BTK/JAK3双靶点抑制剂的设计合成和生物活性评价

以课题组前期发现的XL-12为先导化合物,通过末端苯环的结构修饰,进一步提高化合物的抗炎活性。设计并合成了12个目标化合物。所有目标化合物的结构经^(1)H NMR、^(13)C NMR和HRMS确证。体外活性测试结果显示大部分化合物对布鲁顿型酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine,BTK)和Janus激酶3(JAK3)具有较好的酶抑制活性,化合物I-3对Daudi细胞和BaF3-JAK3细胞显示中等的细胞增殖抑制活性。在体外抗炎活性评价中,化合物I-3能有效抑制炎症因子IL-6的产生。此外,在小鼠二甲苯致耳廓肿胀模型中,化合物I-3显示出优于阳性药依鲁替尼(ibrutinib)的抗炎活性。

基于JAK3/STAT3信号通路探讨热敏灸对银屑病模型大鼠皮损的影响及作用机制

目的探讨热敏灸对银屑病模型大鼠皮损的影响,基于JAK3/STAT3信号通路探讨其作用机制。方法采用5%咪喹莫特乳膏于大鼠背部和手少阳三焦经循行路线处皮肤进行银屑病造模,将SD大鼠随机分为空白组、模型组和治疗组,治疗组于“外关”进行灸疗,每次40min,连续7d,根据敏化状态分为热敏灸组和艾灸组。HE染色观察皮损组织病理变化,ELISA检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-23含量,免疫组化检测皮损组织p-JAK3、p-STAT3阳性表达,RT-qPCR检测皮损组织JAK3、STAT3、IL-17A、IL-17F mRNA表达。结果与空白组比较,模型组大鼠皮损组织突出、肥厚,伴大量炎性细胞浸润,血清TNF-α、IL-1β、IL-23含量显著增加(P<0.01),皮损组织p-JAK3、p-STAT3阳性表达显著升高(P<0.01),JAK3、STAT3、IL-17A、IL-17F mRNA表达显著上升(P<0.01);与模型组比较,热敏灸组大鼠皮损组织棘层肥厚程度减轻,无明显炎性细胞浸润,血清TNF-α、IL-1β、IL-23含量显著减少(P<0.01),皮损组织p-JAK3、p-STAT3阳性表达显著降低(P<0.05,P<0.01),JAK3、STAT3、IL-17A、IL-17F mRNA表达显著下降(P<0.05,P<0.01);与艾灸组比较,热敏灸组血清TNF-α、IL-1β含量显著减少(P<0.05,P<0.01),皮损组织p-JAK3阳性表达显著降低(P<0.05)。结论热敏灸能改善银屑病模型大鼠病理症状,其机制可能与抑制JAK3/STAT3信号通路,减少调节性T细胞17分化及促炎细胞因子分泌有关。

抗NO生成的JAK3抑制剂的合成及其抗炎活性研究

为了探索抗一氧化氮(NO)生成的两面神激酶3(JAK3)抑制剂的抗炎效果,采用药效团拼接原理设计并合成5个7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物。体外活性评价表明,化合物N-(3-((5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(D3)和N-(3-((5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺(D4)不仅能有效地抑制NO的合成(5.13±0.48)μmol/L,D4:IC_(50)=(4.67±0.98)μmol/L),对RAW264.7细胞毒性较低(IC_(50)>60μmol/L),而且可以微弱抑制JAK3激酶活性(D3:IC_(50)=272 nmol/L,D4:IC_(50)=849 nmol/L)。其中,化合物D4对角叉菜胶诱导小鼠模型的急性抗炎能力优于D3,可作为抗NO生成的JAK3抑制剂的先导化合物继续研发。

JAK3抑制剂对肺纤维化大鼠模型白细胞计数、淋巴细胞百分比的影响

目的:研究JAK3抑制剂对肺纤维化大鼠模型外周血白细胞计数、淋巴细胞百分比、支气管肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、肺组织病理的影响。方法:选取雄性SPF级Sprague dawley (SD)大鼠60只,根据随机数字表法分为5组,分别为正常对照组、模型对照组、糖皮质激素(GC)组、JAK3抑制剂组、JAK3抑制剂+糖皮质激素联合组,每组12只。使用博来霉素气管注射对除正常对照组以外的其他各组大鼠造模,造模6天后开始给各组大鼠灌胃相应药物或生理盐水,造模30天后收集样本,观察大鼠的一般情况,检测大鼠外周血淋巴细胞百分比、肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、肺组织HE染色。结果:在外周血白细胞计数方面,各组大鼠差异无统计学意义(P>0.05),糖皮质激素组和JAK3抑制剂组与对照相比有所降低,而JAK3抑制剂联合糖皮质激素组白细胞计数高于对照组;在淋巴细胞方面,各组大鼠之间差异有统计学差异(P<0.05),其中JAK3抑制剂组与正常对照组和糖皮质激素组相比,差异有统计学意义(P<0.05),与模型对照组检测结果相似,而JAK3抑制剂联合糖皮质激素时淋巴细胞百分比的却出现了明显的降低,与模型对照组具有显著的统计学差异。在肺泡灌洗液中,各组大鼠差异无统计学意义(P>0.05),依然可以观察到JAK3抑制剂+糖皮质激素联合组的淋巴细胞百分比的降低,相比模型对照组明显减少;但与外周血不同的是,在支气管肺泡灌洗液中JAK3抑制剂组的淋巴细胞百分比少于正常对照组、糖皮质激素组。在肺组织病理he染色方面,与正常对照组相比,模型对照组肺组织有广泛性轻到中度的肺泡壁增厚、局部重度的肺泡壁增厚,伴有纤维组织增生;糖皮质激素组小血管和毛细血管淤血,伴有纤维素渗出和细胞浸润,肺组织结构完整;JAK3抑制剂组有较大范围的实质病变,肺泡壁毛细血管淤血,组织结构模糊;JAK3抑制剂+糖皮质激素联合组有较大范围的实质病变,局部肺泡壁结构被破坏,同时伴有巨噬细胞增生,炎症性细胞浸润,纤维组织增生。结论:早期短期JAK3抑制剂治疗加重肺纤维化的炎症程度,联合糖皮质激素用药能减轻托法替布造成的炎性破坏,作用机制可能与淋巴细胞增加有关。

骨痨愈康丸通过JAK3/STAT3信号通路对佐剂性关节炎大鼠炎症反应的影响

目的 基于JAK3/STAT3信号通路探讨骨痨愈康丸对类风湿关节炎模型大鼠的影响机制。方法 将60只Wistar大鼠,随机分为正常对照(Control)组、模型(CIA)组、骨痨愈康丸(GL)组、骨痨愈康丸+JAK受体酪氨酸激酶抑制剂AG490(GL+AG490)组、JAK受体酪氨酸激酶抑制剂AG490(AG490)组,除正常对照组外,其余四组均建立胶原诱导性类风湿关节炎(CIA)大鼠模型。通过ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6、IL-17水平,运用免疫组化法与实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测踝关节软骨和滑膜组织中JAK3、STAT3蛋白及mRNA的表达情况。结果 与Control组比较,CIA、GL、GL+AG490、AG490组大鼠踝关节肿胀明显,伴关节畸形、大鼠活动明显减少、跛行、毛色暗淡无光泽、体重减轻;模型大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-17水平显著升高;JAK3、STAT3蛋白表达显著升高(P<0.05)。与CIA组相比,各治疗组大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-17水平降低;JAK3、STAT3蛋白及mRNA表达下调(P<0.05)。结论 骨痨愈康丸能减轻RA的炎症反应,其作用机制可能与抑制JAK3/STAT3信号通路及其下游基因蛋白表达有关。

去C末端JAK3逆转录病毒载体对白血病细胞株NALM-6的影响

目的 :了解去C末端JAK3[JAK3(△C) ]基因对白血病细胞株NALM 6增殖和凋亡情况的影响 ,探索白血病基因治疗的新途径。方法 :用逆转录病毒作为载体 ,将JAK3(△C)基因导入NALM 6细胞 ,G4 18筛选阳性细胞株 ;用免疫沉淀 (IP)、SDS PAGE电泳、Westen blot检测JAK3(△C)对NALM 6细胞本身JAK3表达和磷酸化情况的影响 ;用MTT法检测NALM 6细胞和NALM 6 /JAK3(△C)细胞的增殖情况 ,了解JAK3(△C)对NALM 6细胞增殖的影响 ;用流式细胞术 (FCM )检测JAK3(△C)对NALM 6细胞凋亡的影响。结果 :JAK3(△C)能抑制NALM 6细胞本身JAK3的磷酸化活化 ;从生长曲线上可以看出 ,稳定表达JAK3(△C)的NALM 6 /JAK3(△C)细胞的增殖速率明显比NALM 6细胞阴性对照组低 ;从FCM图中可以看出NALM 6 /JAK3(△C)细胞出现了亚G1峰 (即凋亡峰 ) ,而NALM 6细胞未出现G1峰 ,同时NALM 6 /JAK3(△C)G0 /G1期细胞明显增多 ,而S、G2 /M期细胞相对减少 ,而根据其相应的软件计算出的这两组细胞的增殖指数和凋亡率也存在显著差异 (P<0 .0 5 ) ,说明导入了JAK3(△C)基因的NALM 6 /JAK3(△C)细胞凋亡增加、增殖能力明显降低。结论 :JAK3(△C)作为一种显性阴性分子 。

莪术醇通过JAK3/STAT信号途径抑制Jurkat细胞增殖

目的观察莪术醇对抑制Jurkat细胞增殖的影响,并从JAK3/STAT信号途径探讨其作用机制。方法不同浓度(6.25、12.5、25、50μg/mL)莪术醇干预处理人Jurkat细胞株,分别用新型四唑单钠盐法、流式细胞技术观察检测细胞增殖活力及细胞周期分布。Hoechst 33258染色,观察莪术醇诱导的细胞凋亡形态学变化。设正常对照组、IL-2刺激组、JAK3抑制剂组及莪术醇干预组,Western blot检测细胞中JAK3、STAT3及STAT5a磷酸化蛋白表达量的变化。结果不同浓度的莪术醇体外处理24 h后,Jurkat细胞的增殖受到明显抑制,呈浓度依赖性下降(P<0.05)。细胞周期分布结果显示,随着莪术醇作用浓度的增加,细胞凋亡的比例明显升高,S期细胞比例呈浓度依赖性增多,G2/M细胞比例则呈减少趋势。50μg/mL的莪术醇处理24 h后,细胞表现出核固缩、碎裂等典型的凋亡形态学变化。Western blot检测结果显示,50μg/mL的莪术醇可抑制JAK3与STAT5a磷酸化蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),但对STAT3无明显影响(P>0.05)。结论莪术醇作用于Jurkat细胞S～G2/M期,阻滞S期细胞向G2/M期移行,并下调JAK3/STAT5信号分子以抑制该细胞增殖。

三氧化二砷下调JAK3表达并抑制淋巴细胞增殖

目的研究三氧化二砷对淋巴细胞增殖和JAK3表达的影响。方法以分离培养的外周血淋巴细胞为对象,不同浓度砷剂处理后,采用3H-TdR方法检测淋巴细胞增殖;并进一步探讨其影响淋巴细胞增殖的机制,用Realtime-PCR方法研究细胞JAK3表达情况。结果0.01,0.1,1μmol/L砷剂组,摄入的同位素活性不同程度降低,其中0.01μmol/L砷剂组同对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),而0.1和1μmol/L砷剂组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);Realtime-PCR结果显示:增殖抑制的淋巴细胞组,JAK3 mRNA水平下调。结论一定浓度的砷剂可下调JAK3的表达,抑制淋巴细胞增殖,从而影响机体的免疫功能。

IL-2通过Jak3-Stat5通路促进巨噬细胞M1极化

目的探究IL-2在调控巨噬细胞极化分型方面的作用及机制。方法重组小鼠白介素-2(IL-2)刺激处于M0期的小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7,同时以IL-4作为对照。Real-time PCR和Western blot检测M1型和M2型标志分子的表达;流式细胞术检测M1型和M2型巨噬细胞的百分比;Western blot检测Jak3和Stat5活化水平。结果经IL-2刺激后,处于M0的RAW 264.7细胞显著上调表达M1型标记分子,如IL-1β、IL-12、TNF-α和i NOS等;IL-2使巨噬细胞中M1型的比例由3.2%上升到24.6%,同时Jak3和Stat5分子的磷酸化水平显著提高。结论 IL-2具有促进巨噬细胞由M0向M1极化的作用,且该作用可能是通过Jak3-Stat5通路实现。

维A酸对银屑病患者外周血T淋巴细胞增殖及JAK3表达的影响

目的探讨第三代维A酸（芳维A酸氨丁三醇）和第二代维A酸（依曲替酸）对银屑病患者T淋巴细胞增殖的影响及其机制。方法抽取银屑病患者外周血，分离T淋巴细胞，经不同浓度药物处理后，台盼蓝染色检测细胞活力，用改良M1Tr法检测淋巴细胞的增殖能力；分别用Real．timePCR和蛋白印迹方法检测JAK3，STATS的mRNA和蛋白表达水平。结果芳维A酸氨丁三醇与依曲替酸在10^-9-10^-6浓度范围内，均对银屑病患者外周血T淋巴细胞的增殖有抑制作用，且呈剂量依赖性，芳维A酸氨丁三醇比依曲替酸抑制作用更明显；两种药物均可下调银屑病患者T淋巴细胞JAK3基因的表达，且芳维A酸氨丁三醇的下调作用更显著，但STAT5蛋白表达无变化。结论芳维A酸氨丁三醇和依曲替酸可明显抑制银屑病患者外周血T淋巴细胞的增殖，其机制可能与下调JAK3表达有关。

三氧化二砷联合5-杂氮脱氧胞苷对K562细胞SHP-1、JAK3、TYK2基因表达的影响

本研究旨在探讨甲基化抑制剂三氧化二砷(As2O3)及5-杂氮脱氧胞苷(5-aza-CdR)对JAK-STAT信号转导通路中JAK家族成员JAK3、TYK2和造血细胞磷酸酶SHP-1在慢性髓系白血病细胞株K562中表达的影响及它们在白血病发病中的作用。K562细胞分为单药组、联合用药组及不加药物组(空白对照)。5-aza-CdR单用浓度为0.5、1、2μmol/L,As2O3单用浓度为1、2.5、5μmol/L,As2O31μmol/L+5-aza-CdR 0.5μmol/L、As2O32.5μmol/L+5-aza-CdR 1μmol/L。As2O3联合用药浓度为5μmol/L+5-aza-CdR 2μmol/L。对细胞分别处理24、48、72 h后提取细胞总RNA,应用荧光实时定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RQ-PCR)检测JAK3、TYK2及SHP-1的表达。结果表明,As2O3和5-aza-CdR单独作用及两药合用时,SHP-1 mRNA在K562细胞中的表达呈剂量及时间依赖性升高,JAK3 mRNA的表达呈剂量及时间依赖性降低,TYK2 mRNA的表达呈剂量及时间依赖性降低,SHP-1与JAK3、TYK2呈负相关,JAK3所受影响较TYK2更为显著。结论:As2O3和5-aza-CdR单独及联合应用时,随着浓度增高和作用时间延长,SHP-1表达上调,JAK3和TYK2表达下调,且两药有协同去甲基化作用;SHP-1基因可能通过抑制JAK/STAT通路发挥作用,JAK3所受影响较TYK2更为显著。在JAK/STAT通路中,JAK3可能发挥更为重要的作用。

复方青黛胶囊对寻常型银屑病患者外周血Th17细胞因子及JAK3基因表达的影响

目的观察复方青黛胶囊对寻常型银屑病患者外周血Th17细胞因子及JAK3基因表达的影响。方法选取寻常型银屑病患者94例,按照随机数字表法分为两组(实验组、对照组),每组各47例。对照组行常规药物治疗+窄谱中波紫外线治疗,实验组在对照组治疗的基础上加用复方青黛胶囊治疗,对比两组患者临床疗效、银屑病皮损程度评分(PASI)、瘙痒评分、外周血细胞因子白介素-17(IL-17)、白介素-22(IL-22)、白介素-23(IL-23)、白介素-1β(IL-1β)以及JAK3基因表达量。结果实验组治疗总有效率87.23%较对照组51.06%高,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗前,两组患者PASI、瘙痒评分相比,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,实验组患者PASI、瘙痒评分明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组患者IL-17、IL-22、IL-23、IL-1β水平相比,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,实验组患者的IL-17、IL-22、IL-23、IL-1β水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论复方青黛胶囊治疗寻常型银屑病,能够有效提高患者临床疗效,降低PASI、瘙痒评分,调节Th17细胞因子水平以及减少JAK3基因表达量,值得在临床推广应用。

三氧化二砷联合5-杂氮-2′-脱氧胞苷对U937细胞SHP-1、JAK3、TYK2基因表达的影响

目的探讨甲基化抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)联合三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞株U937中JAK3、TYK2和造血细胞磷酸酶SHP-1表达水平的影响,并探讨它们在白血病发病中的作用。方法 5-aza-CdR、As2O3单用及联合处理U937细胞,5-aza-CdR浓度为0.5、1、2μmol/L,As2O3的浓度为1、2.5、5μmol/L,As2O3 1μmol/L+5-aza-CdR 0.5μmol/L、As2O32.5μmol/L+5-azaCdR 1μmol/L、As2O3 35μmol/L+5-aza-CdR 2μmol/L及不加药物组,分别处理24、48、72 h后提取细胞总RNA,荧光实时定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RQ-PCR)检测JAK3、TYK2及SHP-1的表达。结果 As2O3和5-aza-CdR单独作用及两药合用时,SHP-1 mRNA在U937细胞中的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐升高;JAK3 mRNA的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐降低;TYK2mRNA的表达呈剂量及时间依赖性,其表达逐渐降低;SHP-1与JAK3、TYK2负相关,JAK3所受影响较TYK2更为显著。结论 (1)甲基化抑制剂5-aza-CdR和As2O3可使SHP-1表达升高,JAK3、TYK2表达降低,与浓度及作用时间有关。(2)SHP-1基因的重新表达与其发生去甲基化有关,对JAK/STAT通路有负调控作用。

JAK3蛋白在鼻咽癌细胞中参与STAT活化并受EB病毒潜伏膜蛋白1调控

为了探讨在鼻咽癌细胞 (NPC)中是否存在EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1) /JAK3/STAT信号传导途径 ,首先采用RT PCR方法对NPCJAK家族 4种成员检测 ,发现在两株鼻咽癌细胞株CNE1和HNE2中该家族 4种成员均有表达 .选择最有可能与LMP1相互作用的JAK家族成员JAK3作为我们的研究对象 .利用已建立的一株受四环素衍生物强力霉素 (doxycycline ,Dox)调控的LMP1表达的鼻咽癌细胞系 (Tet on LMP1HNE2 ) ,诱导Tet on LMP1HNE2细胞LMP1动态表达 ,蛋白质印迹发现JAK3的表达方式呈剂量和时间依赖性 .采用瞬间转染方法将STAT报告基因质粒 (GRR Luc)转染入pTet on LMP1HNE2细胞中 ,不同剂量的Dox促使LMP1的表达可以激活STAT报告基因活性 ,在 0 0 6mg/LDox诱导 36h时 ,STAT活性最高 .在该条件下 ,加入 3μmol/LJAK3特异性抑制剂WHI P131时 ,可抑制STAT的活性 .结果表明 :JAK3的表达在NPC细胞中受LMP1的调控 ,LMP1可以通过调控JAK3的表达参与STAT的活化 .

酪氨酸激酶Jak3抑制剂的研究进展

Jak3抑制剂对器官移植以及自身性免疫疾病的治疗有着非常重要的意义。本文根据Jak3抑制剂的化学结构,将其分为WHI系列化合物、CP690550衍生物及其他Jak3抑制剂等3类,并对其作用机制、构效关系及生物活性进行综述,指出提高化合物对Jak3作用的选择性是新的Jak3抑制剂的研究重点和难点。

C-末端缺陷JAK3逆转录病毒载体的构建及在真核细胞中的表达

目的 以逆转录病毒 PL XSN为载体 ,构建重组逆转录病毒 C-末端缺陷的 JAK3[c- term defi-cient JAK3,JAK3(ΔC) ]载体 PL JAK3(Δ C) ,以 BAL B/ c3T3为靶细胞 ,转染 JAK3(ΔC) c DNA,检测 JAK3(Δ C)蛋白在真核细胞中的表达情况。为利用 JAK3(ΔC)对白血病进行基因治疗的实验研究打基础。方法 用限制性内切酶法从质粒 Pc DNA3- JAK3(Δ C)中分离目的基因片段 ,连接到逆转录病毒载体 PL XSN多克隆位点上构建重组逆转录病毒载体 PL JAK3(Δ C) ,通过转化感受态细菌扩增并检测 DNA序列及限制性内切酶酶切鉴定 ;用脂质体L IPOFECTAMINE介导法将 PL JAK3(Δ C)转染包装细胞 PA317细胞 ,并用 G4 18筛选抗性细胞克隆 ,收集病毒 ;用该病毒感染靶细胞 BAL B/ c3T3,G4 18筛选抗性克隆并测定病毒滴度 ;抗性细胞扩增培养 ,细胞溶解后经免疫沉淀 (IP)、Western blotting检测 BAL B/ c3T3细胞中 JAK3(Δ C)的表达情况。结果 1重组逆转录病毒载体 PL -JAK3(Δ C)酶切和 DNA测序均表明含有 2 796 bp的 JAK3(ΔC)基因 ;2病毒滴度为 1.2× 10 4 CFU/ ml;3PL JAK3(Δ C)转染 BAL B/ C3T3细胞中表达出了 JAK3(Δ C)蛋白 ,其相对分子质量为 10 7× 10 3。结论 该研究构建的 C-末端缺陷 JAK3重组逆转录病毒载体 PL JAK3(

去C末端JAK3基因重组逆转录病毒载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

目的 :构建去C末端Jak3重组逆转录病毒载体 ,获得能稳定产生去C末端Jak3基因的重组逆转录病毒的细胞株 ,为利用去C 末端Jak3对白血病进行基因治疗的实验研究打基础。方法 :用限制性内切酶从质粒PcJak3(ΔC)中切出目的基因并从凝胶中回收该目的基因片段 ,连接到逆转录病毒载体PLXSN多克隆位点上构建重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC) ,通过转化感受态细菌后氨卞青霉素筛选、酶切及DNA测序鉴定 ;用脂质体LIPOFECTAMINE转染包装细胞PA317细胞并用G4 18筛选抗性细胞 ,转染的包装细胞包装出病毒粒子 ,同时用PCR方法检测PA317阳性细胞中是否插入目的基因片段 ;用该病毒感染靶细胞NIH3T3,G4 18筛选抗性克隆 ,检测出病毒滴度 ;经免疫沉淀 (IP)、SDS PAGE电泳、Westernblotting检测NIH3T3细胞中Jak3(ΔC)的表达情况。结果 :①重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC)酶切和DNA检序均表明已含有 2 796bp的Jak3(ΔC)基因 ;②转染的PA317阳性细胞经PCR扩增后得到与目的基因一致的片段 ;③病毒滴度为 1.2～ 2 .0× 10 4CFU/ml;④转染的NIH3T3细胞中表达出了Jak3(ΔC)蛋白 ,其分子量为 10 7KD。结论 :我们已成功构建了去C 末端Jak3重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC) ,并得到稳定产生病毒粒子的PA317细胞克隆 ,为利用Jak3(ΔC)

炎症性肠病患者外周血单核细胞JAK1与JAK3的基因表达

目的研究炎症性肠病(IBD)患者外周血单核细胞中JAKI m RNA和JAK3 m RNA及其蛋白表达的变化,探讨JAK1与JAK3基因在IBD发病机制中的意义。方法纳入76例IBD初治患者、28例完全缓解患者和20例健康志愿者(正常对照组),以RT-PCR,Western Blot分别检测外周血单核细胞JAKl、JAK3m RNA和其蛋白表达水平。结果初治IBD患者外周血单个核细胞JAKlm RNA和JAK3m RNA表达水平较正常对照组明显增高,差异均有统计学意义(均<0.05),治疗完全缓解后表达下降,与正常对照组差异均无统计学意义(均>0.05)。IBD患者外周血单个核细胞JAKl和JAK3蛋白表达水平较正常对照组明显增高,差异均有统计学意义(均<0.05),治疗完全缓解后表达下降,与正常对照组差异均无统计学意义(均>0.05)。结论 IBD初治组患者外周血单核细胞中JAK1与JAK3m RNA及其蛋白表达水平明显增高,JAK1与JAK3基因参与了IBD的发生、发展过程,可能为今后临床应用JAK1与JAK3抑制剂治疗炎症性肠病提供了理论依据。

抑制Jak3激酶活性诱导NALM-6白血病细胞凋亡

目的 研究 Jak3的活化与急性淋巴细胞白血病 (AL L)之间的关系。方法 在不同浓度的 Jak3抑制剂 AG490处理 Jak3活化的 AL L 前 B细胞株 NAL M- 6细胞后 ,用流式细胞术及噻唑蓝法分析细胞的凋亡、增殖情况。结果 除 5 μm ol/ L 组外 ,经 10、15、2 0 μm ol/ L AG490处理后 NAL M- 6细胞均有明显的亚 G1 峰 ,与 DMSO对照相比 ,凋亡率均有显著增加 (P<0 .0 5 ) ;噻唑蓝法示除 5 μmol/ L 组外 ,与 DMSO对照相比 ,10、15、2 0 μm ol/ LAG490均能显著抑制 NAL M- 6细胞的增殖 (P<0 .0 5 )。以上作用呈剂量依赖性关系。结论 Jak3抑制剂 AG490能抑制 NAL M- 6细胞的增殖并诱导凋亡 ,提示 Jak3的活化与前 B型 AL L