抗菌肽buforin Ⅱ衍生物抑制细菌核酸合成的机制研究

目的探究抗菌肽buforin Ⅱ的衍生物buforin Ⅱ-A(BF2-A)和buforin Ⅱ-B(BF2-B)对细菌的胞内抑菌作用机制。方法体外用原子力显微镜观察抗菌肽与基因组DNA的结合情况,荧光光谱分析肽与基因组DNA的结合方式。体内用透射电镜观察抗菌肽作用后金黄色葡萄球菌细胞膜超微结构的变化,流式细胞仪分析肽对金黄色葡萄球菌细胞周期的影响。最后通过凝胶阻滞实验推测肽与金黄色葡萄球菌DNA合成相关基因的结合引起了细胞周期的改变。结果肽与基因组DNA发生了结合,与溴化乙锭(EB)竞争性嵌入基因组DNA;BF2-A/BF2-B与金黄色葡萄球菌作用后几乎在不破坏细胞膜的情况下渗透进入胞内,与DNA合成相关基因发生了结合,特异性阻滞细胞周期中的DNA合成阶段;肽与DNA合成相关基因发生了结合。另外,所有的实验结果显示了BF2-B穿透细胞、与DNA结合的能力及对细胞周期的影响强于BF2-A。结论 BF2-A/BF2-B与DNA穿过金黄色葡萄球菌细胞膜后在细胞内通过与DNA结合,特异性的将细胞阻滞在了细胞周期的DNA合成期而发挥了抑菌作用,而且BF2-B的上述作用强于BF2-A。

抗菌肽F1对金黄色葡萄球菌的胞内作用机制

研究副干酪乳杆菌FX-6产抗菌肽F1对金黄色葡萄球菌胞内抑菌作用机制。通过凝胶阻滞电泳、荧光光谱考察抗菌肽F1对金黄色葡萄球菌DNA的结合作用及方式,考马斯亮蓝法检测、聚丙烯酰胺凝胶电泳考察抗菌肽F1对金黄色葡萄球菌蛋白合成的影响,邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷法、荧光指示剂法分别测定抗菌肽F1对金黄色葡萄球菌胞内β-半乳糖苷酶、非特异酯酶表达活性的影响,流式细胞仪分析F1对金黄色葡萄球菌细胞周期的影响。结果显示,抗菌肽F1能以嵌插方式与金黄色葡萄球菌细胞内的DNA结合,阻碍其遗传信息正常表达,使其蛋白的合成减少,并使胞内β-半乳糖苷酶、非特异性酯酶的表达活性减弱,胞内酶系统紊乱,影响其正常代谢,生长周期无法顺利进行,从而起到抑菌的效果。

P物质对GABA_A和GABA_B受体介导的DRG神经元膜反应的调制作用

实验在幼年大鼠ＤＲＧ标本上进行。应用细胞内记录观察了ＳＰ对ＧＡＢＡ反应的调制作用。结果证明：（１）单独滴加ＳＰ（５×１０（－６）－４×１０（－５）ｍｏｌ／Ｌ）或浴槽灌流ＳＰ（１０（－６）－５×１０（－６）ｍｏｌ／Ｌ）不引起膜电位的改变或仅有轻微的去极化，但却能使ＧＡＢＡ引起的去极化反应减小５０．８±２０．２％（±ＳＤ）（２０／３０）；（２）单独滴加ＳＰ可使多数受检细胞ＡＰＤ５０延长２８．７±９．１％（±ＳＤ）（１０／１８）；（３）在预加ＳＰ后，能使ｂａｃｌｏｆｅｎ所引起的ＡＰＤ５０缩短效应（２０．６±２．９％，±ＳＤ）完全消除（４／１２）或翻转成ＡＰＤ（５０）延长１９．３±８．９％（±ＳＤ）（８／１２）；（４）预加ＧＡＢＡＢ受体激动剂ｂａｃｌｏｆｅｎ（１０（－４）－１０（－３）ｍｏｌ／Ｌ）３０—９０ｓ后明显地抑制ｍｕｓｃｉｍｏｌ（１０－４－１０－３ｍｏｌ／Ｌ）引起的去极化反应，其抑制效应达５４．４±１８．８％（±ＳＤ）（１７／２０）。由于ＤＲＧ神经元的胞体通常可用来作为研究初级传入终末的模型，因而本文实验结果提示：介导伤害性刺激信息的Ｐ物质在背角的释放，可能作用于初级传入终末，从而产生对抗ＧＡＢＡ介导的突触?

电极配置对MUAP检测影响的仿真研究

本研究采用模型的方法,研究了电极配置对运动单位动作电位检测的影响。根据肌肉的形态结构和生理特征,从细胞内动作电位开始,仿真了运动单位动作电位序列。在此基础上,研究了电极的配置对运动单位动作电位的波形和统计特征的影响。结果表明:尺寸较小的电极选择性较好;差分电极的选择性优于单电极,适当调整其电极间距离和角度,可提高检测质量。

糖皮质激素快速抑制气道平滑肌游离钙升高与磷脂酶C活性的关系

目的:本实验通过对平滑肌细胞行GCs快速预处理,拟证实糖皮质激素对平滑肌细胞内[Ca2+]i浓度升高有快速抑制作用,并初步探讨该现象的可能分子机制。方法:原代培养的大鼠平滑肌细胞,应用Fura-2/AM显微荧光检测技术,检测肌细胞内[Ca2+]i在受到激动剂刺激后的浓度变化;比较不同浓度地塞米松预处理后10min与对照组之间游离钙上升情况的区别。用Western blot方法,分析气道平滑肌细胞内抑制型磷脂酶C(phospho-PLCβ-ser1105)含量的变化。设立RU486及CHX对照组,排除基因组作用在该反应中的影响。结果:GCs温浴10min,能够明显降低乙酰胆碱引起的ASMCs细胞内[Ca2+]i峰值。并能够明显上调ASMCs内抑制型PLC含量。这些反应不受RU486和CHX影响。结论:GCs能够通过非基因组作用快速抑制刺激物引起的气道平滑肌的收缩反应,这一效应的实现可能是通过抑制PLC分子活性,使其下游的[Ca2+]i浓度降低实现的。

肌纤维细胞内动作电位建模的研究

介绍一种肌纤维细胞内动作电位 (IAP)的建模方法 .该方法将IAP波看作两部分之和 ,一部分对应于动作电位激励波的波峰 ,另一部分对应于动作电位的后电位 ,并用两个简单的解析函数分别表示它们 .模型的特点是 ,模型中描述波峰和后电位相对幅度的参数 ,对应于与激励波波峰有关的跨膜电流的中心矩 ,而且 ,这些参数可以由实验测量的IAP或运动单位动作电位 (MUAP)反向估计确定 .

大鼠海马脑片锥体神经元的细胞内记录

从成年大鼠分离海马结构并用震动切片机制备500μm 厚的海马脑片,应用玻璃微电极技术进行海马锥体层神经元的细胞内记录.对 CAl 锥体神经元的被动膜电性质、I-V 关系曲线、动作电位等进行了观察,发现灌流 Immol/L 的谷氨酸钠或乙酰胆碱均引起去极化,并伴有强烈放电.结果证明海马脑片神经元的细胞内记录是中枢神经电生理和药理学研究的一种稳定可靠的方法.

厚朴酚对大鼠白细胞5-脂氧合酶活性和细胞内钙离子浓度的影响

目的 :探讨厚朴酚对 5-脂氧合酶活性的影响 ,以阐明其抗炎机理。方法 :以大鼠胸腔白细胞为材料 ,分别用高效液相色谱法和荧光分光光度法测定白三烯 B4 (LTB4 ) ,5-羟二十碳四烯酸 (5- HETE)的生成和细胞内钙离子水平。结果 :厚朴酚对白细胞 L TB4 和 5- HETE的生物合成有较强的抑制作用 ,其 IC50 值分别为 8.5μmol/ L和 3.1μmol/ L;厚朴酚还可以抑制趋化三肽 (f MLP)刺激的白细胞内钙升高 ,但对静息状态的白细胞内钙离子水平没有明显的影响。结论 :厚朴酚可以明显影响白细胞的功能 ,抑制炎性介质 L TB4 和 5 - HETE的生成 。

细胞内高钙对小鼠小脑浦肯野细胞动作电位编码的影响

目的:通过向细胞内微量注射IP3受体激动剂诱发细胞内高钙,探讨细胞内高钙对小鼠小脑浦肯野细胞内在电生理特性变化的影响。方法:取小鼠小脑蚓部做矢状切片(400μm)。采用Axoclamp-2B放大器全细胞记录模式,记录细胞内Ca2+浓度升高前后浦肯野细胞动作电位的阈电位和绝对不应期;电信号输入pClamp9.2软件获取和分析群集发放的动作电位峰间距和动作电位峰时程标准差,进行数据采集和分析,观察细胞内Ca2+浓度升高早期浦肯野细胞内在电生理特性的变化。结果:细胞内Ca2+浓度升高后的短时间内,与高钙前相比,小脑浦肯野细胞群集发放动作电位的不应期缩短和激发动作电位的阈电位降低(P<0.001)。结论:细胞内高钙改变动作电位的不应期和阈电位,使浦肯野细胞兴奋增加,动作电位的编码能力降低。

细胞内记录动作电位测定蛙单根有髓神经纤维强度—时间关系

本文介绍了一种简单的细胞内记录蛙有髓神经纤维动作电位方法。将该方法用于测定神经纤维阈刺激的强度-时间关系,所得结果能够满足一般科研及教学工作的需要。

苄基四氢巴马汀细胞内用药对豚鼠乳头状肌动作电位和心室肌细胞延迟整流钾电流的作用

目的 研究将苄基四氢巴马汀 (BTHP)导入细胞内对豚鼠乳头状肌动作电位及单个心室肌细胞延迟整流钾电流的影响。方法 利用外加电压脉冲将药物导入乳头状肌细胞内 ,并用标准微电极方法测定动作电位 ;利用浓度差扩散方式使药物进入单个心室肌细胞内 ,采用全细胞膜片钳技术记录延迟整流钾电流 (IK)。结果 10 0 μmol·L-1BTHP使APD2 0 和APD90 分别延长 13 5 %和 2 0 5 %。 30 μmol·L-1BTHP使IK 和IK ,tail分别从 (14 1± 2 2 )pA·pF-1和 (4 0± 0 6 ) pA·pF-1降至 (9 4± 1 3) pA·pF-1和 (2 1± 1 0 ) pA·pF-1,下降率分别为 33 2 %和 35 3%。该药使IK 和IK ,tail的I V曲线幅度降低 ,对曲线形状影响不明显。结论 BTHP入细胞内后可阻滞延迟整流钾电流和延长动作电位时程。

植物耐受镉的细胞机制研究进展

综述植物细胞水平上对重金属镉耐性机制的研究进展。一方面胞外作用,主要包括根系分泌物的螯合、细胞壁吸附固定和菌根化作用,减少根系吸收Cd进入细胞质;另一方面胞内作用,主要包括细胞质内的金属硫蛋白、谷胱甘肽、植物络合素、有机酸、氨基酸、非蛋白巯基等物质与Cd结合,通过区室化作用将这些Cd-结合物隔离于液泡中,同时抗氧化系统的响应清除氧化伤害,减少或解除Cd毒性和提高植物耐性。

糖皮质激素对大鼠肾上腺嗜铬细胞受激动所致儿茶酚胺分泌及细胞内钙的快速抑制作用(英文)

为研究糖皮质激素对原代培养大鼠肾上腺嗜铬细胞（AMCC）受激动所致儿茶酚胺的快速作用，用HPLC－ED方法检测了乙酰胆碱（10－5mol／L）、烟碱（10－5mol／L）、毒蕈碱（10－5mol／L）及55mmol／L的KCl在20min内所引起的儿茶酚胺量．地塞米松（Dex，10－4mol／L及10－5mol／L）及皮质酮（10－5mol／L）可以抑制AMCC的儿茶酚胺分泌；10－7mol／L的17β-雌二醇不能抑制，但10－5mol／L的可以抑制其分泌；醛固酮、雄烯二酮及胆固醇无抑制效应。为了揭示与分泌有关的细胞内变化，用SPex检测系统检测了细胞内钙（［Ca2+］）的含量。发现地塞米松及皮质酮有抑制因乙酰胆碱、烟碱、毒蕈碱及高K+所引起的［Ca2+］升高的作用，而17β－雌二醇、孕酮、醛固酮及雄烯二酮则无此作用。10－4mol／L的RU38486可部分阻断皮质酮的抑制效应，当细胞外无钙时毒蕈也能引起［Ca2+］．升高，此效应也可被皮质酮所阻断。上述结果表明：糖度质激素抑制AMCC的激动性儿茶酚胺分泌是非基因组的，此作用经过抑制其细胞内钙升高而实现，并提示有膜受体的参与。

Advances in micro-nano biosensing platforms for intracellular electrophysiology

The establishment of a dependable electrophysiological detection platform is paramount for cardiology and neuroscience research.In the past decade,devices based on micro and nanoscale sensing and control technologies have been developed to construct electrophysiological platforms.Their unique morphological advantages and novel processing methods offer the potential for high-throughput,high-fidelity electrical signal recording.In this review,we analyze the structure,transmembrane strategies,and electrophysiological detection methods of active/passive micro and nano sensing platforms.We also provide an outlook on their vast potential for development in light of the opportunities and challenges facing micro and nano sensing technology,with the aim of pushing for higher-level electrophysiological platform construction to meet the needs of experimental research and clinical applications.

Action Calcium:an All-or-none Ca^(2+) Transient in Astrocytes

While membrane potential is an important mediator delivering information in excitable cells, Ca2+ is a versatile intracellular messenger regulating cell function in almost all eukaryocytes.

紫芝酸性三萜类化合物体外抑癌和抑菌作用的研究

采用噻唑蓝比色(MTT)法研究紫芝酸性三萜对几种癌细胞体外增殖的影响,并用管碟法检测了紫芝胞内酸性三萜对几种细菌和霉菌的体外抑菌作用。结果表明,紫芝胞内酸性三萜和胞外酸性三萜在250μg/mL时,对人肝癌细胞BEL7402和人乳腺癌细胞MCF-7均有显著抑制作用(P<0.05),但对人胃癌细胞SGC-7901没有显著抑制作用(P>0.05)。BEL7402细胞的生长曲线试验表明,胞内酸性三萜组的细胞受到显著抑制,未出现指数增长期,且BEL7402细胞培养3d后,对照组细胞数目多、均匀,而胞内酸性三萜组的细胞数目明显减少,且细胞变小。抑菌试验结果表明,胞内酸性三萜在40mg/mL时,对大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的生长均具有显著抑制作用(P<0.01),对枯草芽孢杆菌Bacillus subtitis和青霉的Penicillium chrysogenum抑制作用较弱;而在此浓度下对黑曲霉Aspergillus niger没有抑制作用。该样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉和青霉的MIC分别为20mg/mL、20mg/mL、40mg/mL、80mg/mL和40mg/mL。此外,该酸性三萜的抑菌成分在60℃下(处理2h)较稳定,但在80℃以上,热稳定性较差,活性降低。

地塞米松快速抑制气道平滑肌内游离钙升高实验初探

目的 通过对平滑肌细胞行地塞米松快速预处理,拟证实糖皮质激素对平滑肌细胞内游离钙离子浓度[Ca^2＋]i升高有快速抑制作用.方法 原代培养的大鼠平滑肌细胞,比较不同浓度地塞米松预处理后10 min与对照组之间游离钙上升情况的区别.利用Fura-2/AM显微荧光检测技术,检测肌细胞内[Ca^2＋]i在受到激动剂刺激后的浓度变化;同时设立RU486及CHX对照组,排除基因组作用在该反应中的影响.结果 地塞米松温浴10 min,能够明显降低Ach引起的气道平滑肌细胞内[Ca^2＋]i峰值.以上反应均不能被RU486和CHX影响或者逆转.结果 地塞米松能够通过非基因组作用快速抑制Ach引起的气道平滑肌细胞内[Ca^2＋]i浓度升高.

肽学研究的新发现与研究进展

多肽是一种介于氨基酸和蛋白质之间、具有其独特生物学活性的化合物,依据其来源不同分为内源性多肽和外源性多肽。内源性多肽含量丰富、产生形式多样,受到研究者的关注。近期发现非编码基因同样可以编码具有生物活性的小分子肽,从lncRNA、rRNA、microRNA等寻找新的具有编码功能的开放阅读框成为新近研究的热点。内源性多肽作用方式多样,不仅可以分泌后通过与受体结合发挥类似激素的作用,也可以产生后在胞内发挥功能。随着多肽作为药物越来越多地应用于临床,内源性多肽无疑具有广泛的应用前景。本文介绍内源多肽的产生和作用方式,重点综述新的研究发现和研究进展,旨在为内源性多肽的研究提供参考。