葛根芩连汤通过IRS-1/PI3K/AKT通路对胃肠湿热型2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响

目的探究葛根芩连汤通过胰岛素受体底物-1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对胃肠湿热型2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响。方法将40只SD大鼠随机分为正常组(2 mL生理盐水灌胃)、造模组(2 mL生理盐水灌胃)、二甲双胍组(4.17 mg/100 g二甲双胍灌胃)和葛根芩连汤组(1 g/100 g葛根芩连汤灌胃),每组10只。采用高脂高糖饲料加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建2型糖尿病大鼠模型,随后喂食油脂、42°白酒及蜂蜜水构建胃肠湿热型2型糖尿病大鼠模型。测量各组大鼠不同时间节点体质量,血糖仪测定空腹血糖(FBG);ELISA检测空腹胰岛素(FINS)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化、计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色检测肝组织病理学变化;检测肝组织过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量变化。Western blot检测肝组织IRS-1、PI3K、p-PI3K、AKT及p-AKT蛋白变化。结果与正常组比较,造模组大鼠体质量、FBG、FINS及HOMA-IR、GSH-Px、CAT、SOD、IRS-1、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT水平均明显下降(P<0.05)、TG、TC、IL-6、TNF-α及MDA含量均显著升高(P<0.05),可见局灶性肝实质损失。与造模组比较,二甲双胍组及葛根芩连汤组大鼠体质量、FBG、FINS及HOMA-IR、GSH-Px、CAT、SOD、IRS-1、p-PI3K/PI3K及p-AKT/AKT水平均明显升高(P<0.05)、TG、TC、IL-6、TNF-α及MDA含量均显著降低(P<0.05),显示正常的肝实质。结论葛根芩连汤可明显改善胃肠湿热型2型糖尿病糖脂紊乱,可能是通过IRS-1/PI3K/AKT通路发挥作用。

白虎汤联合中药石蜡疗法治疗2型糖尿病患者的临床疗效及对IRS-1/PI3K/Akt信号通路的影响

目的:探究白虎汤联合中药石蜡疗法对2型糖尿病患者的临床疗效及对胰岛素受体底物-1(IRS-1)/磷脂酰肌醇-3(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法:选取2021年9月~2022年12月在我院内分泌科接受治疗的132例2型糖尿病患者的临床资料进行回顾性分析,根据治疗方式分为对照组(n=64)和观察组(n=68),在基础治疗后对照组给予中药石蜡疗法,观察组给予白虎汤联合中药石蜡疗法。连续治疗8周,比较两组治疗疗效、糖代谢[空腹血糖(FBG)、餐后2小时血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)]、氧化应激水平[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)]、IRS-1/PI3K/Akt信号通路相关mRNA表达情况及不良反应发生率。结果:观察组治疗疗效高于对照组(85.29%vs 65.63%,P<0.05)。治疗后,两组FBG、HbA1c、OGTT、MDA含量较治疗前降低,且观察组显著低于对照组(P<0.05)。两组SOD、GSH及IRS-1、PI3K、Akt mRNA相对表达量较治疗前升高,且观察组显著高于对照组(P<0.05)。治疗过程中观察组不良反应发生率与对照组比较差异无统计学意义(3.13%vs 7.35%,P>0.05)。结论:白虎汤联合中药石蜡疗法能调节2型糖尿病患者糖代谢失衡,降低氧化应激水平,其作用机制可能与激活IRS-1/PI3K/Akt信号通路有关。

IRS-2通过PI3K/AKT通路调控肝细胞焦亡的实验研究

目的探讨胰岛素受体底物(IRS-2)在过氧化氢(H2O2)诱导肝细胞焦亡中的作用及分子机制。方法H2O2刺激HepG2与L02细胞系。构建IRS-2 siRNA,在HepG2与L02细胞系中抑制IRS-2基因表达,Western印迹法检测细胞IRS-2与焦亡相关蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞活性,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,电镜下观测细胞形态、线粒体与焦亡小体,Mito-Track Green观测线粒体形态与数量。IRS-2 siRNA单独或联合PI3K/AKT通路激动剂刺激HepG2与L02细胞系,检测PI3K/AKT通路蛋白与焦亡相关蛋白表达水平。结果与对照组相比,H2O2可降低肝细胞活率,降低IRS-2蛋白表达,提高细胞焦亡相关蛋白表达。下调细胞内IRS-2表达可导致肝细胞线粒体功能障碍,肝细胞形态发生破坏,焦亡小体数量增多,上调细胞焦亡相关蛋白表达水平,P-PI3K/PI3K与P-AKT/AKT比值下调。激活PI3K/AKT通路可逆转IRS-2下调导致的肝细胞焦亡相关蛋白表达。结论H2O2刺激肝细胞能降低IRS-2蛋白表达,诱导细胞焦亡。抑制IRS-2表达可能通过减少PI3K/AKT通路激活导致线粒体功能障碍,诱导肝细胞焦亡。

健脾化痰祛瘀法对肥胖2型糖尿病模型糖脂代谢及IRS-1/PI3K/Akt2信号通路的影响

目的:探讨健脾化痰祛瘀法对肥胖2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠的糖脂代谢作用及其机制。方法:通过高脂饮食联合小剂量链佐菌素诱导的T2DM大鼠,分组对照组、模型组、健脾化痰祛瘀方低剂量组、健脾化痰祛瘀方中剂量组、健脾化痰祛瘀方高剂量组。ELISA试剂盒检测血清中促炎细胞因子、生化指标和肝脏中与糖代谢相关的关键酶的活性。qPCR检测胰岛素信号通路关键靶点的mRNA水平。采用Western blot法检测肝脏中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)和葡萄糖转运蛋白2(Glut2)的表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠血清空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低。而与模型组相比,健脾化痰祛瘀方治疗显著降低了FINS、TG、TC、LDL-C和FFA水平,降低HDL-C水平。此外,与对照组相比,模型组血清CRP、IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-1β、NO水平明显升高。然而,与模型组相比,健脾化痰祛瘀方治疗后,这些促炎细胞因子明显下降。与对照组大鼠相比,模型组大鼠中PEPCK、FBPase、G6Pase和GP的活性增加,但通过健脾化痰祛瘀方治疗后这些酶的活性明显降低。此外,与对照组大鼠相比,模型组大鼠中IRS-1、p-PI3K、p-Akt2的表达增加,但通过健脾化痰祛瘀方治疗后IRS-1、p-PI3K、p-Akt2的表达明显降低。结论:健脾化痰祛瘀法可能通过激活IRS-1/PI3K/Akt2信号通路改善T2DM大鼠的糖脂代谢。

荞麦花叶黄酮对2型糖尿病大鼠肝损伤及IRS-2、PI3K、NF-κB表达的影响

目的观察荞麦花叶黄酮(FBFL)对2型糖尿病大鼠肝损伤和IRS-2、PI3K及NF-κB表达的影响,并探讨其可能机制。方法用高脂饲料和链脲佐菌素建立大鼠2型糖尿病模型,以FBFL为干预因素,动态观察随机血糖(PBG)、空腹血糖(FBG)、空腹血胰岛素(FINS)、血ALT、AST,光镜和电镜观察肝脏病理改变,免疫组化和Western blot检测肝IRS-2和PI3K蛋白表达。ELISA法检测肝组织NF-κB含量。结果与正常组比较,模型组大鼠血中PBG、FBG、FINS、HOMA-IR(胰岛素抵抗指数)、ALT、AST均明显升高(P<0.05,P<0.01),肝病理损伤明显,同时IRS-2、PI3K蛋白表达减少,NF-κB含量增加;FBFL治疗组能明显改善上述指标的变化,增加胰岛素敏感性,使肝组织损伤减轻和上调IRS-2、PI3K蛋白表达及减少NF-κB含量,且FBFL高剂量作用更明显。结论 FBFL对糖尿病肝损伤有抑制作用,其机制可能是通过降低血糖、改善胰岛素抵抗,上调IRS-2、PI3K蛋白表达及下调NF-κB蛋白表达等多途径实现的。

辛开苦降方对初发2型糖尿病KKay小鼠肝脏IRS-2/PI3K通路的影响

目的研究辛开苦降方对KKay 2型糖尿病(T2DM)小鼠肝脏胰岛素受体底物-2/磷脂酰肌醇3-激酶通路(IRS-2/PI3K)的影响。方法将小鼠随机分为辛开组、苦降组、辛开苦降组、罗格列酮组、模型组。对照组选10周龄雄性C57BL/6J小鼠10只。对照组及模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC)。灌胃给药四周后测血浆葡萄糖(FBG),及胰岛素浓度(FINS),免疫蛋白质印迹法(Western blotting)测定肝组织IRS-2、P-IRS-2(磷酸化胰岛素受体底物-2)、PI3K、PPI3K(磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶)、IRS-3、IRS-4蛋白表达水平,RT-PCR法测定肝组织PI3K、IRS-2、IRS-3、InsR(胰岛素受体)的mRNA表达水平。结果与模型组比较,苦降组、马来酸罗格列酮组血糖明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组小鼠胰岛素浓度均降低,IAI均升高(P<0.05)。辛开苦降组、辛开组、苦降组可增强T2DM KKay小鼠IRS-2及其磷酸化形式的蛋白表达(P<0.05),抑制负性调节因子IRS-3、4蛋白表达(P<0.05)。辛开苦降组可以增强PI3K、P-PI3K蛋白表达量及PI3-K mRNA表达(P<0.05)。各给药组间相比,各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论辛开苦降方及其拆方可改善胰岛素抵抗,可能是通过恢复肝脏细胞内正调控和负调控IRS蛋白的平衡实现的。

黄地安消胶囊调控IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β信号通路改善HepG2细胞胰岛素抵抗

目的:观察黄地安消胶囊改善HepG2细胞胰岛素抵抗的分子生物学机制。方法:MTT实验分离出黄地安消胶囊含药血清最佳作用浓度和作用时间,免疫荧光技术检测p-IRS-1、PI3K、p-Akt、p-GSK-3β的表达情况;RT-PCR技术检测细胞中IRS-1、PI3K、Akt、GSK-3β的mRNA表达,Western blot技术检测细胞中p-IRS-1、PI3K、p-Akt、p-GSK-3β的相对表达。结果:与正常组相比,模型组中IRS-1、PI3K、Akt表达降低(P<0.05);GSK-3β表达升高(P<0.05);与模型组相比,黄地安消胶囊含药血清组IRS-1、PI3K、Akt升高(P<0.05),GSK-3β表达降低(P<0.05)。结论:黄地安消胶囊可能通过调控IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β信号通路调节蛋白活性,促进糖原合成,降低血糖,改善胰岛素抵抗。

厄贝沙坦对高血压合并2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗IRS-1/PI3K/GLUT4信号通路的影响

目的探讨厄贝沙坦对高血压合并2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗的影响及其作用。方法自发性高血压大鼠(SHR)采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)建立T2DM模型,随机分为模型组、厄贝沙坦低、高剂量组。以正常大鼠作为对照组。厄贝沙坦低、高剂量组每日分别按30、60 mg/kg剂量灌服厄贝沙坦,对照组和模型组灌服等量生理盐水。测量大鼠收缩压(SBP)、空腹血糖(FBG)、胰岛素抵抗模型评估指数(HOMA-IR)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)、磷脂酰肌醇(-3)激酶p85亚基(PI3Kp85)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白(p-AKT)及葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达。结果与对照组相比,模型组SBP、FBG、FINS和HOMA-IR升高(P<0.05),IRS-1、PI3Kp85、p-AKT和GLUT4降低(P<0.05);与模型组相比,厄贝沙坦低、高剂量上述指标均发生逆转(P<0.05)。结论厄贝沙坦可通过IRS-1/PI3K/GLUT4信号通路改善高血压合并T2DM大鼠胰岛素抵抗。

大黄素介导IRS-2/PI3K/Akt通路干预大鼠非酒精性脂肪性肝炎的实验研究

目的探讨大黄素通过介导IRS-2/PI3 K/Akt通路对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的影响。方法随机选取25只雄性大鼠给予高脂饲料喂养12周制备NASH模型,12周后取5只大鼠进行检测,确定NASH模型制备成功,剩余20只大鼠数字表法随机分为模型组(10只)和大黄素组(10只),另取同龄10只雄性未造模大鼠作为正常对照组。大黄素组大鼠给予20 mg/kg的大黄素灌胃,正常对照组和模型组给予等量生理盐水,连续给予8周。对大鼠肝脏进行称重,计算肝指数;检测空腹血糖和空腹胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),检测血生化指标。对肝组织进行HE染色,检测肝组织中IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量。结果模型组大鼠肝指数、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、ALT、AST、TG、TC和LDL-C水平较正常对照组增高,HDL-C水平较正常对照组降低(P<0.01);大黄素组大鼠肝指数、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、ALT、AST、TG、TC和LDL-C水平较模型组降低,HDL-C水平较模型组增高(P<0.05)病理检测发现,模型组出现大量脂肪变性,存在炎性细胞浸润和细胞气球样变性,大黄素组病灶明显较模型组减轻。模型组大鼠IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量较正常对照组降低(P<0.05),大黄素组大鼠IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量较模型组增高(P<0.05)。结论大黄素可以提高IRS-2/PI3K/Akt通路的活性,改善高脂诱导的NASH大鼠肝脏脂肪沉积及胰岛素抵抗。

辛开苦降方对初发2型糖尿病KKay小鼠肝脏胰岛素抵抗及IRS-2/PI3K通路的影响（英文）

目的:研究辛开苦降方中药对KKay 2型糖尿病(T2DM)小鼠肝脏胰岛素抵抗及胰岛素受体底物-2/磷脂酰肌醇3-激酶通路(IRS-2/PI3K)的影响,探讨其改善肝胰岛素抵抗(IR)的分子机制。方法:将T2DM KKay小鼠按血糖轻重程度分层随机分为4组,即模型组,辛开苦降组、辛开苦降大剂量组、罗格列酮组。正常组选10周龄雄性C57BL/6J小鼠10只。正常组及模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC)灌胃。各组连续灌胃给药4周后取材,采用葡萄糖氧化酶法测血浆葡萄糖(FPG),放射免疫分析法测血浆胰岛素浓度(FINS),免疫蛋白质印迹法测定肝组织IRS-2、磷酸化胰岛素受体底物-2(p-IRS-2)、PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、胰岛素受体底物-3(IRS-3)、胰岛素受体底物-4(IRS-4)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法测定肝组织PI3K、IRS-2、IRS-3、胰岛素受体(Ins R)的m RNA表达水平。结果:与正常组相比,模型组胰岛素敏感指数明显降低(P<0.01),FPG、FINS均明显升高(P<0.01)。辛开苦降组及其大剂量组两组FINS、胰岛素敏感指数均高于模型组(P<0.01,P<0.05)。免疫蛋白质印迹结果显示:与正常组相比,模型组小鼠肝脏IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K蛋白表达均明显减少(P<0.01),IRS-3、IRS-4蛋白表达与正常组比较明显增多(P<0.01)。辛开苦降组和辛开苦降大剂量组与模型组相比,小鼠肝脏IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K蛋白表达均明显增多(P<0.01,P<0.05),IRS-3、IRS-4蛋白表达明显减少(P<0.05),辛开苦降组和辛开苦降大剂量组两组之间无明显统计学差异。实时荧光定量PCR结果显示:与正常组相比,模型组小鼠肝组织PI3-K、IRS-2、IRS-3及Ins R m RNA表达均降低(P<0.01)。与模型组相比,辛开苦降组PI3K m RNA表达升高(P<0.05)。结论:辛开苦降方可改善KKay T2DM小鼠的IR,增加胰岛素的敏感性,调节KKay小鼠肝脏IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、IRS-3、IRS-4蛋白和PI3K m RNA表达水平,提示调整肝脏的IRS2/PI3K通路相关的蛋白表达可能是辛开苦降方改善KKay T2DM小鼠的IR作用靶点,且单纯加大剂量并对相关蛋白及基因表达影响不大。

糖肾一号胶囊对糖尿病肾病大鼠血清SREBP-1c、SREBP-2c水平及肾组织IRS-1、PI3K、podocin、CD2AP蛋白表达影响

目的:观察糖肾一号胶囊对糖尿病肾病大鼠的作用及可能机制。方法:SD大鼠采用腔注射STZ方法建立糖尿病肾病模型,对造模成功大鼠分为模型组、厄贝沙坦片组(15.75mg/kg)、糖肾一号组(1800mg/kg)、糖肾一号组(900mg/kg)、糖肾一号组(450mg/kg),各15只,另设正常对照组15只,连续给药8周,观察血糖、血脂、胱抑素C、SREBP-1c、SREBP-2c水平,尿微量白蛋白,肾组织IRS-1、PI3K、podocin、CD2AP蛋白表达水平。结果:与模型对照组比较,糖肾一号胶囊(900mg/kg、1800mg/kg)各组大鼠血糖、血脂、胱抑素C、尿微量白蛋白明显降低,肾脏组织IRS-1及PI3K、podocin、CD2AP蛋白表达水平明显升高,糖肾一号胶囊(450mg/kg)组升高不明显,糖肾一号胶囊(900mg/kg)组与糖肾一号胶囊(450mg/kg)比较,具有统计学意义,糖肾一号胶囊(900mg/kg)为有效剂量。结论:糖肾一号胶囊通过激活胰岛素受体底物-1(IRS-1),激活胰岛素信号传导系统,达到降糖;降低血清SREBP-1c、SREBP-2c水平,调节血脂代谢;提高肾组织podocin、CD2AP蛋白表达,改善肾足细胞损伤,降低尿蛋白,进而通过上述综合作用达到改善肾脏纤维化、硬化作用。

白虎汤调节IRS-1/PI3K/Akt信号通路对2型糖尿病大鼠血糖、血脂代谢及血管重构的影响

目的:研究白虎汤对2型糖尿病大鼠的血糖、血脂代谢,血管重构的影响及其对胰岛素受体底物-1(IRS-1)/胞内磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调节作用。方法:将90只大鼠随机分为正常组、模型组、白虎汤低、中、高剂量组及二甲双胍组,15只/组,除正常组大鼠外,其余大鼠采用腹腔注射链脲佐菌素法建立2型糖尿病模型。白虎汤低、中、高剂量组大鼠根据体质量分别灌胃给予大鼠白虎汤溶液,剂量分别为5,10,20 g·kg^(-1),二甲双胍组灌胃给予大鼠二甲双胍(100 mg·kg^(-1)),正常组及模型组给予等体积生理盐水,所有大鼠每日给药1次,连续给药12周。给药结束后测定各组大鼠空腹血糖,糖化血红蛋白,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白1C(SREBP1C),乙酰CoA羧化酶(ACC),脂肪酸合成酶基因(FASN)等脂质合成基因及肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A),酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1),重组人中链酰基辅酶A脱氢酶(ACADM)等脂肪酸氧化基因的mRNA水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝脏IRS-1,PI3K,Akt蛋白水平,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胸主动脉血管组织病理学变化,划痕实验检测大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞迁移能力。结果:与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白、血清TNF-α,IL-6,IL-1β,TC,TG及LDL-C水平,肝脏脂质合成基因mRNA水平,大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞迁移能力均明显升高(P<0.05),肝脏脂肪酸氧化基因mRNA水平及IRS-1,PI3K,Akt蛋白表达明显降低(P<0.05),大鼠胸主动脉血管壁厚度明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,白虎汤各剂量组大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白、血清TNF-α,IL-6,IL-1β,TC,TG及LDL-C水平,肝脏脂质合成基因mRNA水平,大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞迁移能力均明显降低(P<0.05),肝脏脂肪酸氧化基因mRNA水平及IRS-1,PI3K,Akt蛋白水平均明显升高(P<0.05),大鼠胸主动脉组织病理学明显改善,且血管壁厚度明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:白虎汤能够降低2型糖尿病大鼠血糖、血脂及血清炎症因子水平,调节肝脏脂质代谢相关基因的表达,改善胸主动脉血管组织病理学及血管重构,其机制可能与调节IRS-1/PI3K/Akt信号通路有关。

中药复方益糖康对IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量及IRS-2/PI3K/AKT信号通路的影响

目的观察益糖康含药血清对IR-HepG2细胞葡萄糖消耗的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用高胰岛素刺激建立稳定可靠的IR-HepG2细胞模型;益糖康高、中、低血清、空白血清、二甲双胍血清分别干预IR-HepG2细胞,葡萄糖过氧化物酶法测定IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量;MTT法检测细胞活性;Annexin V—FITC/PI法测定益糖康含药血清对IR-HepG2细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测IR-HepG2细胞IRS-2、PI3K、AKT基因的表达;Western Blot法检测IR-HepG2细胞IRS-2蛋白及AKT磷酸化蛋白的表达。结果1×10^(-6) mol/L胰岛素作用24h可建立稳定IR-HepG2细胞模型;当益糖康含药血清浓度15%,作用时间48h时,葡萄糖消耗量到达最大;与模型组相比较,益糖康含药血清能够降低凋亡率,抑制细胞凋亡;提高IRS-2、PI3K、AKT基因的表达(P<0.01),提高IRS-2、p-AKT蛋白的表达(P<0.01)。结论15%益糖康含药血清、作用48h使IR-HepG2葡萄糖消耗量达到最大,抑制IR-HepG2凋亡,其作用机制可能与上调IRS-2/PI3K/AKT信号通路中关键分子的基因和蛋白表达有关。

光甘草定通过调节ERK/IRS-1和PI3K/Akt信号通路改善HepG2细胞的胰岛素抵抗

目的 探索光甘草定改善肝细胞胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的作用和机制。方法 通过高胰岛素诱导人肝癌HepG2细胞建立IR模型,采用葡萄糖氧化酶法检测细胞的葡萄糖消耗量及生成;荧光标记法检测葡萄糖摄取量;蒽酮法检测糖原含量;ELISA检测葡萄糖代谢关键酶的活性;Western blotting检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)、细胞外调节蛋白激酶/胰岛素受体底物-1(extracellular regulated protein kinase/insulin receptor substrate-1,ERK/IRS-1)信号通路相关蛋白以及葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)的表达。采用分子对接技术研究光甘草定和ERK分子间的相互作用。结果 光甘草定显著增加IR-HepG2细胞的葡萄糖消耗和摄取(P<0.05);通过显著提高糖原合成酶(glycogen synthase,GS)、葡萄糖激酶(glucokinase,GCK)和丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)活性(P<0.05、0.01),促进IR-HepG2细胞的糖原合成和糖酵解;通过显著减弱磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)的活性(P<0.05),抑制IR-HepG2细胞的糖异生。IR-HepG2细胞经光甘草定处理后,Akt、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)和叉头框蛋白O1(forkhead boxing protein O1,FOXO1)的磷酸化水平得到显著恢复(P<0.01),而这种作用被PI3K的抑制剂LY294002所逆转(P<0.01)。同时,光甘草定显著促进GLUT4向质膜的易位(P<0.01)。光甘草定显著降低IRHep G2细胞的ERK和IRS的磷酸化水平(P<0.01),还可作为ERK的I1/2型抑制剂。结论 光甘草定通过抑制ERK/IRS-1通路,激活PI3K/Akt信号通路,修复IR-HepG2细胞的糖代谢紊乱,缓解IR症状。

藤茶总黄酮调节C2C12细胞胰岛素抵抗的作用和机制研究

目的:观察藤茶总黄酮对棕榈酸诱导的C2C12肌管细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用的影响,并从IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号转导通路探讨其作用机制。方法:用含2%马血清的高糖培养基(DMEM)培养小鼠C2C12成肌细胞,诱导为成熟的肌管细胞后,用0.5 mmol/L棕榈酸诱导培养16 h建立细胞胰岛素抵抗模型。用CCK-8法测定不同浓度的藤茶总黄酮(5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、50μg/mL、80μg/mL)对C2C12细胞活性的影响,并确定后续实验的藤茶总黄酮高、中、低剂量。将C2C12细胞诱导成熟的肌管细胞分为正常组(NC)、高糖模型组(DM)和藤茶总黄酮高、中、低剂量组(AGH、AGM、AGL),检测各组细胞的葡萄糖消耗量,用Western Blotting法检测藤茶总黄酮对IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号转导通的蛋白表达的影响。结果:藤茶总黄酮浓度在50μg/mL时,细胞成活率最高。据C2C12细胞活性检测,得到用于后续细胞实验的藤茶总黄酮高、中、低浓度分别为80μg/mL、50μg/mL、30μg/mL。藤茶总黄酮高、中、低剂量组葡萄糖消耗量与高糖模型组比较显著增加(P<0.01)。藤茶总黄酮高、中剂量组显著提升IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号通路的蛋白表达(P<0.01)。结论:藤茶总黄酮可改善C2C12细胞葡萄糖消耗量从而改善胰岛素抵抗,其作用机制可能通过调节IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号通路实现。

雅连浸渍剂对2型糖尿病大鼠肠道菌群及IRS-1/PI3K/GLUT4通路的影响

目的:探讨雅连浸渍剂对2型糖尿病模型大鼠安全性、血糖血脂、IRS-1/PI3K/GLUT4和肠道菌群的影响。方法:采用高脂高糖饲料联合链脲佐菌素腹腔注射制备2型糖尿病大鼠模型,将60只大鼠随机分为空白组、模型组、二甲双胍组、雅连组。检测各组大鼠肝、肾功能,空腹血糖血脂,胰腺HE染色镜下检查,血清IRS-1/PI3K/GLUT4水平和肠道菌群变化。结果:与空白组比较,模型组大鼠AST、BUN、UA及空腹血糖血脂显著升高(P<0.01,P<0.05),胰腺有病理学改变,血清IRS-1、PI3K、GLUT4水平显著升高(P<0.01),肠道有益菌减少,致病菌增多;与模型组比较,雅连组给药4周后,肝、肾功能恢复正常,空腹血糖血脂和血清IRS-1、PI3K、GLUT4水平下降(P<0.01,P<0.05),肠道菌群有益菌增多,致病菌减少,菌群多样性更为丰富。结论:雅连口服是安全的,可以有效调节血糖血脂,作用机制可能与促进骨骼肌的葡萄糖摄取和调节肠道菌群有关。

从IRS-PI3K信号转导通路探讨寿尔智胶囊对阿尔茨海默病模型大鼠的作用

目的观察寿尔智胶囊对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠胰岛素受体底物-1(IRS-1)和胰岛素受体底物-2(IRS-2)及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的影响,探讨其相关作用机制。方法 SD大鼠40只分为中药寿尔智组、西药安理申组、空白对照组与模型组,每组10只;向大鼠海马区注射凝聚态Aβ_(25-35)建立AD模型,予相应药物灌胃。免疫组化法测定海马CA1区IRS-1、IRS-2、PI3K。结果 AD模型组大鼠IRS-1、IRS-2、PI3K的表达均有不同程度的下调,而寿尔智胶囊治疗后的大鼠海马组织IRS-1、IRS-2、PI3K的表达均有显著增加。结论寿尔智胶囊可能通过增加IRS-1、IRS-2、PI3K的表达,激活海马神经元胰岛素信号转导通路。

中药降糖复方水提取物对KK-Ay糖尿病小鼠骨骼肌糖代谢PI3K/Akt信号通路的影响

目的研究中药降糖复方水提取物(WEJTD)对自发性2型糖尿病(T2DM)模型KK-Ay小鼠骨骼肌糖代谢PI3K/Akt信号通路的影响。方法将KK-Ay小鼠按随机数法随机分为5组:模型组、盐酸二甲双胍(MH,250 mg/kg)组和WEJTD低、中、高剂量(2、4、8 g/kg)组,C57BL/6J小鼠作为对照组,每天ig给药1次,共12周,对照组和模型组ig等体积蒸馏水。给药12周后,取小鼠血清,ELISA试剂盒法检测胰岛素水平;Trizol法提取肌肉组织中的RNA,荧光实时定量PCR(q RT-PCR)检测磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、糖原合成酶(GS)、胰岛素受体底物(IRS-1)m RNA水平。结果与模型组比较,WEJTD高、中剂量显著上调小鼠血清胰岛素水平、骨骼肌中IRS-1 m RNA水平(P<0.05、0.001);高、中、低剂量均显著下调骨骼肌中GSK-3βm RNA水平,显著上调PI3K、Akt、GLUT-4、GS m RNA水平(P<0.05、0.01、0.001)。结论中药降糖复方通过上调PI3K/Akt信号通路,减少糖原沉积,刺激骨骼肌中葡萄糖转运。

肝脏胰岛素信号通路对改善胰岛素抵抗的影响

胰岛素抵抗（Insulin resistance，IR）是引起人体一系列代谢综合征的一种常见病理基础，容易导致肥胖、高血压、高血脂、葡萄糖耐量受损以及2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus，T2DM）等症状的产生。T2DM又是一种由胰岛素敏感性降低，胰岛B细胞功能异常，胰岛素抵抗等引起的代谢紊乱性疾病。

前列腺素E2及其受体在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜病变中的作用及机制研究

目的:探究前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)及其受体前列腺素E2受体(E-prostanoid2 receptor,EP2R)在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜病变中的作用及机制。方法:将SD大鼠随机分为6组:对照组使用标准饲料喂养;其他组大鼠使用高脂高糖饲料喂养+腹膜内注射链脲佐菌素(30 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型;PGE2组、Butaprost组、AH6809组大鼠分别给予玻璃体腔内注射5 mmol/L的PGE2、EP2R激动剂Butaprost或EP2R抑制剂AH6809,注射剂量为6μL。DMSO组注射等剂量DMSO盐溶液。每周注射1次,共注射4周。通过苏木精伊红(HE)染色评价视网膜病变;免疫组化或蛋白质印迹分析视网膜组织中EP2R、胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、内皮一氧化氮合酶(eNOS)、核因子κB p65(NF-κB p65)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。此外,分别应用PGE2、Butaprost或AH6809处理高糖培养基(4.5 g/L葡萄糖)培养的视网膜微血管内皮细胞系(HRMEC),并检测各组细胞活力、细胞凋亡率和血管生成情况。结果:与正常视网膜组织相比,糖尿病大鼠视网膜组织中EP2R呈显著高表达(P<0.05)。与对照组和模型组相比,PGE2和Butaprost组的EP2R、IRS-1、p-PI3K、p-Akt、ICAM-1、eNOS、NF-κBp65和VEGF的表达水平显著升高,而AH6809组的上述蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。体外研究中,与对照组和模型组HRMEC相比,PGE2和Butaprost处理的HRMEC的活力和血管生成数量显著升高,而细胞凋亡率显著降低,AH6809处理则抑制了上述细胞改变(P<0.05)。结论:PGE2/EP2R可能通过促进IRS-1/PI3K/Akt信号通路介导的炎症反应、细胞凋亡和血管生成促进糖尿病视网膜病变的发生和发展。