四种骨组织替代材料对成骨细胞IGF-ImRNA表达水平影响的研究

采用ＳＤ乳鼠颅顶骨体外培养成骨细胞，运用核酸分子原位杂交技术研究了三个时期、４种骨组织替代材料对成骨细胞ＩＧＦ－ＩｍＲＮＡ表达水平的影响。结果表明，替代材料能够影响成骨细胞ＩＧＦ－ＩｍＲＮＡ的表达，其表达规律的检测有可能成为评价骨组织替代材料生物相容性的一个指标。

一条新肺腺癌多药耐药细胞cDNA片段在胃癌中表达的研究

目的 我们在前期工作中通过抑制消减杂交技术 (Suppressionsubtractivehybridization ,SSH)在肺腺癌细胞中发现了 1条新的耐药相关基因片段。本研究主要探讨该片段在胃癌及癌旁正常组织中的表达情况。方法 利用随机引物法将新片段用地高辛标记为探针 ,通过组织原位杂交技术 (Insituhybridizationhistochemistry ,ISHH)检测其在胃癌及癌旁正常组织中的表达情况。结果 该片段在大多数 ( 12 16例 )胃腺癌组织中有表达 ,在癌旁正常组织中没有表达 ,二者之间相差非常显著 (P <0 .0 1) ,而印戒细胞癌组织中无该片段表达 ,与腺癌相比较相差非常显著 (P <0 .0 1)。结论 在大多数被检测的胃腺癌组织中有该片段的表达 ;该片段可能是一些肿瘤组织本身所具有的 。

病理性瘢痕中结缔组织生长因子的表达及其意义

目的:观测结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)在瘢痕组织中的表达,以探讨其与病理性瘢痕形成的关系。方法:分别取正常皮肤20例、成熟瘢痕20例、增生性瘢痕20例和瘢痕疙瘩20例标本,经HE染色、原位杂交(SABC法)染色,用图象分析系统定量分析CTGF在不同组织中表达的差异性。结果:CTGF在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、瘢痕疙瘩边缘正常皮肤中呈强阳性表达,明显高于其在正常皮肤中的表达,差异具有统计学意义(P<0.05);其在成熟瘢痕、增生瘢痕边缘正常皮肤呈弱阳性表达,与正常皮肤相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CTGF在病理性瘢痕的发生发展中起重要作用。

miR-126在膀胱移行细胞癌中的表达及其与VEGF的相关性

目的研究miR-126在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达和临床意义,以及与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的相关性,探讨miR-126在BTCC发生、发展和转移中的作用及机制。方法采用组织芯片平台,应用原位杂交方法(ISHH)检测56例BTCC组织、41例相应的癌旁组织和15例正常膀胱组织的miR-126表达,免疫蛋白印迹法(Western blotting)检测VEGF蛋白的表达。结果 miR-126在56例BTCC组织中的阳性表达率为23.21%,均显著低于癌旁组织和正常膀胱组织(43.90%和53.33%,P均<0.05)。VEGF蛋白在BTCC组织中的表达均显著高于癌旁组织和正常膀胱组织。BTCC组织中miR-126的低表达与肿瘤的淋巴转移密切相关,与病理分级有一定关系;而与患者性别、年龄、临床分期、肿瘤直径和肿瘤发生情况等均无相关性。相关性检验表明miR-126与VEGF表达呈显著负相关(P<0.05)。结论 miR-126在BTCC组织中的表达下调,可促进膀胱癌内微血管形成,提示miR-126可能作为重要的抑癌基因参与BTCC的发生和发展过程,并可能是膀胱癌转移的潜在标志。

含生长抑素mRNA神经元在移植视网膜发育中的表达

将６０例鼠龄１４ｄＳＤ大鼠视网膜移植到出生后１ｄ大鼠中脑偏左侧处，同时摘除新生鼠的右眼。术后１０ｄ至２２ｄ分别取移植视网膜及其中脑，在相应的年龄取正常视网膜作对照，应用原位杂交组化技术──地高辛标记的生长抑素的ｃＲＮＡ探针检测移植和正常视网膜中含生长抑素ｍＲＮＡ神经元出现时间、发育规律及定位分布。同时用免疫组化方法显示生长抑素免疫反应神经元的形态，以作对照和补充。原位杂交组化实验结果表明：在出生当天的移植视网膜节细胞层已出现阳性表达，出生后４ｄ，外核层也出现小的含生长抑素ｍＲＮＡ神经元，此种神经元随后减少、消失；与此同时内核层及节细胞层内含生长抑素ｍＲＮＡ神经元逐渐增多，至生后１２ｄ接近成年水平。通过对非移植大鼠视网膜进行正常对照观察，移植视网膜与非移植的正常视网膜生后发育的结果相似。生长抑素免疫反应神经元与原位杂交含生长抑素ｍＲＮＡ神经元的表达部位是一致的，但生长抑素免疫反应神经元可见其突起。

原位杂交组织化学技术中信号扩增的研究进展

原位杂交组织化学(ISHH)技术是利用两条互补单链之间通过核酸分子碱基的氢键配对反应形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学方法,在核酸原有的位置上把它显示出来。目前它已是一种比较成熟的技术,因其能对核酸进行原位检测而得到广泛的应用。ISHH的种类很多,其方法的改进主要在于检测信号提高上目前用于信号扩增的方法主要有原位PCR侧链系统、酪胺信号放大、催化报告分子沉淀、尾探针原位杂交和原位引物延伸标记这些方法的建立,不同程度的提高了信噪比使ISSH的灵敏性增加并得到广泛的应用。

大豆异黄酮对去卵巢大白鼠垂体雌激素受体和白细胞介素–2表达的影响

为探讨大豆异黄酮(SIF)对雌激素受体(ERα)和白细胞介素–2(IL–2)在去卵巢大鼠垂体各叶中表达的影响,对去卵巢大鼠皮下注射不同剂量的SIF(分别皮下注射1.5、1.0、0.5 mg/kg的SIF)和无水乙醇,另设假手术组,注射等量无水乙醇。待SIF处理至第2、6周时,于各组随机选取5只大鼠进行剖杀,分别对大鼠垂体中ERα和IL–2的蛋白及m RNA表达变化进行研究。结果显示,大鼠去除卵巢后,垂体各叶中ERα和IL–2的蛋白及m RNA表达强度和阳性细胞数均显著下降,补充SIF后有不同程度升高,其中高剂量SIF作用6周后,各指标的表达基本恢复至假手术组水平,其他各组随SIF的剂量增加及作用延长也有部分恢复,表明大豆异黄酮对去卵巢大鼠垂体各叶内ERα和IL–2蛋白及m RNA的表达有促进作用,呈现时间和剂量的依赖性。

VEGF在前列腺癌和良性前列腺增生组织中的表达

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在前列腺癌和良性前列腺增生发生与发展中的生物学作用。方法对30例前列腺癌、30例良性前列腺增生、16例正常前列腺标本进行原位杂交染色,然后行图像分析,观察VEGF与前列腺癌之间的关系并进行统计学分析。结果血管内皮生长因子在前列腺腺癌和良性前列腺增生组织中高表达,在正常前列腺组织中低表达,血管内皮生长因子与前列腺癌的血管生成相关。结论VEGF在前列腺癌血管生成、癌细胞转移中可能起到重要作用。

巢蛋白阳性细胞在胎儿肝中的分布及形态学研究

目的观察巢蛋白(nestin)阳性细胞在发育早、中期胎儿肝中的形态及分布,探讨其在肝发育中的作用.方法取10～20周胎儿肝组织,常规石蜡切片,地高辛标记nestin寡核苷酸探针,原位杂交组织化学法显示netin阳性细胞.结果nestin阳性细胞主要分布在肝界板处或发育中的胆管周围,细胞体积较小,细胞核呈圆或卵圆形,核大,常见双核.结论肝内存在一定数量的nestin阳性细胞,该细胞具有较强的分裂增殖能力,可能是胚胎早期发育过程中隐藏在机体各种组织中的一类具有相同功能的细胞,在日后的肝细胞修复及肿瘤的发生中起着重要的作用.

固定时间对原位杂交的影响

目的研究组织固定时间对原位杂交的影响。方法选择了18个固定时间点的胃癌组织标本,用两种探针进行原位杂交实验。结果固定时间为8-24 h胃癌组织胞核阳性细胞个数及平均光密度为（84/0.40）,明显高于其它组;固定时间为6-16 h胃癌组织胞浆阳性细胞个数及平均光密度为（84/0.40）,明显高于其它组。结论胃癌组织胞核阳性最佳固定时间为8-24 h,胃癌组织胞浆阳性最佳固定时间为6-16 h。

NFκBmRNA在卵巢癌中的表达和意义

目的:探讨核转录因子κB(NFκB)mRNA在卵巢癌组织中的表达和意义。方法:采用原位杂交方法检测卵巢癌组织和正常卵巢组织中NFκB/p65mRNA的表达。结果:NFκB/p65mRNA在卵巢癌中的表达明显强于正常卵巢,与卵巢癌临床分期相关。结论:NFκB与卵巢癌的发生发展密切相关。