Study on In vitro Bacteriostasis of the Different Extract from Ilex Kudingcha C.J.Tseng

[ Objective ] The aim was to study bacteriostatic activity of the different extract from Ilex Kudingcha C. J. Tseng. [ Method ] By using test tube 2 -fold dilution method and Kirby-Baueer Disc Diffusionto,we conducted inhibitory test on S. aureus and E, coil and determined the minimal inhibitory concentration （MIC） and minimum bactericidal concentration （MBC）and the diameter of inhibition zone. [ Result ] The extract 1 had fairly strong in vitro bacteriostasis activities and than the extract2 and extract3. The MIC and MBC was 3.91 mg/ml and 31.25 mg/ml on S. aureus and E. coil [ Conclusion] The result showed that the different extract from Ilex Kudingcha C. J. Tseng had varying amount of different bacteriostatic activities,the Ilex Kudingcha C. J. Tseng was developed new and safe bacteriostatic reagent to provide reference.

大叶苦丁茶抗氧化活性研究进展

大叶苦丁茶是我国南方一种药食两用的传统饮品与药材,也是市场上广泛流通、被普遍当作“苦丁茶正品”的别样茶(non-Camellia teas),具有清热解毒、抗氧化、抗炎、止血凉血、抗菌等多种功效,其次生代谢物质化学成分复杂,主要包括多酚、多糖、黄酮、三萜等多种活性成分。大叶苦丁茶活性成分是天然的抗氧化剂,具有绿色、无毒、高效等特点,在食用油脂储藏、食品保鲜、化妆品、保健品以及抗氧化药物等方面具有良好的应用前景。本文以大叶苦丁茶化学成分的抗氧化作用为主线,综述大叶苦丁茶中具有代表性的多酚、多糖、黄酮、三萜等化学成分的含量、组成及其抗氧化作用,探讨大叶苦丁茶的应用并对其进行展望,拟为大叶苦丁茶的开发与利用提供参考。

苦丁茶冬青挥发油成分的GC-MS分析

采用乙醚超声萃取 -水蒸气蒸馏方法提取苦丁茶冬青的挥发油 ,用气相色谱 -质谱联用分析 ,鉴定了挥发油中的57个成分 ,其中主要成分是醇、醛、酮、醚、脂肪酸。

苦丁茶冬青苦丁茶中多酚类物质的分离纯化与结构解析

利用带二极管矩阵检测器的高效液相色谱仪(HPLC-DAD)分析苦丁茶冬青苦丁茶与绿茶多酚类化合物的组成,结果表明它们的色谱峰图呈现明显的不一致,说明苦丁茶冬青苦丁茶的主要化学成分可能不同于绿茶。利用半制备型HPLC从苦丁茶冬青苦丁茶中分离纯化得到了5种单体化合物,通过质谱(MS)和核磁共振(NMR)分析,将5种单体化合物分别鉴定为羟基酪醇葡萄糖苷、绿原酸、4,5-O-二咖啡酰奎尼酸、3,5-O-二咖啡酰奎尼酸和3,4-O-二咖啡酰奎尼酸。因此,认为苦丁茶冬青苦丁茶的主要多酚类化合物为绿原酸及其衍生物。

苦丁茶中熊果酸的提取工艺

在苦丁茶中提取熊果酸的过程中,采用正交实验研究了乙醇体积分数、液固比、提取时间、提取温度、提取次数等对熊果酸浸出率的影响。正交实验的方差分析结果表明:对于熊果酸的浸出率,提取时间的影响最大,乙醇浓度和固液比的影响次之;最佳回流提取工艺条件为:在85℃水浴中,以90%(体积分数)乙醇水溶液为提取液,液固比为14∶1,提取2次,每次提取2.5h时,熊果酸的浸出率可达到1.44%。

响应面法优化苦丁茶熊果酸提取工艺及其抑菌活性研究

为优化苦丁茶熊果酸的提取工艺,并探讨其抑菌活性。在单因素试验基础上,通过响应面分析法,研究了液料比、提取温度、乙醇浓度对苦丁茶熊果酸得率的影响。以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、白色念珠菌、黑曲霉为供试菌,探究了苦丁茶熊果酸的抑菌活性及最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)。结果表明,最优提取工艺为:液料比为17∶1(mL/g)、乙醇浓度为83%、提取温度83℃;抑菌实验表明,苦丁茶熊果酸对7种菌均有一定的抑制效果,对大肠杆菌、铜绿假单胞菌的MIC为6. 25 mg/mL,对生孢梭菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的MIC为12. 5 mg/mL,对白色念珠菌、黑曲霉的MIC为25 mg/mL。

苦丁茶冬青粗多糖的分离表征及其抗氧化活性研究

水提醇沉法分离制备苦丁茶冬青粗多糖样品,对其进行初步分离表征(包括总糖、糖醛酸、蛋白质、氨基酸含量和红外光谱分析)和体外抗氧化活性(清除DPPH·自由基、·OH自由基清除能力和还原能力)研究。结果表明,苦丁茶冬青粗多糖中总糖含量为30.67%、糖醛酸含量为12.72%、蛋白质含量为9.35%;含有16种氨基酸成分,总含量为7.72%,其中含有7种人体必需氨基酸,占氨基酸总量的40.41%;红外光谱显示该粗多糖样品中含有α-吡喃糖环结构;此外,苦丁茶冬青粗多糖具有较强的体外抗氧化活性,且其抗氧化活性与多糖浓度之间存在良好的量效关系。

分光光度法测定湘产苦丁茶中熊果酸含量

用5%香草醛-冰醋酸、高氯酸显色,以熊果酸纯品为对照,在波长548nm处用分光光度法测定湘产3种苦丁茶中熊果酸的含量。方法线性范围为20—100μg/5mL,实验回收率为98.96%,RSD=1.67%;精密度、重现性好;对照品和样品溶液在1h内稳定。该方法操作方便、简单,可用于苦丁茶中熊果酸的定量检测。

苦丁茶多糖抗氧化活性研究

采用清除超氧阴离子自由基、清除羟自由基、清除DPPH自由基、双氧水诱导红细胞氧化溶血、红细胞自氧化溶血实验,对A、K_1、K_3三个苦丁茶多糖组分的抗氧化活性进行了研究,并与Vc进行了比较,结果表明:苦丁茶多糖对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基具有一定的清除作用;对H_2O_2诱导红细胞氧化溶血反应、对红细胞自氧化溶血反应都有显著的抑制作用。

苦丁茶多糖的提取分离纯化及部分理化性质研究

以多糖提取率为指标,采用单因素实验和正交实验对苦丁茶多糖的提取工艺条件进行优化,确定最佳提取工艺为:水料比20:1、80℃、提取50 min。在此条件下,苦丁茶多糖提取率为2.43%,先后采用Sevag法脱蛋白、分级醇沉法、DEAE—52纤维素离子交换柱层析法对其进行分离纯化,最后得到K_1和K_22个组分。同时对各苦丁茶多糖进行理化性质分析,结合Sevag法预实验所得出的结果,推测苦丁茶多糖可能为以某种方式结合蛋白的糖缀合物。

酶法提取苦丁茶熊果酸的工艺优化及其对CCl4致小鼠肝损伤的保护作用

为优化酶解提取苦丁茶中熊果酸的工艺,并对熊果酸的保肝作用进行研究,通过响应面分析法,研究了酶解温度、酶解pH、酶解时间对熊果酸含量的影响。以0.1%CCl4橄榄油溶液20 mL/kg腹腔注射制备小鼠肝损伤模型,检测血清中谷草转氨酶(Aspartate transaminase,AST)、谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)水平以及肝组织超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)水平,并观察肝组织病理形态变化,评价苦丁茶熊果酸的保肝作用。结果表明,熊果酸的适宜提取条件为:酶解温度为48℃,酶解pH为5.0,酶解时间为1.0 h,该条件下熊果酸含量为(37.28±0.89)mg/g,该模型预测性好、与实际情况拟合较好。保肝作用研究表明,苦丁茶熊果酸能显著降低CCl4致肝损伤小鼠血清ALT和AST活性及肝组织中MDA水平,有效提高肝组织SOD和GSH-Px水平。肝组织病理学观察结果表明,苦丁茶熊果酸可以减轻CCl4对肝脏的病理损伤。本研究表明苦丁茶熊果酸对CCl4致小鼠肝损伤具有明显保护作用。

HPLC法测定苦丁茶中的熊果酸和齐墩果酸的含量

目的:建立 HPLC 法同时测定苦丁茶中的熊果酸和齐墩果酸的含量。方法:色谱柱为 Betasil C_(18)柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水(95:5),检测波长为210nm,灵敏度为1.000AUFS,柱温为35℃,流速为0.5 mL·min^(-1)。结果:熊果酸的进样量在0.20～4.0μg范围内,峰面积与进样量之间线性关系良好,平均回收率为95.9%;齐墩果酸的进样量在0.17～3.5μg范围内,峰面积与进样量之间线性关系良好,平均回收率为93.3%。结论:本方法可同时测定苦丁茶中熊果酸和齐墩果酸的含量,结果准确,重复性好。

大孔吸附树脂纯化苦丁茶总皂苷的研究

优化大孔吸附树脂纯化苦丁茶总皂苷的工艺参数。分别用AB-8、NKA-9、S-8、X-5、D101、HP-20对其进行静态吸附与解吸试验,筛选出效果较好的D101树脂。通过对D101树脂分离苦丁茶总皂苷的动态试验。结果表明,优化的吸附条件:流速为2BV/h时,料液的pH值和浓度分别为6和14.47mg/mL;优化的洗脱条件:流速为2.5BV/h,先用2BV水洗脱去杂,然后用3BV 70%乙醇水溶液进行洗脱并收集洗脱液、浓缩、冷冻干燥,得到总皂苷含量为68.9%粉末,纯化倍数为1.77。D101型大孔树脂纯化苦丁茶总皂苷的方法可行,具有良好的应用前景。

苦丁茶不同提取物抗氧化活性比较及其GC-MS分析

利用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS),对苦丁茶超声辅助不同有机溶剂(乙醇、乙酸乙酯、石油醚)提取物及超临界CO2萃取物的体外抗氧化活性(DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除活性、超氧阴离子自由基清除活性和ABTS+自由基清除能力)进行比较分析。结果表明,苦丁茶不同提取物DPPH清除能力和超氧阴离子自由基清除活性依次为:超声-乙醇提取物>超临界CO2萃取物>超声-乙酸乙酯提取物>超声-石油醚提取物,羟基自由基和ABTS+自由基清除能力依次为:超声-乙醇提取物>超声-乙酸乙酯提取物>超临界CO2萃取物>超声-石油醚提取物。GC-MS结果显示,苦丁茶不同提取物中主要有5类物质,共有49种化学成分,7种共有成分。

土壤pH、Eh对土壤-苦丁茶树系统中铅分布的影响

以苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C.J.Tseng)扦插苗(15个月生)进行盆栽实验,通过土施H2SO4、Ca(OH)2和复合肥,改变土壤pH和氧化还原电位(Eh),研究土壤pH、Eh条件对土壤-苦丁茶树系统中铅分布的影响。结果表明:在所研究的土壤pH范围内,从酸性到碱性变化,铅在土壤中含量分布趋于减少,在苦丁茶树根、茎、叶中的含量分布趋于增多,呈现出酸性增大有利于降低铅对苦丁茶树的污染风险。随pH的变化,铅在土壤各层中含量改变较大的是中层,在苦丁茶树的根、茎、叶中含量变化较大的是根。随pH增大,苦丁茶树中铅含量增大,但铅主要被富集在茶树根部。改变土壤的Eh条件,对苦丁茶树及其土壤中铅的分布均有明显影响,其中以土壤的表层和茶树的根、叶影响较大。从减少铅污染的角度,存在适宜的土壤Eh值,如在Eh=260.5时茶树土壤将铅富集在表层,从而降低铅在茶树叶中的含量,对茶叶的安全性有利。

苦丁茶冬青叶多糖的分离纯化及其对羟自由基的清除作用

苦丁茶冬青叶经乙醇脱脂、水提醇沉和Sevag法除蛋白,得苦丁茶冬青叶粗多糖KPSⅡ。KPSⅡ经DEAE-纤维素阴离子交换层析柱分离纯化,得到两个纯化多糖组分KPSⅢa和KPSⅢb。KPSⅢa和KPSⅢb经过硫酸水解,还原乙酰化,用气相色谱方法测定了其组成及相对含量。KPSⅢa与KPSⅢb均主要由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,其摩尔比分别为10.2:1.0:1.2:8.0:5.4和17.7:1.0:1.1:1.8:4.1。以Fenton反应为产生·OH模型,用紫外分光光度法实验了苦丁茶冬青叶多糖(KPSⅡ、KPSⅢa、KPSⅢb)对模型中产生的·OH的清除作用。结果表明,KPSⅡ、KPSⅢa、KPSⅢb对·OH都具有一定的清除作用,且清除率与多糖的浓度存在一定的量效关系。苦丁茶冬青叶粗多糖KPSⅡ对·OH的清除作用均比纯化多糖(KPSⅢa、KPSⅢb)强。

苦丁茶冬青化学成分和药理作用研究进展

冬青属植物苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C.J.Tseng)的叶或嫩叶,是民间常用的中草药,有清热解毒之功效。现代药理研究表明,苦丁茶冬青具有降脂减肥、降血糖、抗动脉粥样硬化、抗氧化和抗菌、抗病毒等活性。目前从苦丁茶冬青中已分离出大量的三萜及其皂苷类和酚酸类等化学成分,但其发挥功效的药效物质基础及其分子机制有待进一步研究。因此本文就近年来苦丁茶冬青叶化学成分及药理作用进行了分析和总结,为苦丁茶冬青药用资源的开发利用提供参考。

苦丁茶冬青叶多糖KPS Ⅲa的热分析研究

采用热重、热重-红外联用及差示扫描量热法研究苦丁茶冬青叶多糖KPSⅢa的热稳定性。结果表明,苦丁茶冬青叶多糖在225℃以下只失去吸附水,在225～625℃间发生剧烈的裂解反应,产生水和二氧化碳;与肝素、淀粉、半乳糖及甲壳素的热分析比较,含有硫酸酯的苦丁茶冬青叶多糖和肝素的热稳定性较低,含氨基的甲壳素的热稳定性最好。说明苦丁茶冬青叶多糖在225℃以下相对稳定,不同的基团对多糖的热稳定性有很大影响。

苦丁茶体细胞组织培养再生植株的研究

报道了苦丁茶不经愈伤组织直接从外植体获得分化芽及愈伤组织诱导的结果，讨论了体细胞组织培养技术在苦丁茶上应用的可能性．

苦丁茶中总皂苷含量的测定

建立了苦丁茶 (IlexkudinchaC .J .Tseng) 总皂苷F含量的测定方法。以苦丁茶皂苷F作对照品 ,φ =8%香草醛无水乙醇溶液和 φ =77%硫酸溶液为显色剂 ,6 0℃恒温反应 10min ,分光光度法测定苦丁茶总皂苷的含量。最大吸收波长 5 34nm ,在 6～ 36 μg mL范围内浓度与吸光度线性关系良好 ,相关系数r=0 9995。平均回收率为 97 17% ,RSD =1 6 9%。测定了苦丁茶不同产品的总皂苷含量 ,结果表明方法简便 ,重现性好。该法可作为苦丁茶质量检测的方法之一。