MALDI-TOF-MS在耐碳青霉烯肠杆菌多黏菌素B快速药敏试验中的应用

目的构建一种耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)多黏菌素B的快速药敏试验方法,为临床抗生素的选择和精准调整提供依据。方法采用WHONET 5.6软件对分离自西安市第一医院2023年3月至2024年3月的108株CRE菌株信息进行筛选,以肉汤稀释法为参比方法,采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行多黏菌素B快速药敏测定。结果108株CRE分离株以肺炎克雷伯菌为主(48.14%),其次是产气肠杆菌和奇异变形杆菌(各占13.89%)。标本来源以痰液为主(65.74%),其次尿液(18.52%)和血液(8.33%)。临床科室分布以神经外科为主(48.15%),其次为重症医学科(18.52%)和呼吸内科(14.81%)。CRE分离株对大部分药物呈现高度耐药,对常见β内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、β内酰胺复合药物耐药率分别超过70%,80%,50%和75%。与肉汤稀释法相比,MALDI-TOF-MS法测定CRE对多黏菌素B药敏结果的分类一致率(CA)为98.1%,重大误差(ME)为1.85%,未出现非常重大误差(VME),均在可允许范围之内。结论本院分离的CRE对多种抗菌药物广泛耐药,基于MALDI-TOF-MS的快速药敏试验方法准确可靠,可用来评价CRE对多黏菌素B的敏感性,便于临床及时调整泛耐药细菌治疗方案。

MALDI-TOF-MS高灵敏度分析EGFR基因多位点突变方法的建立与应用

目的以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)为分析平台,建立表皮生长因子受体(EGFR)基因多位点突变的高灵敏度同步检测方法,用于辅助临床伴随诊断。方法使用MALDI-TOF-MS推荐的网站设计引物和单碱基延伸引物(UEP),设计添加针对野生型基因组的blocker,以减少野生型模板对突变位点检测的干扰。用数字PCR定量标准品,使用定量后的标准品验证检测体系的灵敏度。收集228例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的血液标本,比较MALDI-TOF-MS平台与微滴式数字PCR(ddPCR)平台检测结果的特异度、灵敏度。结果MALDI-TOF-MS检测E746_A750del位点、T790M位点突变灵敏度达0.1%,最小突变检出拷贝数达2.8;L858R位点突变灵敏度达0.5%,最小突变检出拷贝数达12。与ddPCR检测相比,MALDI-TOF-MS检测E746_A750del、L858R和T790M位点的灵敏度、特异度、Kappa值分别为94.4%(34/36)、99.5%(191/192)、0.95,94.6%(35/37)、100.0%(191/191)、0.97,83.3%(15/18)、99.5%(209/210)、0.87。结论MALDI-TOF-MS建立的检测方法具有很高的灵敏度,与ddPCR检测具有非常高的一致性,有广阔的临床应用前景。

MALDI-TOF-MS鉴定成人颅内感染人型支原体1例

人型支原体是一类没有细胞壁、具有多形性、可通过滤菌器的已知最小原核型微生物。在人体中,其主要引起泌尿生殖系统感染,而在成人颅内感染中极为少见,且引起的颅内感染在诊断、治疗、预后管理等方面尚缺乏统一的共识。本文报告1例成人因车祸伤行神经外科手术后出现人型支原体颅内感染的病例,旨在为临床此类疾病诊治提供参考。

氮掺杂芦丁基碳点作为MALDI-TOF-MS基质对氨基酸的检测

以芦丁为碳源、乙二胺为氮源,采用水热法制备氮掺杂芦丁基碳点(N-CD)。通过优化温度、时间、碳源质量等反应条件得到N-CD荧光最大值。将N-CD作为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)基质对氨基酸进行检测。结果显示:氮原子在N-CD中主要以吡啶氮形式存在,氮原子的孤电子对与碳点的sP2芳香体系以垂直形式构成的共轭结构,增大了共结晶电子解吸/电离效率。使用N-CD对谷氨酸、组氨酸、苯丙氨酸和天冬氨酸进行检测。检测结果表明氨基酸离子信号强度最高可达30382。N-CD溶液作为基质最佳质量浓度为0.5 mg/mL,最大耐盐度为1 mol/L,初步实现对人体血清中氨基酸进行高通量检测。N-CD作为MALDI-TOF-MS新型基质材料在分析化学检测、环境检测以及生物小分子检测中具有良好的应用潜力,也为多元素掺杂生物质碳点材料作为MALDI-TOF-MS基质提供了参考。

MALDI-TOF-MS鉴定布鲁氏菌方法建立和评价

目的为了快速、准确、便捷的检测和鉴定布鲁氏菌,本研究拟建立鉴定布鲁氏菌属的MALDI-TOF-MS方法,利用现场分离菌株对该方法进行特异性和敏感性评价。方法收集布鲁氏菌标准菌株和地方流行株,应用MALDI-TOF-MS采集图谱,获取独特的蛋白质指纹图谱,汇总成标准图谱,建立布鲁氏菌鉴定数据库。并用39株布鲁氏菌菌株,对建立的数据库进行验证。结果经数据库鉴定,39株布鲁氏菌菌株与数据库中布鲁氏菌的匹配分数全部大于2.300,均报告为布鲁氏菌,表明鉴定结果的可信度很高。聚类分型结果表明,在蛋白质水平,MALDI-TOF-MS将测试的布鲁氏菌分成3大类。结论MALDI-TOF-MS对布鲁氏菌进行鉴定,具有快速、准确、灵敏等优点,可以实现对布鲁氏菌属的准确鉴定,对布鲁氏菌病的临床诊断具有较高的使用价值。

克罗诺杆菌MALDI-TOF-MS数据库的建立及应用

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionisation time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术建立了克罗诺杆菌MALDI-TOF-MS数据库,用于该菌属内种和亚种的高通量鉴定及菌株分型。在优化培养条件、样品处理方法及确定MALDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱采集参数的基础上,将采集的8种参考菌株蛋白质质谱数据通过Biotyper软件构建克罗诺杆菌的MALDI-TOF-MS数据库,再用相近肠杆菌及该属分离株验证数据库的准确性。结果表明:应用建立的克罗诺杆菌的MALDI-TOF-MS数据库对135株克罗诺杆菌分离株进行分析,鉴定分值均不小于2.0,达到了种水平鉴定要求,通过聚类分析,可进一步分型。构建的MALDI-TOF-MS数据库为克罗诺杆菌高通量鉴定与分型提供了一种新的手段。

MALDI-TOF-MS方法检测、鉴定副溶血性弧菌

目的建立快速检测和鉴定副溶血性弧菌的基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析方法。方法采用副溶血性弧菌标准菌株,在不同的培养基或不同的培养时间下进行MALDI-TOF-MS检测,同时对长时间冷冻保存的菌株进行检测,以验证该方法的稳定性和重复性。对不同来源的菌株进行检测,以确认方法的准确性。结果用PW、TCBS琼脂和弧菌显色培养基等3种培养基,分别培养18、42、72h时,对该菌的蛋白质谱图影响很小;保存2年的菌株,其MALDI-TOF-MS鉴定分值保持稳定;对来自不同国家和地区的菌株都可以得到同样准确的结果。结论 MALDI-TOF-MS方法可以快速、准确地鉴定副溶血性弧菌。因其具有很好的稳定性和重复性,可用于副溶血性弧菌的日常检测。

MALDI-TOF-MS鉴定宋内志贺菌的初步应用研究

目的通过扩充基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrixassisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)的数据库研究宋内志贺菌的鉴定。方法用提取法进行宋内志贺菌质谱图的建库,建库后分别使用直接涂抹法和提取法对50株宋内志贺菌野生株进行鉴定。结果提取法的鉴定符合率为100%,而直接涂抹法的鉴定符合率为60%。结论 MALDI-TOF-MS通过数据库的扩充和流程的优化可以鉴定宋内志贺菌到血清学水平,它将会成为临床微生物实验室的诊断和鉴别工具。

良性阵发性位置性眩晕患者维生素D状态及影响因素研究

目的 了解北京地区良性阵发性位置性眩晕(BPPV)患者维生素D水平状况,探讨性别、年龄、季节对维生素D水平的影响。方法 将2018年10月—2021年9月就诊于首都医科大学附属北京朝阳医院耳鼻咽喉头颈外科的208例BPPV患者作为研究对象进行回顾性研究。结果 所有BPPV患者血清25-羟维生素D[25(OH)D]水平为15.31(10.68, 21.03)ng/mL。比较不同性别、年龄和各个季节血清25(OH)D水平,男性高于女性,61~70岁年龄组高于其他年龄组;夏季血清25(OH)D水平最高,夏秋季明显高于冬春季。所有纳入研究的BPPV患者维生素D缺乏146例(70.19%);维生素D不足41例(19.71%);维生素D充足21例(10.10%)。回归分析显示性别、年龄和季节均能影响维生素D水平。结论 北京地区BPPV患者维生素D缺乏较为普遍,性别、年龄和季节对维生素D水平有影响。

应用MALDI-TOF-MS联合分离胶法快速鉴定阳性血培养标本的初步研究

目的运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)联合分离胶法快速鉴定血培养阳性标本,探讨快速鉴定法的符合率。方法运用分离胶法提取阳性血培养瓶中富集的菌落,应用MALDITOF-MS对经前处理的血培养阳性标本进行直接鉴定,鉴定结果与传统的VITEK-2Compact全自动细菌分析仪鉴定结果进行比较,若有不符,以16SrRNA序列分析结果作为金标准。结果在实验的200株阳性血培养标本中,革兰阳性菌的鉴定符合率达79.5%;革兰阴性菌鉴定符合率达85.7%;真菌的鉴定符合率达20.0%。由此可见,革兰阴性菌的鉴定符合率高于革兰阳性菌,二者鉴定符合率均远高于真菌。两种及两种以上细菌混合感染的阳性标本直接鉴定还存在一定困难,其直接鉴定方式还需进一步探讨。应用两种鉴定方法得出不同结果的12株阳性标本,16SrRNA序列分析结果均与VITEK-2Compact全自动细菌分析仪鉴定结果一致。结论MALDI-TOF-MS联合分离胶促凝管直接检测血培养阳性标本,对血流感染中主要病原菌的鉴定符合率较高,且迅速简便,此方法可将细菌更快地鉴定到种属,使临床能够进行早期治疗,有效控制菌血症的病死率和院内感染。

单增李斯特氏菌MALDI-TOF-MS鉴定与分型研究

为建立单增李斯特氏菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)快速鉴定与分型方法,实验收集37株单增李斯特氏菌分离株,应用MALDI-TOF-MS采集图谱,获取独特的蛋白质指纹图谱,汇总成标准图谱,建立单增李斯特氏菌鉴定数据库。采用单增李斯特氏菌标准菌株进行验证,表明鉴定结果的可信度很高。在数据库信息的基础上,对37株单增李斯特氏菌分离株进行聚类分型。分型结果表明,在蛋白质水平上,MALDI-TOF-MS可把37株单增李斯特氏菌分成9个型别。

MALDI-TOF-MS在病原微生物鉴定中的研究进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)是鉴定多种致病性细菌的快速、可靠的方法,具有较好的稳定性和可重复性,在快速和准确性方面的总体表现明显好于传统的细菌生化鉴定方法。适合于一些致病菌的快速、高通量的检测和鉴定。综述MALDI-TOF-MS技术在普通病原菌、多血清型病原菌、非发酵性细菌,以及植物病原菌等病原微生物鉴定方面的最新研究进展。

MALDI-TOF-MS技术快速鉴定临床酵母样真菌的应用评价

目的评价基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)在快速鉴定临床分离的酵母样真菌中的应用价值。方法收集临床分离的酵母样真菌135株,分别用VITEK MS、API20C和CHROMargar显色培养同时进行鉴定与比较,χ2检验分析VITEK MS和API及显色培养基鉴定结果的准确率,以真菌内转录间隔区(ITS)基因测序作为鉴定结果的金标准,同时比较各种方法在临床使用中的优缺点。结果 VITEK MS、API20C和显色培养基鉴定的准确率分别为98.5%(133/135)、78.5%(106/135)、59.3%(80/135),经χ2检验分析,差异有统计学意义(χ2=51.996,P<0.05)。结论 MALDI-TOF-MS可将酵母样真菌快速、准确地鉴定到种。

MALDI-TOF-MS用于微生物鉴定的影响因素分析

影响MALDI-TOF-MS微生物鉴定的因素有很多。本研究主要从微生物培养基、培养状态、菌体前处理、上样量等方面进行MALDI-TOF-MS操作技术和方法的探讨。研究结果显示:进行MALDI-TOF-MS细菌鉴定,培养时间在4～24 h之间为佳;尽量选择无色、不含盐的液体培养基;0.1μL菌液是最低鉴定菌量;上样量对结果无影响;对于菌体前处理,除按照标准化前处理程序操作外,也可将菌体加dd H2O制成混悬液进行点靶鉴定,这样更加简便。本研究有助于减少MALDI-TOF-MS操作盲目性,提高鉴定质量,利于操作的规范化和简便化。

糖调节受损患者血清25(OH)D和免疫相关因子对亚临床动脉粥样硬化影响的研究

目的:研究糖调节受损患者血清25(OH)D和免疫相关因子对亚临床动脉粥样硬化(AS)的影响。方法:选取2019年12月至2021年4月枣庄市立医院收治的142例糖调节受损患者,根据经颈动脉超声检查和臂踝脉搏波传导速度分组,仅糖调节受损患者为对照组(n=86),并发亚临床AS为观察组(n=56)。比较两组患者血清25(OH)D和免疫因子,应用颈动脉超声检测测定颈动脉内中膜厚度,Pearson法测定血清颈动脉内中膜厚度与血清25(OH)D和免疫因子的相关性。采集基线资料和血液学指标,单因素和多因素Logistic回归分析确定亚临床AS的影响因素,应用ROC曲线评估血清25(OH)D和免疫因子对亚临床AS的诊断效能。结果:观察组患者血清25(OH)D[(24.01±4.87)mmol/L vs 3(0.74±5.01)mmol/L,t=7.909,P=0.000)明显低于对照组,观察组患者TNF-α[(48.32±8.02)ng/L vs(33.21±9.00)ng/L,t=10.199,P=0.000)和IL-6[(41.22±9.43)ng/L vs(30.21±7.01)ng/L,t=7.492,P=0.000)明显高于对照组。颈动脉内中膜厚度与血清25(OH)D呈负相关(r=-0.428,P<0.001),颈动脉内中膜厚度与血清TNF-α和IL-6呈正相关(r=0.574,0.577,P<0.001)。Logistic回归分析结果表明,血清25(OH)D(OR=0.520,95%CI:0.401~0.675)、血清TNF-α(OR=1.667,95%CI:1.131~2.457)和血清IL-6(OR=1.478,95%CI:1.213~1.802)等是亚临床AS发生的影响因素。ROC曲线结果显示,血清25(OH)D最佳截断值为28.32 mmol/L,其对应的敏感度为69.64%,特异度为70.93%,AUC为0.803(95%CI:0.749~0.855);血清TNF-α临界值为40.56 ng/L,其对应的敏感度为71.43%,特异度为72.09%,AUC为0.761(95%CI:0.717~0.823);血清IL-6截断值为36.13 ng/L,其对应的敏感度为60.71%,特异度为60.47%,AUC为0.627(95%CI:0.566~0.702);回归分析对应的敏感度为85.71%,特异度为81.40%,AUC为0.889(95%CI:0.830~0.915)。结论:血清25(OH)D与免疫相关因子单独和联合回归检测可有效预测亚临床AS的发生,上述指标与颈动脉内中膜厚度相关,且血清25(OH)D和免疫相关因子是亚临床AS发生的预测指标,临床宜根据指标进行针对性干预,值得进一步研究。

应用MALDI-TOF-MS自建鲍氏志贺菌蛋白指纹图谱数据库的研究

目的运用MALDI-TOF-MS技术建立鲍氏志贺菌的蛋白指纹图谱并将其添加至数据库,实现对临床细菌的快速鉴定,便于临床医生对疾病进行快速而有效的控制。方法采用甲酸萃取法进行鲍氏志贺菌蛋白指纹图谱的添加,研究不同的标本前处理方法对鉴定结果的影响,并用新分离的鲍氏志贺菌和大肠埃希菌对图谱进行验证。结果采用新的图谱鲍氏志贺菌提取法鉴定准确率为95%,直接涂抹法准确率为79%,对大肠埃希菌的鉴定准确率为97%。鲍氏志贺菌不同处理方法的鉴定准确率比较,差异有统计学意义(P<(0.05)。结论新添加的鲍氏志贺菌蛋白指纹图谱能快速准确地鉴定鲍氏志贺菌,此图谱可以应用于鲍氏志贺菌的临床快速诊断。

老年血液透析病人衰弱与血清瘦素及25-羟维生素D的相关性研究

目的探究老年血液透析病人血清瘦素及25-羟维生素D[25(OH)D]水平,并分析其与透析病人衰弱的相关性。方法选取2021年4月至2023年4月我院收治的150例老年血液透析病人,依据Fried表型评价病人的衰弱情况,分为非衰弱组(51例),衰弱前期组(74例)和衰弱组(25例)。比较3组一般资料、血清瘦素、25(OH)D及心功能。采用多因素Logistic回归分析老年血液透析病人衰弱的影响因素。结果3组年龄、糖尿病比例、透析龄、左室舒张末期内径,以及白蛋白、镁、IL-6、瘦素、25(OH)D水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。多因素有序Logistic回归分析显示,年龄、透析龄、糖尿病、镁、IL-6、白蛋白、瘦素、25(OH)D、左室舒张末期内径是老年血液透析病人衰弱的独立影响因素(P<0.05)。结论针对白蛋白水平低、瘦素水平高、25(OH)D水平低的老年血液透析病人采取积极干预措施,有利于延缓衰弱的进展。

基于2D-DIGE/MALDI-TOF-MS技术筛选奶牛低血钙症生物标志物

奶牛乳热(MF)是一种严重的营养代谢性疾病,通常被分为临床型及亚临床型低血钙症(SH)。奶牛乳热的诊断通常是应用奶牛血浆中的钙浓度进行判定的,但是在奶牛乳热整个发生发展的过程中,发病的具体机制仍是研究的盲点。在本试验中通过筛选奶牛乳热、亚临床低血钙症及健康奶牛间生物标志物进而解释可能的发生机制。选取27头奶牛作为实验动物,并根据其血浆钙浓度及有无临床症状分为乳热组(MF组)、亚临床低血钙组(SH组)和正常组(C组)。在组内每3个样品混合成为1个混合样本应用于2D-DIGE试验。结果得到110个差异蛋白质点,选取其中80个点进行MALDI-TOF-MS质谱分析,得到66个阳性结果并整合成为16种蛋白质。根据试验结果,选取A2M、HP和PON1进行Western blotting验证试验。本试验首次证实A2M、HP和PON1是奶牛乳热症3种新的生物标志物,并分析了其在乳热症发生过程中的可能作用机制。

桂东北D/C界线沉积特征及对台盆相间演化的启示

台盆相间是桂东北泥盆纪和石炭纪沉积的重要特色,而D/C界线又是台盆相间沉积最突出的一个时段之一。文章回顾并评述了桂东北D/C界线的研究历程、相序划分、主要代表剖面,认为桂东北D/C界线可划分为碎屑岩相序和碳酸盐岩相序以及它们的过渡类型。通过对20条典型剖面的岩性组合特征对比,恢复了桂东北D/C界线海平面相对下降期的岩相古地理,结果显示桂东北在该时期主要存在柳州、桂林两大台地以及多个小型台地,台地间普遍发育快速相变的台沟、盆地沉积,石炭纪初期海水变浅,台地分布范围显著扩大,江南古陆供给增强,台盆相间格局迅速发展。为了进一步探讨桂东北D/C界线的演化过程和背后的控制因素,文章分析了广西整体的台盆相间演化的阶段性、同沉积构造作用以及海平面变化的影响,梳理了台盆相间演化过程中沉积环境分异与构造运动-海平面的关系,认为在滇黔桂裂谷盆地在持续断陷发展的前提下,桂东北D/C界线沉积分异的主要原因可能是受冈瓦纳大陆冰川形成与消融导致的海平面异常波动,以及柳江运动引发的局部同沉积断陷强度差异变动影响,且构造和沉积要素在D/C界线的耦合作用达到最强,最终促进桂东北台盆相间格局在D/C界线达到鼎盛。在此模式下,可以将台盆相间的演化划分为4个阶段,早泥盆世中期—晚期为台盆相间格局的孕育期,早泥盆世晚期—中泥盆世晚期沉积开始分异,为台盆相间格局的发展期,晩泥盆世—早石炭世台-盆出现强烈分割,海平面异常下降和柳江运动同时作用于沉积,为台盆相间格局的鼎盛期,早石炭世之后,台盆相间沉积维持了一定时期的强度,晚石炭世开始海水逐步恢复正常后台盆相间逐渐减弱,为台盆相间格局的衰退期。

二甲双胍联合维生素D对糖尿病合并骨质疏松症患者血清胰岛素样生长因子1及骨代谢标志物水平的影响

目的 探讨二甲双胍联合维生素D对糖尿病合并骨质疏松症患者血清胰岛素样生长因子1(IGF-1)及骨代谢标志物水平的影响。方法 选取北京医院2020年3月至2023年3月收治的160例2型糖尿病(T_(2)DM)合并骨质疏松症患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,各80例。对照组给予维生素D联合运动干预和控制饮食等常规血糖控制方法治疗,观察组在上述治疗的基础上外加二甲双胍治疗,2组均治疗6个月。比较2组患者治疗前后空腹血糖、餐后2 h血糖(2 hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血钙、血磷、骨钙素、总Ⅰ型胶原氨基端延长肽(T-PⅠNP)、IGF-1、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、维生素D_(3)水平以及总有效率。结果 治疗后,2组空腹血糖、2 hPG、HbA1c、血磷、hs-CRP水平均低于治疗前,且观察组均低于对照组(均P<0.05);2组血钙、骨钙素、T-PⅠNP、骨密度、IGF-1、维生素D_(3)水平均高于治疗前、且观察组均高于对照组[(2.82±0.20)mmol/L比(2.40±0.15)mmol/L、(19.9±2.4)ng/L比(13.6±2.1)ng/L、(48±4)μg/L比(37±4)μg/L、(0.98±0.16)g/cm^(2)比(0.78±0.15)g/cm^(2)、(206±35)μg/L比(137±25)μg/L、(37±3)μg/L比(29±3)μg/L](均P<0.05)。观察组总有效率高于对照组(P<0.001)。结论 二甲双胍联合维生素D治疗T_(2)DM合并骨质疏松症效果较好,可更好地控制血糖水平,上调血清IGF-1水平,改善机体骨代谢。