间接免疫组化法检测鸭疫里默氏杆菌感染和抗原定位

应用鸭源血清1型鸭疫里默氏杆菌(RA)作为抗原,免疫兔制备兔抗RA的IgG,建立了检测雏鸭感染鸭疫里默氏杆菌的间接免疫酶组织化学法。该法检测大肠杆菌(O1、O8、O79、O138)、鸭沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌(5∶A)感染发病死亡雏鸭组织,不出现阳性反应,而检测RA感染发病死亡雏鸭组织出现特异性阳性反应;检测RA人工发病死亡雏鸭,可在心脏、肝脏、肺脏、肾脏、十二指肠、盲肠、直肠、脾脏、法氏囊、胸腺、胰脏、脑和腺胃检测到RA抗原,RA抗原分布于细胞浆、组织间隙和血液;检测RA人工感染病例与RA肝脏分离符合率为100%,检测临床可疑病例的血清1型RA的阳性率(92.96%)比细菌分离率(75.12%)高。该法具有特异、直观和敏感的特点,可用于雏鸭RA人工感染和临床感染的诊断、检测及RA抗原定位和RA致病机理的研究。

半边莲生物碱抑制肾性高血压大鼠内皮素1 mRNA和蛋白表达

目的观察半边莲生物碱对肾性高血压大鼠内皮素1 mRNA表达、蛋白合成和释放的影响。方法采用两肾一夹高血压大鼠模型,随机分为高血压组、半边莲组、卡托普利组和假手术组。用原位杂交技术观察大鼠外周血白细胞内皮素1 mRNA的表达,应用免疫组织化学染色计数大鼠主动脉内皮细胞铺片内皮素阳性细胞率(反映内皮素1蛋白的合成),用放射免疫技术测定大鼠血浆内皮素的含量。结果与假手术组比较,高血压组外周血白细胞内皮素1mRNA表达增强(34.64%±8.39%比9.34%±4.47%,P<0.05),动脉内皮细胞合成内皮素增多(7.42%±0.24%比1.58%±0.24%,P<0.05),血浆内皮素水平显著升高(221±24ng/L比138±19ng/L,P<0.05)。应用半边莲生物碱8周后,与高血压组比较,内皮素1 mRNA表达(20.38%±11.31%比34.64%±8.39%,P<0.05)、内皮素合成(3.53%±0.21%比7.42%±0.24%,P<0.05)和血浆内皮素水平(191±21ng/L比221±24ng/L,P<0.05)均受到显著抑制。结论肾性高血压大鼠伴有内皮素表达增强,半边莲生物碱能抑制内皮素基因的转录、蛋白合成及翻译,对防治肾性高血压所致的血管病变具有一定作用。

乙酰胆碱酯酶阳性神经元在鼠脑的分布和形态特征

本文用乙酰胆碱酯酶(AChE)再生技术,研究AChE阳性神经元在鼠脑的分布和形态特征。按其染色程度,可见强度、中度和轻度三种染色细胞。强染色细胞多数是较大的多极细胞,主要分布于纹状体、基底前脑、下丘脑、黑质、红核、蓝斑,腹侧被盖区、臂旁核、桥被盖核和脑神经运动核。本文将AChE染色结果和胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫组织化学资料进行了比较,对AChE和胆碱能神经元的关系,以及AChE阳性神经元的性质和意义,进行了讨论。

酶组织化学和免疫金显示大鼠胰淋巴管及其多肽激素转运的意义

目的探讨胰腺内脉管系的分布特点及其多肽激素转运的意义。方法应用常规HE染色、5’ 核苷酸酶和碱性磷酸酶 (5’ Nase ALPase)双重组织化学染色、免疫金标记外源性胰岛素 (immuno goldmarkingexogenousinsulin ,IGMEI)注射技术 ,对大鼠胰组织冷冻切片进行了光镜 (LM )、扫描电镜 (SEM )二次电子和背散射电子图像(secondaryandbackscatteredelectronimages,SEI ,BEI)观察。 结果①经HE和 5’ Nase ALPase染色处理的胰组织切片LM观察表明 ,在大鼠胰腺内、较大的胰岛周围甚至内部 ,不仅存在血管 ,而且分布有丰富的淋巴管样结构 ;血管呈现ALPase强阳性蓝色反应 ,淋巴管表现 5’ Nase强阳性褐色反应。②免疫金标记胰岛素注射的胰组织切片SEM观察表明 ,SEI只显示胰腺的组织构造 ;BEI可显示标记金颗粒的背散射电子 ,主要存在于胰结缔组织间隙或组织通道、淋巴管或毛细淋巴管内。然而 ,胰腺的血管或毛细血管内 ,无背散射电子或BEI微弱。结论在较大的胰岛周围甚至内部 ,不仅存在血管 ,也分布有淋巴管 ;胰腺组织液的淋巴回流 ,对于胰岛素等多肽激素的正常转运 。

抗波形蛋白单克隆抗体的研制、鉴定及初步应用

用从猪眼晶体中提取的波形蛋白免疫BALB/C小鼠;用杂交瘤技术建立了两株稳定分泌抗波形蛋白单克隆抗体(IgG_1亚类)的杂交瘤细胞株:H_1C_2和I_3B_2;其染色体众数分别为和8690;免疫印迹显示两者均特异地与波形蛋白反应;免疫组化结果:纤维(母)细胞、巨噬细胞、浆细胞、内皮细胞、纤维瘤、恶纤、淋巴瘤、黑色素瘤等呈阳性反应;而神经原、肝、胰、肺鳞癌等呈阴性反应。此抗体的制成。

垂体特异转录因子pit-1在垂体瘤中的表达及意义的实验研究

目的检测垂体特异转录因子pit-1在垂体腺瘤中的表达,研究Pit-1与激素水平、肿瘤侵袭性的关系,以探讨Pit-1在垂体瘤发病机制中的作用。方法根据术前激素水平、临床表现及术后病理诊断确定腺瘤类型,依影像学表现、术中所见及硬膜病检结果判断对肿瘤侵袭性分级,用免疫组化和RT-PCR分别测定Pit-1蛋白和pit-1mRNA的表达。结果Pit-1在GH腺瘤、PRL腺瘤、GH/PRL混合腺瘤中均有表达,与对照组相比,中、高度表达者占此3种腺瘤的78.8%(26/33),无功能腺瘤及ACTH腺瘤中无Pit-1蛋白的表达。pit-1mRNA在全部的GH腺瘤、PRL腺瘤、GH/PRL混合腺瘤和50%(5/10)的无功能腺瘤中有表达,在ACTH腺瘤组中无表达。GH、PRL、GH/PRL混合腺瘤组间pit-1mRNA的表达量差异无显著性,此3组均显著高于无功能腺瘤组(P<0.05)。GH、PRL腺瘤组中pit-1mRNA的表达量与其各自术前的激素水平呈显著正相关。在表达pit-1mRNA的腺瘤中,侵袭性组高于非侵袭性组。结论Pit-1的表达与垂体腺瘤的表型、功能有关,与某些激素(GH、PRL)水平、肿瘤的侵袭性呈正相关,在某些类型(GH、PRL、GH/PRL)的垂体瘤发病机制中起重要作用。

针刺镇痛和抗休克过程中大鼠电针穴区去甲肾上腺素荧光组织化学的观察

本实验用配对比较设计,将选出的32对健康大白鼠,随机分为电针组和对照组。以SPG荧光组织化学方法显示儿茶酚胺,观察“足三里”穴区中去甲肾上腺素(NA)在电针镇痛和抗失血性休克过程中的变化,并探讨其在上述针刺效应中的可能作用。1.电针双侧“足三里”30min后,在电针组痛阈明显提高的同时,穴区NA荧光物质的含量明显低于对照组(P<0.01)。2.在截肢造成失血性休克时,两组动物均大量释放穴区中的NA(P=0.001);不仅动脉管壁中的NA大幅度减少,而且还涉及毛细血管和静脉。3.电针组动物死亡时间延长(P<0.05)、不死亡率提高,穴区中最后残留的NA亦远低于对照组(P<0.05)。上述结果表明,电针穴区NA的改变,可能是电针镇痛和抗失血性休克作用中的重要物质基础之一。

大鼠基底节区血管代谢的组织化学研究

目的 :从基底节血管代谢角度讨论基底节区脑血管病的原因。方法 :用组织化学方法 ,选择能反映血管壁糖代谢 3个途径及平滑肌能量代谢利用的 4个关键酶 ,在同一显微镜下对正常SD系不同月龄组大鼠基底节区血管的酶代谢进行研究 ,并与皮质 ,白质血管酶对照。结果 :基底节区血管微动脉琥珀酸脱氢酶呈轻度活性 ,乳酸脱氢酶活性随大鼠月龄及血管口径的增加而增强 ,葡萄糖 -6-磷酸脱氢酶活性最低 ,钙激活三磷酸腺甘酶在基底节区血管示极强阳性。结论 :基底节区血管壁代谢酶的变化影响脑血管病的发病。

pHGF对CBMC表面标志表达的影响

目的 :为了再次证明pHGF的免疫功能。方法 :应用免疫组织化学法测定pHGF对脐血单个核细胞表达CD4、CD8、HLA DR分子的影响。结果 :证明pHGF均能促进上述分子在脐血单个核细胞表面的表达。与pHGF诱导前相比较 ,CD4、CD8、HLA DR分子的表达增加了 3～ 4倍。结论

大鼠颈上神经节胺类贮存细胞的荧光组化和超微结构细胞化学的研究

本研究用乙醛酸荧光组化方法和改良的嗜铬反应电镜细胞化学技术对大鼠颈上神经节的胺贮存细胞进行了研究。用乙醛酸处理后,在大部分主神经元和小强荧光(SIF)细胞观察到指示儿茶酚胺(CA)可能主要是肾上腺素(NA)存在的特异绿色荧光。SIF 细胞常以小群分布,并多数紧靠毛细血管。主神经元的荧光从弱到中等强度,而 SIF 细胞荧光极强,并观察到肾上腺素能细胞突起的荧光膨体网。用利血平处理动物之后,主神经元的 NA 特异荧光显著减弱,表明非颗粒的 NA 更易为利血平所消耗。由特异的嗜铬反应电镜细胞化学技术揭示了主神经元含有散在的小致密芯小泡。根据我们的荧光组化和超微结构观察,存在两种类型的 SIF 细胞,它们在形态学上与 Williams 提出的Ⅰ型 SIF 细胞相当于中间神经元和Ⅱ型 SIF 细胞是内分泌机能的细胞相一致。对它们的机能意义和所含的化学物质进行了讨论。

机体死亡后组织细胞DNA含量与死亡时间推断

早期死亡时间的推断方法有许多,但近年来通过测量组织细胞DNA含量的变化规律来推断早期死亡时间越来越引起人们的注意。本文就常见的细胞DNA含量的检测方法、变化规律及其在实践中的应用情况加以论述,并对不同检测方法和实际应用效果、前景加以评定。

乳腺某些良恶性疾病CEA免疫组织化学的定位研究

本实验研究用 PAP 免疫组织化学方法观察了84例乳腺癌和24例乳腺良性病变组织石蜡切片中 CEA 的存在情况及其分布形式。结果表明:乳腺癌69例为阳性,阳性率为82.1%,导管浸润癌比特殊类型癌 CEA 阳性率为高(P<0.01).CEA 的分布呈两种形式,一种为胞质为主型,多见于导管特殊类型癌,另一种为胞膜为主型,多见于特殊类型癌。8例伴有导管上皮增生的乳腺结构不良症,增生性导管上皮全部为 CEA 阳性,其余良性乳腺疾病均为 CEA阴性。乳腺癌 CEA 阳性与患者年龄、间质淋巴细胞浸润、组织学分级以及组织在蜡块中的保存年限(26年内)无明显关系.乳腺癌间质弹力纤维增生组比无弹力纤维增生组 CEA 阳性率为高(P<0.01),但与弹力纤维增生程度无关。

各型乙型肝炎HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原免疫组织化学研究

用免疫组织化学桥联酶标APAAP法和PAP法对各型乙型肝炎113例检测了肝内的HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原、T细胞亚群、HBsAg和HBcAg,同时测定血清HBV DNA(斑点杂交)和β_2微球蛋白(RIA)。结果表明;急性肝炎、慢性活动性肝炎、重症肝炎患者的肝细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原表达增强,尤以Ⅰ类抗原明显,慢性迁延性肝炎则几乎无表达。肝细胞HLA-Ⅰ类抗原表达与肝内炎症反应、肝细胞膜型HBSAg和浆膜型HBcAg关系密切,肝内活动性病变主要浸润细胞为CD_2^+细胞,CD_0^+细胞构成主要的细胞亚群。认为抗原依赖的、HLA限制的细胞毒性T细胞效应是构成乙型肝炎免疫损害的主要机制。

四种凝集素在肝癌及癌旁组织的表达

应用ABC免疫亲和组化方法检测了西非单叶豆(BSL)、花生凝集素(PNA)、双花扁豆凝集素(DBA)和荆豆凝集素(UEA)在肝癌及癌旁组织中的表达。结果显示四种凝集素在肝癌及癌旁组织中表现出不同的阳性率;肝癌PNA阳性表达率>BSL和DBA>UEA(P<0.05),而癌旁组织中的BSL阳性表达率显著高于其他三种(P<0.05);PNA和DBA在癌组织中阳性表达率显著高于癌旁组织。且各种凝集素在肝癌及癌旁组织阳性定位亦不同,表明细胞发生癌变时细胞表面的糖链结构发生了变化。

雌激素对大鼠心内神经节血管内皮生长因子表达的影响

目的:用免疫组织化学方法观察成年雌性大鼠,卵巢摘除组大鼠,卵巢摘除后17beta雌二醇肌肉注射组大鼠的心内神经节血管内皮生长因子(VEGF)的表达及变化。方法:免疫组织化学染色。结果:①各组大鼠心内神经节均存在VEGF表达阳性神经细胞;②卵巢摘除组大鼠心内神经节VEGF阳性神经元明显减少,表达明显减弱(P<0.05)。结论:心内神经节细胞表达血管内皮生长因子(VEGF);雌激素可能影响心内神经节VEGF的表达。

ras P_(21)在原发性胆囊癌中的表达及其意义

采用癌基因产物ras P_(21)的单克隆抗体,以ABC免疫组织化学法检测原发性胆囊癌47例,胆囊良性病变33例,结果ras P_(21)阳性率依序为57.4%、27.3%。胆囊恶性病变显著高于良性病变。且在原发性胆囊癌中ras P_(21)表达阳性程度有随低分化程度向高分化增高的趋势。但ras P_(21)表达与胆囊癌各种病理组织类型,Nevin分期,TNM分期均未测出显荨相关性。提示ras P_(21)的检测可能有助于判断胆囊癌的预后。

苦楝叶对钉螺酶组织化学的影响

目的钉螺经苦楝叶浸提液浸泡后,检测其体内三磷酸腺苷酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶和一氧化氮合酶的活性,探讨苦楝叶杀螺机制。方法经苦楝叶浸提液处理48h的钉螺,冰冻切片,使用酶组织化学染色检测4种酶活性的变化,实验设未经药物处理对照组。结果实验组钉螺头足部和消化腺的Ca2+-ATPase灰度值分别为0.197±0.059和0.233±0.037,与对照组0.298±0.041和0.413±0.057比较差异有统计学意义(t=9.036和8.594,P<0.05);实验组钉螺头足部肌纤维的SDH灰度值为0.152±0.038,与对照组0.228±0.041比较差异有统计学意义(t=7.167,P<0.05);实验组钉螺神经中枢、足部和心脏的NOS灰度值分别为0.616±0.064、0.431±0.043和0.716±0.058,与对照组分别为0.514±0.049、0.302±0.042和0.503±0.045比较差异均有统计学意义(t分别为3.833、6.125和8.608,P<0.05)。结论经苦楝叶浸提液处理的钉螺NOS水平升高Ca2+-ATPase和SDH水平下降。因此推测钉螺苦楝叶杀螺机制可能是NOS升高增加了钉螺头足部NO的含量,从而抑制头足部有氧呼吸,降低钙泵的活性,引起钙超载,诱导细胞凋亡,最终导致钉螺死亡。

中药治疗实验性慢性萎缩性胃炎的酶组化及电镜观察

目的 :从酶组化及超微结构角度进一步探讨慢性萎缩性胃炎 (CAG)发病机制及“甘平养胃”、“胃乐”方剂治疗 CAG机制。方法 :采用幽门弹簧插入法及去氧胆酸钠口服法复制大鼠 CAG模型 ,对酶组化进行光镜半定量及图像分析仪定量观察 ,光电镜观察胃粘膜组织形态及超微结构。结果 :光电镜观察发现 :模型组病变显著 ;SDH活性明显降低 ,L DH活性明显升高 ,经治疗后病理形态学明显改善 ,酶活性恢复至近正常水平。结论 :酶活性异常及细胞器退行性变是 CAG发生原因之一 ,“甘平养胃”、“胃乐”方剂对其有明显治疗作用。

岩藻糖基抗原在宫颈鳞癌的表达及意义

目的 探讨人宫颈鳞癌组织的岩藻糖基 (fucose ,Fuc)化的水平及其意义。方法 1992年 1月至 1996年12月采用凝集素组织化学染色技术 ,以能与糖链α -Fuc特异性结合的生物素标记的荆豆凝集素 (biotinylatedulexeuropeausagglutinin ,BUEA)检测了 10 0例宫颈鳞癌、15 0例宫颈不典型增生及 5 0例正常宫颈组织的Fuc表达 ,应用图像分析系统定量分析其表达水平。结果 Fuc在非癌组织中无表达 ,在宫颈癌组织中的表达率为 76 % ,Fuc在细胞分化程度低、临床分期晚、有转移、复发及预后差的患者中的显著高表达 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结论 Fuc的表达可作为反映宫颈癌恶性潜能和患者预后的一项新的指标。

兔出血症诊断方法的比较研究

应用血凝和血凝抑制试验、SPA协同凝集试验、生物素——亲和素免疫酶组化技术,检查5例健康对照兔和25例实验感染RHDV的不同发病阶段病兔的肝脏,联系病理组织学变化,比较上述3种方法在诊断RHD中的可靠性与灵敏度。结果表明:SPA协同凝集试验、生物素——亲和素免疫酶组化技术,同血凝与血凝抑制试验一样,是诊断RHD的特异、灵敏的可靠方法。三种方法比较以生物素——亲和素免疫酶组化法最灵敏,其次是血凝和血凝抑制试验,SPA协同凝集试验居第3位,但从定性角度而言此方法与血凝试验无差别。而且特异、简便。