网状Meta分析在JAGS软件中的实现

JAGS是为了弥补WinBUGS软件和OpenBUGS软件而研发的一款基于贝叶斯统计的软件。该软件属于编程软件,自身独立拥有软件的一套贝叶斯运算函数及公式。JAGS软件具有操作界面简单,与系统兼容好,运行流畅,且与其他软件具有良好交互性的优点,能够完成各种类型的Meta分析。由于该软件自身缺乏对结果数据读取、解读以及图形绘制等功能,使得其的应用及推广较差;而其与其他软件具有良好交互性的这一特点,使其能够与R软件完美地相结合并充分地弥补该部分功能不足。本文以实例剖析的形式介绍了如何使用JAGS软件实现最复杂和最热门的网状Meta分析。

R软件调用JAGS软件实现网状Meta分析

JAGS(Just Another Gibbs Sampler)是为弥补BUGS软件无法在Unix或Linux等非Windows系统上运行的缺陷而研发的编程软件,其自身独立拥有一套贝叶斯理论运算函数及公式,具有操作界面简单、与系统兼容好、运行流畅、且与其他编程软件具有良好交互性等特点。然而,由于JAGS软件在结果数据读取、解读以及图形绘制方面存在功能性缺失,限制了其推广应用;通过R2jags、rjags及runjags程序包从R中调用JAGS软件则克服了这些缺陷。R2jags、rjags及runjags这3款程序包的工作原理均是在R语言的框架下通过调用JAGS软件来完成相关迭代运算,它们的功能结构基本相似,都具有操作简单、命令简洁、数据读取和结果汇总以及图形绘制功能较完善的特点,但在实践运用中仍存在差异。本文介绍了如何使用R软件通过R2jags、rjags及runjags程序包调用JAGS软件来实现网状Meta分析。

两个JAG1基因突变相关的双侧多囊性发育不良肾胎儿家系的遗传学分析

目的:探讨两个双侧多囊性发育不良肾(MCDK)家系的遗传学病因,为两个家系的遗传咨询及再次妊娠指导提供依据。方法:对两个16+周和18+周胎儿行详细超声检查,发现其双侧肾脏呈多囊性发育不良改变,经遗传咨询后胎儿父母决定终止妊娠。取胎儿皮肤进行全外显子组测序,并取父母外周血,采用PCR和Sanger测序验证基因突变位点。结果:全外显子组测序提示家系1胎儿携带JAG1基因c.2078_2079delGT(p.Cys693fs)杂合突变,该突变来自母亲;家系2胎儿携带c.3548_3552delAGAAG(p.Glu1183fs)杂合突变,该突变来源于母亲。结合超声表现及家族史等,这两个双侧MCDK家系的病因为JAG1基因突变相关的Alagille综合征。结论:两个双侧MCDK家系最终确诊为Alagille综合征。

外源性碱性成纤维细胞生长因子促进大鼠创面愈合的机制

背景:深入揭示外源性碱性成纤维细胞生长因子促进创面愈合的分子机制。目的:探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子对大鼠创面修复中巨噬细胞表型转换和肉芽再生的影响。方法:(1)体外细胞实验:分为正常对照组、低剂量碱性成纤维细胞生长因子组、高剂量碱性成纤维细胞生长因子组以及碱性成纤维细胞生长因子+丙戊酸组,其中低、高剂量碱性成纤维细胞生长因子组细胞培养基中分别添加100,200μg/L碱性成纤维细胞生长因子,碱性成纤维细胞生长因子+丙戊酸组细胞培养基中添加200μg/L碱性成纤维细胞生长因子和20 mmol/L Notch1/Jagged1激动剂丙戊酸。通过EdU实验、划痕实验、小管生成实验检测碱性成纤维细胞生长因子对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和血管新生的影响。(2)体内动物实验:SD大鼠按照随机数字表法分为模型组、低剂量碱性成纤维细胞生长因子组、高剂量碱性成纤维细胞生长因子组以及碱性成纤维细胞生长因子+丙戊酸组,构建大鼠全层皮肤缺损开放性创面模型,其中低、高剂量碱性成纤维细胞生长因子组皮下注射100,200μg/L碱性成纤维细胞生长因子,碱性成纤维细胞生长因子+丙戊酸组大鼠皮下注射200μg/L碱性成纤维细胞生长因子的同时腹腔注射10 mg/kg丙戊酸。给药7,14 d检测大鼠创面的愈合率;TUNEL检测创面组织中的细胞凋亡情况;酶联免疫吸附实验检测大鼠血清中丙二醛、超氧化物歧化酶、肿瘤坏死因子α和白细胞介素10水平;免疫荧光检测创面组织中巨噬细胞的表型转换情况;免疫组化检测创面组织中增殖细胞核抗原、CD31和血管内皮生长因子的表达;Western blot法检测创面组织中Notch1、Jagged1的表达。结果与结论:(1)与正常对照组相比,碱性成纤维细胞生长因子能明显促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移和血管新生,并且具有剂量依赖性;(2)与模型组相比,碱性成纤维细胞生长因子能明显促进创面的愈合,下调创面组织中的细胞凋亡率;降低大鼠血清中丙二醛和肿瘤坏死因子α水平,升高超氧化物歧化酶和白细胞介素10水平;促使创面组织中巨噬细胞向M2型转换,上调创面组织中增殖细胞核抗原、CD31和血管内皮生长因子的表达;抑制创面组织中Notch1、Jagged1的表达,并且均具有剂量依赖性。丙戊酸可部分逆转碱性成纤维细胞生长因子对创面愈合的促进作用。结果表明,碱性成纤维细胞生长因子能明显促进创面愈合与肉芽再生以及诱导巨噬细胞向M2型转换,这可能与调控Notch1/Jagged1信号有关。

基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂改善关节炎症的机制

目的基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂对佐剂关节炎大鼠关节炎症的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组,每组6只,除正常组外,其余组大鼠构建佐剂关节炎模型。致炎后第19天开始,复方雷公藤组给予340 mg/L复方雷公藤制剂混悬液灌胃,每天1次;甲氨蝶呤组给予0.95 mg/L甲氨蝶呤混悬液灌胃,每周1次;Notch1抑制剂组给予0.56 mg/L Notch1抑制剂混悬液尾静脉注射,隔天1次;正常组及模型组给予生理盐水灌胃,每天1次。各组均连续干预30 d。检测各组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数;末次灌胃结束后,HE染色观察关节滑膜组织病理学形态,ELISA法检测血清IL-1β、IL-4、IL-10、IL-13、TNF-α水平,流式细胞术检测外周血炎症极化标志物CD86、CD206表达情况,免疫组化及免疫印迹法检测关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显升高(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(除Notch1抑制剂组)、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显降低(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显升高(P均<0.05)。结论复方雷公藤制剂可有效减轻佐剂关节炎大鼠关节炎症反应,其机制可能与抑制Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路轴调控巨噬细胞极化,抑制促炎细胞因子的分泌有关。

BMP7过表达慢病毒载体构建及其对小鼠主动脉平滑肌细胞钙化的影响

目的构建骨形态发生蛋白7(BMP7)过表达慢病毒载体,分析BMP7过表达对小鼠主动脉内皮细胞Jagged1表达的影响及其对共培养血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响。方法根据目的基因信息Mouse-BMP7(NM_007557.3)和质粒信息pLVX-zsGreen-C1进行基因序列合成,构建BMP7过表达慢病毒。qPCR检测BMP7过表达慢病毒感染效率;Western blot检测其感染的小鼠主动脉内皮细胞Jagged1蛋白表达。将过表达BMP7慢病毒感染的内皮细胞与VSMCs共培养,茜素红染色观察共培养后VSMCs钙化情况。结果成功构建BMP7过表达慢病毒载体并转染至小鼠主动脉内皮细胞。qPCR检测结果提示,与正常对照组比较,BMP7过表达组的BMP7 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01),空载体对照组BMP7 mRNA无显著变化(P>0.05)。Western blot结果显示,BMP7过表达组内皮细胞Jagged1蛋白表达水平较正常对照组显著降低(P<0.01),而空载体对照组内皮细胞Jagged1蛋白水平较正常对照组无显著改变(P>0.05)。茜素红染色结果提示,与感染过表达BMP7慢病毒的内皮细胞共培养后,VSMCs的钙化程度明显增加。结论成功构建小鼠BMP7过表达慢病毒载体,并发现过表达BMP7可以降低小鼠主动脉内皮细胞Jagged1表达,并促进共培养的VSMCs钙化。

miR-203a-5p靶向调控JAG1对多发性骨髓瘤细胞增殖、周期调控的作用及机制研究

目的:探讨miR-203a-5p在多发性骨髓瘤(MM)中的生物学功能及其调控机制。方法:采用稳健排序整合方法对GEO数据库中的3个miRNA表达谱(GSE16558、GSE24371和GSE17498,包含131个MM样本和17个正常浆细胞样本)进行差异性表达整合分析。用慢病毒构建了能稳定过表达miR-203a-5p的MM细胞株。采用qRT-PCR方法检测MM细胞株RPMI8226及U266中miR-203a-5p的表达情况,并检测miR-203a-5p表达上调后对MM细胞增殖及细胞周期表型的影响。应用稳定表达miR-203a-5p的U226细胞进行裸鼠成瘤实验,评价miR-203a-5p在体内肿瘤发生中的作用。利用Target Scan和miRanda等生物预测软件预测miR-203a-5p的候选靶基因,利用荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和Western blot研究MM细胞中miR-203a-5p的潜在靶点。结果:miR-203a-5p在MM细胞系中的表达显著低于正常浆细胞。miR-203a-5p过表达可以抑制RPMI8226和U266细胞的增殖和细胞周期进展。动物体内实验表明,上调miR-203a-5p可以明显抑制体内肿瘤的生长。通过双荧光素酶报告基因实验证实了JAG1的3’UTR区域可以与miR-203a-5p结合,JAG1是miR-203a-5p的作用靶基因。此外,回复实验结果显示,过表达JAG1可以逆转由miR-203a-5p引起的细胞增殖抑制及周期阻滞。结论:miR-203a-5p通过靶向调控JAG1抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖和细胞周期进展,从而发挥抑癌作用,该分子有望作为一种基于miRNA的MM治疗靶点。

藤黄健骨胶囊对膝骨关节炎鼠软骨组织Notch1、Jagged1、炎性反应因子及基质金属蛋白酶表达的影响

目的探讨Notch/Jagged1信号通路对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型鼠软骨组织炎性反应因子及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)表达的影响,并揭示藤黄健骨胶囊可能的干预机制。方法60只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、仙灵骨葆胶囊组[0.27 g/(kg·d)]及藤黄健骨胶囊干预组[高剂量0.36 g/(kg·d)、中剂量0.18 g/(kg·d)、低剂量0.09 g/(kg·d)],每组10只。除假手术组外,其余5组采用改良Hulth法构建KOA大鼠模型,模型制备成功后,分别给予仙灵骨葆胶囊及相应剂量的藤黄健骨胶囊灌胃给药,假手术组和模型组给予0.9%(质量分数)氯化钠注射液。给药2个月后股动脉采血处死大鼠,取患侧膝关节软骨采用苏木精-伊红(HE)染色观察关节软骨组织的形态变化;ELISA法检测关节软骨组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Notch1和Jagged1含量变化;免疫组化法观察关节软骨组织中Col-Ⅱ、MMP-9、MMP-13、Notch1和Jagged1蛋白表达变化。结果与假手术组比较,模型组关节面脱落、严重破坏,软骨细胞分布紊乱;模型组软骨细胞Mankin(5.56±0.85)评分、IL-1β(11.13±2.19)、TNF-α(98.29±9.13)、Notch1(5.03±0.37)和Jagged1(222.54±36.87)含量均显著升高,MMP-9(1.54±0.72)、MMP-13(0.41±0.04)、Notch1(0.39±0.05)和Jagged1(0.38±0.05)等蛋白的免疫反应性均显著增强,Col-Ⅱ(0.15±0.04)蛋白的免疫反应性则显著降低(P<0.05)。与模型组比较,藤黄健骨胶囊0.36 g/(kg·d)剂量组软骨细胞形态和分布趋于正常;其软骨组织Mankin(2.86±0.48)评分显著降低,Col-Ⅱ(0.39±0.03)蛋白的免疫反应性则显著增强(P<0.05);藤黄健骨胶囊0.36、0.18 g/(kg·d)剂量组Jagged1(170.54±41.09、183.46±33.12)含量显著降低,MMP-9(0.68±0.25、1.14±0.49)和Jagged1(0.21±0.05、0.26±0.07)等蛋白的免疫反应性也均显著降低(P<0.05);藤黄健骨胶囊0.36、0.18、0.09 g/(kg·d)剂量组IL-1β(5.71±1.03、8.71±1.53、8.81±2.31)、TNF-α(63.42±10.01、67.46±11.68、71.88±15.63)和Notch1(2.95±0.39、3.56±0.37、4.22±0.33)含量均显著降低,同时MMP-13(0.21±0.02、0.27±0.04、0.31±0.09)和Notch1(0.19±0.06、0.24±0.05、0.28±0.04)等蛋白的免疫反应性也均显著降低。结论藤黄健骨胶囊可能通过促进KOA模型鼠关节软骨组织Notch/Jagged1信号通路下游蛋白Col-Ⅱ表达,抑制其Notch/Jagged1信号通路关键蛋白Notch、Jagged1、炎性反应因子及MMPs表达,延缓关节软骨退变,从而改善KOA的临床症状。

苦瓜皂苷G通过调控Notch/Snail1信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾功能减退及肾纤维化

【目的】观察苦瓜皂苷G对糖尿病肾病(DN)大鼠的治疗作用及机制。【方法】从55只大鼠中随机抽取45只采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法诱导DN模型。将造模成功的38只大鼠随机分为模型组9只、苦瓜皂苷G低剂量组9只、苦瓜皂苷G中剂量组10只、苦瓜皂苷G高剂量组10只。剩余10只大鼠设为正常组。对应灌胃给药4周后,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠24 h尿蛋白水平,血糖仪检测空腹血糖(FBG),全自动生化分析仪检测血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平,苏木素-伊红染色(HE)法观察大鼠肾组织病理学变化,采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western Blot法分别检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Notch1、锌指蛋白转录因子1(Snail1)、Jagged1 m RNA及蛋白表达情况。【结果】与正常组比较,模型组24 h尿蛋白、FBG、血清SCr和BUN水平及肾组织α-SMA、Notch1、Snail1、Jagged1 mRNA及蛋白水平显著升高,肾组织E-cad m RNA及蛋白水平降低,肾组织可见肾小球萎缩、肾小管扩张及间质纤维化;与模型组比较,苦瓜皂苷G低、中、高剂量组24 h尿蛋白、FBG、血清SCr和BUN水平及肾组织α-SMA、Notch1、Snail1、Jagged1 mRNA及蛋白水平显著降低,肾组织E-cad m RNA及蛋白水平升高,肾组织病理损伤得到改善。【结论】苦瓜皂苷G可有效改善DN大鼠肾功能障碍、减轻肾脏纤维化,其机制可能与通过调控Notch/Snail1信号通路,抑制α-SMA和Jagged1 mRNA及蛋白表达,增强E-cad mRNA及蛋白表达有关。

高同型半胱氨酸通过Notch1/Hes1信号通路促进HT22细胞自噬和凋亡

目的探讨高同型半胱氨酸(HHcy)引起神经细胞损伤的相关机制。方法采用HT22细胞,分为空白对照组(简称0组),高同型半胱氨酸组(Hcy 100μmol/L,简称100组),高同型半胱氨酸维生素B干预组(Hcy 100μmol/L+叶酸+维生素B12,简称100+fv组),空白对照+叶酸+维生素B12组(简称0+fv组)。通过透射电镜和流式细胞术观察自噬及凋亡;Western blotting、Real-time PCR检测Hes1、Hes5、Notch1、Jagged1、Bcl-2、Bax、P62、LC3II/LC3I表达。结果培养48 h后,高同型半胱氨酸组(100组)中死亡细胞明显增加(P<0.05)。流式细胞检测结果显示,高同型半胱氨酸组凋亡细胞比例均高于0组、100+fv组和0+fv组(P<0.05)。透射电镜观察显示,在高同型半胱氨酸组,线粒体肿胀、空泡化,自噬体增加。Western blot显示,在高同型半胱氨酸组,Bax/Bcl-2比值明显高于对照组和100+fv组(P<0.05);P62相对值明显低于对照组(P<0.05);LC3II/LC3I比值明显高于对照组和100+fv组(P<0.05);HES1、HES5、Notch1和Jagged1蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。Real-time PCR检测结果显示,在高同型半胱氨酸组,LC3 mRNA、Beclin1 mRNA明显高于对照组和100+fv组,P62mRNA明显低于100+fv组(P<0.05);Hes1 mRNA和Hes5 mRNA明显低于对照组、100+fv组和0+fv组(P<0.05)。Hes1 siRNA干扰后,Hes1和Jagged1表达量明显低于对照组,Notch1表达量无显著性差异(P>0.05)。结论高同型半胱氨酸能诱导HT22细胞自噬和凋亡增加,伴有Hes1和Jagged1基因表达下调。

红景天苷调节miR-26a-5p/JAG1/Notch-1信号轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨红景天苷(SAL)调节微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)/JAG1/神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch-1)信号轴对瘢痕疙瘩(KD)成纤维细胞(HKF)生物学功能的影响。方法将HKF细胞随机分为对照组(Control组)、SAL低浓度组(SAL-L组,50μmol/L SAL)、SAL高浓度组(SAL-H组,100μmol/L SAL)、SAL高浓度+miR-NC组(SAL-H+miR-NC组)、SAL高浓度+miR-26a-5p mimics组(SAL-H+miR-26a-5p mimics组)、SAL高浓度+NC-inhibitor组(SAL-H+NC-inhibitor组)、SAL高浓度+miR-26a-5p inhibitor组(SAL-H+miR-26a-5p inhibitor组)。CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;RT-qPCR检测各组细胞中的miR-26a-5p、JAG1和Notch-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中JAG1和Notch-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1的关系。结果与Control组相比,SAL-H组HKF细胞增殖能力(24 h)、迁移距离、侵袭细胞个数、S期细胞比例、JAG1和Notch-1 mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、miR-26a-5p表达显著增加(P<0.05);与SAL-H组和SAL-H+miR-NC组相比,SAL-H+miR-26a-5p mimics组相应指标变化与上述变化相同;miR-26a-5p inhibitor减弱了SAL-H对HKF细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,减弱了HKF细胞凋亡。miR-26a-5p靶向负调控JAG1表达。结论SAL可能通过上调miR-26a-5p,靶向抑制JAG1/Notch-1信号轴抑制HKF细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,改善KD。

丹皮酚抑制Notch1/Jagged1信号通路对妊娠糖尿病大鼠糖代谢紊乱的改善作用

目的探讨丹皮酚(PAE)抑制Notch受体(Notch1)/Notch配体(Jagged1)信号通路对妊娠糖尿病(GDM)大鼠糖代谢紊乱的改善作用。方法大鼠分为正常对照组(NC组)、模型组(GDM组)、低剂量PAE组(L-PAE组,100 mg/kg)、中剂量PAE组(M-PAE组,200 mg/kg)、高剂量PAE组(H-PAE组,400 mg/kg),高剂量PAE+Notch1信号激活剂Jagged1/FC嵌合蛋白组(H-PAE+JFC组,400 mg/kg+500 g/kg),每组12只。血糖仪测定大鼠空腹血糖(FBG)水平;胰岛素放射免疫分析试剂盒检测空腹胰岛素(FINS)水平;采用生化分析仪测定大鼠血清脂代谢指标;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、介素-6(IL-6)、瘦素(Leptin)、脂联素(APN)水平;微量法检测大鼠血清氧化应激指标;western blot法检测大鼠肝脏组织中Notch1、Jagged1、Hes1蛋白水平。结果与NC组比较,GDM组大鼠FBG(0 d、7 d、14 d)、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6、Leptin、MDA、Notch1、Jagged1、Hes1升高,FINS(0 d、7 d、14 d)、HDL-C、APN、GSH-PX、SOD、CAT降低(P<0.05);与GDM组比较,L-PAE组、M-PAE组、H-PAE组大鼠FBG(7 d、14 d)、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6、Leptin、MDA、Notch1、Jagged1、Hes1降低,FINS(7 d、14 d)、HDL-C、APN、GSH-PX、SOD、CAT升高(P<0.05),且具有剂量依赖性;Notch1信号激活剂可减轻高剂量PAE对GDM大鼠糖代谢紊乱的改善作用(P<0.05)。结论PAE可能通过抑制Notch1/Jagged1信号通路,改善GDM大鼠糖代谢紊乱。

尖锐湿疣患者组织中miR-34a-5p、JAG1的表达与HPV分型及复发相关

目的探讨miR-34a-5p、JAG1与人乳头瘤病毒(HPV)分型及预后的关系。方法尖锐湿疣皮损来自于2019年3月—2022年3月本院治疗的101例尖锐湿疣患者(均为HPV阳性),根据治疗后6个月是否复发分为复发组和未复发组;对照组皮损来自于同期行包皮环切术或外阴整形术的患者(98例)。采用qRT-PCR法检测两组皮损组织中miR-34a-5p、JAG1 mRNA水平;采用HPV基因分型检测试剂盒对尖锐湿疣患者进行HPV分型检测;采用Pearson法分析尖锐湿疣患者皮损组织miR-34a-5p与JAG1 mRNA水平的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-34a-5p、JAG1 mRNA水平对尖锐湿疣患者复发的预测价值。结果尖锐湿疣组miR-34a-5p水平显著低于对照组,JAG1 mRNA水平显著高于对照组(P<0.05)。尖锐湿疣患者组织miR-34a-5p与JAG1 mRNA水平呈负相关(r=-0.67,P<0.05)。与疣体直径<10 mm患者相比,疣体直径≥10 mm的患者皮损组织中miR-34a-5p水平显著降低,JAG1 mRNA水平显著升高(P<0.05)。与高危型和低危型患者相比,混合型尖锐湿疣患者组织中miR-34a-5p水平显著降低,JAG1 mRNA水平显著升高(P<0.05)。复发组miR-34a-5p水平显著低于未复发组,而JAG1 mRNA水平显著高于未复发组(P<0.05)。miR-34a-5p、JAG1 mRNA水平及二者联合预测尖锐湿疣患者复发的AUC分别为0.767、0.821、0.891。结论尖锐湿疣患者皮损组织中miR-34a-5p低表达,JAG1 mRNA高表达。二者与HPV分型及复发均相关。

基于Notch1信号通路调控巨噬细胞极化改善佐剂关节炎大鼠关节炎症的机制

目的:探讨Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号轴通过调控巨噬细胞向M2型极化对佐剂性关节炎(AA)大鼠炎症反应的影响。方法:大鼠随机分成3组(6只):健康组(NC)、模型组(MC)及Notch1抑制剂组(FLI),在致炎后12 d开始给予药物,并于30 d后检测各组大鼠的关节炎指数(AI)、右后足关节肿胀度(E);采用流式细胞仪测定CD80+和CD163+细胞在大鼠外周血巨噬细胞中的表达量;ELISA检测大鼠血清中IL-4、IL-10、IL-1β、及TNF-α的水平;Western Blot检测大鼠关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白的表达。结果:MC组AA大鼠的E及AI均明显高于NC组(P<0.01);CD80+细胞的表达显著高于对照组(P<0.01),而CD163+细胞的表达显著低于对照组(P<0.01);IL-1β、TNF-α表达水平明显升高(P<0.01), IL-4、IL-10表达水平明显降低(P<0.01);Notch1、RBP-Jκ、Jagged1、Hes1蛋白的表达量明显增加(P<0.01);与MC组比较,Notch1抑制剂组大鼠E、AI显著降低(P<0.01);CD80+细胞表达明显降低(P<0.01),CD163+细胞表达明显升高(P<0.01);IL-1β、TNF-α表达水平明显降低(P<0.05),IL-4、IL-10显著增加(P<0.01);Notch1、Jagged1、Hes1、RBP-Jκ蛋白表达量显著降低(P<0.05)。相关性分析表明,CD80+与Notch1、Jagged1、Hes1、RBP-Jκ呈正相关(P<0.01),CD163+与上述蛋白的表达呈负相关(P<0.01)。结论:阻断Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号轴可以调控巨噬细胞向M2型极化,减轻AA大鼠的炎症反应。

黄芩苷调节Notch/JAG1信号通路对舌癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨黄芩苷(Bai)调节Notch/JAG1信号通路对舌癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:用0、10、20、30、40、50和100μM Bai处理人口腔上皮细胞HOEC。将人舌磷癌细胞CAL27分为CAL27组(未处理的CAL27细胞)、L-Bai组(10μM Bai处理CAL27细胞)、M-Bai组(20μM Bai处理CAL27细胞)、H-Bai组(40μM Bai处理CAL27细胞)、VPA组(8mM Notch/JAG1通路激活剂VPA处理CAL27细胞)、H-Bai+VPA组(40μM Bai和8mM VPA共同处理CAL27细胞);MTT法检测Bai对人口腔上皮细胞HOEC细胞毒性和CAL27细胞活力的影响;流式细胞术检测CAL27细胞凋亡;Transwell检测CAL27细胞侵袭、迁移能力;Western blot检测上皮-间充质转化(EMT)蛋白以及Notch/JAG1信号通路蛋白表达。结果:0~100μM Bai对HOEC细胞无明显毒性影响。与CAL27组相比,L-Bai组、M-Bai组、H-Bai组OD值、细胞迁移、侵袭数量、vimentin、Snail蛋白水平、Notch1、JAG1蛋白水平依次显著下降(P<0.05),凋亡率、E-cadherin蛋白水平依次显著升高(P<0.05),而VPA组以上指标趋势相反;与H-Bai组相比,H-Bai+VPA组OD值、细胞迁移、侵袭数量、vimentin、Snail蛋白水平、Notch1、JAG1蛋白水平显著增加(P<0.05),凋亡率、E-cadherin蛋白水平显著减少(P<0.05)。结论:Bai可能通过抑制Notch/JAG1信号通路对舌癌细胞增殖、凋亡和EMT产生影响。

JAG2、INHBA、PD-L1蛋白在老年大肠癌组织中表达及与预后的关系

目的 探讨老年大肠癌患者肿瘤组织中Jagged 2蛋白(JAG2)、抑制素βA(INHBA)、细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)表达与预后的关系。方法 选择2017年5月至2019年5月在湖南省肿瘤医院接受手术治疗的112例老年大肠癌患者为研究对象,采用免疫组织化学法检测癌组织和癌旁组织中JAG2、INHBA、PD-L1表达。随访患者的生存时间,Cox回归模型分析JAG2、INHBA、PD-L1表达与老年大肠癌患者预后的关系。结果 患者癌组织中JAG2、INHBA、PD-L1阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化患者JAG2、INHBA、PD-L1阳性表达率高于中高分化患者,TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者JAG2、INHBA、PD-L1阳性表达率高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05)。Cox回归模型显示,肿瘤低分化、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、JAG2、INHBA、PD-L1表达阳性为影响老年大肠癌患者无进展生存时间的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。大肠癌患者癌组织中JAG2、INHBA、PD-L1阴性患者总生存率高于JAG2、INHBA、PD-L1阳性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。大肠癌患者癌组织中JAG2、INHBA、PD-L1阴性患者无进展生存率高于JAG2阳性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 老年大肠癌患者癌组织中JAG2、INHBA、PD-L1阳性表达率较高,且对预后评估具有重要意义。

APEX1介导Jagged1上调驱动结肠癌进展的机制

目的探讨APEX1介导Jagged1上调驱动结肠癌进展的机制。方法APEX1 siRNA转染NCI-H548和DLD1,构建APEX1低表达细胞;SW480和HT29转染APEX1 shRNA,构建APEX1超表达细胞。NCI-H548细胞用于构建APEX1超表达、Jagged1低表达、Jagged1超表达。将构建的NCI-H548-APEX1、NCI-H548-APEX1+Jagged1siRNA,NCI-H548-APEX1+Jagged1细胞注射小鼠体内用于肿瘤生长检测。通过Western blot分析人结肠癌细胞系中APEX1、Jagged1、Notch1和Notch3的蛋白表达。通过MTT试验检测细胞增殖。通过Transwell小室试验检测细胞迁移侵袭。用指定细胞的上清液培养HUVECs成管进行血管生成试验。通过卡尺测量异种移植小鼠肿瘤大小。结果NCI-H548和DLD1中APEX1、Jagged1、Notch1和Notch3蛋白表达较SW480、HT29升高(P<0.05),在APEX1高表达的NCI-H548和DLD1中,Jagged1和Notch蛋白表达较高。相反,在APEX1低表达的SW480、HT29中,Jagged1和Notch蛋白表达较低。在NCI-H548、DLD1等结肠癌细胞中转染APEX1 siRNA敲低APEX1后,Jagged1蛋白和/Notch蛋白水平显著降低(P<0.05),而在SW480-APEX1和HT29-APEX1细胞中,Jagged1蛋白/Notch蛋白平显著升高(P<0.05)。NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA细胞增殖较NCI-H548-APEX1降低(P<0.05),NCI-H548-APEX1+Jagged1细胞增殖较NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA升高(P<0.05)。NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA细胞迁移、侵袭能力较NCI-H548-APEX1降低(P<0.05),NCI-H548-APEX1+Jagged1细胞迁移侵袭能力较NCI-H548-APEX1+Jagged1siRNA升高(P<0.05)。NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA细胞血管生成量较NCI-H548-APEX1减少(P<0.05),NCI-H548-APEX1+Jagged1细胞血管生成量较NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA增多(P<0.05)。注射NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA细胞的小鼠肿瘤体积较注射NCI-H548-APEX1细胞减小(P<0.05),注射NCI-H548-APEX1+Jagged1细胞的小鼠肿瘤体积较注射NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA细胞增大(P<0.05)。结论APEX1通过上调Jagged1的表达,正向调节Notch信号通路,从而促进结肠癌在体内和体外的肿瘤发生。由于APEX1、Jagged1和cleaved Notch的水平在人类结肠癌细胞中密切相关,因此通过强烈激活Jagged1/Notch信号,药物靶向APEX1过表达可能是治疗或预防结肠癌的一种很有前景的方法。

JAG1影响单核-巨噬细胞重塑三阴性乳腺癌转移前微环境:基于外泌体中的LncRNA MALAT1

目的探讨JAG1对单核-巨噬细胞在三阴性乳腺癌(TNBC)中肿瘤转移前微环境(PMN)中作用的影响及其可能的调控机制,以期为TNBC诊疗提供新的思路和靶点。方法人TNBC细胞MDA-MB-231,MDA-MB-231B体外培养,qRT-PCR检测JAG1的表达。动物实验将雌性裸鼠分为MDA-MB-231组和MDA-MB-231B组,5只/组,分别往乳腺脂肪垫注射细胞5×10^(6),6周取肿瘤组织进行免疫组化分析。人源单核细胞THP-1为研究对象,分别经人源JAG1重组蛋白(rhJAG1)直接处理或经TNBC条件培养基(CM)处理,通过单核-内皮粘附、Transwell、qRT-PCR和Western blot实验检测JAG1对单核细胞的直接作用和在PMN中的影响。实验分为5组:Control组:THP-1正常培养;231-CM组:THP-1+231-CM;231-JAG1-CM组:THP-1+rhJAG1处理后231-CM;231B-CM组:THP-1+231B-CM;231-DAPT-CM组:THP-1+DAPT处理后231-CM。透射电镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)检测JAG1对TNBC外泌体分泌影响。生物信息学筛选与LncRNA MALAT1相互作用的miRNA并行qRT-PCR验证。结果与MDA-MB-231相比,侵袭株MDA-MB-231B的JAG1表达更高(P<0.01),肝转移面积更大;rhJAG1直接处理和TNBC条件培养基处理均能促进单核细胞的黏附、迁移,并影响其分化(均P<0.05);透射电镜和NTA检测显示JAG1能促进MDA-MB-231外泌体分泌数量增多(P<0.01),外泌体中LncRNAMALAT1含量升高(P<0.0001)。生物信息学分析得到与LncRNA MALAT1和JAG1相关的5个候选miRNA,实验证实miR-26a-5p在TMN中的单核-巨噬细胞中受到MALAT1的靶向调控(P<0.0001)。结论JAG1能促进TNBC的外泌体分泌并影响其中Lnc MALAT1的表达,从而靶向PMN中单核-巨噬细胞miR-26a-5p的表达,从而使单核-巨噬细胞中JAG1表达升高,进而影响单核-巨噬细胞在PMN中的黏附、迁移和破骨分化作用。

Circ_0007841通过miR-338-3p靶向JAG1促进肝癌细胞恶性生物学活性的机制研究

目的:探究肝癌恶性生物学活性的调控机制。方法:购买人源正常肝上皮细胞THLE-3与肝癌细胞系BEL-7405、SNU-387、MHCC-97H、HCCLM3、Huh7,转染si-0007841/NC或miR-338-3p inhibitor/NC至Huh7细胞,qRT-PCR检测circ_0007841、miR-338-3p、JAG1的表达。在各组Huh7中利用CCK-8、Transwell检测各组的增殖活力、迁移、侵袭能力变化。Circular RNA Interactome、miRWalk预测circ_0007841与miR-338-3p、miR-338-3p与JAG1的靶向关系,双荧光素酶报告实验验证靶向结合。结果:circ_0007841在HCC中呈高表达,抑制circ_0007841的表达可以抑制HCC的增殖活力与迁移、侵袭能力;进一步抑制miR-338-3p的表达后,可以部分逆转低表达circ_0007841对HCC恶性行为的遏制。在HCC中,circ_0007841可以靶向抑制miR-338-3p的表达,而miR-338-3p则可以靶向抑制JAG1的表达。结论:肝癌中高表达的circ_0007841通过竞争性结合miR-338-3p增加JAG1转录,最终促进肝癌细胞恶性生物学活性。

β-catenin、Notch1、Jagged1在胃癌变过程中的表达及意义

目的研究Wnt和Notch通路分子β-catenin、Notch1、Jagged1在胃癌变过程中的表达及意义。方法收集浅表性胃炎(n=30)、低级别上皮内瘤变(n=30)、高级别上皮内瘤变(n=30)及胃癌的胃镜活检组织标本,采用免疫组织化学法检测各组标本中β-catenin、Notch1、Jagged1的表达,并进行统计学分析。结果β-catenin、Notch1、Jagged1在浅表性胃炎、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变、胃癌4种组织中的表达阳性率随病变级别的加重均逐渐上调(P<0.05),且三者表达水平之间均呈显著正相关(P<0.001)。结论β-catenin、Notch1、Jagged1在胃癌变过程中的表达逐级上调,且三者可能互相协同,共同促进胃癌的发生。