Evaluation of the role of H pylori infection in pathogenesis of gastric cancer by immunoblot assay

AIM： To elucidate the different serological reactions to H pylori using the immunoblotting technique for further understanding of its pathogenic role in gastric cancer. METHODS： A total of 54 patients were divided into two groups after upper gastrointestinal endoscopy： normal control group （25 patients） and gastric cancer group （29 patients）. Both groups were further divided into Hpylori （＋） and H pylori （-） subgroups based on the results of CLO test, Giemsa staining and culture. Sera were further analyzed with the immunoblotting technique （HelicoBIot 2.0, Genelabs Diagnostics, Singapore）. RESULTS： The positive rate of the immunoblotting test was as high as 88.9% in the H pylori （-） gastric cancer group and only 14.3% in the H pylori （-） normal control group with a statistically significant difference. CONCLUSION： The prevalence of H pylori infection is higher in gastric cancer patients than in the normal controls, suggesting that H pylori may play a role in the pathogenesis of gastric cancer.

胃癌组织中KAI1/CD82、p27和p53的表达水平及其临床意义

目的研究胃癌组织中KAI1/CD82、p27、p53蛋白的表达水平及其临床意义。方法收集中南大学湘雅医学院附属海口医院胃肠外科2020年6月至2021年6月期间接受胃癌切除术治疗的43例胃癌患者标本,将标本分为43例胃癌组、43例配对的癌旁组(距癌2 cm)和43例配对的正常组(距癌5 cm以上),运用免疫印迹(Western blot)方法检测并比较三组组织中的KAI1/CD82、p27、p53蛋白表达水平,分析胃癌组织中KAI1/CD82、p27、p53的表达水平与临床病理参数的关系,采用Pearson相关分析法分析其与胃癌的临床病理特征的关系。结果胃癌组中的KAI1/CD82、p27、p53蛋白表达水平明显低于癌旁组和正常组,且癌旁组明显低于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);KAI1/CD82、p27、p53蛋白的阳性表达率与肿瘤组织的分化程度、临床分期和淋巴结是否转移有关(P<0.05),而与年龄、性别无关(P>0.05);经Pearson相关分析结果显示,胃癌组织中KAI1/CD82与p27蛋白和p53蛋白的表达均呈正相关(r=0.586、0.426,P<0.05)。结论胃癌组织中的KAI1/CD82、p27、p53蛋白表达水平明显降低,联合检测KAI1/CD82、p27、p53可能成为胃癌诊断及预后评估的新的分子标记物。

多重磁条码液相芯片系统在抗核抗体谱检测中的应用价值

目的探讨多重磁条码液相芯片系统在抗核抗体谱检测中的应用价值。方法选取2023年10—12月深圳市第二人民医院风湿免疫科收治并被确诊为系统性自身免疫性疾病(AID)的98例患者作为AID组,另选同期进行体检且排除AID的90例健康者为对照组。分别使用多重磁条码液相芯片系统与免疫印迹法来检测两组患者血清样本中的抗核抗体和抗核抗体谱15项。比较不同检测系统的检测阳性率,并分析敏感度以及特异性等关键指标,进行严格的一致性评价。结果两种方法对AID组患者的抗核抗体阳性检出率均高于对照组(P<0.05),对抗ds-DNA抗体检测的阳性率差异具有统计学意义(P<0.05),对其余14种观测指标的检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。多重磁条码液相芯片系统与金标准检测对抗Scl-70抗体检测的高度一致(Kappa≥0.75),对抗P0抗体、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、抗CENP-B抗体、抗AMA-M2抗体、抗PCNA抗体、抗R0-52抗体、抗Histone抗体、抗Jo-1抗体检测的中度一致(0.75>Kappa≥0.40),对抗ds-DNA抗体、抗U1-snRNP抗体、抗PM-Scl抗体检测的一般一致(Kappa<0.40)。结论多重磁条码液相芯片系统与免疫印迹法检测自身抗体的总体符合率较高,但是对血清抗ds-DNA抗体的一致性不理想。对于一致性不理想的抗体,需要结合其他实验室指标、影像学检查及临床进行综合判断。

丙型肝炎病毒抗体化学发光免疫分析法≥95%阳性预测值最佳吸光度/临界值建立方法学和重要性探讨

目的确定丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体阳性预测值≥95%的最佳吸光度/临界值(signal-to-cutoff,S/CO),确定首都医科大学附属北京地坛医院实验室医学决定水平,为探索不同系统丙型肝炎病毒抗体检测试剂95%阳性置信区间建立方法学。方法收集2021年7月至2022年2月门诊及住院患者进行化学发光免疫分析法(chemiluminescence analysis,CLIA)初筛检测同时进行HCV RNA检测的血浆样本共282例,其中抗体初筛有反应性(S/CO≥1)样本252例,阴性样本30例,进行重组免疫印记试验(recombinant immunoblot assay,RIBA)并查阅其HCV RNA检测结果,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线得到预测本实验室阳性预测值≥95%时HCV感染的抗体S/CO值。结果初筛为阴性的30例样本双重确证试验结果均为阴性;排除16例HCV感染史不明确的样本,丙型肝炎病毒抗体S/CO≥1的236例样本经双重确证试验得到真阳性样本188例,阴性样本48例,经ROC曲线分析,本实验室阳性预测值≥95%时,本实验室抗体S/CO值为7.83,灵敏度为93.09%,特异度为95.83%,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.98(P<0.0001)。结论为临床提供本实验室阳性预测值≥95%时HCV感染抗体的S/CO值以协助临床诊疗。

荨麻疹患者过敏原及其心肌酶谱联合检测的临床研究

目的探究荨麻疹患者过敏原与心肌酶谱的关系,明确荨麻疹患者的心肌损害情况。方法选择本院皮肤科荨麻疹患者244例作为研究对象,同时选择本院健康体检者及幼儿入托查体者共225例作为对照,采用免疫印迹法进行过敏原检测,采用速率法进行心肌酶谱检测。结果244例荨麻疹患者中过敏原阳性率为69.7%,心肌酶谱升高率为31.1%。在过敏原阳性等级中,1~4级心肌酶谱升高率分别为27.3%、40.0%、53.8%、70.0%,5级以上升高率为100%。对照组225例中,过敏原阳性仅4例,并且分级都在1级以下;心肌酶谱升高率为7.1%,仅AST、CK轻度升高,禁酒或适当休息后正常。荨麻疹患者心肌酶谱中AST、CK、CK-MB较对照组升高不明显,差异无统计学意义(P>0.05),LDH、HBDH明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论荨麻疹患者心肌酶谱升高率随过敏原等级升高而递增,LDH和HBDH数值升高明显,这说明荨麻疹患者过敏原等级越高,对心肌的损害程度越高。通过对过敏原与心肌酶谱的联合检测,为临床诊治提供实验室依据,意义重大。

E-选择素在胚胎着床过程中小鼠子宫内膜的表达规律

目的:研究E-selectin在胚胎着床及早期分化中的作用。方法:用RT-PCR、Immunoblot、Western bolt法检测小鼠 胚胎着床前后蜕膜组织E-seleetin的表达。结果:E-选择素在孕4天的小鼠子宫内膜中的表达出现升高,第5天达到峰值,随后 妊娠第6、第7天E-selectin蛋白的表达则逐渐下降至正常水平。结论:提示E-选择素可能参与了胚胎着床过程。

A Comparative Study on Detection of the Expression of Alternative Oxidase in Tobacco Callus with the Monoclonal Antibody Against Alternative Oxidase and Antibody Against-Synthetic Polypeptide Antibody

从经过不同温度处理的烟草 (NicotianarusticaL .)愈伤组织中提取并纯化线粒体蛋白 ,分别与交替氧化酶的单克隆抗体和抗合成多肽抗体进行免疫杂交。结果表明 :交替氧化酶的含量随温度的下降而显著上升 ;单克隆抗体的特异性较高于抗合成多肽抗体 ,但后者与交替氧化酶同样有良好的亲和性。因此 ,用合成多肽方法制备的抗体可以用于交替氧化酶的研究中。

蛋白质免疫印迹技术的实验研究

阐述了蛋白质免疫印迹（western blotting）技术在蛋白质研究中的重要意义,论述了蛋白质印迹技术的原理和实验方法,从实验技术的几个主要方面对方法进行了分析和讨论,并对蛋白质免疫印迹技术进行了经验性的论述。

人血清高密度脂蛋白亚类免疫印迹检测法

为了检测血清高密度脂蛋白各亚类，采用琼脂糖及梯度聚丙烯酰胺凝胶双向电泳、免疫印迹试验和斑点扫描分析建立了血清高密度脂蛋白亚类的检测方法。高密度脂蛋白各亚类含量重复性试验的板间变异系数为４ ．９ ％ ～１１ ．１ ％ ，正常人血清测得的高密度脂蛋白２ｂ 、２ａ、３ａ、３ｂ 、３ｃ 亚类含量分别为３０ ．８４ ％ ±６ ．９５ ％ 、２１ ．６０ ％ ±３ ．８８ ％ 、２０ ．２８ ％ ±３ ．６９ ％ 、１３ ．５４ ％ ±２ ．０３ ％ 及７ ．０５ ％ ±１ ．７５ ％ ，前β１ 高密度脂蛋白和前β２ 高密度脂蛋白含量分别为６ ．６７ ％ ±１ ．２２ ％ 及４ ．５２ ％ ±１ ．１２ ％ 。结果表明所建立的方法可直接以血清为样品，同时准确检测α及前β高密度脂蛋白各亚类的组成及含量。

虾类和蟹类的过敏原组分分析

目的:分析虾类和蟹类的过敏原组分。方法:聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot分析虾类和蟹类的主要过敏原组分。结果:不同种类的虾其主要过敏原组分相对分子质量(Mr)在36000附近,不同种类的蟹主要过敏原组分Mr在29000、36000、66000、89000附近。结论:不同种类的虾蟹存在共同过敏原。

国产抗HCV酶联免疫诊断试剂质量分析

目的 了解国产抗HCV EIA试剂的质量情况。方法 用16种国产抗HCV EIA试剂盒和2种进口试剂对1426份来源于血站及医院的血清进行了检测,并对疑难样品用RIBA及PCR试剂进行了确证。对各种试剂的灵敏度,特异度及检测的抗体谱进行了分析。结果 目前国产试剂灵敏度不低于国外试剂,特异度尚有待于改进。国产试剂漏检及假阳性的主要原因为HCV NS3区抗原相对较弱,抗原纯度较低,用量不足,有待于改进。结论 国产抗HCV试剂灵敏度不低于国外试剂,特异度有待提高。

抗HCV国家参考品的研制

目的 建立新的抗HCV国家参考品,促进国产抗HCV试剂的发展。方法 从全国各地收集供血员及丙型肝炎病人血样4000多份,应用10多种抗HCV EIA试剂筛选,应用免疫印迹及HCV PCR方法进行确证,并会同26家单位进行会同标定。结果 新参考品由40份抗HCV阴性样品及40份抗HCV阳性样品组成,阳性样品中有单独某一种抗体阳性的样品,有同时含有某两种抗体的样品,也有同时含有4种抗体的样品。结论 新参考品针对试剂存在的问题及发展方向,对研究开发和筛选高质量的丙肝抗原提供了参考数据,并为国产试剂的质量控制提供了标准。

结核感染T细胞斑点试验在结核性腹膜炎诊断中的临床应用

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(enzyme-linked immunospot assay in detection of mycobacterium tuberculosis infection,T-SPOT.TB)在临床诊断结核性腹膜炎中的应用价值。方法对临床明确诊断结核性腹膜炎及可疑结核性腹膜炎患者(n=37)同时实施T-SPOT.TB、结核菌素试验(PPD)、结核抗体、血清腺苷脱胺酶(ADA)等检测,同时设非结核性腹膜炎患者为对照组(n=25)。结果利用T-SPOT.TB试验诊断结核性腹膜炎的阳性率为97.3%(36/37),明显高于PPD的45.5%(15/33)、结核抗体检查的15.2%(5/33)、血清ADA的33.3%(7/21),差异有统计学意义(P<0.01)。T-SPOT.TB试验诊断结核性腹膜炎的敏感性和特异性分别为97.3%和92.0%,显著高于PPD的45.5%和61.9%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 T-SPOT.TB酶联免疫斑点法是一种具有较高敏感性和特异性的检测结核感染的技术,对快速而准确地诊断结核性腹膜炎具有重要的临床应用价值。

酶联免疫电转移印迹技术在囊尾蚴病诊断中的应用

目的 应用高度敏感、特异的酶联免疫电转移印迹技术 (EITB)诊断囊尾蚴病。 方法 用双向电泳法对囊液抗原进行分离、纯化 ,并通过免疫印迹 ,用囊尾蚴病患者、棘球蚴病患者和其他异源血清筛选高免疫反应性和高特异性抗原组分 ,以此建立EITB诊断方法 ,与传统的ELISA法相比 ,并比较血清和滤纸干血浸出液两种样本的敏感性。 结果 得到了等电点为 9.4,相对分子质量为 14 0 0 0和 1660 0两组特异性抗原组分 ,以此为诊断抗原建立了EITB诊断方法 ,其敏感度和特异度分别高达 92 .5 %和 10 0 % ,显著高于ELISA法。在EITB中血清和滤纸干血浸出液的敏感性相似。 结论 EITB诊断囊尾蚴病较ELISA法敏感性高。

853例过敏性疾病患儿体外过敏原检测结果分析

目的了解常州地区小儿常见过敏原种类,为小儿过敏性疾病防治提供参考。方法采用免疫印迹法体外定量测定TIgE和19种常见过敏原的SIgE,对检测结果进行分析。结果 853例被检患儿中SIgE检测阳性率为45.49%,其中1～12月组为14.4%,>12～36月组为43.9%,>36～60月组为59.0%,>60～84月组为57.4%,>84月组为59.4%;单项过敏原检测阳性率处于前5位的分别是户尘螨(27.90%)、点青霉(14.54%)、屋尘螨(10.55%)、羊肉(9.03%)、牛奶(8.68%),占单项过敏原检出总数的70.70%,而处于后5位的分别是贝类(0.12%)、芒果(0.23%)、鱼(0.47%)、蟑螂(0.47%)、榆树(0.70%);主要气吸入性敏原户尘螨、屋尘螨、真菌的检出率随年龄增长逐渐上升。并在5岁以后趋于稳定的高水平;主要食入性过敏原羊肉、牛奶、牛肉、鸡蛋白的检出率,除牛奶外,均在不同年龄组处于相对稳定的水平,并在3岁时达到高峰后逐渐下降。结论常州地区过敏性疾病患儿主要过敏原分别为户尘螨、真菌、屋尘螨、羊肉、牛奶,常见的混合过敏在食入性与吸入性方面随年龄变化各有差异,总的趋势是食入性过敏原随年龄增长逐渐减少,吸入性过敏原则逐渐增加。

烟夜蛾组织蛋白酶B酶原基因的克隆、序列分析和原核表达

利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guene)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体。测序结果表明,该片段长度为1017bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完整开放阅读框架(ORF)(Gen Bank登录号:EF154237)。序列分析结果显示:烟夜蛾组织蛋白酶B(HassCB)编码338个氨基酸残基,预测N-末端含有长度为21个氨基酸残基的信号肽序列;去除信号肽序列后,预测成熟蛋白分子量为35.5kDa,等电点为5.96。氨基酸序列比对结果表明,HassCB与其他昆虫的组织蛋白酶B酶原氨基酸序列有较高的一致性。将去除信号肽序列的HassCB(HassCBa)重组到表达载体pGEX-4T-1中,并转入原核细胞中表达,SDS-PAGE和Western印迹分析表明:该基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61kDa的目的条带,与预测的融合蛋白分子量相符。用该基因制备多克隆抗体并测得该抗体对重组表达的HassCBa的效价为1∶51200。通过免疫印迹检测证实,此抗体既能识别重组表达的HassCBa,又能识别烟夜蛾卵巢匀浆液中的HassCB。

斯氏狸殖吸虫抗原分析和血清学诊断方法的研究

[目的 ]分析斯氏狸殖吸虫囊蚴、童虫和成虫各期抗原和建立特异性抗原的斯氏狸殖吸虫病血清学诊断方法。 [方法 ]用SDS PAGE分离斯氏狸殖吸虫的各虫期抗原 ,经免疫印迹识别成虫期特异性诊断抗原。采用电洗脱技术分离 10～ 30kDa蛋白组分 ,建立纯化抗原的dot ELISA血清学诊断斯氏狸殖吸虫病。 [结果 ]斯氏狸殖吸虫病患者血清与成虫抗原的 10～ 30kDa显示较多免疫识别带 ,主带为 2 2、2 4和 2 6kDa。与血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清的交叉反应带出现于 6 0～ 90kDa。斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA与成虫粗抗原的ELISA检测 2 8例疑诊病人血清 ,两法阳性率间差异无显著性。而检测 38例感染其它吸虫和肺部疾病患者血清 ,粗抗原的ELISA交叉反应率为 13 2 % (5 /38)。 [结论 ]斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA为斯氏狸殖吸虫病高度特异和敏感的血清学诊断方法。

医院患者HIV抗体筛查阳性与免疫印迹试验结果对比分析

目的对比分析HIV抗体筛查试验与免疫印迹试验结果,探讨抗体筛查阳性结果与确证结果之间的关系。方法参照《全国艾滋病检测技术规范》要求,对HIV抗体初筛阳性标本采用免疫印迹试验进行确证。结果 287份筛查阳性标本经WB确证后,251例为HIV-1型抗体阳性(87.46%),16例不确定(5.57%),20例阴性(6.97%)。ELISA、胶体硒法与WB试验的阳性符合率分别为89.96%和90.29%。WB试验阳性、不确定和阴性标本的EIISA平均S/CO值分别为16.93、6.996和5.568。S/CO值大于或等于1而小于6,与确证试验阳性符合率为18.75%;大于或等于6而小于10,阳性符合率为69.23%;S/CO值大于或等于10,阳性符合率为97.05%。确证为HIV-1型抗体阳性的标本,gp160、gp120、gp41、p66、p51、p24出现频率都在95%以上。结论筛查试验存在一定假阳性结果,随着S/CO值的增高,与确证试验的阳性符合率也升高,但是高S/CO值样品并不代表感染HIV,HIV抗体结果报告必须以WB结果为准。WB确证方法在不确定标本中存在一定缺陷。

去N端信号肽和C端跨膜区猪卵透明带-3β蛋白在原核系统表达的研究

猪卵透明带 (Zonapellucida ,ZP)由生物化学和免疫学性质截然不同的三种糖蛋白 (pZP1、pZP3α和pZP3β)组成。由于抗 pZP3β抗体能在体外与人ZP发生交叉反应 ,因此 pZP3β一直被认为是研制抗受精避孕疫苗的潜在抗原之一。为了能在原核系统中获得无卵巢因子污染的 pZP3β蛋白 ,本文采用PCR方法删除了原cDNA中编码5′ 和 3′ 端信号肽和跨膜区的DNA顺序。扩增的 pZP3β基因核心片段 (pZP3β″)经DNA测序验证后 ,通过引入其两端的EcoRI和SalI酶切位点被定向插入 pBV2 2 1质粒PRPL 启动子下游的多克隆区。SDS PAGE分析表明 :工程菌在热诱导后能特异地表达pZP3β蛋白 ,并能在蛋白印迹实验中被兔抗 pZPIgGs识别。

抗核抗体筛查试验与抗核抗体谱检测的相关性分析

目的通过对本实验室开展的抗核抗体(ANA)和特异性抗核抗体谱(ANAs)的分析研究,探讨二者之间的相关性。方法采用间接免疫荧光法(IIF)检测ANA,免疫印迹法检测ANAs,对1 048例ANA阳性标本进行2种方法的比对分析。结果 1 048例ANA阳性标本中,核颗粒型占44.9%;核均质型占23.3%;胞浆颗粒型占11.8%;着丝点型占8.9%;核仁型占4.3%;高尔基体型占2.3%;核周型占1.5%;中心粒型占0.9%;核点型占1.1%;胞浆纤维型占0.9%。主要核型为核颗粒型和核均质型。ANAs的阳性率为60%。所有荧光核型均以抗SS-A抗体阳性为多,其中n RNP/Sm、Sm、SS-A、SS-B、Ro-52特异性抗体的荧光核型以核颗粒型为主;抗nukleosome、his-tones抗体的核型主要是核均质型;胞浆颗粒型中的主要特异性抗体为n RNP/Sm、SS-A、Ro-52;抗CENP B对着丝点核型的诊断具有较高的特异性。结论 ANA检测的荧光核型与ANAs特异性抗体之间有一定的相关性,但仍存在不一致性。必须联合检测才能提高检出率,在AID的诊断中发挥一定的互补作用。