鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒间接免疫荧光检测方法的建立与比较

为建立鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(MDV HVT)的间接免疫荧光方法,将MDV HVT病毒接种96孔细胞板培养(CEF),72 h后用鸡抗马立克氏病病毒阳性血清作为一抗和兔抗鸡荧光抗体作为二抗,对反应条件进行优化,建立了间接免疫荧光方法(IFA)。并与经典的马立克蚀斑计数方法进行病毒滴度的测定比较,运用统计学方法分析,P小于0.05,相关系数为0.995,说明两种方法相关性很好,两种方法均可用于马立克氏病病毒的滴度测定。IFA方法较蚀斑计数方法操作简便快捷,可代替蚀斑计数方法用于马立克氏病活疫苗的病毒含量的初步测定,同时为2025年版《中国兽药典》马立克氏病活疫苗增加IFA鉴别检验方法积累实验数据。

核仁型抗核抗体在自身免疫性疾病中的临床意义

目的 探讨核仁型抗核抗体(ANA)在相关疾病中的临床意义。方法 该研究为回顾性研究,收集2017年1月至2022年5月该院就诊患者临床样本71 780例,采用间接免疫荧光法检测临床标本的ANA,统计核仁型ANA在临床就诊患者中的阳性率,以及核仁型ANA阳性自身免疫性疾病(AID)患者的相关临床信息和实验室特征。结果 在71 780例患者ANA常规检测中,ANA阳性的有16778例,阳性率为23.37%。其中核仁型有1708例,占所有ANA常规检测的2.38%,在ANA阳性者中的比例为10.18%。>20~<50岁组和≥50岁组中不同性别患者核仁型ANA阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),而≤20岁组中不同性别患者核仁型ANA阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄组女性的核仁型ANA阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),其中以>20~<50岁组女性核仁型ANA阳性率为最高。不同年龄组男性核仁型ANA阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。ANA阳性率以风湿免疫科患者为最高(70.35%),但核仁型ANA阳性主要见于生殖医学中心(12.90%)、呼吸内科(12.40%)及神经内科(11.29%)等科室,且科室间的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。1708例核仁型ANA阳性者中,420例做了ANA滴度,包括34例AID患者,386例非AID患者。核仁阳性滴度在非AID患者与AID患者之间的差别无统计学意义(P>0.05)。结论 核仁型是ANA阳性者中的常见荧光模式,在ANA阳性者中存在性别和年龄差异;核仁型ANA阳性率和滴度在不同AID疾病中均存在差异。联合其他免疫功能指标检测,有助于早期鉴别诊断AID。

BP180NC16a与大疱性类天疱疮病情变化的关系

目的探讨大疱性类天疱疮(BP)患者外周血血清IIF滴度、BP180NC16a-ELISA指数与病情变化的相关性。方法监测12例以系统糖皮质激素治疗为主的泛发性BP患者不同时期病情变化及其相应的IIF滴度和BP180NC16a-ELISA指数,并对结果进行分析。结果IIF滴度与病情变化没有平行关系,BP180NC16a-ELISA指数与病情变化较平行。结论BP180NC16a-ELISA指数可作为BP病情的监测和调整治疗方案的重要参考。

9项呼吸道病原体血清IgM抗体检测在呼吸道感染中的临床价值

目的通过检测695例呼吸道感染者病原体IgM抗体表达情况,为临床更好地选择治疗方案提供依据。方法采用间接免疫荧光法检测2015年9月至2016年3月来兰州军区总医院安宁分院和兰州军区总医院呼吸科、小儿科、胸外科门诊就诊和住院的呼吸道感染患者695例血液中的9项病原体IgM抗体,并分析检出情况。结果 695例患者中,9项病原体进行检测,单项病原体检测阳性率33.9%,排在前3位的是肺炎支原体(MP)、乙型流感病毒(IFB)、呼吸道合胞病毒(RSV),检出率依次为MP 14.1%,IFB 9.6%,RSV 4.8%,2项病原体混合感染检出率7.79%;MP、IFB在不同季节检出率有明显区别,Q热立克次体检出率无明显季节变化,男、女比例有明显差异。结论本地区呼吸道感染病原体检出率以MP、IFB、RSV感染为前3位。

免疫组织化学法与间接免疫荧光法对REV抗原定位的比较

本研究分别用免疫组织化学(IHC)法、间接免疫荧光(IFA)法对肿瘤病鸡不同脏器中的禽网状内皮增生病病毒(REV)进行了检测,旨在为两种REV抗原定位方法的应用提供实验依据。采用REV SD1005分离株人工接种1日龄海兰褐鸡,分别采取28日龄肿瘤病鸡的肿瘤、法氏囊、骨髓、肝脏、心脏、脾脏、腺胃的新鲜切面在洁净盖玻片上触片,同时制备其病理组织连续切片,分别用IHC法、IFA法对触片和切片进行REV检测。结果显示,两种用于抗原定位的染色方法检测结果完全一致,均可对病鸡的肿瘤、法氏囊、骨髓、肝脏、心脏、脾脏、腺胃等组织中存在的REV进行定位,依据染色后的阳性细胞感染率可判断REV的组织嗜性。本研究表明,IHC法与IFA法均可用于检测不同脏器中的REV,并具有良好的特异性、低背景和简便快速的特点。但相对于IFA法,IHC法更经济实用并且实验材料易于保存,因此可以在REV抗原定位研究中推广应用。

乳腺癌Ki-67及PCNA表达的比较研究

目的 研究Ki 6 7与PCNA两种增殖抗原在乳腺癌组织中的原位表达特点以及二者的差异性问题。方法 采用间接免疫荧光双标法对 30例乳腺癌组织切片进行Ki 6 7及PCNA染色 ,运用激光扫描共聚焦显微镜观察 ,分析细胞核的荧光阳性面积 ,并对二者进行相关性分析。结果 PCNA的核阳性面积明显大于Ki 6 7,二者的阳性面积呈正相关。结论 在乳腺癌组织中 ,PCNA抗原表达较强 ,几乎涵盖了所有Ki 6 7的增殖信息。

血清抗Dsg1特异性抗体水平变化与落叶型天疱疮病情的关系

目的探讨落叶型天疱疮(PF)患者外周血血清IIF滴度、Dsg1-ELISA指数与病情变化的相关性。方法监测8例落叶型天疱疮患者不同时期病情变化及其相应时间点血清中特异抗体的间接免疫荧光(IIF)滴度和Dsg1-ELISA指数,并对结果进行分析。结果 7例(87.5%)患者病情评分与Dsg1-ELISA指数有显著性关联(P<0.05),且与病情波动平行变化,4例(50%)患者病情评分与IIF滴度有显著性关联,与病情波动平行变化。结论 Dsg1-ELISA指数可作为PF病情的监测和调整治疗方案的重要参考。

比较酶联免疫吸附法与间接免疫荧光法检测抗核抗体的价值

目的比较ELISA法和间接免疫荧光(IIF)法诊断自身免疫疾病的价值。方法系统性红斑狼疮(SLE)组33例,非SLE自身免疫疾病组59例,非自身免疫疾病组43例,同期该院体检中心健康体检者20例纳入健康对照组。采用2种方法检测4组研究对象的抗核抗体(ANA),并进行分析。结果 ELISA法检测SLE组、非SLE自身免疫疾病组中高效价的ANA分别为(2.621±1.700)、(2.248±1.781),IIF法分别为(2.715±0.730)、(2.544±0.59),但前者测出非自身免疫疾病中的ANA(1.034±1.050)低于后者ANA的效价(2.253±0.691)。结论 ELISA检测可提高ANA的检测效果。

间接免疫荧光法检测栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒

用纯化栉孔扇贝(Chlamysfarreri)急性病毒性坏死症病毒(AVNV)免疫兔子,以兔抗血清为一抗,荧光标记的羊抗兔抗体为二抗,采用冰冻切片技术,建立了栉孔扇贝AVNV的间接免疫荧光检测方法。用该方法分析栉孔扇贝和海湾扇贝(Argopectenirradians)体内AVNV感染强度,并对感染率进行统计。结果表明,栉孔扇贝的肾脏、肝胰腺中,AVNV阳性信号最强,呈现中度到重度感染,其AVNV感染率100%。鳃丝、性腺及闭壳肌中未检测到阳性信号。在海湾扇贝的肝胰腺及肾中AVNV的感染率也较高。提示AVNV感染扇贝的靶器官主要是肾脏、肝胰腺。对与栉孔扇贝同一海区养殖的海湾扇贝在栉孔扇贝发病期间存活率较高的原因进行了讨论。

三种不同方法检测抗双链DNA抗体的比较分析

目的比较三种不同方法检测抗双链DNA(ds DNA)抗体的敏感度、特异度和符合度,并探讨其与系统性红斑狼疮(SLE)活动情况的一致性,以指导临床工作。方法采用回顾性分析方法 ,对640例住院患者及健康体检者血清标本进行研究,其中215例SLE患者,用间接免疫荧光法(IIF)、线性印迹法(LIA)、放射免疫分析法(RIA)同时检测抗ds DNA抗体。结果抗ds DNA抗体用IIF、LIA和RIA法在SLE中的检出率分别为40.00%、43.72%、47.44%,与对照组有显著差异,三种方法特异性分别为98.35%、96.24%、94.59%,符合率分别为78.75%、78.59%、78.75%,具有极好的一致性(Kappa>0.8);三种方法在SLE活动期的检出率分别为60.76%、58.23%、60.76%,与SLE稳定期有显著差异,用RIA检测的抗ds DNA抗体的浓度与SLE活动性存在显著的线性趋势(P<0.05)。结论抗ds DNA抗体不仅可以作为SLE患者的诊断标准还对其活动性的评估有着指导作用;三种方法学有着各自的优缺点,有条件的医院建议联合采用两种以上方法相互印证。

血清ANCA检测对肾脏疾病患者的诊断意义

目的进一步探讨血清中的抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测在肾脏疾病患者中的诊断意义。方法应用间接免疫荧光(IIF)和ELISA方法检测了205例肾脏疾病患者血清中的ANCA及其靶抗原。结果在205例肾脏疾病患者血清中,ANCA阳性40例占19.5%,其中38例为pANCA阳性(38/205);2例为cANCA阳性(2/205)。结论不同ANCA荧光模型与疾病种类及预后密切相关;提高pANCA与ANA荧光模型的鉴别,有助于血管炎与其它自身免疫性疾病的诊断;同时应用IIF和ELISA方法检测ANCA,可以提高ANCA检测结果的可靠性。

辽宁省部分地区人群疱疹病毒-6型的抗体调查

用间接免疫荧光试验在沈阳、阜新、本溪三地区进行了抗人疱疹病毒－６型（ＨＨＶ－６）抗体的调查。结果，健康脐带血的阳性率为１００％（３０／３０），幼儿急疹患儿急性期血与ＨＨＶ－６抗原均无特异性阳性反应，恢复期血１００％转阳（１２／１２），其抗体ＩｇＧ效价在１∶８０～１∶３２０之间，健康人血清的总阳性率为７２．４％（２９９／４１５）。６个月～２岁的婴幼儿抗体阳性率最高（８４％～９６％）。提示，这一新发现的幼儿急疹病原体人疱疹病毒－６型早已在我国人群之间广泛感染蔓延。新生儿从母体获得的被动免疫力逐渐下降，６个月以后抗体升高，阳性率也明显高于其他年龄组，表明ＨＨＶ－６感染主要发生于婴幼儿时期。

抗寨卡病毒包膜蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备抗寨卡病毒(zika virus,ZIKV)包膜蛋白(envelope protein,E蛋白)单克隆抗体,检测其免疫反应特异性。方法将ZIKV重组E蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞用50%聚乙二醇(PEG)融合,经过含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培养基筛选出阳性克隆,采取有限稀释法获得单克隆细胞株。利用筛选到的单抗作为一抗,行间接免疫荧光实验和免疫转印试验,鉴定单抗的反应特异性。结果筛选出1株针对寨卡病毒E蛋白的单克隆抗体(命名为13E7-E9),间接免疫荧光实验和免疫转印试验结果表明,该单抗可与寨卡病毒E蛋白结合,且与登革病毒无交叉。结论成功筛选1株抗寨卡病毒E蛋白的特异性单克隆抗体,可为研发寨卡病毒的免疫诊断试剂奠定基础。

替换猪主动脉瓣后抗原性的临床研究

用间接免疫荧光（ＩＩＦ）法对１４例生物猪瓣替换二尖瓣，对其抗原性进行了研究。用已知抗原测患者术后血清中抗体，均显示不同程度阳性。提示生物猪瓣替换于人体内，术后确存在不同程度抗原性，其免疫反应难以避免，这可能是生物瓣钙化、撕裂、坏损或衰败率高的因素之一。如何减轻免疫反应的发生、改善瓣的处理和制备方法，是提高生物瓣耐久性的关键。

间接免疫荧光法与颗粒凝集法诊断儿童肺炎支原体感染的临床价值比较

目的比较间接免疫荧光法与颗粒凝集法诊断儿童肺炎支原体(MP)感染的临床价值。方法选择2019-01~2019-12江苏大学附属医院儿科收治的MP感染患儿539例,均同时采用间接免疫荧光法与颗粒凝集法检测其血清标本,比较两种方法的检测结果。结果间接免疫荧光法检测MP-IgM的阳性率为70.69%(381/539),颗粒凝集法的检测阳性率为73.10%(394/539),两种方法检测结果差异无统计学意义(P=0.409)。间接免疫荧光法检得0~2岁、3~5岁、≥6岁患儿的MP-IgM阳性率分别为70.00%、78.51%、60.25%,颗粒凝集法检得阳性率分别为70.67%、76.32%、70.81%。两种方法检测结果在0~2岁和3~5岁组比较差异无统计学意义(P>0.05),在≥6岁组比较差异有统计学意义(P<0.05)。对于病程≤3 d、4~7 d、8~14 d和≥15 d的患儿,间接免疫荧光法检得MP-IgM阳性率分别为61.90%、68.10%、82.35%、84.09%,颗粒凝集法检得阳性率分别为65.48%、70.86%、83.53%、84.09%,两种方法检测结果差异无统计学意义(P>0.05),检得阳性率随病程延长均呈增高趋势。结论间接免疫荧光法和颗粒凝集法均可作为检测儿童MP感染的有效方式;病程8~14 d是较好的检测时间窗,可以较大程度避免漏诊,及早治疗。

抗核抗体复筛查试验阴性与特异性抗体确认试验阳性的关联

目的探讨抗核抗体(ANA)复筛查试验阴性与特异性抗体确认试验阳性的关联。方法对2065例间接免疫荧光法(IIF)检测阴性结果的样本进行免疫印迹法(LIA)检测,并使用ELISA进行辅助检测。观察IIF阴性结果下LIA、ELISA检测结果,并对样本稀释度对结果的影响进行深入研究。结果 165例IIF阴性样本经LIA确认为阳性,其中以SS-A最多,达到29.76%。通过ELISA检测SS-A,发现与LIA符合率达到88.0%;而通过降低样本稀释度,可以发现50%的样本是因为特异性抗体的浓度较低才漏检的。结论对于高度怀疑为AID的患者,不管IIF检测是否为阳性,都应该进行LIA的复检,以提高检测的准确性。

抗中性粒细胞胞浆抗体在溃疡性结肠炎的检测意义

目的:为探讨抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)对溃疡性结肠炎(UC)的诊断意义。方法:采用间接免疫荧光法(IIF)检测53例UC、60例对照组(其中20例肠结核、40例健康体检者)血清中ANCA阳性率。结果:53例UC患者中,ANCA阳性39例,敏感性73.6%,特异性98.3%。对照组中20例肠结核患者血清中ANCA均阴性,40例健康体检者有1例ANCA阳性。结论:ANCA对UC的诊断特异性强,检查方便、无痛苦。可作为UC诊断的一项血清学指标,同时具有重要的鉴别诊断价值。

检测肺炎支原体的3种方法学比较

目的分析间接免疫荧光法(IFA)、胶体金法和培养法检测肺炎支原体(MP)的敏感度和特异度,探讨筛查MP的最佳方法。方法选择2016年10月—2017年10月在黄石市中心医院确诊为支原体肺炎的126例患者作为MP感染组,另外选择同期进行体检的126例健康体检者作为对照组。分别用IFA法和胶体金法检测两组血清中的MP抗体,用培养法检测两组咽拭子分泌物中的MP,比较3种方法的检测结果并进行统计学分析。结果 IFA法检测MP的敏感度[94.4%(119/126),95%可信区间(95%CI)=0.905~0.983]明显高于胶体金法[82.5%(104/126),95%CI=0.805~0.845]和培养法[42.1%(53/126),95%CI=0.335~0.507],3种检测方法间比较差异均有统计学意义(均P<0.05);IFA法检测MP的特异度[93.7%(118/126),95%CI=0.892~0.976]明显高于胶体金法[84.1%(106/126),95%CI=0.777~0.905;P<0.05],但略低于培养法,差异无统计学意义[93.7%(118/126)比100.0%(126/126),P>0.05]。结论虽然培养法检测MP的特异度最高,但敏感度较低;而IFA法检测MP的敏感度和特异度均较高,是3种方法中筛查MP的最佳方法。

Ki-67和PCNA在乳腺癌中的表达

目的:研究Ki-67与PCNA两种增殖抗原在乳腺癌组织中的原位表达特点及二者的差异性问题。方法:采用间接免疫荧光双标法对60例乳腺癌组织切片进行Ki-67及PCNA染色。运用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM),分析细胞核的荧光阳性面积,并对二者进行相关性分析。结果:PCNA的核阳性面积明显大于Ki-67。二者的阳性面积呈正相关。结论:在乳腺癌组织中,PCNA抗原表达较强,几乎涵盖了所有Ki-67的增殖信息,二者对增殖情况的反映各具特点。

用Hela细胞检测Bip抗体间接免疫荧光法的建立

目的建立抗免疫球蛋白结合蛋白(Bip)抗体检测的间接免疫荧光法(IIF),为探讨其在类风湿关节炎(RA)中的意义做出方法学准备。方法以Hela细胞为抗原基质固定于载片上,加入待测稀释血清温育,待抗原抗体特异结合后加入荧光素标记的抗人IgG与待测Bip抗体结合,最后置荧光显微镜下观察Hela细胞胞浆有无特异荧光出现。结果RA患者血清检测中可见到Hela细胞胞浆中出现特异性荧光,而健康献血员血清检测中未发现Hela细胞胞浆中的特异性荧光,实验所见荧光模式与文献报道相符。结论以Hela细胞为抗原基质的间接免疫荧光法能够对血清中Bip抗体进行检测。