经尿道诊断性膀胱肿瘤电切在膀胱癌分期诊断中的作用

目的探讨经尿道诊断性膀胱肿瘤电切在膀胱癌准确分期的临床应用价值。方法回顾性分析我院在1995年3月至2005年3月期间收治的行经尿道膀胱肿瘤电切术(经典术式)的199例膀胱癌患者,与在2006年5月-2009年1月期间收治的行经尿道诊断性膀胱肿瘤电切术的82例膀胱癌患者临床随访资料。结果①在行经尿道膀胱肿瘤电切术的膀胱癌患者中,术后两内年膀胱癌原位复发6例,术后5年、7年膀胱内无肿瘤复发,而出现盆腔淋巴结转移及全身骨转移2例。②在行经尿道诊断性膀胱肿瘤电切的膀胱癌患者中,有8例证实肿瘤基底部肌层可见癌组织浸润,根据患者个人一般状况,采取膀胱全切或其他治疗方案。结论经尿道诊断性膀胱肿瘤电切术能够准确的对膀胱肿瘤进行分期,对指导膀胱癌治疗提供准确的依据。

假结核耶尔森菌侵染素蛋白作为DNA疫苗佐剂的免疫效果

目的探讨假结核耶尔森菌侵染素(invasin)羧基端397个氨基酸(Inv397)对抗原免疫原性的影响,以评价其作为DNA疫苗佐剂的效果。方法利用PCR扩增Inv397编码基因(inv397),分别构建编码猪丹毒丝菌表面抗原氨基端蛋白(spaA-N)和Inv397蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-spaA-N,pcDNA3.1-spaA-N-inv397。同时构建重组载体pET-30a-inv397,并在大肠杆菌BL21中诱导表达,经过Ni Sepharose 6 Fast Flow亲和层析纯化重组Inv397蛋白。将纯化后重组Inv397蛋白与包含spaA-N的重组真核质粒滴鼻免疫ICR小鼠,ELISA法检测血清特异性抗体水平,细胞增殖实验分析T淋巴细胞增殖反应。结果 Inv397蛋白与spaA-N重组质粒滴鼻免疫组的血清spaA-N特异性IgG水平明显高于spaA-N其它对照组(P<0.01),且T细胞增殖水平也高于其他各组,但无显著差异。结论 Inv397蛋白具有一定程度的免疫增强作用,有可能成为一种新的DNA疫苗佐剂。

假结核耶尔森菌侵袭素蛋白基因的克隆及原核表达

目的克隆假结核耶尔森菌侵袭素蛋白基因并在原核表达系统中表达.方法根据GenBank上登录的假结核耶尔森菌侵袭素蛋白核酸序列设计引物,用PCR方法扩增假结核耶尔森菌侵袭素蛋白基因,并将其插入克隆载体pMD18-T中,测序鉴定正确后再将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,得到重组质粒pGEX-4T-1-inv.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测.结果假结核耶尔森菌提取的基因组,经PCR扩增,得到一段591 bp的片段,与预期结果一致;SDS-PAGE电泳分析,所得重组蛋白的分子量约46 kDa,与预期结果相同;重组菌体超声裂解后,经12%的SDS-PAGE电泳分析,结果显示该重组蛋白为包涵体蛋白.结论克隆的侵袭素基因核心片段可以在原核细胞中高效表达.

表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组腺病毒的构建

为研制表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白的重组腺病毒疫苗,根据PCV-2ORF2(Cap)基因序列和耶尔森菌侵袭素C端(InvC)序列,克隆获得Cap和InvC基因后,插入pAdShttle-CMV载体构建重组穿梭载体pAdShttle-Cap-InvC,经PmeI线性化后,转化入BJ5183感受态细菌与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-Cap-InvC。重组质粒经PacⅠ线性化后,转染HEK293细胞,连续传代后获得重组腺病毒。应用PCR、Western blot和间接免疫荧光(IFA)技术分别检测重组腺病毒中Cap和InvC基因及表达。结果表明,成功构建了表达PCV-2Cap蛋白和InvC的重组腺病毒rAd-CapInvC,经过噬斑纯化和连续传代,重组腺病毒TCID50可达10-9.32/mL,为PCV-2重组腺病毒活载体疫苗的研发提供了基础材料。

非霍奇金淋巴瘤侵犯骨髓及合并淋巴瘤细胞白血病的临床分析

目的:了解非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯的特征与病理类型、临床表现、治疗及预后的关系。方法:413 例经病理学诊断为非霍奇金淋巴瘤患者经骨髓穿刺检查后,对112例诊断为骨髓侵犯患者的骨髓病理形态学特征、骨髓侵犯程度与临床表现、分期,疗效以及生存时间的关系进行分析。结果:骨髓侵犯的发生率为27．12％,骨髓侵犯的形态学特征与原发肿瘤的一致;骨髓侵犯以B细胞淋巴瘤多见,多发生在晚期;骨髓侵犯程度与临床表现、疗效、预后明显相关,骨髓侵犯越重,临床症状越重,预后不良。结论:非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯的形态学特征与原发肿瘤细胞的形态一致,骨髓侵犯程度越重,临床出现各种相关症状重,化疗的缓解率低,疗效差,生存期明显缩短,预后不良,但仍有治愈的机会。

沙门菌的“拉链”与“触发”入侵机制及其调控

沙门菌可以通过"拉链"与"触发"2种机制入侵宿主细胞,"触发"机制依赖于三型分泌系统,"拉链"机制依赖于细菌表面蛋白(侵袭素)与细胞膜受体的相互作用,两者都是通过刺激宿主细胞的信号转导途径,产生一系列的细胞反应,最终导致细菌内化。Rck、PagN和HlyE是目前被鉴定的3种侵袭素。沙门菌入侵基因的表达受转录水平的几个环境因素影响。

痢疾志贺菌侵袭素IpaC的原核表达及纯化复性

目的为进一步研究痢疾志贺菌侵袭素IpaC蛋白的侵袭活性,必须先获得IpaC重组融合蛋白。方法将IpaC基因亚克隆至表达载体pET-24α(+)中,转化至E.coli BL21(DE3)表达宿主菌中,采用IPTG优化诱导表达,然后纯化复性重组蛋白。结果重组蛋白最佳表达条件为0.50mmol/L IPTG、30℃诱导6h,获得分子量约为33kDa的IpaC重组蛋白。Western blotting证实了重组蛋白的特异性。IpaC重组蛋白主要以包涵体形式在宿主菌中表达,通过纯化后得到单一的目的蛋白。结论成功构建IpaC原核表达体系,并获得了蛋白的高效表达及优化。初步建立了IpaC重组蛋白的纯化方案。为进一步研究IpaC的侵袭性作用奠定了基础。

黄连提取物体外对白念珠菌丝侵袭的抑制作用

该文探讨黄连提取物(extract of Coptidis Rhizoma,ECR)体外对白念珠菌丝侵袭的抑制作用。以XTT还原法评价ECR对白念珠菌丝代谢活性的影响;固体培养基上观测白念珠菌落边缘生长的情况;半固体培养基上观察ECR如何影响白念珠菌丝生长;扫描电镜观察ECR对白念珠菌丝形态的影响;荧光显微镜观察ECR对白念珠菌丝形态及活力的变化;qRT-PCR法检测白念珠菌丝侵袭素ALS3,SSA1基因的表达。结果显示,XTT法检测到在64,128,256 mg·L-1ECR干预下,白念珠菌丝活性逐渐降低;128,256 mg·L-1ECR在固体培养基上可抑制菌落褶皱,在半固体培养基中可明显抑制菌丝侵袭性生长;扫描电镜与荧光显微镜下发现,128,256 mg·L-1ECR能显著抑制白念珠菌丝形成;qRT-PCR法显示,64,128,256 mg·L-1ECR作用下,侵袭素ALS3,SSA1基因表达均下调,且在256 mg·L-1ECR干预下,侵袭素ALS3,SSA1基因表达分别下调4.8,1.68倍。该研究表明,黄连提取物通过抑制菌丝生长及侵袭素表达从而影响白念珠菌的侵袭力。

假结核耶尔森氏菌与宿主之间相互作用的分子机制研究进展

耶尔森氏菌属中有3个种对人和动物具有致病性,包括鼠疫杆菌(Yersinia pestis)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)和假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)。研究发现,假结核耶尔森氏菌能通过小鼠小肠派氏淋巴结的M细胞(Microfold cell)进行跨细胞转运。这种转运方式首先是细菌利用其表面蛋白侵袭素Invasin或黏附素Yad A蛋白识别并结合宿主细胞表面的整合素Integrin受体家族成员的β1链,然后细胞膜上的分泌通道打开,细菌利用Ⅲ型分泌系统把效应蛋白注入宿主细胞内,破坏宿主细胞免疫系统进行感染的过程。过去三十年内关于假结核耶尔森氏菌有大量的文献报道,本文综述该菌与宿主细胞之间相互作用分子机制的研究进展,并讨论目前关于假结核耶尔森氏菌的研究方向及热点。