细胞的活力抑制率和凋亡率都显著高于Rapa和FliC(P<0.05)。转录组测序结果显示,Rapa组和control组之间共有579个DEGs,主要富集于PI3K/Akt等信号通路;FliC组和control组之间的DEGs主要富集于Nod样受体等信号通路;Rapa+FliC组与Rapa组之间共有150个DEGs,主要富集于mTOR等信号通路。从PPI网络中,成功筛选出Atm、Itga2等10个Hub基因。结论:Rapa+FliC可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,在体外抑制4T1乳腺癌细胞活力,促进细胞凋亡;Atm和Itga2基因可能是两者联合作用的关键基因。

牙周组织再生术联合替硝唑对慢性牙周炎患者Notch1 mRNA表达影响及疗效观察

目的分析牙周组织再生术与替硝唑联合治疗慢性牙周炎(CP)对患者Notch1 mRNA表达的影响。方法选取丽水市人民医院CP患者130例,根据随机数字表法将其分为对照组(n=65)和观察组(n=65),两组均接受常规治疗,对照组开展牙周组织再生术治疗,观察组开展牙周组织再生术和替硝唑联合治疗,比较两组牙周袋深度(PD)、龈沟出血指数(SBI)、临床附着水平(CAL)、菌斑指数(PLI)的变化,Notch1 mRNA表达、Th17细胞、IL-17水平的变化,以及视觉模拟评分(VAS)、临床疗效、不良反应等。结果治疗后,两组患者PD、SBI、CAL、PLI指数均降低,与对照组相比,观察组PD、SBI、CAL、PLI指数降低更明显,具有统计学差异(P<0.05),治疗后,两组Notch1 mRNA、Th17细胞、IL-17水平均降低,与对照组相比,观察组治疗后Notch1 mRNA、Th17细胞、IL-17水平降低更明显,具有统计学差异(P<0.05),治疗后,两组VAS均有所降低,与对照组相比,观察组VAS降低(P<0.05),与对照组相比,观察组治疗后总有效率高,具有统计学差异(P<0.05),与对照组相比,观察组治疗不良反应略高,但无统计学差异(P>0.05)。结论对CP患者开展牙周组织再生术与替硝唑联合治疗,可降低Notch1 mRNA表达以及疼痛程度,对临床症状治疗效果显著,可以推广使用。

lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探究胃癌(GC)组织中长链非编码RNA HOXC反义RNA1(lncRNA HOXC-AS1)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)mRNA表达水平与患者临床病理特征及术后5年内生存的关系。方法:选取我院2015年5月至2018年4月收治的GC患者139例,手术收集GC组织及癌旁组织。荧光定量PCR法检测lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达。对GC患者进行术后随访5年,记录GC患者生存情况,分为生存组88例,死亡组51例。比较GC组织和癌旁组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平、不同临床病理特征患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况、生存组和死亡组临床病理特征和GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平。分析GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平的相关性、GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况与术后5年生存的关系、影响GC患者术后5年内生存的危险因素。结果:与癌旁组织相比,GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平呈正相关(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度相关(P<0.05);lncRNA HOXC-AS1高表达组、IGF2BP2 mRNA高表达组患者术后5年总生存率分别显著低于lncRNA HOXC-AS1低表达组、IGF2BP2 mRNA低表达组(P<0.05);生存组和死亡组淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度比较差异有统计学意义(P<0.05);死亡组患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平显著高于生存组(P<0.05);TNM分期为III期、肿瘤低分化、lncRNA HOXC-AS1高表达、IGF2BP2 mRNA高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素(P<0.05)。结论:GC患者癌组织中lncRNA HOXC-AS1及IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高,且术后5年内死亡的GC患者较存活患者更高,二者与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度密切相关,二者高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素。

代平颗粒对2型糖尿病大鼠血糖、血脂水平及骨骼肌Glut4 mRNA,IRS-1 mRNA表达的影响

目的:观察中药代平颗粒对2型糖尿病大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(Glut4)、胰岛素受体底物1(IRS-1)基因表达的影响,初步探讨其降低血糖的分子机制。方法:雄性SD大鼠分为正常对照组(8只,普通饲料),其余大鼠采用高脂饲料喂养联合链脲佐菌素(STZ)尾静脉注射的方法造成2型糖尿病成膜大鼠(32只),分为模型组(M)、二甲双胍组(Met)、代平颗粒低剂量组(DL),代平颗粒高剂量组(DH),每组8只。经药物干预4周后检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血脂、空腹胰岛素(FINS)并计算胰岛素敏感指数(ISI),采用实时荧光定量PCR技术检测大鼠骨骼肌Glut4 mRNA,IRS-1 mRNA表达水平。结果:给药后4周,与M组FBG:(20.55±5.50)mmol·L-1,ISI:(-6.05±0.29)比较,Met组FBG(14.75±3.90)mmol·L-1和DH组FBG(11.21±2.95)mmol·L-1均显著下降(P<0.01),Met组ISI(-5.37±0.38)和DH组ISI(-5.38±0.37)均显著升高(P<0.01);M组Glut4 mRNA(0.63±0.13)和IRS-1 mRNA(0.68±0.17)表达量分别为N组的63.3%,67.8%(P<0.01);与M组比较,Met组Glut4 mRNA(0.95±0.19)表达量升高了31%(P<0.01),IRS-1 mRNA(0.88±0.24)表达量无显著升高,DH组Glut4 mRNA(1.19±0.15)和IRS-1 mRNA(1.24±0.22)表达量,分别升高了88.9%,82.4%(P<0.01)。结论:代平颗粒具有降低2型糖尿病大鼠FBG效果,其作用机制之一与增加组织胰岛素敏感性,上调2型糖尿病大鼠骨骼肌中Glut4 mRNA和IRS-1 mRNA的表达,促进骨骼肌对葡萄糖的摄取和利用有关。

老年结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达变化和意义

目的探讨染色体凝缩蛋白复合物I(NCAP)D2、Krüppel样因子(KLF)5蛋白及跨膜受体蛋白Notch1 mRNA对老年结肠癌患者预后的预测价值。方法选取老年结肠癌患者85例,术中采集肿瘤组织和正常组织(距离肿瘤组织5 cm以上),Western印迹检测组织标本中NCAPD2、KLF5蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织标本中Notch1 mRNA表达。收集老年结肠癌患者的人口学特征和临床病理资料;以患者出院时日期为随访起点,进行3年随访,记录患者生存情况,分为预后良好组(生存),不良组(死亡)。结果老年结肠癌患者结肠癌组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于正常组织(P<0.01)。NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平在不同病理分期、分化程度、淋巴结转移情况、远端转移情况的结肠癌患者差异均有统计学意义(P<0.01);其中,浸润程度T3~T4、有淋巴结转移、有远端转移的结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于浸润程度T1~T2、无淋巴结转移、无远端转移的结肠癌患者(P<0.01);随着分化程度的降低,结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01)。不良组NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于预后良好组(P<0.01)。构建受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平对老年结肠癌患者预后均具有较高的预测价值(P<0.01);各指标联合检测对老年结肠癌患者预后的预测价值最高。结论老年结肠癌患者肿瘤组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA高表达,且与浸润程度、分化程度及转移情况密切相关,联合检测可用于患者预后评估。

食管鳞癌外周血细胞PD-L1、PD-1及TCF-1 mRNA表达与预后的关系

目的探讨外周血细胞中程序性死亡配体-1(PD-L1)、程序性死亡受体(PD-1)及TCF-1 mRNA变化及其在食管鳞癌(ESCC)诊断和预后中的价值。方法回顾性分析2019年1月至2019年12月间河南科技大学第一附属医院临床医学院肿瘤医院病理确诊的91例ESCC患者和63例非癌对照外周血细胞中PD-L1、PD-1和TCF-1的mRNA表达变化,并通过ROC曲线分析诊断ESCC效能。Log-rank检验确定不同组别生存曲线差异,确定PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA表达与总生存期相关性。结果ESCC患者外周血细胞中PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA显著高于非癌对照者(P<0.05),其诊断ESCC的敏感性和特异性分别为0.58/0.68、0.92/0.64和0.95/0.58,AUC分别为0.66、0.84和0.78,且这3个mRNA分子表达呈正相关。PD-L1、PD-1、TCF-1 mRNA高表达的ESCC患者总生存期明显高于低表达者(P<0.05)。结论PD-L1、PD-1和TCF-1是ESCC潜在的诊断和预后生物标志物分子。

Fascin⁃1 mRNA联合肿瘤标志物对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移和生存预后的评估价值

目的探讨Fascin⁃1 mRNA联合肿瘤标志物对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移和生存预后的评估价值。方法选取2018年2月至2021年7月于淮南东方医院集团总院接受手术治疗患者97例作为研究对象,术后检测患者血清Fascin⁃1 mRNA、糖类抗原199(CA199)、肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)水平,术后随访12个月。根据是否发生淋巴结转移分为淋巴结转移组(n=34)与无淋巴结转移组(n=63),比较两组血清Fascin⁃1 mRNA、CA199与CEA表达水平;根据随访12个月患者生存情况分为死亡组(n=37)与生存组(n=60),比较两组临床资料与Fascin⁃1 mRNA、CA199、CEA水平,进行单、多因素分析,绘制ROC曲线检验Fascin⁃1 mRNA、CA199、CEA对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移与生存预后的诊断效能。结果淋巴结转移患者血清CA199、CEA与Fascin⁃1 mRNA表达水平均高于无淋巴结转移患者,差异具有统计学意义(t=4.299、4.271、4.492,P<0.05);死亡组与生存组患者肿瘤大小、TNM分期、术后是否接受化疗、有无淋巴结转移、CA19⁃9、CEA、Fascin⁃1 mRNA水平比较差异具有统计学意义(χ^(2)=5.167、5.167、2.428、9.488,t=4.360、4.497、6.993,P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示淋巴结转移、CA19⁃9、CEA、Fascin⁃1 mRNA表达水平为结直肠腺癌患者术后12月生存预后独立影响因素(P<0.05);ROC曲线结果显示Fascin⁃1 mRNA联合CA199、CEA检测均对术后淋巴结转移和生存预后的AUC分别为0.940、0.989,敏感度分别为0.882、0.946,特异度分别为0.857、0.983。结论Fascin⁃1 mRNA、CA199、CEA对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移和生存预后具有良好的预测价值,三项指标联合可提高预测价值。

电针对代谢综合征大鼠糖脂代谢和IRS-1/PI3K/Akt/GLUT4信号通路的影响

【目的】探讨电针对代谢综合征(MS)大鼠糖脂代谢和胰岛素受体底物1(IRS-1)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)信号通路的影响。【方法】采用高脂高糖高盐饲料喂养方法构建代谢综合征大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、二甲双胍组和电针组,另设正常组。二甲双胍组大鼠给予盐酸二甲双胍片的生理盐水混悬液灌胃,电针组大鼠给予关元、中脘、足三里、丰隆穴电针治疗,正常组和模型组大鼠只固定,不针刺。连续干预21 d后,测量大鼠体质量、腹腔脂肪质量和血压,计算Lee’s指数和体脂比,检测空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、血脂、脂肪酸(FFA)、脂联素(APN),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);分别采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western Blot法检测肝脏组织IRS-1、PI3K、Akt、GLUT4的mRNA和蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色法观察肝脏和胸主动脉病理变化。【结果】与正常组比较,模型组大鼠体质量、Lee’s指数、腹腔脂肪质量、体脂比、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、FPG、FINS、HOMA-IR、总胆固醇(TG)、甘油三酯(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、FFA水平升高(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、APN水平降低(P<0.05),肝脏IRS-1、PI3K、Akt、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),HE染色结果显示肝脏脂肪变性和胸主动脉粥样硬化。与模型组比较,电针组和二甲双胍组大鼠体质量、Lee’s指数、腹腔脂肪质量、体脂比、SBP、DBP、FPG、FINS、HOMA-IR、TG、TC、LDL-C、FFA水平降低(P<0.05),HDL-C、APN水平升高(P<0.05),肝脏IRS-1、PI3K、Akt、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),HE染色结果显示肝脏脂肪变性和胸主动脉粥样硬化明显减轻。电针组和二甲双胍组上述指标改变差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】电针可以改善代谢综合征大鼠的糖脂代谢,其机制可能与上调IRS-1/PI3K/Akt/GLUT4通路蛋白表达有关。

高危型HPV阳性患者中HPVL1蛋白的表达及临床意义

探讨HPV-L1蛋白在宫颈细胞学高危型HPV阳性患者中的表达及临床意义。方法 选取187例高危型HPV阳性宫颈液基细胞学标本,其中未见上皮内瘤样病变及恶性细胞(NILM)40例,非典型鳞状上皮细胞(ASC-US)68例、低度鳞状上皮内瘤变(LSIL)39 例、非典型鳞状上皮细胞-不除外高度(ASC-H)13例、高度鳞状上皮内病变(HSIL)24例、鳞状细胞癌(SCC)3例,用赛泰(CytoReact?)免疫组织化学染色检测 HPV L1 蛋白的表达,187例样本中同时具有宫颈细胞学和病理学诊断结果的111例。同时将细胞学诊断与病理诊断相对照。 结果 不同细胞学诊断患者HPV L1蛋白阳性表达率分别为NILM 5%、ASC-US 48.5%、LSIL 61.5%、ASC-H 8%、HSIL 0%、SCC 0%,比较差异显著,有统计学意义(χ2=36.100,P<0.01);不同病理学诊断患者HPV L1蛋白阳性率分别为:炎症66.6%、CIN 1 50%、CIN 2 10%、CIN 3 9%、SCC 0%,比较差异显著,有统计学意义(χ2=22.285,P<0.01)。随着病变级别的增加,HPV L1的表达逐渐下降。结论 HPV L1蛋白表达缺失和高危型人乳头瘤病毒感染的持续存在是ASC-US和LSIL患者进展为CIN2及以上病变的可靠预测因子。