不同底物对Sombati癫细胞模型整合素α_2表达的影响

目的探讨不同底物对经体外培养的Sombati癫癎细胞模型海马神经元整合素α_2表达水平的影响及意义。方法以层黏连蛋白和多聚L-赖氨酸作为底物于体外培养新生小鼠海马神经元,至第7天时行神经元纯度鉴定;无镁细胞外液继续培养3 h后制备Sombati癫癎细胞模型,逆转录-聚合酶链反应检测不同处理组海马神经元整合素α_2 mRNA相对表达变化。结果模型制备前,经体外培养至第5天的层黏连蛋白组神经元胞体增大、饱满,突起连接紧密,神经网络形成,多聚L-赖氨酸组则体外培养至第7天时方出现上述表现;模型制备后24 h,不同处理组神经元均可见迁移现象和神经网络"网格"样改变,但不同处理组神经元形态无明显差异。以整合素α2与β-肌动蛋白光密度值之比值代表整合素α_2mRNA相对表达量,多聚L-赖氨酸组、层黏连蛋白组和多聚L-赖氨酸+层黏连蛋白组分别为0.25±0.03、037±0.05和0.48±0.09,后两组整合素α_2 mRNA表达水平高于多聚L-赖氨酸组,且差异有统计学意义(p=0.005,0.000)。结论与多聚L-赖氨酸组相比,层黏连蛋白对经体外培养的原代神经元贴壁及轴突连接具有较强的促进作用。添加外源性层黏连蛋白可诱导Sombati癫癎细胞模型海马神经元整合素α_2mRNA表达上调。

整合素α2基因C807T多态性与脑梗死的相关性研究

目的探讨整合素α2(ITGA2)基因c807T多态性与脑梗死的关系及其对血脂、载脂蛋白水平的影响。方法选择住院的脑梗死患者150例为脑梗死组,另选健康体检者170例为对照组。应用PCR-RFLP方法检测两组ITGA2的基因型;同时按常规方法测定血脂和载脂蛋白水平。结果与对照组比较,脑梗死组患者TC、TG、LDL-C水平明显升高(P<0.05),ITGA2基因C807T多态性在两组人群中的分布差异有统计学意义(P<0.05),T等位基因携带者患脑梗死的风险是C等位基因的1.690倍(OR=1.690.95%CI:1.219～2.341),携带T等位基因的脑梗死个体TC水平明显高于不携带者(P<0.05)。结论 ITGA2基因C807T多态性与脑梗死发病有相关性,其中T等位基因可能是脑梗死的遗传易感基因;ITGA2基因C807T多态性可能通过影响血脂水平而影响脑梗死的发生。

整合素α2在老龄骨质疏松BMSC成骨分化的调控机制

目的 分析整合素α2在老龄骨质疏松骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的调控机制。方法 检测慢病毒转染BMSCs效率、骨质疏松患者BMSCs中整合素α2转染后高表达,分析骨质疏松患者BMSCs成骨、增殖受到整合素α2高表达的影响及作用机制。结果 BMSCs对整合素α2进行转染3d后,荧光显微镜下可见有GFP表达,感染复数(MOI)=10、20、50、100时视野中分别有零星荧光、少许荧光、显著较多的荧光、最多的荧光。转染后BMSC整合素α2表达显著高于野生型(P<0.05)。整合素α2蛋白表达在慢病毒转染后显著提升,免疫荧光强度显著增强。培养4d后,细胞向增殖期进入,具有较大的生长曲线斜度,说明细胞增殖速度在转染后明显加快,骨质疏松患者BMSC整合素α高表达能够为细胞增殖提供良好的前提条件。对比转染后野生型Osterix、RUNX2表达显著提升。对整合素α2进行转染能够促进骨质疏松BMSC矿化能力的增强。骨质疏松患者BMSC整合素α高表达能够为成骨分化提供良好的前提条件。成骨诱导后30min,转染后细胞外信号调节激酶(ERK)快速活化,1h时显著低于未转染组(P<0.05),但是二者的蛋白激酶B(AKT)/JNK/P38之间的差异不显著(P>0.05)。整合素将ERK1/2通路活化,从而为细胞增殖、分化提供了良好的前提条件。PD98059能够抑制活化ERK、转染后RUNX2,进而抑制茜素红染色所体现的成骨分化、碱性磷酸酶(ALP)活性。结论 整合素α2/ERK/Runx2信号通路参与了老龄骨质疏松发病,为老龄骨质疏松的预防与治疗提供了新的分子机制。

补肾排毒合剂对肾间质纤维化小鼠纤连蛋白及整合素α2、β1表达的影响

目的探讨补肾排毒合剂对肾间质纤维化的作用机制。方法将60只清洁级昆明小鼠随机分为正常组（I组）、UUO组（Ⅱ组）、补肾排毒合剂组（III组）和洛汀新组（IV组）。采用单侧输尿管结扎术建立肾间质纤维化模型。术后7、14、21、28d处死小鼠，取手术肾组织行HE染色，免疫组织化学方法测定肾组织中纤连蛋白及整合素α2、β1的变化。结果纤连蛋白及整合素α2、β1在正常肾组织中微弱表达，Ⅱ组表达较I组升高，Ⅲ组和Ⅳ组各时间点的表达较Ⅱ组降低，Ⅲ组和Ⅳ组之间无明显差异。结论补肾排毒合剂可通过调节纤连蛋白及整合素α2、β1的表达延缓肾间质纤维化的进展。

槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞分泌整合素α_2的影响

目的:通过研究槟榔碱对体外培养的人口腔黏膜成纤维细胞(FB)表达整合素α2的影响,探讨整合素α2在口腔黏膜成纤维性变(OSF)发病机制中的可能作用。方法:体外培养人正常口腔黏膜成纤维细胞(FB),培养基中加入不同浓度(0、10、20、40、80、160μg/ml)的槟榔碱孵育,MTT法12h后检测FB的增殖水平。RT-PCR法24h后检测0、10、20、40μg/ml浓度组整合素α2mRNA的表达水平。结果:槟榔碱浓度为20μg/ml时,FB增殖活性开始下降,与对照组相比无统计学差异(p>0.05),40μg/ml时下降明显与对照组相比有统计学差异(p<0.05)。正常对照组整合素α2mRNA表达量低,随槟榔碱浓度增高其表达量呈增高趋势(p<0.05)。结论:槟榔碱具有刺激FB表达整合素α2的作用,提示FB分泌整合素α2增多,进而诱导胶原合成增多,可能是OSF发生机制之一。

遗传性血小板无力症家系病例的突变分析三例

目的运用生物信息学软件探讨3个遗传性血小板无力症家系的分子发病机制,为体外实验提供依据。方法对3个确诊遗传性血小板无力症家系进行基因分析。采用ClustalX-2.1-win软件分析突变位点同源序列保守性;采用PolyPhen-2、PROVEAN、SIFT、MutationTaster等软件分析突变位点危害性;采用spdbv软件构建突变蛋白结构模型,分析突变位点对蛋白质结构影响。结果3个血小板无力症家系发现"新突变"为ITGA2B:c.814G>C(p.Val272Leu)、ITGA2B:c.432G>A(p.Trp144Ter)及ACTN1:c.2458A>G(p.Ile820Val)。3个突变位点均在同源物种间高度保守。MutationTaster预测结果显示3个新突变均有可能致病,PolyPhen-2和PROVEAN预测结果显示ITGA2Bp.Val272Leu、ACTN1p.Ile820Val为良性的,SIFT预测结果显示ITGA2Bp.Val272Leu为有害的,而ACTN1p.Ile820Val为良性的。突变蛋白质结构分析显示ITGA2BVal272突变为Leu后,原有氢键全部消失。ITGA2BTrp144突变为Ter后形成仅剩113个氨基酸残基的截短蛋白。2个突变均引起GPⅡb分子结构改变,导致GPⅡb/Ⅲa表达减低。ACTN1Ile820突变为Val后,仅保留Ile820与Asp822的氢键,其余氢键消失,引起ACTN1分子结构改变,影响蛋白质功能。结论ITGA2B:c.814G>C(p.Val272Leu)、ITGA2B:c.432G>A(p.Trp144Ter)、ACTN1:c.2458A>G(p.Ile820Val)突变均有较高的致病可能性。