Evaluation of the Toxicity of Stone Hair Dye ＆ Paraphenylenediamine by MTT Bioassays in Vitro

Para-phenylenediamine （PPD）, tile main toxic ingredients of hair dyes, have been used by millions of consumers to improve their appearance. Stone Hair Dye （SHD） mainly contain PPD. SHD and PPD were evaluated by 3-（4, 5-dimethylthiazol-2-yl）-2, 5-diphenyltetrazdium bromide or MTT assay, which measures mitochondria metabolism in the entire cell culture and provides information about the percentage of cell survival. Utilizing the MTT assay, the cytotoxicity of SHD and PPD was determining on SH Sy5y culture from nervous system of rat. The short term exposure SH Sy5y culture were incubated with various aqueous solutions of different concentrations of SHD and PPD, and the LC50 of SHD and para-phenylenediamine was found to be 9.15 and 12.4 mg/ml. With increasing the concentration, cytotoxicity effect increase in PPD and SHD. There is a significant differences （P〈0.01） of cytotoxicity among concentrations used. It concluded that in vitro assay could give important information of the mechanism of toxicity at low dosages.

反复熔铸Ni-Cr烤瓷合金体外细胞毒性实验(MTT法)

目的:初步评价反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同熔铸次数Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液培养小鼠结缔组织成纤维细胞(L-929)的结果,从而对反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性进行初筛。结果:各浓度实验组细胞生长形态良好、细胞毒性级为0～1级;经过2～5次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液、不同培养时间的A492均值与经过1次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金相应A492均值无显著性差异(P>0.05)。结论:初步认为Ni-Cr烤瓷合金经过1～5次熔铸后具有较好的生物相容性。

3Y-TZP全瓷材料体外细胞毒性试验(MTT法)

目的:初步评价牙科全瓷材料3Y-TZP生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒实验(MTT法)测试不同浓度和浸提时间的材料浸提液L-929小鼠结缔组织成纤维细胞的影响从而对全瓷材料3Y-TZP的生物相容性进行初筛。结果:各浓度组OD值均与阴性对照无显著性差异(P>0.05),与阳性组差异显著(P<0.01),材料毒性级别0级。结论:两种材料体外细胞毒实验阴性,初步认为材料具有较好的生物相容性。

不同浸提条件对医疗器械体外细胞毒性试验结果的影响

目的探讨不同浸提条件(浸提24、72 h)对医疗器械体外细胞毒性试验中细胞生长与细胞毒性结果的影响。方法采用含血清MEM细胞培养液作为浸提介质,按照GB/T 16886.12-2017推荐的浸提比例,将空白对照品、阴性对照品及5种不同医疗器械常用材料样品在(37±1)℃条件下分别浸提24、72 h,依据GB/T 16886.5-2017中的MTT法进行试验。比较浸提24、72 h对细胞生长与细胞毒性结果的影响。结果与浸提24 h比较,浸提72 h后空白对照组吸光度偏低,相对偏差为-3.0%,差异无统计学意义(P>0.05);被检样品试验结果显示,样品1、样品2有细胞毒性,样品3和样品5无细胞毒性,浸提24、72 h结果一致,相对增殖率(RGR)变化小;样品4有细胞毒性,但浸提72 h后RGR明显降低,降低幅度为93.7%,提示有毒物质溶出量增多。结论结合显微镜观察细胞形态,确认延长浸提时间至72 h对细胞生长的影响可以忽略。对于被检样品组,延长浸提时间至72 h各样品RGR呈降低趋势。对于RGR>80%、<60%的医疗器械样品,浸提24、72 h的评价结果一致,评价风险较小。而对于RGR处于临界值(60%~80%)的医疗器械样品,浸提24、72 h的结果可能不一致,评价风险较大,尤其是长期接触人体的医疗器械,建议采取浸提72 h的条件进行体外细胞毒性试验,以降低评价风险。

双酚A和几种天然激素对鲫鱼淋巴细胞增殖的影响

通过聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法,从鲫鱼(Carassius auratus)血样中分离淋巴细胞,体外培养72h,用MTT法测试双酚A和几种天然激素对淋巴细胞增殖的作用,评价双酚A的免疫毒性.结果表明,可的松对鲫鱼淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用,睾酮和雌二醇对鲫鱼淋巴细胞的增殖有明显的诱导作用.双酚A具有与睾酮和雌二醇相似的诱导作用,明显地促进鲫鱼淋巴细胞的增殖.研究结果揭示双酚A对鲫鱼具有潜在的免疫毒性.

青龙衣毒性作用及体外抗肿瘤作用的实验研究

目的 :青龙衣提取物及其分离成分的毒性及体外抗肿瘤作用。方法 :采用常规小鼠急性毒性试验方法 ,MTT [3 (4 ,5 dimethylthiazol 2yl) 2 ,5 diphenylterazoliumbromide ,MTT]法和SRB(sulforhodaminB)法对青龙衣提取物及其分离成分的抗肿瘤作用进行了初步筛选。结果 :除小鼠腹腔注射青龙衣氯仿萃取物LD50 为 5 75 .38mg·kg-1和青龙衣醋酸乙酯萃取物为 130 3.5 9mg·kg-1,青龙衣总提取物和青龙衣石油醚萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物小鼠口服及腹腔注射LD50 均大于 5g·kg-1。醋酸乙酯粗提部分对人白血病细胞株HL6 0在 10 0 μg·mL-1时 ,细胞抑制率 <5 0 % ,在 10 0 μg·mL-1剂量下 ,青龙衣的氯仿粗提部分和醋酸乙酯粗提部分对白血病细胞株HL6 0、人胃癌细胞株BGC82 3及人宫颈癌细胞株Hela细胞的抑制率均 >5 0 % ,其IC50 (生长抑制 ) <10 0 μg·mL-1。结论

海龙体外抗肿瘤活性研究

目的 :筛选不同品种海龙的体外抗肿瘤活性部位。方法 :采用MTT法观察海龙的各种提取物对多种人癌细胞株生长的影响。结果 :尖海龙的 95 %乙醇提取物对KB细胞的生长具有抑制作用 ,并呈量效关系 ;粗吻海龙的脂溶性非皂化物具有不同程度的抑制人癌细胞株KB ,Hela ,Bcap37,K5 6 2 ,PAA细胞的作用 ,并有明显的量效关系 ;拟海龙的各提取物未见有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用。结论

抵当汤及其加味方体外抗肿瘤活性研究

目的探讨抵当汤及分别加入柴胡、桂枝、黄芪3个加味方汤剂对人乳腺癌MCF-7细胞、人结肠癌HCT-28细胞、人肝癌HepG-2细胞的体外抗肿瘤活性的影响。方法用MTT法研究抵当汤及3个加味方制剂对MCF-7细胞、HCT-28细胞、HepG-2细胞的生长抑制作用。结果抵当汤对MCF-7、HepG-2细胞有明显的生长抑制作用(P<0.01),分别加入柴胡、桂枝、黄芪3个加味方汤剂对3种癌细胞生长抑制作用有明显提高(P<0.01);4种汤剂在72 h内对MCF-7、HCT-28细胞的毒性呈时间依赖性,IC50值在加味方后显著降低,加入柴胡、桂枝方IC50值可减少至原方的0.79倍至0.25倍。结论抵当汤对体外肿瘤细胞有活性作用,而加入柴胡、桂枝、黄芪的3个加味方活性作用均大于原方抵当汤活性作用,其中加入柴胡、桂枝的活性作用强于黄芪,抵当汤及加味方对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制最为明显。

温室栽培砂糖橘花粉活力测定方法比较研究

以5a生枳砧砂糖橘嫁接苗为试材,研究比较了离体萌发法、TTC染色法、I2-KI染色法和MTT染色法对花粉活力的测定效果及其对砂糖橘有叶花和无叶花2种类型离体花粉活性的影响。结果表明:砂糖橘无叶花花粉活性高于有叶花花粉活性;MTT染色法是简单快速测定砂糖橘花粉活性的最佳方法。

火绒草水提取液对牛乳中多形核白细胞体外杀菌功能的影响

采用平板计数法和MTT法,检测火绒草水煎液、水提醇沉液、醇提水溶部分3种水溶性组分对牛乳中多形核白细胞(PMN)体外吞噬金黄色葡萄球菌NewbouldS 305功能的影响,每种提取试验药物分4种浓度(10.0,5.0,2.5,1.0mg/ml),通过比较火绒草药物孔与对照孔PMN杀菌百分率,确定试验药物对奶牛乳腺免疫功能的调节作用。结果表明:平板计数法测定中,除醇提水溶部分(1mg/ml)外,3种提取物杀菌百分率与对照组比较,呈显著(P<0.05)或极显著差异(P<0.01)。MTT法中,除水提醇沉液(1mg/ml)外,3种提取物均能显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)地提高牛乳中PMN的体外吞噬活性。两种方法检测的结果,随药物浓度升高,牛乳多形核白细胞(PMN)体外杀菌功能有增强趋势。且两种方法测定结果基本一致,t检验差异不显著(P>0.05)。表明火绒草3种提取组分对奶牛乳腺多形核白细胞的体外吞噬活性具有良好的调节作用。

纳米Ag-SiO_2聚氨酯的体外细胞毒性评价

背景:为改善聚氨酯材料的抗菌性能,前期研究中合成了纳米Ag-SiO2聚氨酯材料。目的:比较7种含不同质量分数纳米Ag-SiO2聚氨酯材料的体外细胞毒性。方法:将纳米Ag-SiO2与聚氨酯以熔融共混方式制备成含纳米Ag-SiO2,质量分数分别为0,0.5%,1.0%,1.5%,2.0%,2.5%,5.0%的聚氨酯材料。以上述7种聚氨酯材料浸提液、高密度聚乙烯浸提液(阴性对照)、0.1%苯酚液浸提液(阳性对照)分别培养L929细胞24,48,72h后,并设置试剂对照(含体积分数10%胎牛血清的RPMI1640液体培养基)和空白对照(不加细胞,只加含体积分数10%胎牛血清的RPMI1640液体培养基)。采用MTT比色法定量检测各组细胞相对增殖率,并进行毒性反应分级;同时在显微镜下观察细胞形态。结果与结论:7种含不同质量分数纳米Ag-SiO2聚氨酯材料组、试剂对照组、阴性对照组细胞贴壁良好,形态正常,胞体丰满,胞质、核质分布均匀,细胞相对增殖率均大于80%,毒性反应分级均为1级,且随着纳米Ag-SiO2质量分数的降低,体外细胞毒性渐小、生物相容性更好。随培养时间延长,阳性对照组细胞相对增殖率逐渐降低,72h后细胞相对增殖率降至8.7%,与其他组比较差异有显著性意义(P<0.05),细胞萎缩、变圆、漂浮、片状脱落。表明7种含不同质量分数纳米Ag-SiO2聚氨酯材料均具有良好的体外细胞相容性,毒性反应分级均为1级,符合医用材料体外实验要求。

细胞因子对关节软骨细胞增殖的实验研究

目的 探讨细胞因子对关节软骨细胞增殖的影响。方法 应用关节软骨细胞体外培养 ,分别加入IL - 1β,TNF -α,TGF - β1,IL - 1β和TGF - β1,TNF - β和TGF - β1,采用MTT法观察软骨细胞增殖情况 ,瑞氏染色观察细胞形态及分裂指数测定。结果 细胞因子作用软骨细胞 2 4h ,与对照组比较 ,1ng/ml、 10ng/mlTGF - β1组 ,10ng/mlIL - 1β和 1ng/mlTGF - β1组 ,高于对照组。细胞因子作用软骨细胞 4 8h ,与对照组比较 ,2 0ng/mlIL - 1β组 ,1ng/ml、 10ng/mlTNF -α组 ,0 1、 1、 10ng/mlTGF - β1,10ng/mlIL - 1β和 1ng/mlTGF - β1组 ,1ng/mlTNF -α和 1ng/mlTGF - β1组 ,高于对照组。IL - 1β,TNF -α作用软骨细胞 2 4h ,形态发生改变。培养 4 8h ,分裂指数测定 10ng/mlTGF - β1组显著高于对照组。结论 TGF - β1对体外培养关节软骨细胞有明显促进细胞分裂与增殖作用 ,IL - 1β ,TNF -α,作用软骨细胞 4 8h也有促进细胞增殖作用。

荭草花提取物体外抗肿瘤活性研究

目的:筛选荭草花中的抗肿瘤活性部位。方法:采用MTT法观察荭草花的各提取部位对人宫颈癌HeLa细胞、人肝癌SMMC-7721细胞株生长的影响。结果:荭草花的乙酸乙酯部位及正丁醇部位对人宫颈癌HeLa细胞的抑制率约分别为60%及40%;对人肝癌SMMC-7721细胞均约为60%,并具有明显的量效关系。结论:荭草花对人宫颈癌HeLa细胞及人肝癌SMMC-7721细胞的增值具有一定的抑制作用,是一类具有开发前景的抗肿瘤中药。

卵巢癌个体性化疗方案的初步研究

目的评价卵巢癌细胞对8种化疗药物的敏感性,为临床卵巢癌患者个体性化疗方案的制定提供有用的研究模式。方法①应用MTT法检测8种化疗药物对卵巢癌细胞系HO-8910细胞和对照组不同时间、不同浓度化疗药物及其组合的细胞抑制率,筛选出抑制率最高的化疗药物并进行组合。②通过FCM法检测其诱导细胞凋亡的效果,采用Annexin-V-FITC结合PI染色和TdT介导X-dUTP缺口末端标记(TUNEL)法。结果①在MTT法定量检测中,8种化疗药物作用48h对HO-8910细胞系抑制率与对照组相比具有不同程度的差异性,其中以4PPC (32μg/ml)的CDDP与4PPC(0.12μg/ml)的As2O3效果最显著,此时HO—8910细胞系的抑制率分别为80.43 %和73 37%,与对照组比较,差异显著(P=0 01)(2).MTT法定量检测21种化疗药物组合对HO-8910细胞系抑制率,筛选出抑制率最高的化疔药物组合:CDDP+BLM+紫杉醇(抑制率94.44%),与对照组比较,差异显著(P=0. 0125)。(3).FCM法定量检测组合CDDP+BLM+紫杉醇作用2、4、6、8、10、12、24、48h 8个时间段对HO-8910细胞系的细胞凋亡率,与空白对照组比较有不同程度的差异,其中以作用48h的细胞凋亡率最高(75.70%),差异显著(P=0.0136)。结论①卵巢癌细胞的化疗敏感性与化疗药诱导的卵巢癌细胞凋亡密切相关。②细胞抑制率,早期细胞凋亡,晚期细胞凋亡,细胞凋亡率可作为制汀卵巢癌个体性治疗方案的评价指数体系。③在细胞抑制率的基础上优选出相应的抗癌药物,再通过细胞凋亡率评价抗癌药物的优化组合方案,这一肿瘤个体性化疗方案制定程序具有可行性,为卵巢癌者个体性化疗方案的制定提供了一个有用的研究模式。

杠柳毒苷对神经胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的观察杠柳毒苷对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的抑制作用。方法体外实验中,将不同质量浓度的杠柳毒苷作用于神经胶质瘤细胞,MTT法检测其对神经胶质瘤细胞增殖的抑制作用;DAPI荧光染色观察细胞核形态的变化;流式细胞术分析给药后神经胶质瘤细胞凋亡及细胞周期的变化情况;Western blot法检测给药后周期蛋白依赖激酶抑制剂P27的表达量。结果杠柳毒苷可以显著抑制神经胶质瘤细胞的生长增殖,且随着药物浓度的增加和作用时间的延长抑制作用也随之加强。结论不同浓度的杠柳毒苷可显著促进神经胶质瘤细胞的凋亡,在抑制细胞增殖的过程中,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P27的表达量显著升高。

蒲葵子总黄酮提取工艺的优化及其体外抗肿瘤活性

目的优化蒲葵子总黄酮提取工艺,并评价其体外抗肿瘤活性。方法以提取时间、超声功率、乙醇体积分数、液料比为影响因素,总黄酮提取率为评价指标,星点设计-效应面法优化提取工艺。然后,MTT法检测总黄酮对SGC7901、Hep G2、A549细胞的抑制作用。结果最佳条件为提取时间30 min,超声功率80 Hz,乙醇体积分数65%,液料比30∶1,总黄酮提取率11.59%。与阴性对照比较,总黄酮对3种肿瘤细胞均具有显著抑制作用(P<0.05,P<0.01),并呈量效关系,48 h内最大抑制率分别为83.77%、93.33%、74.39%。结论该方法稳定可靠,可用于提取具有较强体外抗肿瘤活性的蒲葵子总黄酮。

黄芩总黄酮脂质体的制备及其体外抗肿瘤活性

目的制备黄芩Scutellariae Radix总黄酮脂质体,并评价其体外抗肿瘤活性。方法逆向蒸发法制备脂质体。以磷脂质量浓度、磷脂与胆固醇比例、有机相与水相比例、总黄酮质量浓度为影响因素,包封率为评价指标,BoxBehnken设计优化制备工艺。MTT法检测所得脂质体对人肝癌细胞HepG2的抑制作用。结果最佳条件为磷脂质量浓度30 mg/mL,卵磷脂与胆固醇比例3∶1,有机相与水相比例2∶1,总黄酮质量浓度5 mg/mL。所得脂质体圆整均匀,平均粒径(160.7±12.0)nm,Zeta电位(-41.4±2.3)mV,包封率(86.19±0.44)%,载药量(5.32±0.04)%,24 h累积释放率(80.77±2.53)%。与总黄酮相比,脂质体对HepG2细胞有更强的抑制作用(P<0.05),48 h IC50为48.853μg/mL,并呈时间和浓度依赖性。结论低温(4℃)下保存的黄芩总黄酮脂质体具有缓释作用和体外抗肿瘤活性。

盐酸米托蒽醌聚乙二醇化脂质体的制备及对A549细胞体外抗肿瘤作用的研究

目的研究盐酸米托蒽醌聚乙二醇化脂质体(DHAD-PEG-L)的制备及其抗肿瘤细胞增殖作用,比较DHAD-PEG-L与常规盐酸米托蒽醌(DHAD)制剂的抗肿瘤活性差异。方法以主动载药法制备获得DHAD-PEG-L;以人非小细胞肺癌A549细胞为模型,采用MTT法考察DHAD-PEG-L和DHAD对肿瘤细胞的抑制效果,测定制剂作用肿瘤细胞48 h后的IC_(50)值;以方差分析法比较DHAD-PEG-L与DHAD抗肿瘤活性的统计学差异。结果 DHAD-PEG-L和DHAD对A549细胞的IC_(50)分别是(1.561±0.09)mg·L^(-1)和(0.862±0.02)mg·L^(-1);药物经聚乙二醇(PEG)脂质体包封后,与常规制剂相比,高浓度时肿瘤抑制作用略有下降,低浓度时抑制作用增强。结论 PEG化技术可运用于脂质体,对DHAD进行减毒增效改造,预期可降低药物不良反应。

噻唑蓝法测定香菇多糖体外对癌细胞毒作用

目的评价香菇多糖对癌细胞的体外细胞毒作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法测定香菇多糖对人前列腺癌细胞PC-3、人肺癌细胞A-549、人肝癌细胞HepG2和人白血病细胞K-562的细胞毒作用。结果香菇多糖对人前列腺癌细胞PC-3、人肺癌细胞A-549、人肝癌细胞HepG2和人白血病细胞K-562的半数抑制浓度(IC50)值分别为(25.8±3.4),(90.0±7.8),(63.3±4.2),(33.1±3.3)μg.mL-1,生长曲线显示香菇多糖100μg.mL-1对PC-3细胞及HepG2细胞的抑制率随着时间增加而增强,表现出一定的时-效关系。结论香菇多糖对癌细胞具有一定的体外细胞毒作用。

四种牙科陶瓷材料细胞毒性研究

目的:初步评价牙科陶瓷材料的生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同材料和浸提时间的浸提液对L929小鼠结缔组织成纤维细胞的影响,从而对全瓷材料的生物相容性进行初筛。结果:各组A490nm值均与阴性对照无显著性差异(P>0.05),材料毒性级别除培养48h后金属烤瓷粉浸提液组的细胞毒性为1级外,其他各浸提液组均为0级。结论:四种材料体外细胞毒性实验阴性,初步认为材料具有较好的生物相容性。