IL-18 sTLT-1及miR-25对脑梗死复发风险的预测价值

目的探讨miR-25、白细胞介素18(IL-18)、可溶性髓样细胞触发受体样转录因子-1(sTLT-1)在脑梗死患者复发中的预测价值。方法 选取三二〇一医院收治的154例脑梗死患者为脑梗死组,对脑梗死组患者随访1 a,根据是否复发分为复发组和非复发组,比较2组临床资料及血清miR-25、IL-18及s TLT-1表达情况。单因素和Logistic回归分析影响患者复发的独立危险因素。采用ROC曲线分析miR-25、IL-18、sTLT-1在预测患者复发中的临床价值。结果 脑梗死组共46例患者出现复发,相较于未复发组,复发组miR-25[32.00(23.31,34.68)比11.89(7.67,19.39)]、IL-18[(44.75±12.38)ng/L比(23.36±10.49)ng/L]及sTLT-1[(484.61±83.90)ng/L比(325.72±99.17)ng/L]水平更高(P<0.05)。单因素及多因素Logistic回归分析显示,吸烟史、高血压史、miR-25≥11.89、IL-18≥23.36 ng/L、sTLT-1≥325.72 ng/L是影响患者复发的独立危险因素。ROC曲线显示,当miR-25截断值为20.97、IL-18截断值为28.92 ng/L、sTLT-1截断值为388.03 ng/L时预测患者复发的AUC均>0.700。结论 脑梗死复发患者血清miR-25、IL-18及sTLT-1水平显著上升,且miR-25、IL-18及sTLT-1水平在预测脑梗死患者复发中具有一定临床价值。

鸡IL-18对IBDV多聚蛋白DNA疫苗的免疫增强作用研究

为进一步评价鸡IL-18的免疫增强作用,用鸡白细胞介素18(IL-18)的真核表达质粒(pCI-IL-18)与传染性法氏囊病病毒(IBDV)多聚蛋白DNA疫苗分别免疫SPF鸡,14日龄时首免,2周后二免,二免后5周用IBDV标准强毒株BC6/85攻击.研究发现,鸡IL-18能显著促进T、B淋巴细胞的增殖反应,增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗诱导的中和抗体水平及其对强毒攻击的保护力.结果提示,鸡IL-18(200μg)对IBDV多聚蛋白DNA疫苗具有显著的免疫增强作用(P<0.05).

IL-18-PE38重组免疫毒素的原核表达及其鉴定

目的 构建绿脓杆菌外毒素 PE38融合鼠 IL - 18基因的原核表达载体并鉴定其表达。方法 首先采用 RT- PCR获得小鼠 IL - 18基因 ,再通过适当的酶切及连接反应 ,构建小鼠 IL - 18与 PE38融合基因的原核表达载体 PRKL - IL 18- PE38,重组载体经限制性内切酶、PCR及 DNA序列测定等证实连接片段的正确性后 ,再转染感受态大肠杆菌 BL 2 1,经 IPTG诱导表达 ,表达产物用 SDS- PAGE和蛋白免疫印迹法分别测定其相对分子质量及特异性。结果 酶切分析、PCR鉴定和 DNA测序等证实 ,IL - 18- PE38免疫毒素的原核表达载体被成功构建 ,重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达 ,表达产物的相对分子质量与预期值一致 ,且所表达蛋白可被抗 IL - 18的特异性抗体所识别。结论 IL - 18- PE38融合基因原核表达载体的获得 ,为进一步研究其对 Th1细胞的靶向细胞毒性及临床应用奠定了基础。

创伤性休克致急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α IL-18mRNA表达的变化及地塞米松的影响

目的 探讨创伤性休克致急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞TNF -α、IL - 18mRNA表达水平的变化及地塞米松对其的影响。方法 将大鼠随机分为正常对照组、创伤性休克生理盐水处理组、创伤性休克地塞米松治疗组 3组 ,在创伤性休克打击前予地塞米松 (10mg/kg)对治疗组预处理 ,测定正常对照组、创伤性休克生理盐水处理组及地塞米松治疗组 1、2、4、6、8h各时点肺泡巨噬细胞TNF -α、IL - 18mRNA表达水平。结果 大鼠遭受创伤性休克打击后 ,肺泡巨噬细胞TNF -αmRNA表达明显增加 ,2h即达高峰 (P <0 0 1) ,然后逐步下降 ,但 8h仍高于正常水平 (P <0 0 5 ) ;IL - 18mRNA表达亦显著增加 ,4h达高峰 (P <0 0 1) ,然后逐步下降 ,8h恢复至正常水平 ;地塞米松能显著降低肺泡巨噬细胞TNF -α、IL - 18mRNA的峰值浓度及各时点值 ,并能一定程度改善PaO2 及肺组织损伤。结论 创伤性休克早期大鼠肺泡巨噬细胞TNF -α、IL - 18mRNA表达均增加 ,地塞米松能抑制TNF -α、IL - 18mRNA的表达 ,在ALI早期应用能减轻病变。

新生儿感染性肺炎时IL-18、IFN-γ与免疫球蛋白关系探讨

目的探讨新生儿感染性肺炎白细胞介素_18(IL_18)和γ_干扰素 (IFN_γ)与免疫球蛋白 (IgG、IgA和IgM )的关系。方法采用免疫酶法 (ELISA)和速率散射比浊法检测111例感染性肺炎患儿血清IL_18、IFN_γ、IgG、IgA和IgM含量。以CRP≥20mg/L作为诊断细菌感染的界限值 ,结合其他临床资料 ,将肺炎患儿分为4组进行分析。结果①肺炎组111份血清中 ,8型常见病毒及支原体特异性IgM阳性40份 (36.0 % ) ,对照组30份血清均阴性 ;病毒及支原体感染23例 (20.7% ) ,细菌感染45例 (40.6 % ) ,病毒及支原体与细菌混合感染17例 (15.3% ) ,其他不明病原感染26例 (23.4% )。②肺炎组IgA、IgM含量>对照组 (P<0.05)。其中 ,病毒及支原体感染组IgA含量>其他不明病原感染组和对照组 (P<0.05) ;细菌感染组IgM含量>对照组 (P<0.05)。肺炎各组IgG、IL_18和IFN_γ含量与对照组比较 ,差异无统计学意义 (P>0.05)。③对照组IgM与IFN_γ呈正相关 (P<0.01)。病毒及支原体感染组IgA和IgM分别与IFN_γ呈正相关 (P<0.01) ;IgA和IgM分别与IL_18呈正相关 (P<0.05) ;IFN_γ与IL_18呈正相关 (P<0.05)。细菌感染组IgA与IL_18呈正相关 (P<0.01)。结论新生儿发生病毒或细菌感染时 ,体内抗感染免疫和免疫调节的机制不同 。

鸡IL-18基因的克隆与序列测定

根据Genbank发表的鸡IL-18基因序列,设计一对引物,提取鸡脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增和扩增产物的克隆、测序,获得了中国江西土鸡IL-18基因片段,其大小为597bp,与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18的基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。

豫南地区汉族人群类风湿关节炎患者IL-18基因启动子-607C/A多态性检测

采用序列特异性引物的聚合酶链反应技术(PCR-SSP)分析110例类风湿关节炎(RA)患者和100例健康体检者的IL-18基因启动子在-607位点的单个核苷酸多态性,检测豫南地区汉族人群白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)基因启动子单个核苷酸多态性与类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生是否存在关联.结果表明,RA患者组与健康对照组在IL-18基因-607位点的等位基因频率的分布及基因型频率的分布比较差异均有统计学意义(χ2=8.668、4.225,P<0.05),抗CCP抗体阳性组和阴性组在IL-18基因-607位点的基因型频率分布差异没有统计意义(χ2=0.941,P>0.05),说明IL-18基因启动子-607位点的多态性与RA患者类风湿因子存在关联.

尿NGAL、KIM-1和IL-18联合检测对儿童急性肾损伤早期诊断的价值

目的探讨尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子-1(KIM-1)及白细胞介素-18(IL-18)联合检测在儿童急性肾损伤(AKI)早期诊断中的价值。方法选择2015年1月至2016年8月期间石家庄市第一医院儿科诊治的32例AKI患儿为研究对象,检测不同时间及不同分期AKI患儿尿NGAL、KIM-1、IL-18和血肌酐的变化。结果 AKI患儿尿NGAL、KIM-1、IL-18在诊断前3 d分别为(1.23±0.28)μg/m L、(37.58±5.88)ng/m L、(30.35±6.21)ng/m L,在诊断前2 d分别为(1.77±0.39)μg/m L、(43.29±6.32)ng/m L、(36.49±9.35)ng/m L,及诊断前1 d水平(2.28±0.71)μg/m L、(60.38±12.83)ng/m L、(58.32±20.12)ng/m L,均明显依次升高,差异均有统计学意义(P<0.05);但是血肌酐在诊断前1 d与诊断前2 d、3 d比较差异均无统计学意义(P>0.05);尿NGAL、KIM-1、IL-18及血肌酐水平在AKI 1期为(2.68±0.48)μg/m L、(69.23±5.31)ng/m L、(65.84±6.43)ng/m L,2期为(3.19±0.41)μg/m L、(60.38±12.83)ng/m L、(73.29±6.68)ng/m L,3期为(3.81±0.42)μg/m L、(89.67±6.22)ng/m L、(81.31±7.42)ng/m L,均依次升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论尿NGAL、KIM-1、IL-18在儿童AKI早期即可明显升高,三者联合检测对早期诊断儿童AKI具有重要意义。

肺炎支原体肺炎患儿治疗前后血清IL-2、IL-10、IL-18和D-D检测的临床意义

目的:探讨了肺炎支原体肺炎患儿治疗前后血清IL-2、IL-10、IL-18和D-D水平的变化及临床意义。方法:应用放免法、酶联法和免疫比浊法对32例肺炎支原体肺炎患儿进行了治疗前后血清IL-2、IL-10、IL-18和D-D检测。并与35名正常健康儿比较。结果:肺炎支原体肺炎患儿在治疗前血清IL-2水平显著地低于正常儿组(P<0.01),而IL-10、IL-18和D-D水平又非常显著地高于正常儿组(P<0.01),经治疗1个月后则与正常儿组比较无显著性差异(P>0.05),且血清IL-2水平与IL-10、IL-18和D-D水平呈显著负相关(r=-0.4806、-0.5014、-0.5988,P<0.01)。结论:血清IL-2、IL-10、IL-18和D-D参与了肺炎支原体感染的全过程,检测这些细胞因子的变化有助于诊断、治疗和预后,具有一定的临床价值。

慢性丙型肝炎患者血清sFas和sICAM-1及IL-18水平与意义

目的 :观察可溶性 Fas(s Fas)和可溶性细胞间粘附分子 - 1(s ICAM- 1)及白细胞介素 - 18(IL- 18)在慢性丙型肝炎患者血清中的水平 ,探讨它们在丙型肝炎发病机制中的作用。方法 :采用 EL ISA法检测 30例慢性丙型肝炎患者 α-干扰素治疗前后血清 s Fas、s ICAM- 1、IL- 18的水平 ,荧光定量 PCR技术测定血清 HCV- RNA滴度。结果 :慢性丙型肝炎患者 s Fas、s ICAM- 1、IL- 18的水平均显著高于正常人 (P<0 .0 1) ,且与血清 HCV- RNA滴度密切相关(分别为 r=0 .915 ,r=0 .795 ,r=0 .75 7,P均 <0 .0 1) ;s ICAM- 1、IL- 18水平与 ALT活性显著相关 (分别为 r=0 .95 2 ,r=0 .96 9,P<0 .0 1) ,但 s Fas水平与 ALT无关 (P>0 .0 5 )。实验结果还显示 ,抗病毒治疗有效者 ,血清s Fas、s ICAM- 1、IL- 18较治疗前明显下降 ,而无反应者治疗前后改变不明显。结论 :s Fas、s ICAM- 1、IL- 18均参与慢性丙型肝炎免疫致病过程 ,且与肝脏炎症活动性。

IL-18对HK-2细胞E-钙黏蛋白表达的作用及其可能的胞内信号途径

目的:探讨白细胞介素-18(IL-18)是否通过核因子-κB(NF-κB)细胞内信号转导途径诱导近端肾小管上皮细胞转分化。方法:实验分单纯IL-18刺激组和SN50预孵育组,单纯IL-18刺激组采用终浓度分别为0、1、10、100μg/L的IL-18处理人肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)72h,SN50预孵育组在此基础上预先应用终浓度为100mg/L的NF-κB特异性抑制剂SN50预处理细胞0.5h。然后应用免疫细胞化学法检测HK-2细胞E-cadherin的表达百分数;采用RT-PCR法检测HK-2细胞E-cadherin mRNA的表达。结果:NF-κB特异性抑制剂SN50可拮抗IL-18对HK-2细胞E-cadherin mRNA和蛋白表达的抑制作用。结论:IL-18可通过核因子-κB(NF-κB)细胞内信号转导途径诱导近端肾小管上皮细胞转分化。

白癜风患者血清及负压吸引疱疱液IL-18和IFN-γ的检测

目的探讨白细胞介素18(IL-18)和干扰素Ⅱ型(IFN-γ)与白癜风发病的关系及在不同分型分期的作用。方法采用Elisa双抗体夹心法分别检测41例白癜风患者血清及负压吸引疱疱液IL-18和IFN-γ水平,并与正常对照组比较。结果白癜风患者血清IL-18和IFN-γ水平明显高于对照组(P<0.01);进展期明显高于稳定期(P<0.05);白斑处疱液IL-18和IFN-γ水平明显高于非白斑处(P<0.05)。结论白癜风患者血清及负压吸引疱疱液IL-18和IFN-γ水平升高,二者参与白癜风发病及发展,在自身免疫机制中起重要作用。

冬虫夏草对肾缺血-再灌注大鼠尿IL-18水平的影响

目的:观察冬虫夏草对肾缺血-再灌注大鼠肾功能及尿IL-18的影响。方法:SD大鼠随机分为sham组、I/R组和CS组,sham组和I/R组均灌服生理盐水(2 ml/d),CS组灌服CS(5g/kg·d),检测各组大鼠BUN、Scr、尿NAG、尿IL-18水平。结果:与sham组相比较,I/R组大鼠BUN、Scr、尿NAG酶和尿IL-18水平均明显增高,差异均有统计学意义(P<0.01);与I/R组相比较,CS组大鼠BUN、Scr、尿NAG酶和尿IL-18水平均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:冬虫夏草的肾保护机制可能与抑制尿IL-18的排出有关。

耐力训练对ApoE^(-/-)致AS小鼠IL-18和IL-10表达的影响

目的:深入观察耐力训练对载脂蛋白E基因敲除(Apo E^(-/-))致动脉粥样硬化(AS)小鼠白介素18(IL-18)和白介素10(IL-10)的影响,探讨运动防治AS的可能机制。方法:选取8周龄雄性Apo E^(-/-)小鼠20只:随机分为2组(n=10):AS模型组(AC组)和运动干预组(AE组),AE组进行跑台耐力训练;选取8周龄C57BL/6J雄性小鼠10只作为正常对照组(CC组)。实验持续12周,取主动脉制作冰冻切片,分别用于观察主动脉AS斑块和病理变化以及主动脉IL-18、IL-10蛋白表达;采用ELISA法检测血清IL-18、IL-10水平。结果:112周高脂膳食致Apo E^(-/-)小鼠发生典型的AS病变,耐力训练使AS斑块面积显著减少(P<0.01),病变程度显著减轻。2与CC组比较,AC组、AE组小鼠血清IL-18和IL-10水平均显著升高(P<0.01),且AC组IL-18/IL-10比值显著升高(P<0.01)。AE组血清IL-18水平及IL-18/IL-10比值均显著低于AC组(P<0.01)。3与CC组比较,AC组、AE组小鼠主动脉IL-10和IL-18蛋白表达均显著升高(P<0.01),AE组IL-10表达显著高于AC组(P<0.05),IL-18表达显著低于AC组(P<0.05)。结论:耐力训练通过降低血液和主动脉IL-18及提高IL-10水平,增强了主动脉血管抗炎能力,从而发挥抗AS的作用。

IL-18DNA免疫对HIV-1核酸疫苗诱导的免疫应答的影响

为了研究白细胞介素-18(IL-18)基因对人免疫缺陷病毒(HIV-1)核酸疫苗诱导免疫应答的影响,将人IL-18基因插入到真核表达载体pVAX1中,构建了真核表达载体pVAX1-IL-18;将pCI-neoGAG联合pVAX1-IL-18或者pCI-neoGAG单独免疫Balb/c小鼠,检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN-γ,同时观察免疫小鼠脾淋巴细胞增殖和小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。酶切及测序结果表明成功地构建了人IL-18基因真核表达载体;与pCI-neoGAG免疫组比较,pCI-neoGAG联合pVAX1-IL-18免疫组小鼠血清的抗HIV-1p24抗体滴度降低(P<0.01);而与pCI-neoGAG免疫组比较,pCI-neoGAG联合pVAX1-IL-18免疫组小鼠血清的IFN-γ升高(P<0.01);pCI-neoGAG联合pVAX1-IL-18免疫组小鼠的脾淋巴细胞增殖实验刺激指数(SI)以及特异性CTL活性均高于pCI-neoGAG免疫组(P<0.01)。IL-18基因联合HIV-1核酸疫苗免疫小鼠,可能增强特异性Th1细胞和CTL反应,白细胞介素-18基因对体液免疫有抑制作用。

实验性急性肝损伤血清IL-18、NO的检测意义及作用机制研究

目的 本实验以ConcanavalinA(ConA)诱发小鼠急性肝损伤模型,检测白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)及一氧化氮(Nitric oxide,NO)血清浓度变化。并探讨此模型中IL-18和NO的关系、意义及作用机制。方法 用ABC-ELISA法及硝酸还原酶法分别检测了20只正常小鼠(对照组)及20只(实验组)小鼠6h血清中IL-18及NO的浓度。结果 实验组小鼠血中IL-18及NO较对照组均明显增高,差异有显著性。经直线相关分析,IL-18与NO呈显著相关性。结论 IL-18在肝损伤中起关键作用,NO对肝损伤亦有重要作用,NO浓度随IL-18表达水平的变化而变化,两者对肝损伤既有独立又有协同作用。IL-18的浓度高低可用于判断肝损伤的严重程度及预后,IL-18使血清中NO水平升高是其致肝细胞损伤的机理之一。

脂多糖协同MSU诱导THP1分泌IL-1β和IL-18

通过合成尿酸钠结晶(monosodium urate crystals,MSU)分析其对人外周血单核细胞系THP1的促炎作用,分别以0、1.0、10.0和100.0μmol/L的MSU刺激THP1细胞4 h,检测不同浓度的MSU对炎症体组分Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶(caspase-1)及促炎因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18的信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)表达的影响.为研究toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)的配体脂多糖的作用,用1.0 ng/m L的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预刺激THP1细胞3 h,再加100.0μmol/m L的MSU刺激细胞,通过实时荧光定量聚合酶链式反应及酶联免疫吸附试验,检测LPS对MSU诱导的促炎因子IL-1β和IL-18的mRNA及蛋白水平.研究发现,在THP1细胞中,100.0μmol/L的MSU即可显著激活炎症体的mRNA,但其对促炎因子IL-1β及IL-18的mRNA表达的诱导作用却不明显,加入1.0 ng/m L LPS预刺激3 h后,MSU诱导的THP1细胞IL-1β和IL-18的表达量显著增加.证明脂多糖对MSU诱导THP1细胞产生IL-1β和IL-18有协同作用.

鞘内注射IL-18中和抗体对大鼠吗啡耐受形成的影响

目的探讨阻断脊髓IL-18对大鼠吗啡耐受形成的影响及可能机制。方法♂SD大鼠40只,随机均分为5组(n=8)。Ⅰ组为生理盐水对照组,Ⅱ组为吗啡耐受组,Ⅲ组为IgG对照组,Ⅳ组、Ⅴ组为IL-18中和抗体(0.4μg、4μg)处理组。所有大鼠均行鞘内置管,手术5 d后确定导管位置(记为第1天)。第3～9天,各组建立吗啡耐受模型并进行相应处理。第2、10天,测定各组大鼠热刺激缩足反应潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)及尾静脉注射吗啡后30 min的PWTL,计算30 min时最大可能镇痛效应比值(%MPE)。第10天行为学测试后,取大鼠脊髓腰膨大,采用免疫印迹法(Western blot)检测ERK与p-ERK蛋白表达水平,免疫荧光法分析星形胶质细胞标记物GFAP表达水平。结果①第2天:各组大鼠给予吗啡后30 min%MPE差异无统计学意义(P>0.05)。第10天:给予吗啡30 min后,与Ⅰ组相比,其余4组%MPE均明显降低(P<0.05)。与Ⅱ组相比,Ⅲ组、Ⅳ组差异无统计学意义(P>0.05),Ⅴ组%MPE明显升高(P<0.05)。②Western blot结果显示,与Ⅰ组相比,其余各组p-ERK表达量均升高(P<0.05)。与Ⅱ组相比,Ⅲ组、Ⅳ组p-ERK表达水平无统计学意义(P>0.05),V组明显降低(P<0.05)。③免疫组织荧光染色结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组大鼠腰段脊髓背角GFAP阳性荧光明显增加。而与Ⅱ组相比,Ⅴ组大鼠腰段脊髓背角GFAP免疫荧光强度明显降低。结论 IL-18中和抗体可以缓解吗啡耐受的形成,该效应可能与其抑制脊髓ERK的磷酸化,缓解背角星形胶质细胞的活化有关。

急性脑梗死患者血清IL-18含量动态变化研究

目的动态观察急性脑梗死患者血清白介素-18(Interleukin-18,IL-18)含量变化,探讨炎症因子在脑梗死发病机制中的作用。方法选取46例急性脑梗死患者发病1d、3d、7d和14d时的空腹静脉血,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清IL-18的水平,并与30名健康对照组比较。结果急性脑梗死患者发病1d内、3d、7d和14d时血清IL-18水平均显著高于正常对照组(P<0.05),其中发病3d水平最高,随时间推移及治疗的介入,炎症因子水平逐渐下降;3d测定的不同梗死体积患者血清IL-18含量存在显著性差异(P<0.05)。结论急性脑梗死患者血清IL-18水平明显升高,并与急性脑梗死的体积密切相关,对炎症反应的干预治疗可能有利于减轻缺血性脑损害。