夫西地酸对分枝杆菌的体外抑菌效果评价

目的:评价夫西地酸(fusidic acid,FA)对分枝杆菌的体外抑菌效果。方法:选取首都医科大学附属北京胸科医院菌株库保存的分枝杆菌标准菌株和临床分离株作为研究菌株,其中,分枝杆菌标准菌株共计45株,包括26株快速生长型分枝杆菌(rapidly growing mycobacteria,RGM)菌株和19株缓慢生长型分枝杆菌(slowly growing mycobacteria,SGM)菌株;分枝杆菌临床分离株共计129株,为首都医科大学附属北京胸科医院2017年1月至2018年12月分离获得,包括结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)药物敏感株26株、耐多药(multidrug-resistant,MDR)MTB菌株29株、广泛耐药(extensive drug-resistant,XDR)MTB菌株30株、鸟分枝杆菌分离株23株和戈登分枝杆菌分离株21株。采用肉汤稀释法药物敏感性试验,测定FA对研究菌株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)、MIC_(50)、MIC_(90)、MIC_(99),并将MIC≤16μg/ml的菌株定义为FA敏感株,分析菌株对FA的耐药情况。结果:RGM和SGM标准菌株对FA的耐药率分别为23.1%(6/26)和21.1%(4/19)。FA对MDR-MTB临床分离株的MIC_(50)、MIC_(90)、MIC_(99)分别是4、16、16μg/ml,MTB临床分离株对FA的耐药率为3.5%(3/85),其中MTB药物敏感株、MDR-MTB和XDR-MTB菌株的耐药率分别为0、0和10.0%(3/30)。鸟分枝杆菌和戈登分枝杆菌临床分离株对FA的耐药率分别为17.4%(4/23)和9.5%(2/21)。FA对分枝杆菌临床分离株的MIC_(50)、MIC_(90)、MIC_(99)值分别为4、16、>32μg/ml,分枝杆菌临床分离株对FA的总体耐药率为7.0%(9/129)。结论:FA对分枝杆菌菌种具有较强的抑菌活性,其中对MTB临床分离株具有很好的抑菌效果。

基于患者源性口腔鳞状细胞癌类器官的药敏分析与初步临床应用

目的:基于所建立的患者源性口腔鳞状细胞癌类器官模型进行药物敏感性实验,对相应患者制定个性化药物治疗方案,观察其疗效与实验结果的匹配性。方法:本研究将通过活检或根治手术获得新鲜口腔鳞状细胞癌标本建立患者源性类器官模型,依托此模型对6种治疗口腔鳞状细胞癌药物(顺铂、紫杉醇、5-FU、西妥昔单抗、阿培利司、Nutlin-3)的敏感性进行测定,并对其中4例活检患者参考实验结果制定个性化用药方案,观察两个疗程后的近期治疗效果。结果:本研究成功建立了10例OSCC类器官(成功率10/12,83.3%),均可稳定传代、扩增达4代以上,且与亲本肿瘤组织表现出高度一致的组织病理学特征。口腔鳞状细胞癌类器官模型在药敏实验结果中表现出个体化差异,4例接受药物治疗的患者肿瘤控制结果均达到部分缓解标准,与实验结果一致。结论:本实验建立的患者源性口腔鳞状细胞癌类器官模型高度还原了同源亲本肿瘤的组织病理学特点,基于该模型的体外药敏实验与相应患者临床治疗反应一致,为建立个性化口腔鳞状细胞癌精准药物治疗新体系奠定基础。

扁柏酚及其组合物抑制马拉色菌性能研究

探究了扁柏酚及其组合物抑制马拉色菌的性能。扁柏酚对糠秕马拉色菌的MIC为3.91μg/mL;Fe^(2+)可以使扁柏酚失活,Cu^(2+)降低了扁柏酚的活性,而金属螯合剂EDTA二钠可以增强扁柏酚的活性;联合药敏实验结果显示,γ-十一内酯、γ-壬内酯、硫辛酸分别对扁柏酚在抑制糠秕马拉色菌上起到协同、相加、无关作用。含有扁柏酚、EDTA二钠、γ-十一内酯、γ-壬内酯、硫辛酸的组合物对糠秕马拉色菌、球型马拉色菌、斯洛菲马拉色菌、合轴马拉色菌、钝型马拉色菌共5种马拉色菌具有优异的抑制能力。该研究为扁柏酚及其组合物在抑制马拉色菌领域的应用提供了依据。

体外药物敏感性实验在肺癌治疗中的研究现状

肺癌是威胁人类健康的一大“杀手”,目前现有的治疗手段难以满足临床需求。化疗是肺癌非手术治疗中最常用的手段,然而由于肿瘤异质性的普遍存在,肿瘤多药耐药和治疗失败的案例比比皆是。为了避免化疗的盲目性,并提高化疗的有效率,基于体外药敏实验的肿瘤个体化治疗方法应运而生。国内外已广泛开展了一系列临床实验,证实体外药敏实验对于肿瘤个体化治疗具有重要的指导意义。本文重新梳理了当下最为热门及传统常用的几种肿瘤药敏实验方法,并着重介绍了基于类器官、患者来源的肿瘤细胞群、微流控芯片、高通量药敏检测技术及类器官芯片等的新兴体外药物敏感性检测方法,以期更全面、更深入地了解体外药敏实验在肺癌治疗中的最新研究进展。

体外化疗药物敏感实验对指导原发性肝癌个体化疗的临床意义

背景与目的:肝细胞癌(肝癌)化学治疗效果差。为了提高化疗效果,本研究采用体外化疗敏感实验——三磷酸腺苷肿瘤化疗药物敏感实验(adenosinetriphosphatetumorchemosensitivityassay,ATP鄄TCA)系统评估化疗药物,并利用该系统指导肝癌患者临床个体化疗。方法:获取50个原发性肝癌手术标本,采用ATP鄄TCA系统评估5鄄氟尿嘧啶(5鄄fluorouracil,5鄄FU)、丝裂霉素(mitomycin,MMC)、顺铂(cisplatin,DDP)、草酸铂(oxaliplatin,OXA)、表阿霉素(epirubicin,EPI)、健择(gemcitabine,GEM)、伊立替康(irinotecan,CPT鄄11)、足叶乙甙(etoposide,VP鄄16)和泰素(paclitaxel,PTX)等化疗药物;23例肝癌患者术后接受ATP鄄TCA系统指导临床化疗,同时以20例接受手术及常规治疗的肝癌患者作为对照,观察162周临床疗效。结果:ATP鄄TCA系统结果可评估率为90.8%。肝癌细胞对各种化疗药物中鄄高度敏感率分别为:泰素46%、伊立替康44%、健择36%、丝裂霉素14%、表阿霉素12%、顺铂8%、足叶乙甙6%、草酸铂6%以及5鄄氟尿嘧啶4%;临床结果:临床研究观察终点ATP鄄TCA组与对照组比较,PR、CR、SD及观察期内患者死亡率两组之间无显著性差异;然而对照组有较高病情进展发生率(60.00%vs.13.04%,P=0.003);ATP鄄TCA组较对照组在总病情缓解率(60.86%vs.30.00%,P=0.043)、平均手术后总生存期(78.91周vs.27.21周,P=0.006)及手术后无疾病进展生存期(30.52周vs.4.78周,P=0.005)方面表现出明显优势。结论:ATP鄄TCA系统可以成功用于评估肝癌标本。泰素、伊立替康和健择有较高的体外抗肝癌活性。ATP鄄TCA系统指导肝癌个体化疗有可能提高患者无疾病进展生存期和总生存期。

40种中药提取物对6种临床常见感染菌株的体外抑菌活性观察

目的观察苏木、地榆、淫羊藿、黄连、白芍等40种贵州省常见中药对6种临床常见感染菌株的体外抑菌活性。方法取40种中药(厚朴、陈皮、益母草、连翘、三七、虎杖、百部、菌陈、拳参、半夏、龙胆草、玄参、黄精、苦瓜、天冬、瓜蒌、淫羊藿、木蝴蝶、木香、姜黄、杜仲、白芨、木瓜、白头翁、地榆、苏木、白芍、紫草、山豆根、钩藤、黄药子、猪牙皂、黄柏、女贞子、山慈菇、黄连、石斛、栀子、枳壳、金钱草)制备水提取液或乙醇提取液。采用纸片琼脂扩散法(K-B法)测算40种中药提取物对6种标准菌株(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、粪肠球菌、肺炎链球菌)的抑菌圈直径。筛选出对标准菌株有抑菌作用(抑菌圈直径范围10~21 mm)的中药提取物,采用微量肉汤稀释法测定中药提取物对6种标准菌株及其临床分离耐药菌株的最小抑菌浓度(MIC)值。结果K-B法显示15种中药提取物(三七、虎杖、半夏、龙胆草、玄参、黄精、瓜蒌、淫羊藿、木香、地榆、苏木、白芍、紫草、猪牙皂、黄连)对至少1种标准菌株有抑菌作用,抑菌圈直径为10~21 mm;黄连对肺炎链球菌、苏木对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好,抑菌圈直径分别为21、20 mm。15种中药MIC在15.63~1 000 mg/m L,其中黄连对肺炎链球菌、苏木对金黄色葡萄球菌的MIC值均为15.63 mg/m L,淫羊藿对肺炎链球菌、地榆对肺炎链球菌的MIC值均为31.25 mg/m L。筛选出5种抑菌活性较强的中药为苏木、地榆、淫羊藿、黄连、白芍,对6种临床分离的耐药菌株有不同程度的抑菌效果,其中苏木对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、黄连对产超广谱-β内酰胺酶肺炎链球菌的MIC_(50)均为15.63 mg/m L。结论 40种中药中苏木、地榆、淫羊藿、黄连、白芍对临床常见感染菌株的抑菌活性较好,黄连对肺炎链球菌及苏木对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强,苏木对铜绿假单胞菌和白芍、地榆对鲍曼不动杆菌也有一定抑菌效果。

布氏锥虫伊氏亚种体外药敏试验

应用布氏锥虫伊氏亚种(Trypanosoma brucei evansi,T.b.e)体外药敏试验系统检查了国内6个T.b.e虫株和国外布氏锥虫指名亚种(T.b.b)对苏拉灭(Suramin)、贝尼尔(Berenil)、安锥赛(Antrycide)、咪唑苯脲(Imidocard)和硫胂聚氰胺(Cymelarsan)等5种抗锥虫药的敏感性。结果表明,该系统能准确测定不同虫株对各种药物的敏感性,与小鼠治疗试验结果基本相符,发现了国内抗贝尼尔和苏拉灭的T.b.e虫株。

乌骨鸡肠乳杆菌的分离鉴定及体外抑菌试验

【目的】寻找能在禽类生产实践中替代抗生素的益生菌,以提高乌骨鸡生产性能,减少抗生素的使用,对乌骨鸡肠道黏膜进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验。【方法】利用常规理化法做生理生化试验;PCR扩增测序法进行分子生物学鉴定;牛津杯琼脂扩散法做体外抑菌试验;灌喂乳酸菌法做动物安全性试验。【结果】分离菌株生长迅速、产酸强,有明显透明溶钙圈,为革兰氏阳性短杆菌;能发酵乳糖、七叶苷等,不分解木糖、阿拉伯糖;甲基红(M-R)试验结果为阳性,H2S、氧化酶、乙酰甲基甲醇(V-P)等均为阴性,生理生化特性与乳酸杆菌基本一致;PCR扩增在约1500 bp处出现目的条带,16S rDNA基因测序显示分离菌与唾液乳酸杆菌的同源性最高;分离菌对新生霉素高度敏感,对诺氟沙星耐药;对大肠杆菌、链球菌等病原菌均表现明显的抑菌作用;分离菌发酵液呈酸性时才具有抑菌活性,蛋白酶、高温对分离菌发酵液抑菌活性影响不大;动物试验中小鼠均生长良好,无一死亡。【结论】分离菌均为唾液乳杆菌,具备成为益生菌的优势;分离菌对多种病原菌具有抑制作用,与诺氟沙星等配合使用,可防治由大肠杆菌、链球菌等多种病原指示菌引起的疾病。

猪附红细胞体培养方法及药敏试验研究

为实现抗猪附红细胞体药物的高通量筛选,拟建立稳定可靠的体外培养方法,并应用其进行药敏试验。采用单因素试验法,分别对培养基种类、胎牛血清添加比例、动物红细胞泥种类、换液和传代间隔时间进行考察。应用建立的方法对猪附红细胞体进行体外培养,并以贝尼尔、青蒿素作为阳性对照药物,对咪唑苯脲、四环素、强力霉素等8种药物进行药敏试验。结果显示,RPMI-1640基础培养液与胎牛血清按6∶4比例混合,同时添加2 g/L比例的肌苷,并用HEPES和NaHCO3调节pH至7.2~7.4,猪附红细胞体体外生长状况良好。以正常兔红细胞泥为体外培养载体,每24 h更换1次培养液,每32 h传代1次,可连续稳定传代42次,红细胞最高感染率达93.6%。测得咪唑苯脲的IC50最小,为14.55μg/mL,表明在8种药物中,其抗猪附红细胞体活性最强。

土槿皮等5种中药及其不同组合抗糠秕马拉色菌的体外药敏试验研究

目的测定土槿皮、侧柏叶、苦参、丁香、肉桂及其不同组合对糠秕马拉色菌的最小抑菌浓度,观察其体外抑菌效果。方法参照美国国家临床实验室标准化委员会制订的M27-A方案中酵母菌微量稀释法,在此基础上进行改良,采用含油的培养基作为药敏试验的液基,制备微量药敏板,对糠秕马拉色菌进行体外药敏试验。结果最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)依次为:5种中药混合液(槿柏洗剂):5.5 mg/m L,土槿皮+侧柏叶+苦参+丁香:16 mg/m L,土槿皮+侧柏叶+苦参:8.5 mg/m L,丁香+肉桂:9 mg/m L,土槿皮:10 mg/m L。结论相比于各单味药及不同组合,槿柏洗剂全方MIC为最小,5种中药及其不同组合混合液均有抑制糠秕马拉色菌生长的作用。

bFGF/胶原蛋白复合海绵的研制及体内外药理学研究

目的:研制碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)/胶原蛋白复合海绵并对其体外活性和体内过敏性进行研究。方法:以新鲜猪皮和bFGF为原料,制成bFGF/胶原蛋白复合海绵,并检测其理化性质,采用MTT法测定其浸提液对小鼠胚胎成纤维细胞3T3小鼠细胞的体外促增殖活性,采用迟发型超敏反应封闭贴敷试验研究其体内过敏作用。结果:高低剂量bFGF/胶原蛋白复合海绵的表观密度等理化性质指标与空白海绵比较均没有显著性差异;电泳检查结果表明复合海绵在约18kD处具有明显的条带;体外活性检测表明高低剂量bFGF/胶原蛋白复合海绵生理盐水浸提液均对3T3细胞具有明显的促细胞增殖作用,与PBS对照组比较具有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。在过敏试验中,高低剂量bFGF/胶原蛋白复合海绵组以及生理盐水浸提液组动物在诱导和激发期间均未见过敏症状,病理检查结果表明,动物皮肤未见炎症病变;而阳性对照2,4-二硝基氯苯组动物过敏反应发生率为100%,且具有明显的炎症病变。结论:bFGF/胶原蛋白复合海绵理化性质较好,具有明显的促细胞增殖活性,对皮肤无过敏反应,有望开发成为新型外用治疗创伤的材料。

KeratinoSens试验在医疗器械致敏性检测中的应用研究

目的:介绍一种迟发型皮肤超敏反应的新型体外人源细胞系替代评价方法──Keratino Sens试验,并探讨其在两种医疗器械致敏性检测中的应用。方法:构建质粒p GL4.17-AKR1C2-ARE-SV40转染人类永生化角质细胞系Ha Ca T,用G418筛选得到稳定转染细胞系Keratino Sens(采用此细胞系检测致敏性的方法称为Keratino Sens试验)。采用Keratino Sens试验对已知非致敏物和致敏物进行分析,通过计算阴性对照组的变异度,测试细胞株的稳定性;将试验结果和已知的致敏性进行对比,得出Keratino Sens试验的致敏预测性。采用Keratino Sens试验测试临床上致敏报道较多的医疗器械医用天然乳胶手套和含镍金属的致敏性。结果:阴性对照组的变异度为18.6%,符合稳定性要求,Keratino Sens试验的致敏预测性良好;两种医疗器械的Keratino Sens试验结果均呈阴性。结论:KeratinoSens细胞系构建成功,将其初步应用于医疗器械的致敏性检测,可为该方法转化为医疗器械检测方法提供经验数据。

人体肝癌细胞周期FCM测定与化疗药物敏感性关系的研究

应用细胞周期流式细胞仪(FCM)分析与~3H—TdR掺入法药敏测定技术,对8种化疗药物(MMC,MTX,5—Fu,ADM,CDDP,VP_(16),VCR,DTIC)在29例肝癌体外培养细胞的抑制作用与细胞周期比例的关系进行了对比研究。结果显示,化疗药物抑制率与细胞周期比例有关。以抑制率>60％作为有效标准,则对8种化疗药物有效的22例肝癌(75.9％)的细胞周期比例明显不同于抑制率<60％的肝癌。我们认为,FCM细胞周期测定具有简便、快速、客观、准确的特点,在临床个体化疗上具有实际应用价值。

胃癌中胸苷酸合成酶与培美曲塞/雷替曲塞敏感性的初步研究

目的探讨胃癌组织中胸苷酸合成酶(TS)mRNA表达与培美曲塞或雷替曲塞药物敏感性之间的关系。方法收集50例经病理确诊的新鲜人胃癌标本,采用三维微组织块培养法(HDRA)进行两种药物的体外敏感试验;实时荧光定量PCR检测对应胃癌石蜡组织中TS mRNA水平。结果新鲜胃癌组织对培美曲塞或雷替曲塞的敏感性以及胃癌石蜡组织中TS mRNA水平均与临床病理特征无明显相关性。培美曲塞敏感组与耐药组的TS mRNA相对表达量分别为6.72±1.34和15.39±2.43(P=0.002);雷替曲塞敏感组与耐药组的TS mRNA相对表达量分别为7.96±1.70和14.14±2.37(P=0.028)。结论胃癌石蜡组织TS mRNA水平与新鲜胃癌组织对培美曲塞或雷替曲塞的敏感性呈负相关,TS在胃癌应用新型抗叶酸代谢类药物个体化治疗中具有潜在的指导价值。

善宁对大肠癌细胞体外抑制作用探讨

目的探讨生长抑素(善宁)对体外培养的大肠癌细胞的抑制作用,为大肠癌的内分泌治疗提供实验依据。方法采用MTT法体外检测善宁对54例大肠癌细胞的抑制率。依其性别、年龄、部位、Dukes分期及p53的表达将其分组,统计分析各组病例的敏感药物的差异。结果54例大肠癌病人中有16例对善宁敏感,敏感率为29.6%。善宁敏感性与性别、部位、Dukes分期及p53蛋白的表达无关,但与年龄有关,60岁以下组(敏感率50%)较60岁以上组(敏感率13.3%)敏感,P<0.01。结论善宁在体外对部分大肠癌患者癌细胞有抑制作用,对年轻患者大肠癌细胞抑制作用大于60岁以上患者。

溶菌酶对奶牛子宫内膜炎主要病原的体外药敏试验

选取从患有子宫内膜炎奶牛的子宫黏液中分离出的主要病原菌金黄色葡萄球菌37株、链球菌30株、大肠埃希氏菌12株和化脓棒状杆菌22株,在体外用溶菌酶、庆大霉素、氨苄西林和头孢唑啉按照微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果表明,溶菌酶对奶牛子宫内膜炎分离的金黄色葡萄球菌和链球菌具有良好的抗菌活性,对化脓棒状杆菌具有一定的抑杀作用,对大肠埃希氏菌作用较弱;氨苄西林则均产生了大量的耐药菌株,而溶菌酶对庆大霉素、氨苄西林和头孢唑啉耐药菌株同样具有较好的抑杀效果。

原发性肝癌体外化学药物敏感性试验及结果分析

目的测定肝细胞性肝癌组织对常用化疗药的敏感性,探讨肝癌组织多药耐药患者的临床病理特征。方法对2010年3月至2011年3月间在中山大学肿瘤防治中心肝胆科行肝癌切除术的100例患者标本进行体外药物敏感性实验,测定目前常用8种化疗药的抑瘤率,包括紫杉醇、开普拓、卡铂、丝裂霉素C、氟脲苷、亚砷酸、表阿霉素和吉西他滨;将患者分为2组:多药耐药组(敏感药物<4种)与非多药耐药组(敏感药物≥4种),分析患者的临床病理特征;分析肝内多病灶数与癌组织耐药数的相关性。结果化疗药物对肝癌组织的抑瘤率从高到低为紫杉醇、开普拓、卡铂、丝裂霉素C、氟脲苷、亚砷酸、表阿霉素和吉西他滨,分别为60%,44%,41%,39%,37%,29%,24%及13%,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者的肝内多病灶情况存在显著差异;肝内多病灶数与癌组织耐药数正相关。结论常用化疗药物对肝细胞性肝癌组织的敏感度最高为紫杉醇。肝内多病灶的患者更易发生耐药,而且病灶数目越多耐药数目就越多。

3种方法评估肺炎克雷伯菌及鲍曼不动杆菌对替加环素的体外药敏结果分析

目的:比较3种药敏方法在判定菌株对替加环素不敏感结果的一致性。方法:收集Vitek 2 Compact系统测定的对替加环素不敏感菌株110株,其中肺炎克雷伯菌59株,鲍曼不动杆菌51株。纸片扩散法及MIC Test Strip(MTS)法进行复核检测对替加环素的敏感性。结果:以MTS法为参考方法,Vitek 2法检测菌株与MTS法的一致率,MTS法采用EUCAST折点优于FDA折点,并且误差率较FDA折点低。Vitek2法检测肺炎克雷伯菌对替加环素敏感性与MTS法的一致率高于纸片法,而检测鲍曼不动杆菌的一致率低于纸片法。产ESBL肺炎克雷伯菌对替加环素的耐药率高于非产ESBL肺炎克雷伯菌,Vitek 2 MIC50较MTS MIC50高一个稀释度。CRAB对替加环素的敏感率为100%(MTS法/FDA折点),CSAB的中介率为77.8%,未发现耐药株。结论:Vitek 2法与纸片法均不能作为检测肺炎克雷伯菌与鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性的常规方法,应采用MTS法或肉汤稀释法对不敏感菌株进行复核。

环孢素A治疗再生障碍性贫血体外药敏试验的初步研究

目的 :为预测环孢素A(CSA)治疗再生障碍性贫血 (AA)疗效而建立体外药敏试验。方法 :采用微量甲基纤维素半固体培养粒—单核细胞集落 (GM CFU) ,并用CSA干预。结果 :体外 /体内 (S :敏感 ,R :耐药 ) :S/S11例 ,R/R10例 ,R/S :2 0例 ,与临床总符合率 5 1.2 % ,阳性符合率 10 0 % ,阴性符合率 3 3 .3 % ,试验敏感性 3 5 .3 5 % ,特异性10 0 %。结论 :CSA体外敏感试验与临床疗效有一定相关性 ,如体外敏感 ,则体内 10 0 %敏感 ,但存在一定假阴性。

合成抗菌肽对大肠杆菌的体外抑制作用

目的 观察不同浓度抗菌肽在不同时间内对大肠杆菌体外抑制和杀灭作用。方法 将2种不同浓度的抗菌肽分别加到1×105 cfu.mL-1大肠杆菌菌液中,振荡培养0.5～6 h, 其中取5个时间段菌液,一部分培养后进行细菌计数,另一部分放入肉汤中继续培养,16h后测定不同时间段的A值。结果 在细菌浓度一定,加入抗菌肽200 mmol.L-1,作用时间为0.5,6 h时,A值分别为0.15,0.63。加入抗菌肽400 mmol.L-1,作用时间0.5～6 h时,A值为0.002～0.001,对照组A值为0.98。结论 抗菌肽杀菌效果与抗菌肽和细菌量有关,抗菌肽活性分子足够量才能杀死细菌,未受到抗菌肽作用的菌体能继续分裂繁殖。