ISO-DALT双向电泳方法的优化与改进

通过对ISO-DALT双向电泳技术进行优化与改进,建立了一套适合于UV-B胁迫下水稻蛋白质组分析的双向电泳技术.用此方法对经低剂量UV-B辐射处理的水稻品种IR64的叶片蛋白进行双向电泳,可以分辨出1200-1300个蛋白(肽)点,等电点(pI)在3.5-9.3之间,相对分子质量在10-120 ku之间,分辨率较高,且重复性较好.

红麻细胞质雄性不育系与保持系总蛋白提取及双向电泳体系优化

为探讨红麻细胞质雄性不育形成的分子遗传机理,以红麻细胞质不育系L23A和保持系L23B开花期叶片为材料,对其红麻蛋白质双向电泳体系进行研究,比较TCA/丙酮和酚抽提法提取红麻叶片总蛋白,同时优化上样量和样品制备方法,建立了红麻蛋白质的双向电泳技术体系和凝胶成像染色法,利用PDquest软件分析双向电泳凝胶的相关差异蛋白。结果表明:(1)TCA/丙酮法比酚抽提法更适合于ISO-DALT电泳系统;(2)TCA/丙酮提取的红麻叶片粗蛋白平均产量为31.67 mg/g,是酚抽提法的1.77倍,但裂解效率为160 mg/g,是酚抽提法的36%;(3)每根胶条最佳上样量为300μg;(4)考马斯亮蓝G-250比R-250以及银染色法效果更佳,在17 cm×17 cm的凝胶上平均可获得708个蛋白质点。本研究建立的红麻细胞质雄性不育系与保持系总蛋白提取方法及双向电泳体系,可为揭示红麻雄性不育分子机理奠定基础。

两种不同体系的双向电泳比较

探讨蛋白质组学中不同体系的双向凝胶电泳技术(2-DE)对昆虫细胞内蛋白质分离和电泳结果的影响。以经Cry1Ac抗性筛选的粉纹夜蛾BT1-Tn-5B1细胞为例,分别进行ISO-DALT和IPG-DALT方法进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳,并比较了电泳图谱。ISO-DALT得到了700多个蛋白质斑点,IPG-DALT得到了800多个蛋白质点。前者的pH梯度不稳定,受电场和时间的影响较大,制得的胶条的重复性不好,但对样品的要求不高。后者有稳定的pH梯度,操作方便,但对样品中盐离子浓度的耐受性低。