云南不同产地羊耳菊中总酚质量分数测定分析

为建立羊耳菊总酚的含量测定方法,考察云南不同产地羊耳菊总酚含量差异,通过单因素试验和正交试验优化提取工艺,以麝香草酚为对照品,采用可见分光光度法测定羊耳菊的总酚含量。研究结果表明:对照品麝香草酚溶液在波长278 nm处有最大吸收,在9.8~68.6 mg/L范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系(r^(2)=0.9992),方法精密度RSD为1.45%,加标平均回收率为98.62%,分析方法稳定可靠。9批不同产地羊耳菊总酚的质量分数有一定差异,总体在7.61~2.89 mg/g之间。实验结果可为提高羊耳菊药材的质量标准,进一步开发利用羊耳菊产品提供一定的参考。

羊耳菊的化学成分

目的：研究羊耳菊全草的化学成分。方法：用硅胶柱和凝胶柱层析等方法分离羊耳菊全草的化学成分，用现代波谱技术（EI—MS，^1H NMR，^13C NMR）鉴定其结构。结果：从羊耳菊全草的氯仿和乙酸乙酯部分共分离得到12个化合物，分别鉴定为橙黄胡椒酰胺乙酸酯（1），橙黄胡椒酰胺苯甲酸酯（2），大黄素甲醚（3），东莨菪亭（4），香草醛（5），松柏醛（6），丁香醛（7），丁香酸（8），木犀草素（9），芹菜素（10），壬二酸（11），三十二烷酸（12）。结论：所有化合物均为首次从该植物中分离得到，其中1—8，11—12为首次从该属植物分离得到。

羊耳菊中咖啡酰基奎宁酸类化学成分研究

采用正相硅胶色谱柱、Sephadex LH-20以及制备HPLC等色谱方法对羊耳菊进行分离纯化,并通过理化常数和波谱数据鉴定其化学结构。深入研究羊耳菊干燥全草的咖啡酰基奎宁酸类化学成分。从羊耳菊中分离得到8个咖啡酰基奎宁酸类化合物,分别为1,5-O-二咖啡酰基奎宁酸（1）、1,3,5-O-三咖啡酰基奎宁酸（2）、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯（3）、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯（4）、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯（5）、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯（6）、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸（7）、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸（8）。化合物1-3为从该植物中首次分离得到,4-6从该属植物中首次分离得到。

基于体内外炎症模型研究羊耳菊提取物的抗炎活性

研究羊耳菊提取物的抗炎活性。通过D_(101)大孔树脂吸附法对羊耳菊粗提物进行富集分离,由此制备出不同极性的组分;采用体外抑菌实验对不同组分进行抑菌活性筛选,同时建立LPS刺激RAW 264.7细胞模型和小鼠耳肿胀动物模型,对不同组分进行抗炎活性评价。通过D_(101)大孔吸附树脂对粗提物进行富集分离,制备的五个不同组分:Fr.A、Fr.B、Fr.C、Fr.D和Fr.E。其中Fr.E组(60%乙醇组分)的抗炎效果优于其余各组。抑制NO和TNF-α的释放作用分别为53.32±1.14、56.46±2.02,小鼠耳肿胀实验的肿胀抑制率为54.81%。羊耳菊Fr.E组分(60%乙醇组分)为羊耳菊抗炎的主要有效组分。

基于UHPLC/Q-TOF/MS分析羊耳菊有效组分的入血成分

目的应用UHPLC/Q-TOF/MS技术和血清药物化学研究手段,分析检测羊耳菊有效组分的入血成分。方法大鼠灌胃给予羊耳菊有效组分提取物后,腹主动脉抗凝采血,血浆经甲醇二次沉淀蛋白处理。采用Eclipse Plus C18RRHD色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)做流动相梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1。负离子检测模式,同时结合布鲁克道尔顿公司的Metabolite Tools软件,鉴定和表征其血中的移行成分。结果给药后,在大鼠血浆中共检测到16个代谢产物,包括9个原型成分和7个代谢物,代谢方式主要以咖啡酰基奎宁酸类化合物的异构化、甲基化及甲基葡萄糖醛酸化的复合反应为主。结论本研究较为全面地阐释了羊耳菊活性部位提取物在大鼠血中的入血成分,为进一步研究羊耳菊药材的体内过程和药效物质基础提供了一定的参考。

羊耳菊挥发油化学成分及其清除自由基的作用研究

[目的]研究羊耳菊挥发油的化学成分及其对自由基的清除作用。[方法]采用水蒸汽蒸馏法提取羊耳菊的挥发油,利用气相色谱-质谱联用法对该挥发油的化学成分进行分离鉴定,利用Fenton反应产生羟基自由基(.OH)及邻苯三酚自氧化产生超氧阴离子自由基(O.2-),以比色法测定羊耳菊挥发油对这2种自由基的清除作用。[结果]挥发油得率为0.486%(V/W),确定了28种化合物的结构和相对含量。挥发油主要含3-甲基-5-异丙基-甲基氨基甲酸酚酯(74.37%)、11,14-二十碳二烯酸乙酯(9.50%)和2,2-二甲基丙酸-2-[1,1-二甲基乙基]酚酯(7.59%)3种酯类化合物。挥发油对羟基自由基(.OH)和超氧阴离子自由基(O.2-)都有一定的清除能力,但清除羟基自由基(.OH)的能力较强。[结论]通过对羊耳菊挥发油化学成分的研究,为进一步开发利用该植物提供了科学依据。

羊耳菊黄酮类化合物的提取与抑菌作用

采用微波辅助提取法提取羊耳菊总黄酮,在单因素试验的基础上,通过正交试验对提取工艺进行优化,并用所得的提取物对9种微生物的抑菌作用进行了试验研究。结果表明,羊耳菊总黄酮提取的最佳工艺为乙醇体积分数60%、固液比1:25、微波作用时间4min、微波火力为解冻;羊耳菊总黄酮提取物对大多数供试微生物有抑制作用,其中对藤黄八叠球菌抑菌效果最好,其最低抑菌浓度为0.0039g/mL;对粪肠球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.1250g/mL;对大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌最低抑菌浓度为0.5000g/mL;而对普通变形杆菌及白假丝酵母菌抑制作用不明显。

羊耳菊有机溶剂提取物的抑菌作用研究

目的:评价羊耳菊提取物抗微生物活性,为广泛应用于传统医药系统的药物提供科学依据。方法:通过使用不断增强极性的有机溶剂,即石油醚、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮和冰醋酸,获得羊耳菊根、茎、叶的提取物。使用药敏纸片扩散法和试管二倍稀释法,研究了提取物对大肠杆菌(E.coliO1)、白色念珠菌(Candida albicans)、金黄色葡萄球菌(Staphy-lococcus aureus 91053)、甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphiA)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)的体外抑菌特性。结果:羊耳菊不同有机溶剂提取物都具有抑菌作用,其中,冰醋酸提取物的抑菌效果最好,其次是乙醇和丙酮提取物,石油醚提取物抑菌效果略差;根和叶提取物抑菌作用比茎提取物好;提取物对革兰氏阳性抑制效果比革兰氏阴性菌好。结论:羊耳菊有机溶液提取物体外试验证实了该民间药物具有抗菌活性,也表明了羊耳菊是一种有开发潜力的新抗菌药物资源。

羊耳菊的化学成分研究(Ⅱ)

研究了菊科旋覆花属植物羊耳菊根的化学成分,从其甲醇提取物中分离得到东莨菪苷(Ⅰ),二十八烷酸(Ⅱ),三十三烷(Ⅲ)以及5个神经酰胺类化合物的混合物,分别为(2S,3S,4R,8E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十二烷酸酰胺]-十八烷-1,3,4-三醇(Ⅳ),(2S,3S,4R,8E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十三烷酸酰胺]-十八烷-1,3,4-三醇(Ⅴ),(2S,3S,4R,8E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十四烷酸酰胺]-十八烷-1,3,4-三醇(Ⅵ),(2S,3S,4R,8E)-2-[(2′R)-2′羟基二十五烷酸酰胺]-十八烷-1,3,4-三醇(Ⅶ),(2S,3S,4R,8E)-2-[(2′R)-2′-羟基二十六烷酸酰胺]-十八烷-1,3,4-三醇(Ⅷ)。以上化合物均为首次从该植物中分离得到。

羊耳菊有效组分化学成分分析

[目的]分析羊耳菊有效组分中的化学成分。[方法]采用UHPLC-Q-TOF-MS技术,对其中主要的化学成分进行表征,指认其中特征性、代表性的化学成分,并通过对照品进行比对。[结果]在羊耳菊有效组分中鉴定出12个化合物,分别为绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、洋蓟素、木犀草苷、东莨菪苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖(6→1)-α-L-鼠李糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷。[结论]明确了羊耳菊有效组分中的12个化合物,为羊耳菊药材的质量控制指标成分的选择提供依据。

羊耳菊水提取物体外抑菌活性研究

目的探讨羊耳菊不同器官水提取物的体外抑菌活性。方法以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌等10种微生物为试验菌株,采用药敏纸片扩散法、试管二倍稀释法,对羊耳菊水提取物进行抑菌试验。结果羊耳菊全株各器官都具有较强的抑菌作用,其中根对10种供试菌种都有抑制作用,抑制范围最广;茎对9种供试菌种有抑制作用,叶对8种供试菌种有抑制作用。羊耳菊各器官对金黄色葡萄球菌与铜绿假单胞菌的抑制作用最强。羊耳菊根、茎、叶对金黄色葡萄球菌的MIC值分别为15.63,62.5,62.5 mg/ml,而其抑菌圈直径分别为14.3,13.8,13.5 mm;羊耳菊根,茎,叶对铜绿假单胞菌的MIC值分别为15.63,31.25,62.5 mg/ml,其抑菌圈直径分别为15.8,15.5,14.0 mm。结论羊耳菊水提取物体外试验证实了该民间药物具有抗菌活性,也表明了羊耳菊是一种有开发潜力的新抗菌药物资源。

羊耳菊抗菌物质及其抑菌特性分析

通过硅胶柱层析法,结合活性追踪,从羊耳菊中分离到1种对水稻纹枯病菌具有较强抑菌活性的化合物,经菌丝生长速率法测定,其抑菌中浓度为47 mg/L。通过分析氢谱和碳谱数据,该化合物被鉴定为百里香酚,具有耐热、耐酸碱、抗紫外光和荧光的特性。百里香酚对15种植物病原真菌和4种植物病原细菌具有抑制作用,其中对水稻纹枯病菌、茉莉枝枯病菌、烟草黑胫病菌、香蕉弯孢霉叶斑病菌、白菜软腐病菌和木薯细菌性枯萎病菌的抑菌活性较强。

抑制水稻纹枯病菌的植物筛选

以水稻纹枯病菌为供试菌,采用菌丝生长速率法测定了27科37种植物甲醇提取物的离体抑菌活性,发现羊耳菊全草对水稻纹枯病菌的抑菌作用最强,其茎和叶2个不同部位的甲醇提取物对水稻纹枯病菌的抑菌中浓度分别为1.19×103和4.08×103mg/L。以羊耳菊茎秆提取物对离体水稻叶片纹枯病进行了防效试验,当其浓度为10×103mg/L时,先喷药后接种的预防效果为100%,先接种后喷药的治疗效果为92.38%。研究结果初步证实,羊耳菊含有强烈抑制水稻纹枯病菌的抑菌物质。

小黑药抗油脂氧化及抑菌效果研究

采用Schaal烘箱法,通过测定过氧化值(POV),并且以Pb值为评价的标准[Pb=POV(试样)/POV(空白)],分别评价了小黑药根粉(A)、小黑药根粉乙醇浸提物(B)、小黑药根粉石油醚浸提物(C)对猪油、菜籽油的抗氧化效果。通过对比POV值及Pb值随时间的变化曲线可以看出:各种物质都能不同程度地抑制油脂的POV;猪油的效果更明显;B的抑制效果优于C,说明小黑药的抗氧化有效成分更易溶解于乙醇。此外,采用扩散法和牛津杯法评价了B和C的抑菌性能,结果表明:C、B都能明显抑制金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌,而C的效果更好。

超声波提取羊耳菊叶总黄酮优化工艺研究

探讨超声波法提取羊耳菊叶总黄酮的主要影响因素,通过L9(34)正交试验,研究了羊耳菊叶中黄酮类化合物提取的最佳工艺.结果表明,各试验因素对羊耳菊叶中黄酮类物质提取量的影响依次为乙醇浓度、提取时间、液料比.超声波法提取羊耳菊叶黄酮类化合物的最佳工艺为:乙醇浓度为70%、液料比为25∶1、超声波提取3h、提取1次.

基质、光照和温度对羊耳菊种子萌发的影响

为了研究羊耳菊种子的萌发特性,观察了不同基质、光照和温度等条件处理对羊耳菊种子萌发的影响。种子萌发试验的基质分别为纱布、滤纸及细河沙;光照条件分别为黑暗和自然光2种;萌发温度分别为10,15,20,25℃。结果表明:1)种子萌发最佳基质为细河沙;2)种子在光照条件下具有较高的萌发率;3)最适萌发温度为25℃,萌发率达53.75%。本研究可为羊耳菊资源利用提供科学依据。

羊耳菊水提物减轻免疫紊乱和软骨退变对ACLT诱导的骨关节炎大鼠保护作用

目的探讨羊耳菊水提物(water extract of Inula cappa)保护前交叉韧带切断术诱导的骨关节炎大鼠的可能机制.方法构建骨关节炎大鼠模型,术后给予6、12、24 g/kg羊耳菊水提物灌胃.28 d后,检测骨体积分数(BV/TV)、特定骨表面积(BSA/BV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-10水平;统计骨小梁及软骨含量,检测软骨组织中Osx、Col1a1、Dlx2基因表达以及WOSCAR、TRAP蛋白表达.结果中、高剂量羊耳菊水提物干预后,能够提高大鼠的BV/TV、Tb.Th水平、骨小梁、软骨含量、Osx、Dlx2、Col1α1相对表达水平(P<0.05),降低BSA/BV、Tb.Sp、TNF-α、IL-1β、IL-10、TAPR染色阳性率、OSCAR、TRAP蛋白表达水平(P<0.05).结论羊耳菊水提物可能通过抑制炎性应激反应降低软骨组织处的免疫反应,恢复成/破骨细胞的功能平衡,改善软骨退变程度,从而保护骨关节炎大鼠.

羊耳菊提取物的抑菌动力学研究

[目的]研究羊耳菊不同浓度提取物对细菌存活率随时间变化的关系,以及不同pH值条件下提取物的抑菌效果。[方法]以金黄色葡萄球菌、甲型副伤寒沙门氏菌为供试菌种,绘制时间杀菌曲线和浓度杀菌曲线。在提取物浓度为最低抑菌浓度(MIC)时培养24h,测定不同pH值条件下的抑菌率。[结果]羊耳菊提取物对金黄色葡萄球菌和甲型副伤寒沙门氏菌的MIC、最低杀菌浓度(MBC)分别为62.5、125.0mg/ml和125.0、250.0mg/ml。绘制了羊耳菊提取物16MIC、4MIC、2MIC、MIC、1/2MIC和对照条件下的杀菌曲线。羊耳菊水提物抑菌作用最适pH值为6～8。[结论]羊耳菊提取物对金黄色葡萄球菌的杀菌作用在较高浓度时并没有进一步提高杀菌速度,表现为时间依赖性,但对甲型副伤寒沙门氏菌表现为浓度性依赖性。

UPLC-MS法测定羊耳菊中6种成分的含量

建立了UPLC-MS/MS同时测定羊耳菊药材中东莨菪苷、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸6个成分含量的方法。采用Waters BEH C18（2.1 mm×100 mm,1.7μm）色谱柱,用0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液作流动相,梯度洗脱,电喷雾电离源（ESI）,以多反应离子监测（MRM）检测。6种成分分别在0.058~42.000、0.178~129.630、0.087~63.400、0.288~69.930、0.172~125.500、0.184~134.130μg/m L浓度范围线性良好,平均回收率为97.84%~105.67%（RSD〈1%）。稳定性,重复性及精密度良好,本方法能简便、快捷、有效的测定羊耳菊药材中多种成分含量,为羊耳菊药材的全面质量控制提供了新的方法。

羊耳菊活性部位在大鼠循环肠灌流液中的代谢产物研究

[目的]采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF/MS)研究羊耳菊提取物在大鼠循环肠灌流液中的代谢产物。[方法]收集健康SD大鼠循环肠灌流液,分别用甲酸水溶液和正丁醇处理样品后,UHPLC-Q-TOF/MS分析其代谢产物。结合对照品、质谱碎片信息和相关文献,初步推测代谢产物的结构。[结果]大鼠循环肠灌流液中的代谢物较少,初步鉴定出3个代谢产物,主要存在二咖啡酰基奎宁酸酯基位置异构和甲基化代谢物。[结论]该方法初步探究了羊耳菊提取物主要成分在大鼠循环肠灌流液中的代谢特征,为阐释羊耳菊药材的药效物质基础提供理论依据。