金黄色葡萄球菌IsdB基因缺失序列比较与宿主特异性分析

对新疆地区分离的牛源金黄色葡萄球菌XJ43(CC97)、XJ108(CC398)和XJ69(CC479)的IsdB基因序列测定、比对发现,在编码非功能结构域的277-314碱基(5'-3')间存在不同序列的缺失,并导致各编码蛋白质的二级结构出现一定差异;Blast分析显示,NCBI中登录的金黄色葡萄球菌不同菌株IsdB基因序列相似性大于95%,但与新分离的三种序列型相比,除医源菌株USA300 TCH959(CC8)与XJ69(CC479)的IsdB基因序列缺失一致外,其他医源菌株与XJ43缺失的序列均不一致;牛源或羊源CC133、CC425、CC151和属人畜共患CC398 XJ108菌株IsdB基因缺失的序列一致,表明这种序列缺失与金黄色葡萄球菌的宿主特异性无绝对相关性,但含有IsdB基因序列缺失的菌株在反刍动物乳腺感染中出现频率较高。

金黄色葡萄球菌isdb基因的克隆表达及其小鼠免疫试验

为了研究金黄色葡萄球菌表面Isdb蛋白的免疫原性,应用PCR方法扩增出金黄色葡萄球菌Wood46株的isdb基因并进行序列分析,再将isdb基因插入到pET32-a(+)载体上,构建了pET32-a(+)-isdb重组质粒,将重组质粒转化到宿主菌大肠杆菌BL21中并诱导表达和纯化Isdb蛋白。用纯化的Isdb蛋白免疫小鼠,检测小鼠血清中抗体水平;在二次免疫之后的第2周,用金黄色葡萄球菌Wood46、HLJ23-1株对小鼠攻毒,每组8只小鼠。研究结果发现:isdb基因在不同菌株中高度保守;Isdb蛋白在宿主菌中获得成功表达;在免疫后血清抗体效价与对照组相比,均显著升高(P<0.05);攻毒结果表明Isdb蛋白对Wood46和HLJ23-1两种菌株攻毒保护率分别为62.5%和75%。以上结果表明Isdb蛋白具有较好的免疫原性和免疫保护作用。