淫羊藿苷对小鼠慢性低氧诱导学习记忆功能降低的防护作用及机制

目的探究淫羊藿苷(ICA)对小鼠慢性低氧环境暴露诱导记忆障碍的主要保护作用机制。方法选择8周龄雄性C57BL/6小鼠40只,建立模拟海拔6000 m低氧环境暴露动物模型。40只小鼠随机分至常氧组、常氧+ICA组、低氧组、低氧+ICA组(每组10只)。暴露28 d后进行Y迷宫、新物体识别实验评测小鼠空间记忆功能。利用免疫荧光染色观察小鼠海马组织小胶质细胞活化程度和神经元损伤情况,利用qRT-PCR方法检测海马组织iNOS、IL-1β、TNF-α、Cxcl-1、IL-4等炎性分子表达。使用喹啉酸试剂盒检测海马组织色氨酸犬尿氨酸途径代谢产物喹啉酸含量,使用qRT-PCR方法检测色氨酸犬尿氨酸代谢途径Ido1、Kmo、Haao、Kynu、Kyat3相关分子mRNA表达情况。结果与常氧组相比,Y迷宫及新物体识别实验结果显示低氧组小鼠出现明显空间记忆障碍(P<0.01);免疫荧光染色组织切片可见低氧组较常氧组海马小胶质细胞活化及神经元损伤明显(P<0.01);低氧组海马组织喹啉酸含量较常氧组升高(P<0.01);qRT-PCR检测发现低氧组海马组织炎症相关分子表达较常氧组显著升高(P<0.01),色氨酸犬尿氨酸代谢相关分子Ido1(P<0.01)、Kmo(P<0.01)、Haao(P<0.01)表达较常氧组明显升高,Kynu(P<0.01)、Kyat3(P<0.01)较常氧组表达降低。低氧+ICA组与低氧组小鼠相比,空间记忆能力有所改善(P<0.05),海马区小胶质细胞活化及神经元损伤相对减弱(P<0.05),炎症相关分子(P<0.01)及色氨酸犬尿氨酸代谢相关分子(P<0.01)表达均有相应回调。结论ICA可通过调控小胶质细胞色氨酸犬尿氨酸代谢,抑制小胶质细胞炎性活化和喹啉酸生成,缓解慢性低氧诱导小鼠海马神经元损伤,改善记忆功能减退。

淫羊藿苷对家兔阴茎海绵体cGMP浓度的效果

目的 观察淫羊藿苷对家兔阴茎海绵体组织中cGMP浓度的影响。方法 应用12 5I放射免疫法 ,测定不同浓度的淫羊藿苷对阴茎海绵体内PDE5酶底物cGMP浓度的影响 ,并以西地那非和罂粟碱作为阳性对照。结果 淫羊藿苷能提高阴茎海绵体内cGMP浓度 ,具有浓度依赖性 (P<0 0 0 1) ,其半数有效浓度 (EC50 )为 5 13μmol·L-1,而西地那非 0 31为 μmol·L-1,罂素碱为 3 15 μmol·L-1。

淫羊藿甙对大鼠卵泡颗粒细胞和肾上腺皮质细胞分泌功能的影响

淫羊藿甙与大鼠卵泡颗粒细胞和肾上腺皮质细胞共育３ｈ后测定培养液中激素含量。结果：淫羊藿甙（３０～１０００μｇ／Ｌ）可促进卵泡颗粒细胞分泌雌二醇；

淫羊藿甙诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究

目的:采用淫羊藿苷icarrin(ICA,从朝鲜淫羊藿中提取的中药单体),作用于人急性早幼粒白血病细胞HL-60,较系统地对ICA诱导肿瘤细胞凋亡进行了观察,为ICA的开发应用提供实验依据.方法:采用电镜、流式细胞术、DNA片段化检测、RT-PCR等技术进行研究.结果:ICA在体外诱导HL-60细胞凋亡,呈典型的细胞凋亡形态学和生化特征,并具有时间剂量依赖性.ICA诱导肿瘤细胞凋亡的同时,下调相关基因bcl-2和c-myc基因mRNA和蛋白表达水平.结论:ICA体外诱导HL-60细胞凋亡,其机理可能与下调bcl-2和c-myc基因mRNA和蛋白表达水平密切相关.

淫羊藿甙对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

本实验根据小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力及对巨噬细胞产生日细胞介素－１（ＩＬ－１）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的能力进行活性测定。观察了淫羊藿甙对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。结果表明：当淫羊藿甙在０．０１～１μｇ／ｍｌ时能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的功能，在０．００１～１０μｇ／ｍｌ的浓度时与ＬＰＳ（１０μｇ／ｍｌ）协同作用能促进ＩＬ－１和ＴＮＦ产生，提示：淫羊藿甙有明显激活巨噬细胞的作用。

淫羊藿中淫羊藿苷的提取工艺研究

目的研究淫羊藿中淫羊藿苷的提取工艺条件。方法采用HPLC法对不同提取工艺条件下淫羊藿苷含量进行测定,探讨不同提取溶媒、煎煮时间、浓缩时间及温度、药材粉碎度对淫羊藿苷含量的影响。结果不同提取方法对淫羊藿中淫羊藿苷的提取率影响较大。结论本研究可为工业大生产中合理地提取淫羊藿活性成分提供参考。

淫羊藿苷、黄芩苷联合多柔比星抑制肝癌细胞APRIL表达和逆转肿瘤免疫逃逸

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(icarrin,ICA)、黄芩苷(baicali,BAI)联合化疗药多柔比星(doxorubicin,又称ADM)抑制肝癌HepG2细胞增殖诱导配体(proliferation-inducing ligand,APRIL)的表达,进而抑制肿瘤细胞的增殖和逆转肿瘤细胞免疫逃逸的作用和机制。方法:MTT法检测25μg/ml ICA、200μg/ml BAI、2μg/ml ADM以及12.5μg/ml ICA+1μg/ml ADM、100μg/ml BAI+1μg/ml ADM等5个用药处理组与未用药对照组HepG2细胞的增殖活性;RT-PCR检测APRIL及其受体HSPG、凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平;MTT法检测CD3AK(anti-CD3 antibody induced activated killer cells)对用药处理组和未用药对照组HepG2细胞的杀伤活性。结果:ICA、BAI以及ADM对HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用,且呈时间依赖效应;ICA、ADM、ICA+ADM、BAI+ADM组作用96 h抑制率最高,分别为(29.30±6.62)%、(63.60±1.35)%、(99.03±0.10)%、(98.89±0.18)%(均P<0.01)。HepG2细胞高表达APRIL及其受体HSPGmRNA。ICA、BAI以及ADM下调HepG2细胞APRILmRNA以及凋亡相关蛋白bcl-2 mRNA的表达水平。ICA、BAI、ADM以及ICA+ADM、BAI+ADM能增加HepG2细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性,杀伤率由对照组的(30.00±4.50)%分别增加到(97.23±5.11)%、(93.12±9.88)%、(60.45±5.71)%、(43.87±8.2)%、(47.25±2.68)%(均P<0.01);且经CD3AK作用后,HepG2细胞bcl-2 mRNA的表达进一步下调。结论:ICA、BAI联合ADM抑制HepG2细胞APRIL、bcl-2 mRNA的表达,进而抑制肿瘤细胞增殖;同时增强其对CD3AK细胞的杀伤敏感性,逆转肿瘤细胞的免疫逃逸。

固定化蜗牛酶同时生物转化淫羊藿中4种黄酮苷

目的采用固定化蜗牛酶同时生物转化淫羊藿Epimedii Folium中4种黄酮苷,并对工艺进行优化。方法交联-包埋法制备固定化蜗牛酶,单因素试验优化生物转化工艺,HPLC法测定转化率,LC-MS/MS法鉴定转化产物。结果在最佳条件(p H值5,温度50℃,蜗牛酶与底物比例1∶1,底物质量浓度1.0 mg/m L,转化时间2 h)下,朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷可分别转化为箭藿苷A、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ,以及宝藿苷Ⅰ和淫羊藿苷元(两者均为淫羊藿苷转化产物),平均转化率分别为73.69%、74.01%、73.46%、75.52%。结论该工艺稳定简单,重复性好,可用于淫羊藿中4种黄酮苷的高效转化。

淫羊藿多糖和甙的胸腺免疫药理作用

给小鼠sc淫羊藿多糖(EPS)和甙(Icarrin).对二者的胸腺免疫药理作用进行研究,结果发现:胸腺细胞产生IL-2和~3H-TdR的掺入能力增强。EPS使胸腺内L_3T_4^+和Lyt_z细胞数目减少.伴同胸腺细胞对ConA刺激的增殖反应降低。Icarrin对胸腺内上述两个细胞亚群无影响,但使胸腺细胞对ConA刺激的反应增高。故认为EPS和Icarrin对胸腺都有免疫激活作用。EPS可能有促进胸腺释放成熟细胞的作用。

淫羊藿苷对更年期综合征模型大鼠的实验

目的:探讨淫羊藿苷对更年期综合征(CS)的影响.方法:将40只雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、淫羊藿苷低剂量治疗组(质量分数为25 mg/kg)、中剂量治疗组(质量分数为50 mg/kg)和高剂量组(质量分数为100 mg/kg)5组,每组8只.除假手术组外,其余各组大鼠去势4周,复制CS动物模型后,分别给予灌胃相应的生理盐水和药物60 d,采用放射免疫分析法检测各组大鼠血清雌二醇(E_2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)以及下丘脑β-内啡肽(β-EP)的含量,放射配体结合分析法检测子宫、脾脏雌激素受体(ER)水平.结果:与假手术组相比,模型组大鼠E_2、下丘脑β-EP以及子宫、脾脏ER表达量显著性下降(P<0.05),血清FSH与LH表达量显著性升高(P>0.05).与模型组相比,淫羊藿苷低、中、高剂量治疗组模型组大鼠E_2、下丘脑β-EP以及子宫、脾脏ER表达量显著性上升(P<0.05),血清FSH与LH表达量显著性降低(P>0.05),且淫羊藿苷剂量越高,治疗效果越高.结论:淫羊藿苷对更年期综合征有治疗作用.

淫羊藿甙对小鼠体外脾脏细胞增殖及产生集落刺激因子样活性的影响

为探讨淫羊藿甙（ＩＣＡ）对免疫功能的影响。本实验采用［＾３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法及骨髓细胞［＾３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法，观察了ＩＣＡ对刀豆球蛋白（ＣｏｎＡ）诱导小鼠脾淋巴细胞增殖反应及ＩＣＡ对ＣｏｎＡ或脂多糖（ＬＰＳ）诱导的小鼠脾淋巴细胞产生集落刺激因子（ＣＳＦ）样活性的影响。实验结果表明：ＩＣＡ能显著促进ＣｏｎＡ诱导的小鼠体外脾淋巴细胞增殖；同时检测ＩＣＡ和小鼠脾淋巴细胞培养上清液证明；

淫羊藿苷提高SIRT6酶活性及抑制小鼠NF-κB炎症信号通路的实验研究

目的观察淫羊藿苷（Icrrin，ICA）对组蛋白去乙酰化酶SIRT6的激活作用及对老年小鼠体内NF-kB（p65）、SIRT6蛋白表达及NF—kB信号通路下游炎症细胞因子表达的影响。方法以体外酶学实验观察ICA对SIRT6的激活作用并绘制不同剂量浓度激活效率曲线。选取24月龄老年组（N=11）、24月龄＋ICA干预组（N=12）和3月龄青年组小鼠（N=10）的心、肝、肌肉组织，用Westernblot检测NF-kB（p65）和SIRT6蛋白表达水平；采用ELISA法柃测小鼠血清中肿瘤坏死网子α（TNF—α）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）、白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-6（IL-6）的含量。结果体外酶学实验显尔ICA随着药物浓度的下降，对SIRT6逐渐呈现激活效应，在10。mol／L浓度时达到最大激活效应为142％。小鼠实验显示ICA干预后，心脏、肝脏与肌肉组织中NF—kB（p65）蛋白表达与老年小鼠比较呈现下调趋势，而SIRT6蛋白表达较老年小鼠则呈现上调趋势；与青年小鼠比较，老年小鼠血清中炎症细胞TNF-α、ICAM-1、IL-2、IL-6的含量均明显上调（P〈0．05、P〈0．01）；与老年小鼠比较，ICA干预后小鼠血清中炎症因子TNF-α、ICAM-1、IL-2、IL-6的含量均明显下降（P〈0．05、P〈0．01）。结论ICA对SIRT6的酶活性具有显著的激活效应，且在极低的药物浓度下仍对SIRT6有激活作用；ICA能上调老年小鼠组织中SIRT6蛋白表达，抑制NF—kB（p65）蛋白表达及下调下游炎症细胞因子的产生，提示ICA延缓炎性衰老的作用机制及干预新靶点与NF—kB信号通路和组蛋白去乙酰化酶SIRT6密切相关。

HPLC法测定仙鹿胶囊中淫羊藿苷的含量

目的:建立HPLC法测定仙鹿胶囊中淫羊藿苷的含量。方法:采用YMC C18分析柱(150 mm×4．6 mm,5μm),流动相:甲醇-水(55:45),检测波长:270 nm,流速:1．0 ml·min-1,柱温:25℃。结果:淫羊藿苷在0．1-1．0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0．999 9(n=5),平均回收率为98．6％,RSD为1．3％。结论:本法准确可靠,简便灵敏,重复性好,可用于仙鹿胶囊的质量控制。

淫羊藿甙对大鼠成骨细胞功能及Osterix表达的影响

目的观察淫羊藿甙对体外培养成骨细胞功能及Osterix(Osx)表达的影响,探讨淫羊藿抗骨质疏松的作用机制。方法分别用酶消化法获得新生SD大鼠成骨细胞,在培养液中分别加入不同浓度的淫羊藿甙,观察成骨细胞的增殖功能和分化功能。用RTPCR法测定成骨细胞OsxmRNA表达。结果增殖率测定淫羊藿甙从1ng/ml起光密度值均较对照组增加,且呈剂量依赖关系。但仅有浓度为100ng/ml时差异才有显著意义(P<0.01);碱性磷酸酶活性从1ng/ml起均较对照组增加,也呈剂量依赖关系,且浓度≥10ng/ml差异有显著意义;1ng/ml,10ng/ml,100ng/ml淫羊藿甙均可促进OsxmRNA表达(P<0.05),以10ng/ml组作用最显著。结论淫羊藿甙能通过影响成骨细胞增殖、分化、提高成骨细胞Osx基因表达水平,从而促进骨形成,发挥抗骨质疏松的作用。

益精补肾颗粒质量标准研究

目的 :制定益精补肾颗粒 (淫羊藿、菟丝子、白芍、莪术、川芎等 )的质量标准。方法 :用TLC鉴别菟丝子、白芍、莪术 ;以HPLC测定淫羊藿苷的含量。选用Lichrospher C18柱 ,乙腈 2 %乙酸水 (30∶70 )为流动相 ,流速 :1mL·min-1,检测波长 :2 70nm。结果 :TLC色谱中能明显地检出菟丝子、白芍、莪术 ;淫羊藿苷线性范围在 4 .32～ 2 1.6 0 μg平均回收率为98.6 9% (RSD =1.13% ) .结论 :定性、定量方法简便、可靠、准确、专属性强 。

薄层色谱-荧光分光光度法测定淫羊藿药材中淫羊藿苷的含量

目的 :建立了薄层色谱 荧光分光光度法测定淫羊藿药材中淫羊藿苷的含量。方法 :用 70 %乙醇水浴回流提取 ,用醋酸丁酯 甲酸 水 (1.3∶1∶1)在 10℃以下放置后的上层溶液为展开剂 ,展开 ,分离淫羊藿苷 ,在Ex=4 30nm ,Em=4 80nm条件下测定荧光强度。结果 :线性范围为 0 .8～ 4 .8μg ,相关系数r =0 .9973,平均回收率 97.4 8%。结论 :此法简单、灵敏、准确 ,重现性好。

RP-HPLC法测定杞蓉片中淫羊藿苷的含量

目的建立HPLC法测定杞蓉片中淫羊藿苷含量的方法。方法样品用甲醇超声提取30min,滤过,滤液用RP-HPLC法测定。采用HypersilCl8柱(250mm×4.6mm,5μm)为分析柱,乙腈-水(30∶70)为流动相;检测波长为270nm。结果淫羊藿苷与其他成分分离良好,tR=13.2min,线性范围0.207～1.449μg,r=0.9996,平均回收率为97.5%,RSD=1.94%(n=5)。结论该法灵敏度高、操作简便、结果准确,可用于杞蓉片中淫羊藿苷的含量测定。

HPLC法测定健宝胶囊中淫羊藿苷含量

目的 建立健宝胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法 ,色谱柱为C18(15 0mm×4.6mm) ,流动相为乙腈 0 .0 75mol·L-1磷酸溶液 (2 5∶75 ) ,流速 1.0mL·min-1,检测波长为 2 70nm。结果 淫羊藿苷进样量在 0 .0 6～ 0 .30 μm范围内 ,线性关系良好 (r=0 .9991) ,方法回收率为 98.5 0 %(n =5 ,RSD =1.2 0 %)。结论 本方法准确、简便、快速 ,适合于该药的质量分析检验。

淫羊藿总苷对缺血-再灌注损伤大鼠心肌的保护作用

目的探讨淫羊藿总苷对缺血-再灌注损伤大鼠心肌的保护作用及其机制。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)后再灌注造成心肌缺血-再灌注损伤模型,从心肌梗死面积及血清酶学变化观察淫羊藿总苷的抗心肌缺血作用。结果淫羊藿总苷能缩小急性心肌梗死大鼠心肌梗死面积,抑制血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,提高心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性,同时降低丙二醛(MDA)的含量。结论淫羊藿总苷对缺血-再灌注损伤大鼠心肌具有保护作用,其作用机制与抗氧化自由基作用有关。

高效液相色谱法测定清宫龙凤宝中淫羊藿甙的含量

用高效液相色谱法测定清宫龙凤宝中淫羊藿甙的含量，采用SpherisorbC18柱，4．6mm×150mm，流动相甲醇-水（50：50），流速1．0mL／min，检测波长270nm。测定结果平均回收率为101．38％，RSD＝2．1％。