黑眉锦蛇J-chain基因的克隆与序列分析

J-chain是由浆细胞产生的约15KDa大小的糖蛋白,其可以通过与IgM和IgA尾部半胱氨酸的连接启动多聚化过程并利用二硫键共价稳定地与多聚IgA和IgM结合。本研究克隆并分析了黑眉锦蛇(以下简称蛇)J-chain基因在各组织中的表达情况,发现与其它物种一致,J-chain基因中用于形成二硫键的半胱氨酸残基是高度保守的;蛇J-chain基因在脾脏、肠道中的表达量相对较高,这也正符合免疫球蛋白基因在各组织中的表达情况。蛇J-chain基因的克隆为研究其多聚免疫球蛋白的特点奠定了良好的基础。

一般情况下一维j原子链的求解及色散关系讨论

本文推导了一般情况下一维j原子链晶格振动的计算模型,并在简谐近似和最近邻近似下获得了晶格的运动方程组。令j=2,3分别计算了一维双原子链及三原子链晶格振动的色散关系,得到了与现有教材及文献相同的结论。本文还讨论了原子质量顺序、恢复力系数顺序等特有晶体结构参数及原子质量大小、恢复力系数大小、晶格常数等一般晶体结构参数对一维三原子链晶格振动色散关系的影响。本文内容可为固体物理教学提供额外的教学素材,帮助学生深入理解晶格振动相关内容,也可为工程上带通滤波器的研发提供一定的参考。

基于改进雅克比–旋量模型的航空发动机转子–叶片结构装配精度分析

转子–叶片是航空发动机的核心部件,具有装配结构复杂、装配难度大等特点,在高温高压条件下,转子–叶片装配误差被催化放大,容易导致疲劳裂纹等故障,严重影响整机安全性和可靠性。针对转子–叶片结构,传统的装配偏差分析方法常采用多特征并联结构中的一条支链作为单一主链来建立偏差传递模型,难以综合考虑转子–叶片复杂定位结构和局部并联关系。本文提出了基于改进的雅可比–旋量(Jacobian–Torsor,J–T)模型的转子–叶片装配偏差分析方法。首先分析了转子–叶片多级回转结构、止口定位结构和榫头榫槽结构,建立了考虑转子–叶片多特征局部并联关系的整机装配尺寸链;然后采用不完全定位策略将转子–叶片装配结合面表达为基于点接触形式的偏差旋量,建立了基于定位点系统的转子–叶片联合定位基准方案;最后提出转子–叶片装配精度指标及基于改进的雅克比–旋量模型的求解方法。以某航空发动机转子–叶片的径向、轴向和周向装配偏差分析为例,将传统雅克比–旋量模型、基于蒙特卡洛法的仿真模型、改进雅克比–旋量模型及实测结果进行了对比分析。结果表明,本文方法相较其他方法预测精度更高,与实测结果误差率不超过9%,提出了榫头榫槽更合理的装配连接方式。

扁桃体灭活菌株对IgA肾病扁桃体CD4^+CD25^+细胞和J链产生的影响

目的:以扁桃体隐窝内甲型链球菌(HS)灭活菌株刺激IgA肾病(IgAN)患者和非肾炎患者扁桃体淋巴细胞,观察未刺激及刺激后CD4+CD25+细胞和分泌J链IgA细胞数量,探讨IgAN的发病机制。方法:(1)收集37例IgAN患者及37例非肾炎慢性扁桃体炎患者手术摘除的扁桃体;(2)分离鉴定两组患者扁桃体隐窝内细菌及分离培养扁桃体淋巴细胞;(3)以分离最多的灭活菌株HS体外刺激扁桃体淋巴细胞72h;(4)以流式细胞仪检测扁桃体淋巴细胞CD4+CD25+细胞数,以原位杂交技术检测J链mRNA表达,以免疫荧光及荧光原位杂交技术同步分析分泌J链IgA细胞。结果:(1)两组患者均有甲型链球菌,且甲型链球菌在分离的细菌中是最多的。两组患者的细菌谱和细菌量无统计学差异。(2)未刺激、非肾炎患者HS(HS-controls)、IgAN患者HS(HS-IgAN)刺激后CD4+CD25+细胞数[(0.98±0.204)% vs (3.58±0.554)%,P<0.05,(1.37±0.214)% vs (5.78±0.562)%,P<0.05,and(1.43±0.202)% vs (6.05±0.521)%,P<0.05],IgAN组与非肾炎组比较,前者均显著低于后者。HS对IgAN组CD4+CD25+细胞的刺激指数(stimulation index,SI)显著低于非肾炎组(P均<0.05)。(3)未刺激、HS-controls、HS-IgAN刺激后J链mRNA阳性IgA细胞[(11.9±3.1)% vs (6.5±1.5)%,P<0.05,(33.5±5.7)% vs (13.9±1.2)%,P<0.05,and(35.1±6.2)% vs (13.9±1.2)%,P<0.01],IgAN组与非肾炎组比较,前者均显著高于后者。HS对IgAN组J链mRNA阳性IgA细胞的SI显著高于非肾炎组(P均<0.01)。(4)HS对CD4+CD25+细胞的SI与对分泌J链IgA细胞的SI呈显著性负相关(P均<0.01)。结论:IgAN患者扁桃体CD4+CD25+细胞减少和分泌J链IgA细胞增多可能与IgAN的发病机制有关。

带J链的α-防御素-1的基因重组和表达载体的构建

目的 将α防御素 1(HNP 1)改建为一种杀菌分子J链α防御素 1(J HNP 1) ,这种杀菌分子具有与细胞膜上具备的多聚IgA受体(PIgR)相结合而进入粘膜上皮细胞的能力,发挥其杀菌作用。即克隆人Jchain HNP 1嵌合基因DNA ,并构建真核表达载体。方法 将从pCH质粒中获取的J链片段,采用人工连接方法与HNP 1片断相连接,并将其构建于新型哺乳动物细胞质粒表达载体pcDNA3 .1( ) Myc HisC中,进行序列测定。结果 经过重组得到的J链防御素 1的目的片断为786bp ,序列分析与GenBank中报道的编码J链及HNP 1成熟肽的序列完全一致。结论 Jchain HNP 1嵌合基因DNA的克隆和哺乳动物细胞表达载体的构建,为进一步进行抗菌肽的研究及制备奠定了基础。

人J链基因的克隆及原核表达研究

目的用基因工程技术在大肠埃希菌中表达人J链基因重组蛋白,为研究其功能及开发检测J链抗原的试剂盒奠定基础。方法提取人脾细胞总RNA,以此为模板,通过RT-PCR的方法获得J链基因。将该基因克隆到表达载体pET-22b(+)中,构建J链表达载体,测序证实正确后转化至EcoliBL21(DE3),IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE,表达产物经免疫印迹法(western blot,WB)鉴定其免疫反应性。结果测序结果证实笔者成功地获得了J链基因,其序列与GenBank中报道完全一致。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白在EcoliBL21中获得表达,其相对分子量约为15KD左右,表达的蛋白量约占菌体蛋白的15%。结论成功克隆了人免疫球蛋白J链基因,并在大肠杆菌中获得表达。

人α-防御素-1基因与J链基因的融合及其表达载体的构建

目的本研究旨在将α-防御素-1(HNP-1)基因与J链基因进行融合使其成为融合基因J-HNP-1。方法从pCH-J质粒中扩增出J链;从pBabeNeo-HNP-1质粒中扩增出HNP-1;然后以它们的自身产物为模板,进行重组PCR,获取J-HNP-1 DNA片段,并插入编码双重报告基因Myc和6个多聚组氨酸(His)的哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-HisC中,构建出C端带Myc和6×His的rpcDNA3.1(-)/Myc-HisC/J-HNP-1。结果经过重组得到的融合基因J-HNP-1的目的片段为786 bp,与预测相符。结论杀菌分子J-HNP-1的重组和哺乳动物细胞表达载体的构建,为进一步进行抗菌肽的研究及制备奠定了基础。

C端带Myc和多聚组氨酸双重标签基因的改构体J-HNP-1在COS-7细胞的转染表达

目的改构α-防御素-1(HNP-1)使其成为一端带J链的改构体J-HNP-1分子,并探索建立能有效表达和分泌J-HNP-1,其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳动物细胞表达系统。方法利用重组PCR技术,使HNP-1一端带上J链;将J-HNP-1 DNA片段插入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-HisC中,构建出C端带Myc和6×His的rpcDNA3.1(-)/Myc-HisC/J-HNP-1;将此重组真核表达载体导入COS-7细胞,分别从mRNA和蛋白质水平分析J-HNP-1的表达情况,并同步检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性。结果采用RT-PCR法从被转染的细胞中扩增出1条约786bp的片段,其大小与预测相符;采用Western印迹法,用抗His抗体检测到细胞可溶性蛋白及培养上清在相对分子质量约24×103处有强反应条带显示;细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性检测显示,经rpcDNA3.1(-)/Myc-HisC/J-HNP-1转染的COS-7细胞的可溶性蛋白和培养上清均有明显的抗菌活性。结论α-防御素-1(HNP-1)被成功改构成杀菌肽J-HNP-1;所建立的J-HNP-1哺乳动物细胞表达载体系统能有效表达和分泌活性J-HNP-1。

带J链的α-防御素-1基因转染COS-7细胞后的表达检测

目的将α防御素1(HNP 1)基因与J链基因重组为一种新的杀菌肽分子J HNP 1,观察J HNP 1在细胞内的表达及分泌情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法分别从pCH J质粒和pB abeN eo HNP 1质粒中扩增出J链和HNP 1;进行重组PCR,获取J HNP 1 DNA片段,并插入哺乳动物细胞表达载体pcDNA 3.1()/M yc H isC中;用脂质体转染法将此重组真核表达载体导入CO S 7细胞,然后应用蛋白质免疫印迹法(W estern b lot)检测H is tag标签基因。结果用抗H is抗体检测到细胞可溶性蛋白及培养上清在约24 ku处均有强反应条带显示,其大小与预测相符;对照组未见相应条带显示。结论采用W estern b lot检测到新的杀菌肽分子J HNP 1在细胞内得到表达并分泌到细胞外,为进一步研究J HNP 1杀菌肽的抗菌活性奠定了基础。

Channel catfish重组激活基因克隆与鉴定

目的 尝试用简并引物扩增序列未知的channelcatfish基因组DNA中rag1基因的片段并测序 ,为rag1基因的早期进化模式和遗传学变异情况的研究提供直接的证据。方法 基于rag1基因的高度保守设计简并引物 ,PCR扩增channelcatfish基因组DNA中rag1基因的片段 ,TA克隆并双向测序。将所得序列资料拼接 ,用多种生物信息学方法分析其ORF、内含子、与其它物种rag1基因及Rag1蛋白的相似性 ,并做多序列比较和系统进化树分析。结果 扩增出 3条chan nelcatfishrag1基因的DNA片段。从拼接后的序列中找到一 2 2 3 5bp的ORF和一 2 93bp的内含子 ,所得序列与其它物种rag1基因的相似程度高 (多大于 70 %) ,去除内含子后的channelcatfishrag1基因序列与zebrafish、rainbowtrout、bullshark的rag1基因cDNA全序列碱基一致的位点占 43 9%,自第 13 5 2位碱基至 2 92 5位碱基为 5 3 1%,而自第 1位碱基至 13 5 1位碱基为 3 3 2 %,有非常显著的差异 (P <0 .0 1)。结论 用简并引物成功扩增出channelcatfishrag1基因的DNA片段。序列在GenBank中的登记号是 :AY42 3 85 8(去除内含子序列 ) ,AY42 3 85 9。rag1基因进化缓慢 ,高度保守 ,不同物种rag1基因的变异相对集中在氨基末端的区域。系统进化树分析显示了 13种硬骨鱼在进化上关?

妊娠高血压综合征患者载脂蛋白J基因的筛查

目的 :探讨载脂蛋白J(apoJ)基因在妊娠高血压综合征 (妊高征 )遗传背景中的地位。方法 :运用聚合酶链反应 变性梯度凝胶电泳 (PCR DGGE)技术对 5 0例妊高征患者和 5 0例正常孕妇的apoJ基因外显子进行了多态变异筛查。结果 :对apoJ基因 5号外显子筛查 ,共检出 38例杂合子和 1例纯合子 ,其中正常孕妇组有 2 5例杂合子和 1例纯合子 ;妊高征组有 1 3例杂合子 ,有 1例的 7号外显子也为杂合子。 5号外显子的杂合子多态变异基因型频率在妊高征组为 2 6 % ,显著低于对照组的 5 2 % (P <0 0 1 )。其余外显子DGGE未检出异常电泳条带。结论 :apoJ基因

公路运输业向第三方物流涌入的动因分析

介绍了物流及第三方物流的概念,以及我国应用第三方物流的现状,对公路货运业的发展现状进行了阐述和概括.从价值链角度对公路货运业涌入第三方物流的动因进行分析.最后对公路货运业涌入第三方物流提出对策和建议.

福建省蛋鸡血管瘤型J亚群白血病的分子生物学诊断

针对福建省某鸡场的蛋鸡群发生产蛋下降和部分死亡,病鸡脚趾明显呈现血管瘤特征,运用实时荧光定量PCR方法对病鸡组织和血液样品进行检测,检出了J亚群白血病病毒(ALV-J);通过基因序列的比较分析,发现其氨基酸序列与国外及国内其他省份报导的ALV-J有很高的同源性,从病原分子生物学诊断角度证实福建省蛋鸡群中ALV-J的存在。

人鼠嵌合弓形虫免疫球蛋白M重组抗体制备及J链对其聚体形成的影响

目的体外制备人鼠嵌合弓形虫免疫球蛋白M(TOX-IgM)抗体,并验证加入J链对IgM抗体蛋白聚体、效价及稳定性的影响。方法从美国国家生物信息中心数据库获取抗体的重链可变区、轻链可变区以及J链序列,通过DNA重组技术分别将TOX抗体轻重链可变区和人源恒定区进行拼接,构建人鼠嵌合IgM表达载体,转染HEK 293F细胞进行表达。观察J链相关效应。结果J链有利于抗体聚体形成(聚体占比由11.3%提升至75.5%),抗体效价由1∶40提升至1∶160;在37℃热稳定性实验及反复冻融实验中,TOX-IgM(J+)稳定性与TOX-IgM(J-)相当。通过酶联免疫吸附试验鉴定蛋白活性,本实验成功制备人鼠嵌合TOX-IgM抗体,经聚丙烯酰胺凝胶电泳还原显示,重链大小约为75000,轻链大小约为25000,符合预期;效价、稳定性、基质效应均满足需求。结论在连接链J链(15000蛋白)存在下,IgM抗体更易形成五聚体,即5个IgM单体通过二硫键和J链彼此之间相互连接,且经评价效价和稳定性均有了明显提升。

J-HNP-1多肽的重组及体外抗菌作用研究

目的:将α-防御素-1(HNP-1)基因与J链基因进行重组使其成为一种新的杀菌肽分子J-HNP-1,并将其构建于能有效表达和分泌活性J-HNP-1杀菌肽的哺乳动物细胞表达系统．方法:应用PCR技术从不同的质粒中获得J链基因和 HNP-1基因,然后应用重组PCR技术将这两个不同的基因连接在一起而成为J-HNP-1基因．将此基因克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3．1(-)／Myc-HisC中．用脂质体转染法将此重组子导入COS-7细胞,分别从 mRNA和蛋白质水平采用RT-PCR和Western blot分析 J-HNP-1的表达情况,并体外检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性．结果:获得的J链基因和HNP-1基因大小分别为489和 297 bp．采用RT-PCR法从被转染的细胞中扩增出一条约786 bp的片段,其大小与预测相符;采用Western blot 印迹法．用抗His抗体检测到细胞可溶性蛋白及培养上清在约Mr 24 000处有强反应条带显示;抗菌活性检测显示,经rpcDNA3．1(-)／Myc-HisC／J-HNP-1转染的 COS-7细胞的可溶性蛋白和培养上清均有明显的抗菌活性,抑菌圈的直径分别为34和43 mm．结论:重组J-HNP-1基因构建到哺乳动物细胞表达系统,并体外表达,具有抑菌作用．

论企业的绿色供应链管理

绿色供应链管理是把环境管理融入到整个供应链管理中,提高企业管理经济效益和环境绩效的一种新的战略管理模式。目前,国际上一些知名大公司已成为绿色供应链管理的实践先驱。加入WTO以后,我国企业势必参与世界贸易竞争,加强绿色供应链管理,将是企业降低成本、树立形象、创造声誉、并最终提升国际竞争力的关键。

免疫球蛋白J链与慢性乙肝中医证候肝纤维化相关性研究初探

对慢性乙肝中医证候蛋白质组学规律的探索研究中,发现慢性乙肝五种中医证型患者与正常人比较,存在多个蛋白质表达差异,其中,免疫球蛋白J链(IG-J)与慢性乙肝患者肝纤维化改变有较强的相关性。探讨免疫球蛋白J链作为肝纤维化标志物的可能性,为临床乙肝纤维化的无创伤性诊断提供了新的思路。为中医临床辨识慢性乙肝中医证候纤维化反应状况提供可供参考的客观化指标,最终为进一步探讨慢性乙肝中医证候本质提供科学依据。

一维j原子链晶格振动的色散关系

本文以一维j原子链晶格振动为理论计算模型,在简谐近似和最近邻近似下获得其晶格振动方程组,并分别令j=1,2,3得到了一维单原子、双原子以及三原子链晶格振动的色散关系,获得了与现有教材及文献中已有的相同结论.结果表明,本文所获得的一维j原子链晶格振动方程组具有一般性.紧接着以该组晶格振动方程组为出发点,通过数值模拟法分析原子间距、恢复力系数及原子质量等晶体结构参数对一维四原子链晶格振动色散关系的影响,进而加深了对固体物理学晶格振动相关内容的理解,并可为工程上带通滤波器的研发提供一定的参考.

乳腺癌的端粒酶活性检测

目的探讨端粒酶活性与乳腺癌的相关性、端粒酶活性检测在乳腺肿瘤诊断和判断预后中的意义。方法运用端粒重复扩增法（ＴｅｌｏｍｅｒｉｃＲｅｐｅａｔＡｍｐｌｉｆｉｅａｔｉｏｎＰｒｏｔｏｃｏｌ，ＴＲＡＰ）检测了３０树新鲜冰冻乳腺癌标本，以及２０例良性乳腺肿瘤组织和３０例癌旁正常乳腺组织。结果在新鲜乳腺癌标本３０例中２７例阳性，阳性率９０％，其中伴有淋巴结转移的１９例，阳性率１００％；３０例癌旁正常乳腺组织中有１例阳性，阳性率为３％；２０例良性乳腺肿瘤组织中均未检测出端粒酶活性。结论乳腺癌发生与端粒酶活性相关。提示在乳腺癌发生发展中可能存在着端粒酶活性的再激活，使乳腺癌细胞获得永生，端粒酶活性检测对于乳腺肿瘤的良、恶性鉴别具有十分重要的意义。端粒酶活性的抑制剂可能对乳腺癌的治疗有一定的作用。

焊接残余应力对深水立管力学性能的影响

在J型铺管时,焊接质量对于钢悬链线立管能否安全服役有着很大的影响。在系统研究焊接残余应力分布规律的基础上,运用整体模型和局部模型相结合的方法,研究了立管焊接残余应力对深水立管力学性能的影响。建模时使用ABAQUS软件模拟焊接过程,利用DFLUX子程序进行二次开发来编译双椭球热源模型,将焊缝及附近区域的网格进行加密细划。分析结果表明,焊接残余应力对深水钢悬链线立管焊缝中心线附近的强度影响很大,对于立管整体来说,焊接塑性区存在的范围很小,即使应力过大也不会造成承载面的全屈服而发生立管的塑性断裂;在焊接残余应力影响下,各水深立管管段所受的平均应力幅值均有所增大,疲劳损伤增加;J型铺管时建议采取一定的应力释放措施,以保证钢悬链线立管在使用年限内能够安全服役。