The 12th China-Japan Joint Seminar on Histochemistry and Cytochemistry

01 Differentiation-dependent changes in DNA methylation and histone H3 acetylation: possible roles of these epigenetic factors in mouse spermatogenesis Takehiko Koji Department of Histology and Cell Biology, Nagasaki University Graduate School of Biomedical Sciences, Nagasaki 852-8523, Japan Mammalian spermatogenesis is a well-ordered process, consisting of spermatogonial mitosis, spermatocytic meiosis and spermiogenesis.The process is also characterized by successive chromatin condensation and a high frequency of spermatogenic cell apoptosis.Therefore, epigenetic factors can be implicated in the regulation of spermatogenesis and any epigenetic disorder may lead to the induction of apoptosis. When we analyzed global level of DNA methylation by immunohistochemistry with anti-5-methylcytosine in paraffin-embedded sections of mouse testis, there was no difference among any stages of germ cells.

泥鳅外周血细胞的细胞化学染色特征及细胞化学谱

目的 研究泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)外周血细胞的细胞化学染色特征及细胞化学谱。方法 自泥鳅尾静脉取血,立即制作血涂片,进行瑞氏及7种细胞化学染色,包括酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、氯乙酸AS-D萘酚酯酶(AS-D)、α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)、过碘酸-雪夫(PAS)、过氧化物酶(POX)和苏丹黑B(SBB)染色。结果 在泥鳅外周血中分辨出红细胞、4种白细胞和血栓细胞,4种白细胞分别为淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。红细胞PAS染色呈阳性,ACP、AKP、AS-D、α-NAE、POX和SBB染色均为阴性;淋巴细胞AS-D、α-NAE和PAS染色呈阳性,ACP、AKP、POX和SBB染色为阴性;单核细胞AS-D染色呈阳性,ACP、α-NAE和PAS染色为弱阳性,AKP、POX和SBB染色为阴性;嗜中性粒细胞ACP和AS-D呈阳性染色,α-NAE、PAS和SBB染色为弱阳性,AKP和POX染色为阴性;嗜酸性粒细胞ACP和AS-D染色呈强阳性,α-NAE、PAS和SBB染色为阳性,AKP和POX染色为阴性;血栓细胞AS-D染色呈阳性,α-NAE和PAS染色为弱阳性,ACP、AKP、POX和SBB染色为阴性。结论 泥鳅外周血细胞的细胞化学谱和其他鱼类有相同之处,也有一些明显的物种特异性。本研究结果为泥鳅的健康检测和疾病诊断提供了基础资料。

刺五加种子结构、后熟作用及其细胞化学研究

刺五加（Ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｃｏｃｃｕｓｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ（Ｒｕｐｒ．ｅｔＭａｘｉｍ）Ｍａｘｉｍ）种子为扁肾形，种皮由一层细胞构成。种子脱落时，胚处于心形胚期，胚周围的胚乳细胞解体形成囊腔包裹胚，胚细胞原生质浓厚，胚乳细胞中贮存大量蛋白质和脂类，但两者均未见贮存多糖，有萌发潜能的种子只占全部种子的１２．８０％。种子经变温层积处理６个月即可完成后熟过程，其细胞化学特点是：处理１．５个月时胚细胞中开始积累多糖颗粒，至４个月时达最大量并一直保持至种子萌发。试验地种植条件下饱满种子经１８－２０个月后萌发，出苗率为１０％，其细胞化学特点是：处理１２个月以后，胚细胞中开始逐渐积累多糖颗粒，至种子萌发时达最大量。刺五加种子质量差、自然状态后熟时间长和出苗率低。

低温胁迫下董棕(Garyota urens L.)幼苗叶肉细胞内Ca^(2+)水平及细胞超微结构的变化

用焦锑酸钙沉淀的电镜细胞化学方法 ,研究了低温胁迫下董棕 (GaryotaurensL .)幼苗叶肉细胞内Ca2 + 水平的变化。研究结果表明 ,未经低温处理的董棕幼苗叶肉细胞 ,焦锑酸钙沉淀颗粒大量出现在液泡和细胞间隙中 ,细胞壁中也可见少量沉淀 ,而细胞基质中则看不到焦锑酸钙沉淀 ;经 2℃ 48h低温处理后 ,细胞基质和细胞膜上焦锑酸钙沉淀增加 ,而液泡和细胞间隙中的焦锑酸钙沉淀则显著减少 ,并且超微结构已初步显示出寒害的特征 ,叶绿体外膜部分破损 ,类囊体片层稀疏且排列不规则 ,光合速率明显下降等 ;经 2℃ 1 2 0h低温处理后 ,细胞间隙内的焦锑酸钙沉淀极少 ,有的也紧贴在细胞外壁上 ,而细胞基质和细胞膜上则分布有非常多的焦锑酸钙沉淀 ,在核基质和液泡中也可见到少量的焦锑酸钙沉淀 ,并且超微结构遭到了显著破坏 ,叶绿体结构完全被破坏 ,核膜与液泡膜严重破损 ,内部结构模糊 ,细胞只表现为呼吸作用 ,不进行光合作用。表明Ca2 + 的区域性分布的变化与植物抗寒性存在一定关系。

K型和T型小麦雄性不育花粉粒形态与细胞化学定位

通过光镜、电镜和酶细胞化学定位技术 ,比较研究了T型和K型同核异质不育系及其保持系在小孢子发生、发育过程中的细胞学、ATP酶和细胞色素氧化酶活性反应变化。结果表明 ,T型不育系花粉粒败育主要发生在单核花粉粒后期 ,败育发生的形态学变化从液泡膜开始 ,花粉粒败育与单核花粉粒时期细胞核和核仁中ATP酶活性的缺乏有关。K型不育系花粉粒败育主要发生在二细胞后期和三细胞时期 ,败育发生的形态学变化从线粒体开始 。

棘尾虫酸性磷酸酶的定位及诱导表达

本文利用电镜对贻贝棘尾虫 (Stylonychiamytilus)体内酸性磷酸酶的定位进行了观察。发现其体内除含有溶酶体性的酸性磷酸酶 (ACPase)外 ,在纤毛内部还存在非溶酶体性的ACPase。另外 ,本文还利用光镜和酶细胞化学技术观察并比较了棘尾虫年轻态和衰老态个体体内ACPase在食物诱导下的表达量随时间发生的动态变化和差异 。

改良Pereira髓过氧化物酶快速染色法及应用

目的 为了使髓过氧化物酶 (MPO)染色快速准确、安全可靠 ,对Pereira碘化钾MPO染色方法做了进一步改进。方法 采用将碘化钾溶于Wright Giemsa染色液中的新配方 ,使试剂更稳定、保存时间长 ,并简化了操作、缩短了染色时间。结果 此法与Washburn联苯胺法比较 ,两者阳性率十分相近 ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论 改良Pereira髓过氧化物酶法阳性反应标本存放多年不褪色 ,是目前众多碘化钾法中较理想的MPO染色方法之一。

日本沼虾雄性生殖系统的研究:Ⅱ.精子的形态及超微结构

运用电镜和细胞化学技术研究了日本沼虾精子的形态结构，结果表明；日本沼虾精子属无鞭毛 精子，为单一棘突型，呈图钉样，由主体部和棘突构成；主体部分为帽状体、精核和细胞质带。帽 状体由约２０根辐射状纤丝组成，纤丝上具横纹，并汇合于帽状体基部，由此向后延伸形成棘突；棘 实基部无顶体和中心粒结构，呈ＰＡＳ阴性、快绿阳性反应，精核为非浓缩型，核膜不完整，核质 疏松，快绿和Ｆｅｕｌｇｅｎ阳性，内有许多内质同样膜囊和 ＰＡＳ阳性小泡，分别构成用核的膜状带和泡状带；泡状带中的小泡是精子通过胞饮精荚基质形成的；细胞质带内无细胞器。

小鼠精原干细胞的形态结构及其细胞化学和免疫组化特性

应用光镜、电镜观察了 ７～８ ｄ 小鼠精原干细胞的形态结构特点；应用细胞化学、免疫组织化学方法研究了体外培养小鼠精原干细胞的细胞化学和免疫组织化学特性。结果显示，精原干细胞呈圆形，直径（９±１） μｍ ，核大，呈圆形或轻微卵圆形，胞质较少；核内常染色质占绝对优势，异染色质极少；胞质内核糖体、线粒体较丰富，其他细胞器不发达；精原干细胞 Ａ Ｋ Ｐ染色呈阳性或强阳性，胞质内脂滴很少或没有；精原干细胞表达特异的 ｃｋｉｔ 受体；体外培养的小鼠精原干细胞常呈不完全的胞质分裂，细胞间由细胞间桥相连而呈链状或团状的细胞群丛，细胞群常由偶数细胞组成。

低温胁迫下夏威夷椰子幼苗叶肉细胞Ca^(2+)水平及细胞超微结构变化的研究

用焦锑酸钙沉淀的电镜细胞化学方法 ,研究了低温胁迫下夏威夷椰子 (PritchardiagaudichaudiiH .Wendl.)幼苗叶肉细胞内Ca2 + 水平的变化 .研究结果表明 ,未经低温处理的夏威夷椰子幼苗叶肉细胞 ,焦锑酸钙沉淀颗粒大量出现在液泡中 ,而细胞基质及细胞间隙中则看不到焦锑酸钙沉淀 .而夏威夷椰子幼苗经过 2℃ ,48h低温处理后 ,细胞基质和细胞膜、液泡膜上焦锑酸钙沉淀增加 ,而液泡中的焦锑酸钙沉淀减少 ,并且超微结构已初步显示出寒害的特征 ,叶绿体外膜部分破损 ,类囊体片层稀疏且排列不规则 .而夏威夷椰子幼苗经过 2℃ ,96h低温处理后 ,Ca2 +大量分布于液泡和细胞基质中 ,细胞间隙中也可见少量斑块状沉淀 ,大部分细胞结构已经严重破损 ,内部结构分辨不清呈现出了遭受严重冷害的症状 .从而揭示了Ca2 +

长薄鳅外周血细胞的显微结构和细胞化学特征研究

长薄鳅外周血细胞可分为红细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞。在数量上,中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞占白细胞总数的百分比分别是17.06%、5.83%、28.16%和48.94%。细胞化学染色显示所有白细胞均含有糖原物质,所有红细胞均不含酸性磷酸酶,中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞均含有酸性磷酸酶。非特异性酯酶染色显示单核细胞呈阳性反应,中性粒细胞、淋巴细胞和血栓细胞均为部分呈阳性反应。所有细胞的碱性磷酸酶、过氧化物酶、苏丹黑显色反应均呈阴性。

中国对虾组织细胞中酚氧化酶活力的研究

运用酶细胞化学技术 ,显示中国对虾 (Fenneropenaeuschinensis )淋巴器、皮肤、鳃、肝胰腺、中肠盲囊和中肠这几种组织细胞中的酚氧化酶活性 ,在透射电镜下观察各组织中细胞内酚氧化酶的活性部位 ;观察在受病毒感染的细胞内酚氧化酶对病毒的作用。结果表明 ,在健康对虾的组织细胞中 ,基本不表现酚氧化酶活性 ,而在受病毒感染的对虾中 ,不同的组织表现不同程度的酚氧化酶活性。其中 ,尤以淋巴器和皮肤的细胞中酚氧化酶活性最强 ,在淋巴器和皮肤这两个组织的细胞中 ,都可看到酚氧化酶对病毒结构的破坏作用。中国对虾淋巴器具有对血淋巴中有害异物进行过滤的作用 。

虚寒薄白苔的细胞化学初步研究

本研究首次运用细胞化学定位定性定量技术对25例虚寒证患者的薄白舌苔与20例正常淡红舌薄白苔舌上皮细胞中的脱氧核糖核酸(DNA)、糖原(PAS)、琥珀酸脱氨酶(SDH)、酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)等化学成分进行对比观察,发现虚寒薄白苔舌上皮细胞中的PAS、DNA高于正常薄白苔(P<0.001,P<0.05),而SDH、ANAE活性显著低于正常薄白苔(P<0.001,P<0.01),并初步探讨了正常薄白苔的细胞化学特点及虚寒薄白苔的变化机制。

胭脂鱼外周血细胞的显微、超微结构与细胞化学观察

胭脂鱼Myxocyprinus asiaticus（Bleeker）属鲤形目（Cypriniformes）胭脂鱼科或称亚口鱼科（Catostomidae）。该科鱼类全世界现知约有13属70种,绝大多数种类分布于北美洲,仅胭脂鱼为我国也是亚洲的特有种,分布于我国的长江和闽江。胭脂鱼在鱼类系统演化和动物地理学研究上有着极为重要的科学价值,现为国家二类水生野生保护动物。

大白菜干烧心病发生过程中心叶组织Ca^(2+)定位及超微结构变化

采用电镜细胞化学技术，研究了人为诱导大白菜干烧心病发生过程中心叶组织细胞的Ｃａ２＋定位和超微结构变化。结果表明，正常植株叶片细胞内钙主要分布于液泡、细胞壁和叶绿体的膜片层结构中；试验处理植株随着缺钙天数的增加，细胞壁膜上的钙被释放沉淀到细胞间隙，叶绿体片层膜上的Ｃａ２＋释放到胞液中。缺钙后期，细胞内钙沉淀明显减少。同时细胞结构改变，质膜内陷，叶绿体膜和内膜系统破坏；随后细胞壁中胶层解体，可见症状出现时，细胞内隔消失。

日本血吸虫成虫培养细胞SDH和LDH细胞化学研究

目的 研究日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (LDH)含量、分布及变化规律 ,了解日本血吸虫成虫培养细胞的能量代谢类型。方法 将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI- 16 4 0含2 0 %小牛血清附加常量抗生素的培养基中 ,定时运用Pearson法进行SDH和LDH染色 ,用Olympus-BH2 显微镜观察并拍照 ,用HPIAS - 2 0 0 0图像分析仪测量其含量 ,并作统计分析。结果 日本血吸虫成虫培养细胞均具有SDH和LDH活性 ,两者均分布在细胞质内。培养 1d细胞的SDH和LDH活性最强 ,随着培养时间延长 ,其活性逐渐减弱 ,其中SDH活性下降较快 ,培养 5d大部分细胞SDH活性已极弱 ;而LDH活性下降则较缓 ,培养 5 6d细胞仍具LDH活性。结论 体外培养的日本血吸虫成虫细胞的能量代谢类型与成虫相似 ,既存在三羧酸循环需氧型呼吸链 ,也具有无氧糖酵解 ,但以无氧糖酵解为主。

三聚氰胺对小鼠肾脏病理损伤的初步观察

为观察三聚氰胺对小鼠肾脏病理损伤情况,以浓度700、350、175mg/kg体重给28天昆明小鼠连续灌胃,玉米油做溶剂,观察肾脏组织病理学变化及细胞化学变化。结果发现,三聚氰胺可引起小鼠肾脏肾小管管腔中出现黄色或棕黄色结晶,肾小管上皮细胞变性、坏死,细胞核固缩,肾小管管腔扩张,上皮细胞脱离基底膜。试验表明高剂量的三聚氰胺可引起小鼠肾脏的严重损伤,造成肾小管上皮细胞变性、坏死,特征性的变化是肾小管管腔中三聚氰胺产物结晶沉积,此变化具有证病意义。

大鼠纹状体边缘区与Meynert氏基底核的突触联系及其与学习记忆功能的关系——WGA-HRP束路追踪法、电镜法和行为实验法研究

纹状体边缘区（ＭｒＤ）是我们先后在大鼠、猫和猴脑内新发现的一个区域。它是位于纹状体尾内侧、环绕着苍白球头外侧的一层梭形细胞。ＭｒＤ的细胞构筑、免疫组化特性和纤维联系形式不同于纹状体其它区。ＭｒＤ的离心投射终止在苍白球尾侧，接近Ｍｅｙｎｅｒｔ基底核（ＮＢＭ）附近。损毁双侧ＭｒＤ后，动物的学习记忆功能减弱。ＮＢＭ已知与动物智能有关。本研究用纤维溃变和束路追踪电镜法结合行为实验方法，旨在了解ＭｒＤ与ＮＢＭ之间有无突触联系，以及此种联系与动物学习记忆的关系。用纤维溃变和束路追踪电镜法研究表明，由ＭｒＤ发出的纤维终末与ＮＢＭ的胆碱能神经元胞体间存在着突触联系。损伤ＭｒＤ造成ＭｒＤ和ＮＢＭ形成突触联系的终末溃变后，动物的学习记忆能力降低。研究结果表明边缘区与Ｍｅｙｎｅｒｔ基底核间存在着突触联系，而这种联系很可能是ＭｒＤ的学习记忆功能的结构基础之一。

罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)卵子发生的细胞化学研究

本研究应用细胞化学方法研究了罗氏沼虾卵子发生过程中主要生物大分子的变化。从卵原细胞到卵母细胞的发育过程中，核酸逐渐分散，蛋白质大量沉积。尽管卵原细胞和卵黄发生前的卵母细胞中，PAS和苏丹黑反应为阴性，但随着卵母细胞被滤泡细胞包围，这两种反应阳性物质在卵母细胞质中大量出现，似乎表明滤泡细胞可以向卵母细胞提供糖类和脂类或能构成糖类、脂类的物质。成熟卵子内含有大量蛋白质、糖类和脂类，为此后的胚胎发育作好了准备。

甲基硝基亚硝基胍对日本血吸虫成虫培养细胞磷酸酶影响的研究

目的 研究甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶 (AKP)和酸性磷酸酶 (ACP)活性的影响。方法 将虫龄 2 6 d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,在RPMI- 16 40含 2 0 %小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中培养第 7天时 ,随机分为实验组和对照组 ,实验组用含浓度为 3μg/ ml MNNG的常规培养基处理 48h,对照组用不含 MNNG的常规培养基处理同样时间 ,随后换用常规培养基培养 3周 ,当再换用含 5 %小牛血清的培养基培养 1周时 ,分别用 Gomori钙钴法和 Gom ori硫化铅法对两组培养细胞进行 AKP和 ACP细胞化学染色 ,用Olym pus BH- 12显微镜观察并拍照 ,用 HPIAS- 2 0 0 0图像分析仪测量其含量 ,并作统计分析。结果 实验组培养细胞的 AKP、ACP活性明显高于对照组培养细胞的活性 (P<0 .0 1)。结论 MNNG能增强日本血吸虫成虫培养细胞 AKP、ACP的活力 ,对培养细胞有促生长或 /和诱导其转化的作用。