CRISPR/CAS9敲除PD-1的肿瘤浸润T淋巴细胞回输对小鼠结肠癌的治疗作用

目的:探讨应用成簇规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas9)技术敲除程序性死亡分子-1(PD-1)的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)回输对结肠癌小鼠的治疗作用。方法:皮下注射CT26构建小鼠结肠癌模型,从3只模型小鼠肿瘤组织中提取TIL,并提取外周血淋巴细胞;对TIL进行PD-1基因敲除;回输实验分为对照组(Control)、输注淋巴细胞组(Lym)、输注荷瘤小鼠TIL组(TIL)、慢病毒空载对照组(pVSV-G-PX458-NC)组、PX458-PD-1-sgRNA1组(PD-1-sgRNA1),每组10只;测量各组小鼠肿瘤组织质量及肿瘤抑制率;TUNEL法检测各组小鼠肿瘤组织细胞凋亡;ELISA检测各组小鼠肿瘤组织TNF-α和IFN-γ含量;免疫组化检测肿瘤组织CD4+T、CD8+T细胞表达;免疫荧光法检测肿瘤组织细胞增殖核抗原-67(Ki-67)和血管内皮生长因子(VEGF)表达;Western blot检测肿瘤组织PD-1及其主要配体PD-L1表达。结果:PD-1-sgRNA1能明显抑制小鼠肿瘤细胞体内生长,抑制肿瘤组织Ki-67和VEGF表达及PD-1、PD-L1表达,提高肿瘤组织细胞凋亡率、TNF-α、IFN-γ含量、CD4+T、CD8+T细胞表达(均P<0.05)。结论:CRISPR/CAS9敲除PD-1的TIL回输能明显抑制结肠癌小鼠肿瘤组织Ki-67和VEGF表达,增加CD4+T、CD8+T细胞,诱导肿瘤细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长作用。

肺腺癌患者胸水肿瘤细胞PD-L1/TTF-1表达及应用分析

目的探讨肺腺癌患者胸水肿瘤细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)/甲状腺转录因子1(TTF-1)、PD-L1免疫组化染色的表达及与组织标本PD-L1表达一致性及其应用研究。方法选取2021年1月至2023年4月间首都医科大学附属北京朝阳医院收治的符合入组条件的50例肺腺癌患者为研究对象,比较同一病例组织标本中肿瘤细胞的PD-L1表达和胸水细胞蜡块中肿瘤细胞的PD-L1、PD-L1/TTF-1表达情况,评估它们之间表达的一致性。结果50例肺腺癌组织标本PD-L1的表达与患者性别、年龄、标本类型、病灶性质、标本来源和EGFR突变对比差异无统计学意义(P>0.05);胸水细胞蜡块中肿瘤细胞PD-L1/TTF-1免疫组化双染的表达与组织标本PD-L1表达的一致性较好(κ=0.846,P<0.05),明显高于PD-L1免疫组化单染(κ=0.754,P<0.05),与手术或活检切除标本一致性较好(κ=0.90,P<0.05),高于胸腔镜或穿刺小标本(κ=0.82,P<0.05),与原发病灶标本的一致性适中(κ=0.689,P<0.05),与转移病灶标本的一致性较好(κ=0.779,P<0.05)。结论胸水细胞学标本采用PD-L1/TTF-1免疫组化双染与组织标本PD-L1表达一致性较高,细胞蜡块PD-L1/TTF-1双染可在组织不易获取时作为一种有益补充,供临床制定免疫治疗方案参考。

铁死亡加持PD-1/PD-L1抑制剂杀伤肿瘤细胞综述

恶性肿瘤发生发展的每一环节都与免疫调节息息相关,近年铁死亡及PD-1/PD-L1抑制剂杀伤肿瘤细胞方面的研究是一大热点,因其精准治疗肿瘤的效果被越来越多地应用于临床治疗。但目前尚无将PD-1/PD-L1抑制剂与铁死亡治疗肿瘤细胞结合的研究,本文将对铁死亡的相关机制、铁死亡与肿瘤的关系和PD-1/PD-L1免疫治疗肿瘤等方面进行综述。

鼻咽癌放化疗治疗患者外周血PD-1及免疫指标水平的变化及其临床意义

目的探讨鼻咽癌放化疗治疗患者外周血程序性死亡受体1(PD-1)及免疫指标水平的变化及其临床意义。方法回顾性选取2020年1月至2023年江苏省肿瘤医院收治的90例鼻咽癌患者,所有患者均经病理确诊并接受放化疗治疗,采集其血液样本之后采用流式细胞术对不同时间段(治疗前、新辅助化疗后、放疗后)外周血淋巴细胞亚群比例、外周血PD-1、CD8^(+)CD28^(+)细胞比例的水平变化予以动态监测并比较。结果鼻咽癌患者新辅助化疗后CD3^(+)、CD4^(+)细胞比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值分别为(72.28±8.37)%、(39.27±8.58)%、1.58±0.67,均明显高于治疗前,CD3-CD16^(+)CD56^(+)、CD19^(+)细胞比例分别为(18.27±8.38)%、(7.87±4.08)%,均明显低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05);新辅助化疗后与治疗前的CD8^(+)细胞比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。鼻咽癌患者新辅助化疗之后CD8^(+)CD28^(+)细胞比例为(10.68±3.87)%,明显高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);新辅助化疗后与治疗前的外周血PD-1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。放疗后与治疗前的CD3^(+)细胞比例比较,差异无统计学意义(P>0.05);鼻咽癌患者放疗后CD4^(+)细胞比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值、CD19^(+)细胞比例分别为(26.68±6.09)%、0.88±0.29、(3.69±2.36)%,均明显低于治疗前,CD8^(+)、CD3-CD16^(+)CD56^(+)细胞比例分别为(31.03±8.08)%、(27.39±10.26)%,均明显高于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。鼻咽癌患者放疗后CD8^(+)CD28^(+)细胞比例为(7.08±2.57)%,明显低于治疗前,外周血PD-1水平为(13.38±6.27)%,明显高于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论新辅助化疗之后鼻咽癌患者外周血T细胞亚群比值处于持续上调趋势,而放疗完成后处于下降趋势,表明鼻咽癌患者于放疗完成后免疫功能受损;放疗完成后鼻咽癌患者T细胞PD-1表达水平明显上调,提示PD-1抑制剂最佳使用时间可能为放化疗完成时,抗PD-1维持治疗可发挥持久、高效的抗肿瘤作用。

EZH2抑制剂对恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗、Th细胞分化及PD1/PD-L1表达的作用机制

目的探究Zeste基因增强子同源物(EZH)2抑制剂对恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗、Th细胞分化及程序性死亡(PD)1/PD1配体(PD-L1)表达的作用机制。方法取对数生长恶性淋巴瘤放疗抵抗细胞株将其分为恶性淋巴瘤(A)组、多柔比星(B)组、EZH2抑制剂(C)组、EZH2抑制剂联合PD1/PD-L1抑制剂(D)组,酶联免疫吸附试验(ELISA)及流式细胞仪检测Th细胞分化相关因子,Western印迹检测PD1/PD-L1蛋白表达,Hoechst33258染色法、噻唑蓝(MTT)法及小室法检测恶性淋巴瘤细胞活性。结果与A组相比,B、C、D组细胞凋亡率、干扰素(INF)-γ水平明显升高,细胞增殖率、侵袭数量、白细胞介素(IL)-4水平、PD1、PD-L1蛋白表达明显降低(P<0.05),且C组比B组变化更明显,D组比C组变化更明显(P<0.05)。结论EZH2抑制剂可显著抑制恶性淋巴瘤细胞放疗抵抗,有效调控Th细胞分化,并抑制PD1/PD-L1蛋白表达。

老年晚期非小细胞肺癌患者PD⁃1抑制剂临床疗效及预后与淋巴细胞亚群水平的关系研究

目的探讨老年晚期非小细胞肺癌患者淋巴细胞亚群水平与程序性细胞死亡蛋白⁃1(PD⁃1)抑制剂临床疗效及预后的关系。方法选取2021年6月至2023年4月在建湖县人民医院接受PD⁃1抑制剂治疗的非小细胞肺癌老年患者75例,根据治疗3个月后是否有效分为有效组(n=60)和无效组(n=15);根据无进展生存期(PFS,中位PFS为9个月)分为生存期长组(n=50,>9个月)和生存期短组(n=25,<9个月)。比较不同疗效组、不同预后组的临床相关指标,运用多因素Logistic回归分析预测非小细胞肺癌淋巴细胞亚群水平与PD⁃1抑制剂临床疗效及预后的独立危险因素。结果有效组的PD⁃L1≥50%占比、CD4^(+)、NK细胞和Tregs含量为51.67%、(35.08±9.45)、(21.79±9.15)、(6.61±2.53),均高于无效组的20.00%、(30.45±8.15)、(17.78±7.56)、(5.18±1.06)(P<0.05)。生存期长组的PD⁃L1≥50%占比、CD4^(+)、NK细胞和Tregs含量为60.00%、(42.65±9.85)、(23.68±9.86)、(7.65±2.51),均高于生存期短组的16.00%、(30.45±8.62)、(18.42±8.96)、(5.23±2.53)(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,PD⁃L1、CD4^(+)、NK细胞和Tregs含量是预测非小细胞肺癌PD⁃1抑制剂临床疗效及预后的独立危险因素(OR=3.540、0.443、0.474、0.491,P<0.05)。结论通过分析老年非小细胞肺癌患者的淋巴细胞亚群水平,可以指导PD⁃1抑制剂疗效的判断,PD⁃L1、CD4^(+)、NK细胞和Tregs含量是预测非小细胞肺癌PD⁃1抑制剂临床疗效及预后的独立危险因素。

血清中PD-L1含量与胃癌病人预后的关系

目的:分析胃癌病人血清中程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)含量及其与肿瘤分期和预后的关系。方法:收集我院2018年8月至2019年12月60例胃癌病人血清,15例健康成人血清作为对照,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清PD-L1的含量,比较胃癌病人与健康成人血清PD-L1含量的差异,分析胃癌病人血清PD-L1的含量与病期及预后的关系。免疫组织化学检测肿瘤组织内PD-L1的表达情况,并分析其与血清中PD-L1含量的相关性。结果:胃癌组血清中PD-L1的含量明显高于对照组。Ⅲ、Ⅳ期胃癌病人血清PD-L1含量明显高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌病人。胃癌病人合并腹膜转移者血清PD-L1含量明显升高,提示预后不良。生存分析显示,血清PD-L1含量高的胃癌病人生存期明显短于低者。检测肿瘤组织标本中PD-L1的表达水平,发现其与血清中PD-L1含量无明显相关性。结论:胃癌病人血清中PD-L1含量高于健康成人。随病期进展逐渐升高。胃癌伴腹膜转移的病人血清中PD-L1升高明显。血清中PD-L1含量与肿瘤组织中的PD-L1表达不相关。

炎调方通过PD-1/PD-L1通路抑制脓毒症大鼠T淋巴细胞衰竭的实验研究

目的研究炎调方对脓毒症大鼠T淋巴细胞及T淋巴细胞表面表面程序性死亡蛋白(PD-1)、程序性死亡蛋白配体(PD-L1)表达的影响。方法SD大鼠(雄性)分为正常组、假手术组、模型组和炎调方组。盲肠结扎穿孔(CLP)制备脓毒症大鼠模型,于造模后12、24、48、72 h采集外周血处死大鼠(每个时间点各5只大鼠),采用流式细胞分析法测定CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)比例;双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定CD4^(+)及CD8^(+)表面PD-1、PD-L1表达水平。结果白介素-6(IL-6)在脓毒症模型组12 h分泌达到高峰后逐渐下降,降钙素原(PCT)在模型组24 h达到高峰后逐渐下降;炎调方组在12 h降低IL-6的水平(P<0.05),24 h时明显降低IL-6、PCT的水平(P<0.01)。模型组CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)比例早期分泌开始减少,48 h分泌达最低点(P<0.01);炎调方组在48 h时可升高CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)比例,提高CD4^(+)/CD8^(+)的比值而具体调节T细胞活化和增殖的功能。模型组CD4^(+)、CD8^(+)表面PD-1、PD-L1表达水平早期24 h即表达增多(P<0.01),72 h表达最多;炎调方组24 h时即可抑制PD-1、PD-L1的表达水平而具体改善T细胞衰竭的作用。CD4^(+)的比例与CD4^(+)表面PD-1、PD-L1的表达呈负相关(P<0.01);CD8^(+)比例与CD8^(+)表面PD-1、PD-L1的表达呈负相关(P<0.01)。结论脓毒症早期48 h内即出现了T细胞活化和增殖的功能衰竭引起的T细胞免疫抑制。炎调方能在脓毒症早期改善T细胞活化和增殖的功能,其机制可能与抑制PD-1/P-L1通路有关。

PD1联合安罗替尼治疗复发难治胸腺癌1例

胸腺癌是一种发病率相对较低的恶性肿瘤,其临床表现、治疗及预后不同于胸腺瘤,易转移到淋巴结及胸外其他部位,胸腺癌具有较强的侵袭性。晚期胸腺癌治疗方案有限,以内科治疗为主,但对化疗不敏感,疗效欠佳。一线化疗失败后,二线治疗方案目前证据较少,NCCN推荐的药物主要有舒尼替尼、培美曲塞、依维莫司、紫杉醇、奥曲肽(长效;LAR)联合或者不联合泼尼松、吉西他滨、5-FU、依托泊苷和异环磷酰胺等,缓解率大约为4%~21%,而且二线治疗药物临床使用疗效欠佳。免疫检查点抑制剂在胸腺癌的后线治疗中有少量病例探索,但证据级别不高,本例个案报道为一例晚期胸腺癌多线治疗失败的患者使用免疫联合抗血管治疗的疗效观察。

PD-1抑制剂联合化疗对比贝伐珠单抗联合化疗一线治疗非鳞非小细胞肺癌的研究

目的比较细胞程序性死亡受体-1(programmed cell death protein-1,PD-1)抑制剂联合化疗与贝伐珠单抗联合化疗一线治疗晚期非鳞非小细胞肺癌(non-squamous non-small cell lung cancer,nsNSCLC)的疗效。方法回顾性收集2014年11月至2024年3月于河北医科大学第四医院接受一线治疗的晚期nsNSCLC患者237例。根据治疗方案分为PD-1抑制剂联合化疗(IC组)119例和贝伐珠单抗联合化疗(BC组)118例。采用倾向得分匹配(propensity score matching,PSM)平衡协变量。研究主要终点为无进展生存期(progression-free survival,PFS),次要终点为客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、总生存期(overall survival,OS)。结果237例患者经PSM后IC组和BC组各87例,IC组和BC组的ORR分别为31.0%(27/87)和43.7%(38/87)(P=0.085),DCR为96.6%(84/87)和95.4%(83/87)(P=1.000)。中位PFS IC组为9.3个月,BC组为9.1个月,两组差异无统计学意义(P=0.053)。OS两组差异无统计学意义(两组均未达到中位OS,P=0.116)。结论PD-1抑制剂联合化疗对比贝伐珠单抗联合化疗一线治疗晚期nsNSCLC近期疗效无差异。

鸢尾素调节PD-1/PD-L1通路增强病毒性心肌炎小鼠的抗病毒免疫水平

目的:探讨鸢尾素调节程序性死亡因子-1(PD-1)/程序性死亡因子配体-1(PD-L1)通路增强病毒性心肌炎小鼠抗病毒免疫水平的作用。方法:取50只C57BL/6小鼠经腹腔接种柯萨奇病毒B3(CVB3)构建病毒性心肌炎小鼠模型,将建模成功小鼠随机分为模型组、鸢尾素低、中、高剂量组和阳性对照组,另取10只C57BL/6小鼠记为空白对照组。阳性对照组经腹腔注射给予10000 U/g干扰素,鸢尾素低、中、高剂量组经腹腔注射给予30、60、120μg/kg鸢尾素,空白对照组和阳性对照组均给予等量生理盐水,1次/d,共2周。HE染色观察小鼠心肌组织病理改变情况;空斑形成单位(PFU)法检测小鼠心肌组织的病毒滴度;流式细胞术检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群(CD4^(+)T、CD8^(+)T、NK细胞)比例和CD4^(+)T/CD8^(+)T;ELISA检测小鼠心肌组织中炎症细胞因子IL-6、IL-17、TNF-α和IFN-γ水平;RT-qPCR检测小鼠T淋巴细胞PD-1及心肌组织PD-L1 mRNA表达;West?ern blot检测小鼠T淋巴细胞PD-1及心肌组织PD-L1蛋白表达。结果:与空白对照组相比,模型组小鼠心肌组织结构改变明显,有大量炎症细胞浸润和成片灶性坏死,心肌组织的病理积分、病毒滴度、炎症细胞因子IL-6、IL-17、TNF-α、IFN-γ水平和PDL1 mRNA及蛋白表达升高,外周血CD8^(+)T淋巴细胞比例及T淋巴细胞PD-1 mRNA及蛋白表达升高,外周血CD4^(+)T淋巴细胞、NK细胞比例及CD4^(+)T/CD8^(+)T降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组和鸢尾素低、中、高剂量组心肌组织病变情况均有不同程度减轻,心肌组织的病理积分、病毒滴度、炎症细胞因子IL-6、IL-17、TNF-α、IFN-γ水平和PD-L1mRNA及蛋白表达降低,外周血CD8^(+)T淋巴细胞比例及T淋巴细胞PD-1 mRNA及蛋白表达降低,外周血CD4^(+)T淋巴细胞、NK细胞比例及CD4^(+)T/CD8^(+)T升高,其中鸢尾素作用呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:鸢尾素具有增强病毒性心肌炎小鼠抗病毒免疫水平作用,推测是通过抑制PD-1/PD-L1通路激活,改善小鼠外周血T淋巴细胞亚群比例失调,提高机体免疫功能实现的。

安胃汤抑制CAG大鼠PD-1/PD-L1信号轴免疫逃逸机制研究

背景众多证据表明免疫逃逸在肿瘤形成过程中扮演重要角色,慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)是胃癌的癌前疾病.安胃汤被发现可改善CAG临床症状及病理表现,实现CAG的逆转,该作用是否与免疫逃逸机制相关有待进一步研究.目的从细胞免疫逃逸角度,探讨程序性死亡受体-1(programmed cell death protein 1,PD-1)/程序性死亡受体配体-1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)信号轴与安胃汤对CAG模型大鼠疗效之间的关系.方法采用1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(1-Methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine,MNNG)慢性萎缩性胃炎大鼠模型,应用不同剂量安胃汤及维酶素片进行干预;HE染色观察安胃汤对CAG模型大鼠胃黏膜炎症细胞浸润及组织形态改变的影响;免疫组化检测CAG模型大鼠胃黏膜组织PD-1、PD-L1蛋白表达;ELISA检测血清CD4^(+)、CD8^(+)水平变化;qPCR检测CAG模型大鼠胃黏膜PD-1mRNA、PD-L1mRNA表达;Western-blot检测CAG模型大鼠胃黏膜组织PD-1、PD-L1蛋白表达.结果免疫组化结果示:与模型组和维酶素组比较,安胃汤高、低剂量组PD-L1表达均较低(P<0.01,P<0.05).ELISA实验结果示:与模型组比较,安胃汤高剂量组CD4^(+)表达及CD4^(+)/CD8^(+)比值升高(P<0.01,P<0.05),安胃汤各组和维酶素组CD8^(+)表达降低(P<0.01);与维酶素组比较,安胃汤高剂量组CD8^(+)表达降低(P<0.05).qPCR实验结果显示:与模型组比较,安胃汤高剂量组和维酶素组PD-1mRNA表达下降(P<0.01),安胃汤高、中剂量组PD-L1mRNA表达下降(P<0.01,P<0.05).Western-blot实验结果显示:与模型组比较,安胃汤高、中剂量组PD-1/Actin,PD-L1/Actin表达下降(P<0.01,P<0.05).结论安胃汤抗CAG作用可能与抑制PD-1/PD-L1信号通路诱导的细胞免疫逃逸有关.

外周血和尿常规炎性指标评估PD-1抑制剂治疗晚期尿路上皮癌预后的价值

目的:探讨血小板与白细胞比值(platelet and white blood cells ratio, PWR)、血小板与淋巴细胞比值(platelet and lymphocyte ratio, PLR)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio, NLR)以及尿白细胞计数(urinary leucocyte count, ULEU)与接受PD-1抑制剂治疗晚期尿路上皮癌(urothelial carcinoma, UC)患者预后的关系。方法:收集78例接受PD-1抑制剂治疗晚期UC患者的临床资料,利用Kaplan-Meier法计算生存率和Log-rank检验比较不同组间的生存差异,同时采用COX回归分析预后影响因素。结果:低PLR组与高PLR组的1年生存率分别为71.98%和47.63%,差异有统计学意义(P<0.05);低NLR组与高NLR组的1年生存率分别为71.36%和48.15%,差异有统计学意义(P<0.05);PWR高低两组和ULEU状态预测UC患者生存率无显著性差异(P>0.05)。单因素回归分析结果显示,N分期、M分期、TNM分期、远处转移个数、PLR、NLR是影响晚期UC患者生存情况的危险因素(P<0.05)。多因素回归分析显示,PLR是影响接受PD-1抑制剂治疗的UC患者预后的独立因素。结论:PLR、NLR为影响接受PD-1抑制剂治疗晚期UC患者预后的独立因素,PLR高值组和NLR高值组患者的预后较PLR低值组和NLR低值组的患者差。

安罗替尼通过调控miR-16-5p/PD-1轴抑制人非小细胞肺癌细胞系增殖并促进凋亡

目的 探讨安罗替尼对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 将非小细胞肺癌细胞系A549和H1299分别采用安罗替尼、miR-16-5p激动剂和/或PD-1过表达载体进行处理。CCK-8实验和EDU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-16-5p相对表达量;Western blot检测程序性细胞死亡-1蛋白(PD-1)的表达。双荧光素酶报告实验确定miR-16-5p和PD-1的靶向关系。用A549细胞构建裸鼠成瘤模型,检测安罗替尼对体内肿瘤生长的影响。结果 安罗替尼在A549和H1299细胞中以剂量依赖的方式显著增加miR-16-5p表达,同时降低PD-1表达,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p能靶向PD-1,且负调控PD-1表达。siRNA下调PD-1表达后明显抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PD-1则可逆转安罗替尼介导的miR-16-5p对A549和H1299细胞的促增殖和抗凋亡作用(P<0.05)。体内实验证实,安罗替尼能够明显抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论 安罗替尼可有效抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,减少体内肿瘤生长,其作用机制与miR-16-5p/PD-1信号轴相关。

PD-1检测联合T淋巴细胞亚群分析对脓毒症患者预后评估的临床研究

目的 检测PD-1表达量联合T淋巴细胞亚群和部分细胞因子分析,评估脓毒症患者的免疫状态及预后。方法 选取符合2016年美国重症医学会/欧洲重症医学会(SCCM/ESICM)脓毒症及脓毒症休克定义Sepsis-3诊断标准,并且符合入组条件的68例患者,根据病情分为脓毒症组和脓毒症休克组,其中脓毒症组30例,脓毒症休克组38例,记录患者一般临床资料,通过ELISA法检测PD-1,抽取外周血送检,检查项目包括血常规、淋巴细胞亚群测定(T辅助淋巴细胞CD4^(+)与T抑制淋巴细胞CD8^(+))、降钙素原、白介素-6、超敏C反应蛋白。结果 2组患者一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),但2组患者急性生理与慢性健康评分和序贯器官衰竭的评分比较差异有统计学意义(P<0.05);脓毒症休克组的PD-1较脓毒症组表达水平高,差异有统计学意义(P<0.05),但淋巴细胞计数、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)较脓毒症组低(P<0.05);2组患者的感染指标降钙素原及炎症指标白介素-6和超敏C反应蛋白比较差异有统计学意义(P<0.05),脓毒症休克组较脓毒症组检测值更高(P<0.05);总T淋巴细胞相比,2组患者差异无统计学意义(P>0.05);脓毒症休克组患者的住ICU时间、14天病死率、28天病死率均较脓毒症组明显升高(P<0.05);PD-1表达水平、CD4^(+)T细胞是影响脓毒症患者死亡的独立危险因素。结论 脓毒症和脓毒症休克患者早期即出现免疫抑制,脓毒症休克组患者免疫抑制更严重,预后更差。

食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1的毒性研究

目的:考察食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1后的体内毒性,探索安全剂量范围,为后续临床试验提供参考信息。方法:30只食蟹猴随机分成3组,包括溶媒对照组和低、高剂量(1.0×10^(8)、4.0×10^(8)pfu)组,每组10只,雌雄各半。采用肌肉注射给药,每周给药2次,连续给药6周,恢复期8周。试验期间,每天观察动物的临床症状和摄食量,每次给药后1~2天观察注射部位症状,每周称量体重。分别在检疫期、首次给药后、给药期结束、恢复期结束的不同时间点进行安全药理(体温、血压、心电图)测定、临床病理(血液学、血凝、血清生化、尿生化)检查、免疫学(T淋巴细胞、细胞因子、免疫原性)测定、组织病理学检查和脏器称重。结果:给药后,动物未见异常症状、注射部位刺激性、体重和摄食量改变,未见安全药理和临床病理指标有意义的变化。与溶媒对照组比较,第41天,低剂量会引起动物CD3^(+)CD4^(+)T细胞比例升高,高剂量未见明显变化。第13至97天,低、高剂量均能引起动物产生抗载体结合抗体、抗抗体,以及个别动物检出hPD-1表达产物。证明药物在体内产生免疫活性和介导免疫原性。组织病理学检查显示,给药期结束时,低、高剂量组动物注射部位极轻度至中度混合细胞浸润,高剂量组动物坐骨神经极轻度髓鞘/轴突变性;恢复期结束时注射部位病变减为极轻度,坐骨神经病变未见恢复趋势。低、高剂量组动物未见组织脏器重量改变。结论:食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1后,动物体内耐受良好,受试物未见毒性反应剂量(NOAEL)是1.0×10^(8)pfu。上述研究结果为药物开展临床试验提供了数据支持。

结直肠癌患者外周血及肿瘤组织中PD-1/PD-L1及相关免疫细胞水平变化特点及临床意义

目的 检测结直肠癌患者外周血及肿瘤组织内程序性死亡分子-1(PD-1)/PD-1配体(PD-L1)、相关免疫细胞表达水平,并分析其临床表达意义。方法 将80例行结直肠癌根治术患者纳为癌变组,同期80例健康体检合格者纳为对照组,采集2组外周静脉血,检测PD-1、PD-L1、CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tregs)标志物叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)表达水平,术中收集结直肠癌患者癌灶及癌旁组织,免疫组化法检测癌灶及癌旁组织内PD-1、PD-L1及Foxp3蛋白表达水平。结果 癌变组患者外周血PD-1、PD-L1及Foxp3水平均高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。癌变组患者术后外周血PD-1、PD-L1及Foxp3水平均较其术前下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌组织中PD-1、PD-L1及Foxp3阳性表达率均高于癌旁组织,差异均存在统计学意义(P<0.05)。癌灶组织内PD-1阳性表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及pTNM分期具有相关性(P<0.05);癌灶组织内PD-L1阳性表达与肿瘤部位、浸润深度具有相关性(P<0.05);Foxp3 Treg阳性表达与肿瘤分化程度、浸润深度及淋巴结转移具有相关性(P<0.05)。结论 PD-1、PD-L1及Treg细胞均与结直肠癌肿瘤免疫微环境相关,与结直肠癌发生及发展间均存在联系,三者联合检测可用于评估结直肠癌免疫检查点抑制剂的治疗新指标。

PD-1抗体联合胸腺肽α1、肝动脉灌注化疗治疗原发性肝癌合并门静脉癌栓的疗效观察

目的探究程序性死亡蛋白-1(PD-1)抗体联合胸腺肽α1、肝动脉灌注化疗(HAIC)治疗原发性肝癌合并门静脉癌栓(PVTT)的疗效。方法选择2021年8月—2022年8月石家庄市第五医院介入医学科治疗的原发性肝癌合并PVTT患者50例,以随机数字表法分为PD-1组(n=25)和对照组(n=25)。对照组给予胸腺肽α1与HAIC治疗,PD-1组给予PD-1抗体联合胸腺肽α1、HAIC治疗。比较2组患者客观缓解率、肝功能指标、血清肿瘤标志物、免疫功能指标。结果PD-1组的客观缓解率高于对照组(48.00%vs.20.00%,χ^(2)/P=4.367/0.037)。治疗6周、12周后,2组Alb均升高,TBil、ALT均降低,且治疗12周后PD-1组升高/降低幅度显著大于对照组(t/P=2.897/0.006、3.424/<0.001、2.658/<0.001);2组患者甲胎蛋白(AFP)、胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)均降低,且治疗12周后PD-1组低于对照组(t/P=3.934/<0.001、5.992/<0.001);2组患者CD8^(+)均降低,CD4^(+)/CD8^(+)均升高,且治疗12周后PD-1组降低/升高幅度大于对照组(t/P=3.110/<0.001、2.414/0.020)。结论PD-1抗体联合胸腺肽α1、HAIC治疗能够改善原发性肝癌合并PVTT患者的肝功能和免疫功能,降低血清肿瘤标志物水平,延缓肿瘤进展,疗效显著。

诃子水提物通过上调PD-1/PD-L1表达调节胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠脾脏中细胞的细胞免疫减轻关节炎症

目的研究诃子水提取物(TCWE)对胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠细胞免疫及程序性死亡蛋白1/程序性死亡蛋白1配体1(PD-1/PD-L1)通路的影响。方法SD大鼠随机分为对照组、CIA组、TCWE处理组、甲氨蝶呤(MTX)处理组,每组15只。除对照组外,其余各组SD大鼠皮下注射Ⅱ型胶原蛋白制备胶原蛋白诱发关节炎(CIA)模型,TCWE组大鼠采用[20 mg/(kg·d)]TCWE处理,MTX组大鼠采用[1.67 mg/(kg·d)]MTX处理。处理14 d后,通过HE染色检查软骨形态,流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞凋亡和调节性T细胞(Treg)/Th17细胞比率,反转录PCR检测脾脏中的维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)和叉头盒转录因子P3(FOXP3)、PD-1和PD-L1的mRNA表达,免疫组织化学染色检测RORγt、FOXP3的表达和定位。Western blot法检测脾脏淋巴细胞的PD-1和PD-L1的蛋白表达,ELISA检测大鼠血清白细胞介素17(IL-17)和转化生长因子β(TGF-β)水平。结果与CIA组相比,TCWE组和MTX组的软骨和滑膜病变明显减轻,脾脏中的T淋巴细胞凋亡率增加,Treg/Th17细胞比率上调,RORγt的表达降低,FOXP3、PD-1和PD-L1的表达增加。血清IL-17水平降低,血清TGF-β水平升高。结论TCWE处理可能激活脾脏细胞的PD-1/PD-L1通路调节CIA大鼠脾脏中细胞的细胞免疫,减轻软骨损伤。

LncRNA LBX2-AS1调节miR-873-5p/G6PD轴对胃癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)瓢虫同源盒2反义RNA1(LBX2-AS1)调节微小RNA-873-5p(miR-873-5p)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)轴对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:以SGC7901细胞为研究对象,将其随机分为Control组、sh-NC组、sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组、sh-LBX2-AS1+miR-873-5p inhibitor组;qRT-PCR法检测LncRNA LBX2-AS1、miR-873-5p、G6PD的表达;MTT法和平板克隆实验检测SGC7901细胞增殖;划痕实验检测SGC7901细胞迁移;Transwell实验检测SGC7901细胞的侵袭;Western blot检测SGC7901细胞中MMP-2、PCNA、MMP-9、G6PD蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测LncRNA LBX2-AS1与miR-873-5p,miR-873-5p与G6PD之间的相互作用;小鼠荷瘤实验验证敲除LncRNALBX2-AS1对CC肿瘤生长及G6PD表达的影响。结果:sh-LBX2-AS1组SGC7901细胞中A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、LncRNA LBX2-AS1、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达低于sh-NC组、Control组,miR-873-5p表达高于sh-NC组、Control组(P<0.05);与sh-LBX2-AS1组、sh-LBX2-AS1+inhibitor-NC组相比,sh-LBX2-AS+miR-873-5p inhibitor组miR-873-5p表达降低,A490值、克隆数、划痕愈合率、侵袭数、G6PD mRNA和PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.05)。LncRNA LBX2-AS1靶向负调控miR-873-5p,miR-873-5p靶向负调控G6PD。实验组移植瘤质量、体积、Ki-67阳性率、G6PD阳性率低于对照组(P<0.05)。结论:敲除LncRNA LBX2-AS1可能抑制GC细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能是调节miR-873-5p/G6PD轴实现的。