醒脑开窍针刺法对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织p-Akt(Ser473)表达及细胞凋亡的影响

[目的]观察醒脑开窍针刺法对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织p-Akt(Ser473)表达及细胞凋亡的影响。[方法]将78只大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组26只。按Zea Longa线栓法复制大脑中动脉缺血再灌注模型(MCAO/R)。电针组给予针刺内关、人中、三阴交治疗,每日2次,持续治疗3 d。采用Zausinger 6分法评价神经功能,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积,苏木精-伊红(HE)染色观察海马组织病理损伤,流式细胞技术检测海马神经细胞凋亡率,Western Blot技术检测p-Akt(Ser473)、Bcl-2、Bax蛋白表达。[结果]电针组神经功能评分明显高于模型组(P<0.01),脑梗死体积明显小于模型组(P<0.01),海马组织病理损伤较模型组改善;电针组海马神经细胞总凋亡率明显小于模型组(P<0.05);电针组p-Akt蛋白、Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值较模型组均明显增大(P<0.05,P<0.01),Bax蛋白表达较模型组明显减小(P<0.01)。[结论]醒脑开窍针刺法可明显改善局灶性脑缺血再灌注大鼠的神经功能,减轻神经细胞凋亡,其作用可能通过激活PI3K/Akt信号通路起到脑保护效应。

虎杖甙对家兔肺缺血/再灌注损伤肺组织TLR4和ICAM-1表达的影响

目的:研究家兔肺缺血/再灌注损伤时Toll样受体4(TLR4)信号转导通路变化及虎杖甙(PD)对其影响。方法:复制在体肺缺血/再灌注损伤模型。健康日本大耳白免30只,随机分为对照(C)组、缺血/再灌注(I/R)组、PD组。鲎试剂试管法检测血浆内毒素(ET);RT-PCR法检测肺组织TLR4、核因子-κBp65(NF-κBp65)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA表达;苏木素-伊红(HE)染色,光镜观察肺组织形态学变化。结果:I/R组、PD组与C组相比血浆ET无显著差异(均P>0.05)。L/R组肺组织TLR4、NF-κBp65及ICAM-1mRNA表达较C组显著升高(均P<0.01); PD组上述改变较L/R组明显下降,但仍高于C组(均P<0.01);光镜见PD组肺组织结构损伤明显轻于I/R组。结论:PD治疗可以下调肺组织TLR4、NF-κBp65表达,进而抑制ICAM-1等炎症介质的转录和分泌,减轻肺缺血/再灌注损伤。

MAPK及PI3K-AKT信号通路活化在小鼠胃缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及PI3K-AKT信号通路在小鼠胃缺血再灌注损伤中的作用。方法实验鼠随机分为假手术组和再灌注0.5、1、2、4、6、12 h组,夹闭小鼠腹腔动脉30 min后松开动脉夹再灌注建立模型。分析计算胃黏膜出血面积百分比,Western blot法检测胃组织中磷酸化p38、JNK、ERK、AKT以及总AKT蛋白。结果再灌注组再灌注后各时间点胃黏膜出血面积明显大于假手术组(P均<0.01)。与假手术组相比,再灌注组再灌注后30 min^2 h,胃组织p38、JNK、ERK明显活化(P<0.01);12 h及24 h再灌注组ERK活化明显高于假手术组(P<0.01);再灌注组再灌注后各时间点AKT的磷酸化均明显高于假手术组(P均<0.01)。结论MAPK信号通路活化可能参与了小鼠胃缺血再灌注损伤过程;促修复的PI3K-AKT通路持续活化,可能参与了缺血再灌注后胃黏膜损伤的修复。

骨髓间充质干细胞在大鼠缺血-再灌注损伤眼的视网膜下移植

目的观察骨髓间充质干细胞移植于大鼠缺血再灌注损伤眼的视网膜下后生长、分化和迁移的情况。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞并传至第四代,建立大鼠眼缺血-再灌注损伤模型。将Brdu标记的BMSCs移植于大鼠缺血再灌注眼内的视网膜下,应用荧光免疫组织化学方法示踪移植后10、20、30天视网膜中Brdu标记的BMSCs的分布情况。结果移植后10d荧光显微镜下见大部分Brdu标记的BMSCs在移植区城周围成簇聚集。移植后20d观察发现BMSCs分布较多的位置为外核层。移植后30d可见BMSCs部分出现在节细胞层并且连接成片。在移植后整合于视网膜的BMSCs中,部分细胞显示NSE、GFAP、NF200阳性。结论移植于缺血再灌注损伤眼视网膜下的BM-SCs具有向损伤部位迁移和分化为神经样细胞的能力。

骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的修复作用

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养方法,建立大鼠肝脏缺血-再灌注损伤动物模型,观察骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的修复作用。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,建立大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的模型。动物模型制备后,将30只大鼠随机分为实验组(即尾静脉注入骨髓间充质干细胞0.5 ml,约106个)10只,阴性对照组(尾静脉注入生理盐水0.5 ml)10只。以正常大鼠作为空白对照组10只。结果各组大鼠于1周,2周,4周进行采血,取脏器进行各项指标检测。肝脏缺血-再灌注损伤大鼠在第1周实验组和阴性对照组的丙氨酸转移酶(ALT)、门冬氨酸转移酶(AST)和丙二醛(MDA)均明显高于空白对照组,差异显著,P<0.05。第2周时,实验组大鼠ALT、AST和MDA与阴性对照组比较,明显低于阴性对照组P<0.05,但SOD明显高于阴性对照组P<0.05。第4周时,实验组大鼠ALT、AST和MDA与阴性对照组比较,明显低于阴性对照组P<0.05。但实验组与空白对照组MDA和SOD有差异P<0.05。结论大鼠骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的修复可起促进作用。

雌激素对大鼠肠缺血再灌注损伤时TNF-α、ICAM-1表达的影响

目的探讨雌激素对大鼠肠缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用以及对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达的影响。方法青春期大鼠随机分为4组(各组n=15),假手术组未切除卵巢,其余3组行双侧卵巢切除术后隔天皮下分别注射蓖麻油(对照组)、雌二醇(E2,E2组)、高剂量的E2(5E2组)4周。各组大鼠行肠系膜上动脉夹闭30min后行再灌注。血清标本测E2浓度,小肠黏膜行黏膜病理评分、TNF-α和I-CAM-1mRNA表达测定。结果对照组、假手术组、E2组和5E2组的血清雌二醇浓度依次增加(各组间P均<0.01)。黏膜病理评分E2组低于其他3组(P<0.01)。组织TNF-α、ICAM-1mRNA表达在E2组最低,对照组最高;E2组的组织TNF-α、ICAM-1mRNA表达比对照组低(P均<0.01)。结论雌激素对大鼠肠I/R损伤有保护作用,该保护作用与抑制TNF-α、ICAM-1表达有关。

含饱和氢气HC-A肾保存液减轻大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤的研究

目的:研究含饱和氢气的HC-A肾保存液对大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠24只随机分为3组(n=8)。H1组大鼠仅接受右肾切除;H2组大鼠为冷缺血再灌注模型,以腹主动脉插管和下腔静脉缺口作为灌注和流出通路,用4℃普通HC-A肾保存液对左肾行原位冷灌注,灌注完成后阻断左肾动、静脉,缝合腹主动脉和下腔静脉缺口。阻断45min后移除血管夹,冲洗腹腔后关腹;H3组仅灌注液换用自制的4℃含饱和氢气的HC-A肾保存液,其它处理同H2组。3组大鼠均于24 h后再次手术,取血标本,测定BUN和Cr浓度,评估肾功能。切取左肾,检测肾组织中MDA的水平和SOD、caspase-3的活性,并在光镜下观察肾组织形态学的改变。结果:与H2组相比,H3组BUN、Cr、MDA的水平和caspase-3活性降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05)。光镜下,H3组肾组织病理损伤较H2组减轻。结论:含饱和氢气的肾保存液能减轻大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤。

右美托咪定对大鼠I/R损伤肺组织TLR4表达及保护作用的影响

目的:探讨右美托嘧啶对大鼠再灌注损伤肺组织Toll样受体素4(TLR4)表达的调控,并分析其对肺保护作用机制。方法:采用大鼠在体左侧肺缺血/再灌注(I/R)模型,50只健康雄性成年SD大鼠随机分为5组(n=10):对照组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、右美托咪定组(Dex组)、阿替美唑组(Atip组)、右美托咪定+阿替美唑组(Dex+Atip组),实验结束后处死大鼠,留取左肺,检测肺湿干重比(W/D)和总肺水含量(TLW);光镜下观察肺组织形态结构变化;PCR检测肺组织TLR4 mRNA表达;Western blot检测肺组织TLR4的蛋白表达。结果:与Sham组相比,其余各组W/D和TLW明显升高(P<0.05,P<0.01),TLR4 mRNA和蛋白表达量上升(P<0.01),光镜显示肺组织结构出现明显损伤性变化;与I/R组相比,Dex组W/D和TLW下降(P<0.05,P<0.01),TLR4 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.01),光镜下肺组织损伤减轻;与Dex组比较,Dex+Atip组W/D和TLW明显升高(P<0.05,P<0.01),TLR4 mRNA和蛋白表达量上升(P<0.01),光镜肺组织结构损伤严重;I/R组、Atip组、Dex+Atip组两两比较,以上各指标均无统计学差异(P>0.05)。结论:I/R可引起大鼠肺组织TLR4表达上调和肺组织损伤;右美托咪啶可减轻肺I/R损伤,抑制TLR4表达,这种作用与α2-肾上腺素能受体有关。

NGAL在大鼠肾脏缺血再灌注损伤不同时段中的表达及意义

目的 探讨大鼠肾脏缺血再灌注损伤不同时段中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）表达在急性肾损伤中的意义.方法 建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型,46只大鼠随机分为A组和B组,各23只.观察各组肌酐、血尿素氮、β2-微球蛋白、血NGAL的变化.结果 A组血肌酐于48 h开始显著升高（P〈0.05）;尿素氮于6 h升高于48 h达高峰（P〈0.01）;β2-微球蛋白于12 h升高至48 h达高峰（P〈0.01）;NGAL于2 h开始升高,于24 h达高峰,至48 h仍高于正常（P〈0.05）;病理改变：A组大鼠受损肾小管2 h时可见刷状缘消失,管腔扩张,上皮细胞肿胀;6 h时上皮细胞有少量脱落、变性甚至坏死,可见管腔内有蛋白管型,细胞碎屑出现;12 h时可见管腔被间质水肿压迫后明显狭窄,24～48 h可见蛋白管型显著增多.结论 血NGAL可作为肾脏缺血再灌注损伤早期特异和敏感的标志物.

淫羊藿配伍维生素C对大鼠运动性肾脏缺血再灌注的保护作用

本文对淫羊藿配伍维生素C对大鼠运动性肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制进行了研究。试验中对大鼠以6.01 g.kg-1的剂量的淫羊藿灌胃,100 mg.kg-1的维生素C腹腔注射56 d,并进行力竭游泳训练、血尿素氮等生化指标测定。结果显示,8周的过度训练导致大鼠运动性肾缺血"再灌注",肾组织组织病理学发生明显改变,肾功能受到严重损坏。血尿素氮和血清肌酐上升,EOM组(P<0.05)、VCOM组(P<0.05)、EVCOM组(P<0.01)低于OM组;EOM组(P<0.05),EVCOM组(P<0.01)低于VCOM组。SOD活性降低,EOM组(P<0.05)、VCOM组(P<0.05)、EVCOM组(P<0.01)高于OM组;EOM组(P<0.05),EVCOM组(P<0.01)高于VCOM组。MDA含量升高,EOM组(P<0.05)、VCOM组(P<0.05)、EVCOM组(P<0.01)低于OM组;EOM组(P<0.05),EVCOM组(P<0.01)低于VCOM组。从而说明淫羊藿和维生素C均可以增强SOD活性,清除氧自由基,减轻脂质过氧化,对运动性缺血再灌注肾脏具有保护作用。淫羊藿作用优于维生素C。二者配伍使用效果更好。

纳洛酮对缺血再灌注海马细胞线粒体功能保护作用的研究

目的观察缺血再灌注期间海马细胞内游离钙离子、线粒体膜电位的变化以及纳洛酮对细胞的保护作用。方法20只新西兰大白兔随机分成4组对照组、缺血组、再灌注组、纳洛酮组,每组5只,然后以荧光染色流式细胞仪检测各实验组海马细胞内游离钙离子浓度和线粒体膜电位的变化。结果缺血组、再灌注组海马细胞内游离钙离子浓度显著高于对照组和纳洛酮组;其线粒体膜电位则低于对照组和纳洛酮组;再灌注组游离钙离子浓度明显高于缺血组;其线粒体膜电位则低于缺血组;对照组与纳洛酮组间各指标无显著差异。结论纳洛酮对缺血再灌注引起的海马细胞内钙离子浓度升高有抑制作用,对线粒体膜电位下降有一定的保护作用。

rhKD/APP对肾脏缺血再灌注损伤大鼠的肾保护作用

目的观察对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护和治疗。方法取wistar大鼠60只,根据给药不同随机分为6组,伪手术组,模型组,小、中、大剂量组、对照组。造模24小时后检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、尿NAG,并光镜、电镜观察肾脏组织病理变化。结果各实验组与伪手术组比较Cr、BUN、NAG明显升高(P<0.05),与模型组比较rhKD/APP中、大剂量组、对照组Cr、BUN、NAG明显降低(P<0.01 orP<0.05),小剂量组无明显差异。光镜电镜观察rhKD/APP中、大剂量组、对照组细胞损害较模型组明显减轻。结论rhKD/APP对大鼠肾缺血再灌注损伤确实具有器官保护作用。

缺血预处理对未成熟心肌的保护作用

目的研究单纯缺血预处理对未成熟心肌缺彬再灌注损伤的保护作用。方法20只健康新西兰幼兔（3—4周龄），利用Langendorff灌注装置灌注其离体心脏，建立全心缺血／再灌注模型。KH液自主动脉逆行灌注心脏，向球囊缓慢注入生理盐水，调整至左室舒张末压（LVEDP）为10mmHg（1 mmHg=0．133kPa），平衡灌注心脏15min，随机等分为两组：对照（Control）组：继续灌注15min；缺血预处理（IPC）组：缺血5分钟，再灌注10分钟。然后两组心脏均st．Thomas停搏液诱导停跳，常温（37℃）缺血60min（保湿保温），再灌注60min。记录冠脉流量（CF），多导生理记录仪记录左心功能指标，硫代巴比妥酸法测定心肌细胞内丙二醛（MDA），高压液相色谱测心肌细胞内三磷酸腺甘（ATP）含量，自动生化分析仪测量冠脉流出液中磷酸肌酸激酶（CK）、磷酸肌酸激酶同工酶（CK—MB）、乳酸脱氢酶（LDH）含量，计算心肌含水量（WC）。结果除IPC组再灌注60min时点的CF恢复率与对照组相近，其余再灌注时点IPC组的LVDP恢复率、＋dp／dtmax恢复率、-dp／dtmax恢复率和CAF恢复率均优于对照组。IPC组LDH、心肌含水量、MDA低于对照组，而ATP高于对照组。结论单纯预处理能减轻未成熟心肌缺血／再灌注损伤。

小檗胺减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用及其分子机制

目的观察小檗胺(berbamine,BM)对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)的保护作用并探求其分子机制。方法 32只8周龄SD大鼠随机分为4组:缺血再灌注损伤组(IR)、小檗胺给药组(BM+IR)、小檗胺给药加抑制剂组(EX527+BM+IR)和单独加抑制剂组(EX527+IR)。离体心脏行Langendorff灌流,建立缺血再灌注损伤模型;记录左室发展压,观察心肌梗死面积;HE染色法观察心肌纤维形态学改变;检测冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB isoenzyme,CK-MB)释放量,线粒体中琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase,COX)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;Western blot法检测沉默信息转录调控因子1(SIRT1)、乙酰化叉头转录因子1(Ac-foxo1)以及凋亡和氧化应激相关蛋白的表达。结果 BM预处理可显著改善I/RI后离体心脏心功能,降低心肌梗死面积,减轻肌纤维断裂及紊乱程度(P<0.05);明显降低冠状动脉流出液中LDH和CK-MB的释放量(P<0.05);明显下调凋亡及氧化应激相关蛋白表达,升高线粒体中SDH、SOD、COX的活性,同时降低MDA的含量(P<0.05);明显上调SIRT1蛋白表达,下调foxo1的乙酰化水平。而给予SIRT1阻断剂EX527均可显著逆转BM的上述保护效果(P<0.05)。结论 BM可发挥抗氧化应激损伤与抗凋亡作用减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤并改善心功能,其作用机制可能与其激活SIRT1分子并降低foxo1的乙酰化水平有关。

巨噬细胞亚型转变在大鼠肾脏缺血/再灌注损伤中的作用

目的:探讨巨噬细胞在大鼠肾脏缺血/再灌注损伤过程中的亚型转变及意义。方法:将30只雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham,n=6)和缺血/再灌组(IRI,夹闭肾动脉45 min,n=24)。IRI组分别于术后0、6、24和72 h取肾组织,每个时相组6只大鼠。用HE染色观察肾组织损伤程度;免疫组化染色检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达;实时定量RT-PCR检测巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA的表达;免疫组织荧光染色检测MIF、单核巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及活化巨噬细胞标志物CD68的表达,流式细胞分析检测巨噬细胞M1和M2亚型的分布特征。结果:病理结果显示大鼠肾局部损伤情况和炎症细胞浸润程度在24 h时最为严重,之后逐渐恢复。PCNA在再灌后表达明显增加,6 h达峰值,72 h表达下降。相比于正常组,再灌组大鼠肾组织中MIF的rnRNA和蛋白表达明显升高;MCP-1表达则在6 h达峰值,随后下降;而CD68阳性的巨噬细胞数量明显增加,24 h达峰值,72 h表达下降。更进一步研究发现缺血/再灌注6 h时,M1亚型分布达最高值;之后随着缺血/再灌注时间延长,M1亚群相对含量开始下调,M2随之升高。结论:在肾脏缺血/再灌注早期,M1巨噬细胞介导的组织损伤发挥主要作用,随后M2型表达逐渐上调,并通过促进细胞增殖修复肾组织损伤。

盐酸戊乙奎醚(长托宁)抑制脑缺血/再灌注时谷氨酸的释放及受体机制研究

目的:观察盐酸戊乙奎醚对全脑缺血/再灌注大鼠易损区海马谷氨酸(Glu)及其受体(NMDAR1)的影响,探讨盐酸戊乙奎醚脑保护作用机制。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机分为3组(n=20):假手术组(A组);缺血再灌注对照组(B组);盐酸戊乙奎醚干预组,采用Pulsinelli-Brierley四血管阻断法制备全脑缺血模型,实验分两部分进行,各组随机选择10只大鼠于全脑缺血15 min再灌注1 h3、h6、h,采用脑微透析技术结合高效液相色谱(HPLC)检测大鼠海马细胞外Glu水平的变化,其余10只大鼠于再灌注3 h后灌流固定断头取脑,采用免疫组织化学方法,检测海马CA1区NMDAR1蛋白表达。结果:与缺血/再灌注组各对应时点相比较,盐酸戊乙奎醚干预组大鼠海马细胞外Glu含量明显降低,统计结果差异均有显著性(P<0.05或P<0.01);海马CA1区NMDAR1表达明显受抑制,积分光密度、阳性细胞面积、平均灰度值均存在显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:脑缺血/再灌注早期应用盐酸戊乙奎醚不仅减少兴奋性氨基酸释放,还能抑制NMDAR1的高表达而产生脑保护作用。

表观遗传学在肾缺血/再灌注损伤中的研究进展

肾缺血/再灌注(I/R)损伤是急性肾损伤和肾移植的病理基础。近年来随着对肾I/R损伤研究的不断深入发现,表观遗传修饰在肾I/R损伤的发生、发展过程中起重要作用。补体C3启动子发生DNA异常甲基化,抑制组蛋白甲基化和乙酰化转移酶具有肾保护作用,微RNA的不同表达与肾损伤和修复有关,长链非编码RNA可作为判断肾I/R损伤和预后的标志物,影响炎症反应及氧化应激损伤。未来,深入研究表观遗传修饰与肾I/R损伤发生、发展的关系,可能为肾I/R损伤的预防、诊断及治疗提供新的思路,保护肾功能。

黄连素预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨黄连素(Berberine,BBR)预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。30只雄性SD大鼠随机均分为假手术组(Sham)、心肌缺血/再灌注损伤组(IRI)和黄连素组(BBR)。检测各组大鼠心肌功能、病理形态、JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、p-NF-KB、NF-KB、白介素-6(IL-6)、白介素1(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果与Sham组相比,IRI组心肌失功,心肌病理改变,p-JAK2,p-STAT3,p-NF-KB,IL-6,IL-1和TNF-表达明显增加,而JAK2,STAT3和NF-KB表达无明显差异。与IRI组相比,BBR组IRI组心肌失功,心肌病理改变,p-JAK2,p-STAT3,p-NF-KB,IL-6,IL-1和TNF-表达明显减少,而JAK2,STAT3和NF-KB表达依然无明显差异。结论黄连素预处理可通过抑制JAK2/STAT3/NF-KB信号通路激活而减少炎症反应,从而减轻心肌缺血再灌注损伤。