幽门螺杆菌lpp20基因与麦芽糖结合蛋白基因的融合表达与纯化

目的 研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)lpp20基因与麦芽糖结合蛋白基因的融合表达产物的纯化方法,为幽门螺杆菌基因工程疫苗的制备建立基础。方法 采用本研究室分离的HpMEL-HP27菌株提取染色体DNA,用PCR方法从HP染色体DNA上扩增出lpp20基因片段,将目的基因插入到表达载体pMAL-c2X中,用重组质粒转化大肠杆菌(E.coli TB1)。采用IPTG进行诱导表达。用多糖树脂(amylose resin)作为填充料,制备层析柱,将可溶性菌体蛋白进行亲和层析。应用SDS-PAGE方法对纯化产物进行分析。结果 融合蛋白的分子量约为60kDa,融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的34％;纯化后的融合蛋白纯度达90％以上。结论 与麦芽糖结合蛋白基因融合的lpp20基因在E.coli TB1中能够高效表达;用多糖树脂作为填充料,进行亲和层析的方法,具有良好的纯化效果。