地西他滨对MDS患者JAK2基因表达的影响及临床意义

目的:通过研究地西他滨对骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者JAK2基因表达的影响进一步明确JAK2基因是否可作为预示地西他滨对MDS疗效的阳性分子标志物。方法:回顾2011年11月至2014年11月在门诊及住院确诊为骨髓增生异常综合征的患者共22例(其中高危MDS-RAEB型10例,低危MDS-RA型12例),抽取同期健康体检者20例作为对照组,应用FQ-PCR方法监测正常人群、MDS-RA型患者、MDS-RAEB型患者化疗前、MDS-RAEB型患者单药地西他滨化疗2周期及4周期后外周血JAK2-V617F实时定量PCR拷贝数。结果:MDS-RAEB型患者经地西他滨单药化疗2周期后外周血JAK2-V617F基因实时定量PCR拷贝数由化疗前的22545.98±11084.17下降为14654.88±7205.41,两组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.01)。再经地西他滨单药化疗4周期后JAK2-V617F基因PCR拷贝数与化疗2周期后比,由14654.88±7205.41下降为9469.31±4655.56,比较差异有统计学意义(P<0.0l)。结论:地西他滨可降低MDS-RAEB患者中JAK2-V617F基因的表达,并且增加地西他滨化疗周期可使JAK2-V617F基因表达进一步降低。

4-苯基-吡咯并［2,3-d］嘧啶类JAK2激酶抑制剂的设计、合成和抗肿瘤活性

以JAK2激酶抑制剂鲁索替尼(ruxolitinib)为先导化合物,应用分子杂交的药物设计原理,通过结构修饰改造,设计、合成了一系列新的4-苯基-吡咯并[2,3-d]嘧啶类衍生物并进行初步的体外活性评价。以4,6-二羟基嘧啶为起始原料,依次通过Vilsmeier-Haack反应、S_NAr取代、成环、脱水、Suzuki偶联、酰基化等多步反应最终合成得到12个目标化合物(12a^12l),其结构经~1H NMR、^(13)C NMR、HRMS确证。对目标化合物进行体外JAK2激酶活性、GM-CSF诱导的TF-1细胞活性测试,结果表明,部分化合物(12b、12e和12h)具有一定程度的JAK2抑制活性;采用MTT法测试目标化合物对JAK2非依赖性A549细胞的抗增殖能力,结果显示,该类化合物A549细胞表现出良好的增殖抑制活性,尤其是化合物12c(IC_(50)=0.12μmol/L)活性最强,表明该类化合物具有潜在的研究开发价值。

大鼠肾小球系膜细胞活性氧簇JAK2/STAT5通路与TIMP-1之间的关系及对其凋亡的影响

目的:探讨高糖(HG)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)活性氧簇(ROS)、JAK2/STAT5信号通路与金属蛋白酶1组织抑制剂(TI MP-1)之间的关系及对其凋亡的影响。方法:在HG培养条件下的RMC中,根据是否使用DPI(NADPH氧化酶特异性抑制剂,可抑制ROS产生)和AG490(JAK2特异性抑制剂)刺激24 h,将RMC分为HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组四组。采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,RT-PCR检测各组RMC Bcl-xl、Cyclin D1、P27kip1、JAK2和TI MP-1 mRNAs的表达,Western blot检测胞浆中JAK2、STAT5及相应磷酸化蛋白的表达。结果:HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组的细胞总凋亡率分别为:(10.69±0.26)%、(20.52±0.51)%、(24.56±0.36)%和(26.01±0.28)%;加入AG490和(或)DPI后RMC总凋亡率明显升高(P<0.01),Bcl-xl、Cyclin D1、JAK2和TI MP-1 mRNAs表达显著减少,P27kip1 mRNA表达增加。AG490和(或)DPI可使各组RMC P-JAK2和P-STAT5的表达显著减少,尤其在加入DPI后减少更加明显。结论:HG条件下JAK2/STAT5信号通路受ROS调控;阻断ROS生成和(或)JAK2/STAT5信号通路,可使RMC TI MP-1 mRNA表达减少,凋亡增加。

真性红细胞增多症患者JAK2基因突变的临床意义

真性红细胞增多症(polycythemia vera,PV)为一种以红细胞增多为特征的骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasm,MPN)。PV的发病机制尚未阐明,可能和JAK2基因的功能获得性体细胞突变相关,JAK2基因突变为PV提供了分子学诊断标准。JAK2基因突变和等位基因突变负荷可推测PV患者的临床特征和发展趋势。JAK2基因突变的发现促进了分子靶向治疗的发展,JAK2抑制剂ruxolitinib已应用于临床,治疗效果和安全性均良好。JAK2等位基因突变负荷与白细胞增多、转化为骨髓纤维化(myelofibrosis,MF)密切相关,高JAK2等位基因突变负荷可能为PV患者预后不良的危险因素。本文对PV患者JAK2基因突变的临床意义进行综述。

JAK2V617F基因突变与骨髓增殖性肿瘤关系

长期以来,除慢性髓系白血病的发病与BCR-ABL融合基因有关外,其他骨髓增殖性肿瘤(MPNs)的发病机制仍不清楚,近年来大量研究证实,在多种MPNs中存在较高的JAK2基因突变率,并认为该突变可能是BCR-ABL阴性MPNs所特有的分子标志。该文就近年来对JAK2基因突变、MPNs的最新诊断和靶向治疗等方面的研究进展进行综述。

分子动力学模拟研究Fedratinib-JAK2/JAK3选择性

通过动力学模拟获得JAK2高选择性抑制剂Fedratinib在JAK2和JAK3激酶中的结合构象,结合自由能的计算结果表明Fedratinib在JAK2中更稳定.将能量分解到结合位点氨基酸,分析发现当分子在JAK2中占据P-loop区的疏水口袋,并与附近Arg980和Asp994等氨基酸形成氢键时,可以增加相对于JAK2的选择性.

JAK2Ⅱ型抑制剂CHZ868的合成

以廉价易得的1-硝基-3-甲氧基甲苯为原料,依次经硝基还原、保护氨基、硝化、保护氨基后还原硝基、氨基甲基化,再与异硫氰酸酯环化构建2-氨基苯并咪唑环、脱去羟基保护基、成醚、硝基还原和乙酰化反应,合成了JAK2Ⅱ型抑制剂CHZ868,总收率6.24%,其结构经1H NMR,13C NMR和LC-MS确证。

治疗原发性骨髓纤维化的JAK2抑制剂研究进展

原发性骨髓纤维化是一种骨髓恶性肿瘤疾病,针对其治疗十分困难。许多研究表明,Janus Kinase 2(JAK2)激酶的突变V617F与原发性骨髓纤维化的发生密切相关。近年一些靶向JAK2的抑制剂对致病信号通路的异常调控起到抑制作用,为治疗提供了新的途径。文章将对处于临床阶段的五个JAK2抑制剂进行介绍并详述其研究进展。

JAK2 V617F突变研究进展及其诊治骨髓增殖性肿瘤的作用

骨髓增殖性疾病(MPD)中,除慢性粒细胞性白血病有特异性染色体及基因标志而容易诊断外,其他几种MPD患者病程缓慢,临床表现不特异,缺乏特异性诊断指标,容易导致漏诊和误诊。2005年以来多个国际研究小组陆续报道该类MPD有高频获得性JAK2 V617F点突变,JAK2 V617F突变是JAK2基因突变的常见类型,对MPD具有重要的诊断价值。现对JAK2基因结构及功能、JAK2 V617F点突变及其临床意义、诊治MPD的作用等方面予以综述。

4-(3-磺酰基苯基)氨基-6-甲酰基吡咯并[2,3-d]嘧啶类化合物的设计、合成与生物活性

以JAK2抑制剂baricitinib和fedratinib为先导化合物,运用分子杂交药物设计原理,设计并合成了17个以4-(3-磺酰基苯基)氨基-6-甲酰基吡咯并[2,3-d]嘧啶(3)为母核、结构新颖的目标化合物,并通过JAK2激酶和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导的TF-1细胞对所合成的化合物进行了活性测试。结果显示,多数化合物具有JAK2抑制活性,其中化合物(31)表现出较好的JAK2激酶活性(IC_(50)=0.009μmol/L)和GM-CSF诱导的TF-1细胞抑制活性(IC_(50)=0.136μmol/L),表明该化合物具有潜在的研发价值。

Janus激酶2选择性抑制剂HipHop药效团模型与3D QSAR模型的建立

目的为Janus激酶2(JAK2)选择性抑制剂的设计提供指导。方法将从已报道文献中筛选出的27个JAK2选择性抑制剂小分子通过Discovery Studido 4.5软件的分子共同特征药效团(HipHop)定性算法与定量构效关系(QSAR)分别构建JAK2选择性抑制剂的模型。结果HipHop药效团模型具有较强的筛选能力,且可以预测化合物是否具有活性;3D QSAR模型不仅可以预测化合物的活性值,还对化合物的设计提供指导;二者结合应用更加有助于发现新型JAK2选择性抑制剂。结论HipHop药效团和3D QSAR模型方法可以寻找可能的抗癌药物JAK2抑制剂先导分子,为后续的研究奠定理论基础。

线粒体分裂抑制剂1对NK细胞活化的影响

目的:观察线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)对自然杀伤(NK)细胞活化的影响。方法:以人NK细胞系NK-92MI为研究对象,采用CCK-8法筛选Mdivi-1适宜的干预浓度。据此结果,分为对照组、重组人胸腺基质淋细胞生成素(TSLP)组和Mdivi-1低、中、高剂量组。其中,TSLP组以20μg/L TSLP刺激24 h,Mdivi-1组于20μg/L TSLP刺激下以相应浓度Mdivi-1干预24 h。采用RT-qPCR检测Mdivi-1干预后细胞中白细胞介素4(IL-4)、IL-5和干扰素γ(IFN-γ)的mRNA表达;以Western blot分析测定各组细胞IL-4、IL-5和IFN-γ的蛋白表达及JAK2和STAT6的磷酸化水平;以MitoSOX Red染色探查各组细胞的活性氧(ROS)水平。结果:CCK-8结果显示,1、5和10μmol/L为Mdivi-1干预NK-92MI细胞的适宜浓度。RT-qPCR结果显示,与对照组比较,TSLP组细胞IL-4和IL-5的mRNA表达显著升高,IFN-γ的mRNA水平下调(P<0.05);而5和10μmol/L Mdivi-1干预则有效逆转了上述异常变化。Western blot结果显示,与TSLP组比较,5和10μmol/L Mdivi-1组的IL-4表达下调,IFN-γ水平则有所回升,10μmol/L Mdivi-1组的IL-5表达降低(P<0.05)。与TSLP组对比,5和10μmol/L Mdivi-1组的JAK2磷酸化水平降低,10μmol/L Mdivi-1组STAT6的磷酸化水平降低(P<0.05)。同时,5和10μmol/L Mdivi-1干预有效抑制了TSLP刺激下NK-92MI细胞ROS水平的升高。结论:Mdivi-1能有效抑制TSLP刺激所诱导的NK细胞NK2型分化,该效应可能与其对ROS及JAK2/STAT6信号通路的调节作用相关。

SOCS3在风湿性心脏病大鼠CD4^+T细胞分化中的作用及机制

目的研究细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在风湿性心脏病大鼠脾脏CD4^+T细胞分化中的作用及机制。方法建立灭活A组链球菌(GSA)诱导的大鼠风湿性心脏病模型,分离脾脏CD4^+T细胞;实验分6组:空白对照组(A组)、GSA免疫大鼠CD4^+T细胞组(B组)、GSA免疫大鼠CD4^+T细胞+PYrAd-rSOCS3转染组(C组)、GSA免疫大鼠CD4^+T细胞+PYrAd-GFP转染组(D组)、GSA免疫大鼠CD4^+T细胞+siRNA-SOCS3转染组(E组)、GSA免疫大鼠CD4^+T细胞+siRNA-control转染组(F组);采用RT-qPCR和Western blot法检测SOCS3、P/T-STAT3(仅检测蛋白)、T-bet、Gata3、RORγt和Foxp3的mRNA和蛋白表达;采用ELISA法检测各组细胞上清液中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17和TGF-β的水平。结果与A组比较,B组SOCS3、STAT3、P-STAT3、T-bet、RORγt、IFN-γ和IL-17表达上调(均P<0.05),而Gata3、Foxp3、IL-4和TGF-β表达下调(均P<0.05)。与B组比较,C组SOCS3表达进一步上调(P<0.01),而STAT3、P-STAT3、T-bet、RORγt、IFN-γ和IL-17表达下调(均P<0.05),同时Gata3、Foxp3、IL-4和TGF-β表达上调(均P<0.05)。与B组比较,E组SOCS3表达下调(P<0.01),STAT3、P-STAT3、T-bet、RORγt、IFN-γ和IL-17表达上调(均P<0.05),而Gata3、Foxp3、IL-4和TGF-β表达下调(均P<0.05)。结论 SOCS3通过抑制STAT3的磷酸化而抑制CD4^+T细胞向Th1和Th17细胞过度极化,在风湿性心脏病发病中可能具有负向调节的作用。

JAK2V617F突变及JAK2激酶抑制剂对骨髓增殖性肿瘤的影响

骨髓增殖性肿瘤（MPNs）是一类造血干细胞起源的骨髓克隆性疾病,是一种恶性血液系统疾病。2008年,WHO论述的MPNs的详细列表包括慢性粒细胞白血病（CML）,真性红细胞增多症（PV）,原发性血小板增多症（ET）,原发性骨髓纤维化（PMF）,慢性中性粒细胞白血病（CNL）,慢性嗜酸性粒细胞白血病/高嗜酸性粒细胞综合症（CEL/HES）和肥大细胞病（MCD）等疾病,并将有无JAK2突变列为重要的诊断标准。近年来,JAK2激酶抑制剂对MPNs治疗的研究为MPNs患者带来了新的希望,也为临床使用JAK2V617F突变的基因靶向治疗提供了较好的实验依据。

Rho激酶抑制剂对大鼠脑缺血再灌注后JAK2/STAT3信号传导通路的影响

目的 研究JAK2/STAT3信号通路在脑缺血再灌注损伤后的表达情况,并观察Rho激酶抑制剂Y-27632对其调控作用.方法 建立大鼠脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学染色法检测P-JAK2、P-STAT3在梗死区的表达水平,Tunel法检测神经细胞凋亡数量,观察P-JAK2、p-STAT3表达水平与神经元凋亡的相关性.结果 脑缺血再灌注后P-JAK2以及P-STAT3表达均上调,给予P-JAK2抑制剂以及Y-27632后,P-JAK2、P-STAT3的表达均受到抑制,同时减少了神经元凋亡数量,与模型组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 脑缺血再灌注后JAK2/STAT3信号通路激活,Y-27632可能通过抑制该通路的激活起到减少神经元凋亡,减轻神经功能缺损等脑保护作用.

费城染色体阴性骨髓增殖性肿瘤的诊断与治疗：JAK2 V617F基因突变评价

简要回顾了近百余年人们对骨髓增殖性肿瘤（MPN）的认识过程,重点讨论这一类疾病的诊断与治疗.JAK2 V617F基因突变的发现将费城染色体阴性（Ph-）MPN带入分子生物学时代,为临床提供了重要的诊断手段和依据,指导、研发了芦可替尼（ruxolitinib）等一批靶向药物.但是,与慢性粒细胞白血病（CML）中的bcr-abl不同,JAK2 V617F突变不是MPN诊断的“金标准”,其他辅助检查和鉴别诊断仍不可少.目前,JAK抑制剂开始用于Ph-MPN患者,有一定的适应证,远期疗效正在观察,目前还不能替代有效的常规治疗,如羟基脲、阿司匹林等.

JAK2抑制剂治疗骨髓增殖性肿瘤研究进展

骨髓增殖性肿瘤(myelopro1iferative neoplasms,MPNs)是一类造血干细胞异常增生性疾病,主要表现为骨髓中一系或多系细胞出现异常增殖。JAK2磷酸化导致的JAK-STAT信号通路持续活化是诱发MPNs的重要原因,而JAK2激酶的突变可以使其处于持续的磷酸化状态,JAK2最典型的突变是假激酶区V617F的位点突变。95%的红细胞增多症(PV)以及50%的原发性骨髓纤维化(PMF)、血小板增多症(ET)患者中存在这种突变。现已明确JAK2是治疗MPNs的重要靶标,通过抑制JAK2-STAT信号通路的异常激活来治疗MPNs已成为热门研究方向。本文拟从JAK2激酶的生物学功能、JAK2与MPNs的关系以及JAK2小分子抑制剂的研发现状等角度,综述近年来JAK2抑制剂在治疗MPNs疾病的研究进展。

JAK2基因突变在急性白血病中的研究进展

JAK-STAT信号通路介导细胞增殖、分化、迁移、凋亡等功能,该通路与造血系统的发育及一些血液系统疾病的发生密切相关。JAK2-STAT作为JAK-STAT通路中的重要信号轴,它的异常激活在血液系统肿瘤的形成中起重要作用。JAK2V617F突变是骨髓增殖性疾病发生的重要分子机制,近年来研究发现在不同类型的急性白血病中JAK2突变亦有不同的发生率,JAK2突变可能与急性白血病的发生、治疗及预后密切相关。目前JAK2突变的致病机制尚未完全阐明,可能与突变引起JAK-STAT信号通路的过度活化,继而导致细胞过度增殖、凋亡分化受阻相关。JAK2激酶抑制剂也逐渐进入临床试验用于JAK2突变的血液系统疾病的靶向治疗。该文就近年来JAK2基因突变与急性白血病的发生、临床特征及其分子靶向治疗等方面的研究进展作一综述。

基于计算机模拟对JAK2抑制剂的定量构效关系、分子设计和分子动力学研究

本文选取了52个对Janus激酶2(JAK2)有抑制作用的小分子化合物,分别使用3D-QSAR中的CoMFA和CoMSIA方法构建了两个可靠的、具有预测能力的模型,并利用分子对接分析数据集化合物与JAK2蛋白的相互作用,表明化合物主要通过氢键和范德华作用与JAK2靶蛋白结合。根据3D-QSAR模型的分析结果,设计了40个化合物,利用构建的模型预测其抑制活性;使用软件预测了化合物的药代动力学(ADME)参数,开展分子对接模拟,最终选择化合物D01和D22与JAK2靶蛋白进行了分子动力学模拟研究,结果显示两个复合物结合构象稳定,与分子对接结果趋势一致。本研究的结果可以为JAK2抑制剂的研发提供一些新的思路,为临床开发此类药物提供理论支撑。

JAK2/FLT3抑制剂fedratinib的合成工艺改进

目的确立JAK2/FLT3双靶点抑制剂fedratinib的合成路线并对工艺进行优化。方法以3-溴苯磺酰氯和叔丁基胺为原料,经酰化反应得到3-溴-N-(叔丁基)苯磺酰胺(3);以吡咯烷为原料,经亲核取代、氯代后与对氨基苯酚反应得到4-[2-(吡咯烷-1-基)乙氧基]苯胺(9);2,4-二氯-5-甲基嘧啶经氨解后,分别与中间体3和9发生Buchwald-Hartwig偶联反应和取代反应得到终产物fedratinib。结果与结论目标产物的结构经MS、1H-NMR、13C-NMR和IR谱确证,总收率为46.4%(以3-溴苯磺酰氯计),纯度为99.60%(HPLC法)。本合成路线原料价廉易得,所用试剂均为常用试剂,反应条件温和,后处理简单,为工业化生产奠定了一定基础。