双亲灭活原生质体电诱导融合法选育高漆酶活性菌株

以杏鲍菇和平菇为亲本菌株,采用双亲灭活原生质体融合技术选育高漆酶活性且遗传稳定的融合菌株。结果表明:杏鲍菇原生质体采用紫外灭活,在30 W紫外灯、照射距离30 cm条件下处理20 min,灭活率达100%。平菇原生质体采用热灭活,65℃处理30 min,灭活率达100%。两菌株按1∶1混合,施加1 MHz、250 V/cm的成串脉冲电压,5.5 kV/cm的融合脉冲电压的电场诱导下使其电融合,原生质体成对率达到70%,融合率为3.2×10-3。从147株融合菌株中筛选出1株高漆酶活性菌株F49,其漆酶和TTC-脱氢酶酶活比双亲分别提高20.6%和25.3%,遗传稳定性分别达到92.0%和92.7%以上。从菌落特征、菌丝形态、菌丝生长量、拮抗试验等方面对融合子进行鉴定,证实为具有双亲性状的融合株。

伊犁地区父母代种鸡场发生沙门氏菌病后的净化研究

试验对患沙门氏菌病的父母代种鸡和商品代雏鸡进行了免疫试验研究。研究表明:用禽伤寒9R株活疫苗配合自制沙门氏菌蜂胶灭活苗免疫注射父母代种鸡,可有效防治种鸡群再次感染沙门氏菌病;发病后的商品代雏鸡用药物治疗的同时用自制沙门氏菌灭活苗免疫,可有效降低死亡率。

利福霉素高产菌株快速筛选方法的建立及应用

利福霉素发酵过程中pH变化规律能够反映菌体对不同营养物质的利用情况及菌体生理特性的变化,并与最终放瓶效价有一定的关联。据此建立了一种以发酵前期(±50 h)pH变化为判断依据的新的快速筛选菌种的方法,即发酵前期pH下降到谷底较早的菌株高产的可能性很大(概率接近70%),并在双亲株灭活种间融合法选育利福霉素SV菌株中进行了应用,筛选到了高产融合菌株F-3及F-16,两菌株分别比出发菌株效价提高了11%和17%。同时,得到了两个亲株(利福霉素SV产生菌U-32、利福霉素B产生菌X#-1)的酶解条件(U-32:10 m g/mL、34°C、2 h;X#-1:10 m g/mL、34°C、3 h)及原生质体双灭活标记条件(U-32:UV 20 m in;X#-1:60°C、50 m in),双灭活原生质体用500 g/L PEG融合,融合频率约1.04×10-5。

芽孢杆菌种间原生质体融合选育高产Surfactin新菌株

旨在获得纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌种间融合高产Surfactin的新菌株。以纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌为亲本菌株,通过制备纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌的原生质体,采用PEG介导的双亲灭活标记法融合原生质体,拟融合子通过PCR鉴定、CPC-BTB法高通量筛选、HPLC复筛以及融合菌株的稳定性验证获得高产Surfactin的新菌株。研究结果表明纳豆芽孢杆菌和暹罗芽孢杆菌的原生质体制备最佳酶解浓度分别为0.25mg/mL和0.2mg/mL,最佳酶解时间分别为25min和20min,其原生质体得率分别为83.1%和84.3%。两者的原生质体融合条件为:纳豆芽孢杆菌紫外灭活80min,暹罗芽孢杆菌85℃热灭活40min,融合体系为50%的PEG6000在38℃下融合时间15min。获得了遗传稳定的融合菌株F8,该菌株Surfactin产量相对于纳豆芽杆菌提高了33.3%,暹罗芽孢杆菌提高了60%。

双亲灭活电融合技术选育酱油生产菌株

选择互补且各具优势的2株米曲霉A98和A33为出发菌株,研究了其原生质体制备和电融合条件。接种YPD液体培养基,30℃摇瓶培养11h获得菌丝。以0.6mol/L甘露醇为渗透压稳定剂,最佳破壁酶液为溶壁酶∶蜗牛酶∶纤维素酶=1∶1∶1,浓度为10mg/mL,28℃酶解2.5h时原生质体浓度达到108个/mL,再生率≥20%;最佳电融合条件为1MHz交流频率,交流场强300V/cm,直流场强6kV/cm,脉冲间隔60μs,脉冲个数3;在此条件下,电融合率达到10-5。对获得的融合子进行酱油发酵筛选,以原料收得率为关键考察指标,筛选获得了1株融合子F01-008,其原料收得率较亲本较高者提高了5.61%。

新支灭活苗不同免疫程序对父母代蛋种鸡的影响

为验证父母代蛋种鸡于60日龄取消新城疫-传染性支气管炎二联灭活苗(简称ND-IB二联灭活苗)免疫的可行性,试验选取健康水平一致的1日龄“峪口京红1号”父母代鸡群60000只,其中30000只为试验组,取消60日龄的ND-IB二联灭活苗免疫。另外,30000只为对照组,于60日龄进行二联灭活苗ND-IB免疫。结果:试验组鸡群于60日龄取消ND-IB二联灭活苗免疫后,2周内的日耗料和体重增重无免疫应激影响。2组鸡群的抗体、死淘率差异不显著,均达到产蛋高峰且23~30周龄产蛋率差异不显著。2组鸡群死亡剖检均未发现IBV感染迹象。结论:取消父母代蛋种鸡60日龄ND-IB二联灭活苗免疫不会对鸡群生产指标造成影响,且可一定程度的降低鸡群免疫应激和免疫成本。