长顺绿壳蛋鸡ITPR1基因RYDR-ITPR结构域的多态性对蛋壳品质的影响

为了探究贵州特产长顺绿壳蛋鸡ITPR1基因RYDR-ITPR结构域的多态性对蛋壳品质的影响,采用在线引物设计软件Primer Premier 3.0设计1对引物,扩增ITPR1基因RYDR-ITPR结构域,利用双向直接测序和序列比对法挖掘单核苷酸多态性(SNP)位点,应用SPSS 18.0软件分析SNP位点对长顺绿壳蛋鸡蛋壳品质的影响。结果显示,在ITPR1基因第17~19内含子区共发现3个SNP位点,分别为位于18内含子上的g.18853584 G>T、g.18853600 A>G突变位点和19外显子上的g.18853848 C>T突变位点;3个SNP位点均为中度多态,均未偏离Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),共检测到4种单倍型和7种双倍型。关联分析结果显示,位于19外显子上的g.18853848 C>T突变对蛋壳厚度有显著影响,TT、CC基因型显著高于TC基因型(P<0.05);双倍型H3H3的蛋壳厚度和蛋壳强度测定值最高。综上,长顺绿壳蛋鸡ITPR1基因RYDR-ITPR结构域中g.18853848 C>T突变可能是影响蛋壳厚度的标记位点,双倍型H3H3可能是蛋壳厚度和蛋壳强度的有利双倍型。

抑郁倾向Itpr2-/-小鼠海马3D-ASL灌注成像改变

目的研究肌醇1,4,5-三磷酸受体2型(Itpr2)全身敲除小鼠(Itpr2^-/-小鼠)行为学变化,并利用三维动脉自旋标记(3D-ASL)成像探究海马血流灌注量可能存在的异常情况。方法将28只Itpr2^-/-小鼠作为实验组,20只野生型小鼠作为对照组,采用行为学测试的方法对实验组Itpr2^-/-小鼠及对照组野生型小鼠进行抑郁倾向的考察,测试内容包括糖水偏爱实验、悬尾实验、强迫游泳实验以及旷场实验。分别随机选取15只Itpr2^-/-小鼠及14只野生型小鼠,进行3D-T2WI结构图像及海马中间层面的3D-ASL图像的采集,计算得出该海马层面的血流灌注图(CBF图),利用ITK-SNAP手动勾画左右海马区域并测出其左侧海马、右侧海马的血流灌注值(CBF值)。结果行为学测试结果显示Itpr2^-/-小鼠出现明显抑郁倾向,糖水偏爱测试显示Itpr2^-/-小鼠糖水偏好百分比下降(P<0.05),悬尾实验中Itpr2^-/-小鼠的不动时间延长(P<0.05),强迫游泳实验中中Itpr2^-/-小鼠的不动时间延长(P<0.01),而旷场实验中两组小鼠行为没有明显差异(P>0.05)。相较于正常对照组小鼠,Itpr2^-/-小鼠左侧(P<0.01)及右侧(P<0.01)海马区平均血流灌注量下降,其中实验组Itpr2^-/-小鼠及正常对照组小鼠的左侧海马CBF平均值分别为73.30±5.61和95.77±5.10,右侧海马CBF平均值分别为73.53±5.70和100.5±4.70,双侧海马最终计算所得平均值分别为73.42±5.61和98.12±4.75。结论Itpr2的缺失可能与小鼠抑郁倾向相关,且对海马的平均血流灌注量存在影响。

ITPR2基因内含子遗传变异与鸭蛋壳品质关联性分析

Ca^2+调控基因ITPR2是细胞内一种重要的配体门控,钙离子跨膜转运活性的关键调控因子,影响钙蛋壳的品质,对ITPR2基因多态性与蛋壳品质间的关联性角度进行深入探究,旨在为利用该基因指导蛋鸭的遗传育种提供参考。本文以三穗鸭(Anas platyrhyncha domestica)为材料,采用常规PCR、直接测序等方法筛查ITPR2基因多态性。结果显示:在ITPR2基因中共发现4个SNP位点,分别处于内含子10的g.128643840 G>A、g.128643903 G>A和g.128643906 G>A,以及内含子14的g.128659401 T>G,4个SNP位点中g.128643840 G>A和g.128643903 G>A位点三穗鸭群体中基因型分布均显著偏离哈代温伯格平衡(Hardy-Weinberg平衡)(P<0.05)。4个SNPs均对蛋壳品质有显著影响,其中g.128643840 G>A、g.128643903 G>A及g.128659401 T>G位点能显著提高蛋壳强度(P<0.05),g.128643840 G>A位点显著影响蛋黄色泽(P<0.05)。研究结果可作为蛋壳品质遗传育种的参考。

ITPR1基因与自闭症谱系障碍关系的研究进展

自闭症谱系障碍(ASD)是一种常见的高度遗传的异质性神经发育障碍。作为由三磷酸肌醇(IP3)激活的细胞内质网钙通道,肌醇1,4,5-三磷酸受体1型(ITPR1)通过调节细胞内钙离子信号变化影响神经细胞突触的结构和功能。遗传学研究表明ITPR1基因改变与ASD相关。多个与ASD发生相关的基因通过影响ITPR1的表达与功能导致突触结构异常与功能障碍。目前,ASD缺乏客观易行的诊断方法以及对核心缺陷的治疗手段,ITPR1功能改变和ASD患者的核心症状相关。因此,通过对ITPR1引起ASD的病理改变和机制做进一步研究,有助于寻找简单实用的生物学诊断标志物和用于治疗ASD核心症状的药物。

IP3R2基因敲除小鼠的繁育及基因型鉴定

目的:繁殖并鉴定IP3R2基因敲除小鼠,为后续实验提供样本支持,同时验证PCR法对基因鉴定的适用性。方法:购买IP3R2杂合子小鼠15只,以1雄2雌的合笼方式进行繁殖。繁殖出的子代小鼠生长至6周时,剪子代鼠尾做基因提取及PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳结果判定。取鉴定结果为IP3R2基因敲除纯合子小鼠和野生型小鼠脑组织进行Western印迹及免疫荧光双标法,验证脑组织中IP3R2蛋白的表达情况。结果:可成功繁育IP3R2基因敲除小鼠,子代小鼠中,IP3R2纯合率为23.3%。PCR扩增可成功鉴定子代小鼠的基因型。与野生小鼠比较,IP3R2基因敲除小鼠脑组织中IP3R2表达量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:该实验可成功繁殖并鉴定出IP3R2基因敲除小鼠,为后续实验提供大量样本,PCR技术可快速、准确地鉴定IP3R2基因型,为后续实验提供技术支持。

ITPR1基因过表达对鸭子宫上皮细胞Ca2+浓度、脂质含量及钙转运相关基因的调控效应

肌醇1,4,5-三磷酸受体Ⅰ型(Inositol1,4,5-trisphosphatereceptor1,ITPR1)是细胞内Ca2+释放的重要通道。为探讨ITPR1基因过表达对鸭子宫上皮细胞Ca2+浓度和脂质含量的调控效应及其对钙转运相关基因的影响,文中构建鸭ITPR1基因结构域的真核表达载体,转染鸭子宫上皮细胞,检测细胞ITPR1基因的过表达量、Ca2+浓度、细胞的脂质含量以及其他6个钙转运相关基因的表达量。结果显示,转染后子宫上皮细胞内的Ca2+浓度显著降低(P<0.05),甘油三酯含量极显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白含量极显著降低(P<0.01);相关性分析结果显示,C端ITPR1基因过表达量与总胆固醇含量呈极显著正相关(P<0.01),与低密度脂蛋白含量呈显著正相关(P<0.05), N端ITPR1基因过表达量与甘油三酯含量呈极显著正相关(P<0.01),与Ca2+浓度呈显著负相关(P<0.05);RT-qPCR结果显示,C端ITPR1基因过表达对IP3R2、VDAC2、CAV1基因的表达有显著抑制作用,N端ITPR1基因过表达对IP3R3、CACNA2D1基因的表达有显著促进作用。总之,ITPR1基因过表达能促进鸭子宫上皮细胞内Ca2+释放,促进甘油三酯、低密度脂蛋白和胆固醇的合成,抑制高密度脂蛋白的生成,且ITPR1基因过表达对6个钙转运相关基因的表达均产生影响。

基于线粒体和核基因序列的蜜蜂属系统发育分析

文章测定了中国分布的蜜蜂属(Apis)5种蜜蜂22个样本的线粒体基因ND2、CO2、16S rRNA以及核基因ITPR的序列,对序列的碱基组成和蜜蜂种间的遗传距离进行了分析。结合下载的蜜蜂属其他4个种的相关序列,采用最大简约法、邻接法和最大似然法重建了蜜蜂属系统发育关系。系统发育分析结果支持蜜蜂属划分为3个类群,即小蜜蜂类群(包括小蜜蜂和黑小蜜蜂)、大蜜蜂类群(包括大蜜蜂和黑大蜜蜂)和穴居蜜蜂类群(西方蜜蜂、东方蜜蜂、沙巴蜂、苏拉威西蜂、绿努蜂),且小蜜蜂类群较早分化。结果还显示,我国海南岛的大蜜蜂和大陆的大蜜蜂之间可能存在较大的遗传分歧。

基于蛋白质组学的噪声性隐性听力损失机制研究

目的通过蛋白质组学对噪声性隐性听力损失机制进行初步探索。方法于2022年10月,按照单纯随机抽样的方法将64只SPF级雄性C57BL/6J小鼠分为对照组和噪声暴露组,每组32只。噪声暴露组在声压级100 dB、2000~16000 Hz宽频噪声下暴露2 h,构建小鼠隐性听力损失模型。采用听性脑干反应(ABR)测试小鼠噪声暴露后第7天的听力阈值变化情况,免疫荧光观察基底膜毛细胞损伤情况,4D-Label-free定量蛋白组学鉴定并分析各组小鼠内耳差异表达蛋白质,并用蛋白印迹(Western blotting)法进行验证,采用方差分析和t检验对结果进行统计分析。结果噪声暴露后第7天,短声(click)、8000 Hz声刺激时两组小鼠听力阈值差异均无统计学意义(P>0.05),16000 Hz声刺激时噪声暴露组小鼠听力阈值明显高于对照组(P<0.05);共聚焦免疫荧光显示噪声暴露组小鼠耳蜗组织基底膜毛细胞排列整齐,但中回和底回突触前膜C末端结合蛋白2抗体(CtBP2)相对表达均明显少于对照组(P<0.05)。GO富集分析显示,差异表达蛋白功能主要集中在膜电位调节、配体门控通道活性、配体门控离子通道活性等。KEGG通路富集分析发现,差异表达蛋白明显富集的通路包括磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、NOD样受体信号通路、钙信号通路等。Western blotting结果显示,噪声暴露组小鼠肌醇1,4,5-三磷酸受体3型(Itpr3)表达量升高,溶脂载体家族38成员2(2Slc38a2)表达量降低(P<0.05)。结论在构建的小鼠噪声性隐性听力损失模型中,通过蛋白质组学分析、筛选并验证差异表达蛋白Itpr3和Slc38a2,初步证实以Itpr3和Slc38a2为代表的谷氨酸能突触相关通路可能参与了隐性听力损失的发生。

Gillespie综合征1例

对2019年11月南京医科大学附属儿童医院康复科诊断的1例Gillespie综合征患儿的病历资料进行回顾性分析。患儿,男,6月龄,其临床特点为运动智力落后、肌张力低下、双眼畏光、眼球震颤、双眼不能注视及追视物,眼科裂隙灯下检查提示瞳孔固定扩大、双眼虹膜部分缺损、特征性虹膜残丝,基因检测及生物信息学分析显示患儿ITPR1基因第26内含子存在1个杂合剪接突变c.3256-1G>A,为新发致病性变异,患儿父母该基因位点均未见异常。提示有双眼虹膜部分缺损、运动智力落后及肌张力低下的患儿应考虑Gillespie综合征,完善基因检测有助于早期明确诊断。