利用荧光探针JC-1检测心肌细胞线粒体膜电位的改变

利用荧光探针JC 1观察大鼠心肌细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化。用过氧化氢 (H2 O2 )诱导心肌细胞凋亡 ,在凋亡早期 ,利用新型荧光探针JC 1标记细胞线粒体 ,在FACSCalibur流式细胞仪上检测JC 1荧光强度的变化 ,用Annexin V/PI双染色法鉴别凋亡和坏死的心肌细胞。结果显示 ,在正常大鼠心肌细胞中 ,线粒体维持较高的膜电位 ,JC 1在线粒体内形成聚合物 ,发出红色荧光。H2 O2 导致线粒体膜电位下降 ,JC 1聚合物分解成单体 ,红色荧光强度减弱。提示JC 1结合流式细胞仪是一种理想的检测线粒体膜电位的手段。

荧光探针JC-1与PI联合染色法在猪精子线粒体膜电位检测中的应用

目前,对于精子线粒体膜电位(MMP)的检测分析,通常采用JC-1单独染色,这种染色方法可以准确地区分高、低MMP精子,但不能明确区分精子的存活状态。本研究采用JC-1与碘化丙啶(propidium iodide,PI)2种荧光染料联合染色的方法,对6种不同保存条件下的猪精子进行染色,分别使用流式细胞仪与荧光显微镜2种检测手段对猪精子MMP进行检测。结果表明:死亡精子头部呈红色,高MMP精子尾部呈橙红色,低MMP精子尾部为绿色。2种检测手段的结果比较显示,荧光显微镜能够有效地区分出高、低MMP死精子,但对于活精子MMP的高低检测效果不甚理想。相反,流式细胞仪则能够有效地区分活精子MMP的高低,但对于死精子MMP高低的检测仍较困难。因此,对于猪精子线粒体MMP的检测,采用JC-1与PI双染的方法,用流式细胞仪与荧光显微镜进行联合检测,能比较全面的反映出精子线粒体的功能状态。

JC-1高清净性冷轧油的研制与应用

研制了ＪＣ－１ 高清净性冷轧油。ＪＣ－１冷轧油用于五机架高速串联轧机上具有优异的轧机清净性、退火清净性以及润滑性。可轧制０．３５ ｍ ｍ 以上的各种规格的薄板，与国内外同类油相比，能耗下降８％ ，油耗下降１７％ ，在贫氢退火条件下，退火后的钢板表面平均反射率在８０％ 以上，残炭值小于４ ｍ ｇ／ｍ ２。

JC-1单标法和JC-1/PI双标法荧光探针检测山羊附睾精子线粒体膜功能的研究

为准确、全面研究超低温冷冻技术对山羊附睾精子线粒体膜电位的影响效果,本试验采用荧光探针JC-1单标和JC-1/PI双标2种荧光染色方法,通过流式细胞仪和荧光显微镜两种检测手段对精子线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)变化进行检测分析,用JC-1单独染色,能准确、快速地区分高、低MMP精子,但不能明确区分精子的存活状态,采用JC-1与碘化丙啶(Propidium iodide,PI)双标法,则能明显判定精子的存活状态。通过对绒山羊附睾精子在冷冻前和解冻后线粒体膜电位检测,结果表明,单标记后高MMP精子尾部呈橙红色,低MMP精子尾部为绿色;双标后死亡精子头部呈红色(PI+)。对两种检测手段的比较研究,结果显示,荧光显微镜能够有效地区分出高、低MMP及死精子,但对于活精子中MMP的高低检测效果不理想;流式细胞仪则能够有效地区分活精子MMP的高低,而且结果准确,速度快,敏感性高。试验表明,两种检测方法相关性很高,分析同一处理样品时用JC+%和JC+/PI-%检测结果呈显著正相关(r=0.815,r=0.982,P<0.01)。因此,对于精子线粒体MMP的分析,采用JC-1单染与JC-1/PI双染的方法,利用流式细胞仪与荧光显微镜进行联合检测,能比较全面、准确的反映出精子线粒体的功能状态。

JC-1微型数控测井地面系统的研制

针对现有数控测井地面系统存在的问题 ,以硬件高度集成、尽量以软代硬、功能强大、操作简便、维修方便为指导思想 ,研制出了JC 1微型数控测井地面系统。为此对其硬件系统的主要器件电源箱、综控箱及接口板软件系统。

JC-1型激光表面粗糙度测试仪

重庆光机所研制成功的JC-1型激光表面粗糙度测试仪，于1985年10月24日经重庆市科委组织通过技术鉴定。

JC-1型激光扫描测径仪

我所已研制成功JC-1型激光扫描测径仪。它适用于线材及圆柱形物体直径的测量。仪器用激光扫描取得测量信号，用数码管显示测量结果，读数直观、迅速、准确，具有非接触式测量的优点。

miR-146a靶向TLR4对糖尿病所致足细胞能量代谢障碍的保护作用

目的探讨糖尿病肾病足细胞(podocyte)能量代谢的调控机制。方法购买人源肾足细胞,高糖诱导建立糖尿病体外模型,转染miR-146a mimic或pcDNA3.1-TLR4及其阴性对照物。qRT-PCR检测miR-146a与TLR4的表达。通过检测细胞外酸化率(ECAR)、检测糖酵解关键酶HK2的mRNA评估足细胞的糖酵解能力;通过JC-1荧光染色与ATP试剂盒检测了线粒体膜电位的变化以及ATP的含量。Starbase网站(https://starbase.sysu.edu.cn/)预测、双荧光素酶报告实验检测miR-146a与TLR4的靶向结合。结果高糖诱导的足细胞中miR-146a表达下调,TLR4表达上调,糖酵解能力下降,细胞膜电位下降,ATP产生减少;上调miR-146a的表达可以改善这种变化,而同时上调TLR4的表达则抑制了高表达miR-146a的改善作用。miR-146a靶向抑制TLR4的表达。结论糖尿病肾病足细胞中miR-146a低表达,促进了TLR4的表达,抑制了足细胞的糖酵解、膜电位及ATP的含量,最终导致足细胞的能量代谢障碍。

简易BH3分析法在血液肿瘤药敏筛选的初步探索

目的建立一种血液肿瘤BCL-2抗凋亡蛋白抑制剂药敏筛选的简易BH3分析法。方法建立基于显微镜和JC-1染色的BH3分析方法,通过BH3-only模拟肽描绘K562、NB4细胞系BCL-2家族抗凋亡蛋白依赖谱,应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)加以验证;回溯临床治疗疗效,检验该方法对临床样本BH3药敏分析结果的符合情况。结果BH3分析结果显示NB4对抗凋亡蛋白的依赖程度依次为BCL2>MC1-1>BCL-XL;K562的依赖程度依次为BCL-XL>MC1-1>BCL2。PCR分析BCL-2家族基因表达量显示,K562抗凋亡蛋白MCL-1、BCL2、BCL-XL相对表达程度较高,BH3-only促凋亡蛋白中BIM、PUMA、NOXA高表达而HRK低表达,细胞抗凋亡能力更依赖于BCL-XL;NB4抗凋亡蛋白BCL-XL表达明显低于MCL-1与BCL-2,BH3-only促凋亡蛋白NOXA低表达,细胞抗凋亡更依赖于MCL-1与BCL-2而非BCL-XL,与BH3分析结果相符。对连续6例血液肿瘤患者骨髓进行BH3分析,结果显示6例患者均对HRK(BCL-XL抑制物)、VEN(BCL-2抑制物)不敏感;4例患者(例1~3,例5)对NOXA(MCL-1抑制物)表现为敏感,2例(例4、例6)的敏感度较低(<50%)。药敏预测结果显示6例患者均对BCL-2抑制剂耐药,例1~3、例5患者对MCL1抑制剂敏感,例4和例6对MCL1抑制剂可能耐药。回溯临床用药效果(4~6个疗程)显示例1~5患者对BCL-2抑制剂相关方案治疗无效,考虑与BCL-2抑制剂不敏感有关,例5更换西达苯胺治疗有效,例4和例6患者西达苯胺相关方案疗效不佳,考虑与MCL-1抑制物不敏感有关,上述临床结局与BH3预测结果一致。结论基于荧光显微镜和JC-1染色的BH3分析是简便可行的,可用于检测血液肿瘤细胞对不同抗凋亡蛋白的依赖性,从而为BCL-2家族相关抑制剂的选择提供证据。

沉默miR-31-5p抑制口腔鳞状细胞癌的增殖及凋亡

目的探究miR-31-5p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖和凋亡的作用及与线粒体活性之间的关系。方法RT-qPCR检测OSCC组织和细胞中miR-31-5p的表达。利用Lipofectamine 2000将miR-NC、miR-31-5p mimic、miR-31-5p inhibitor分别转染至SCC-25和CAL-27细胞内,将细胞分为Control组、miR-NC组、miR-31-5p inhibitor组和miR-31-5p mimic组。克隆形成实验检测细胞增殖,微管形成实验检测微管数目,流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色评估线粒体活性,ELISA检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;蛋白印迹法检测Ki67、survivin、VEGF、Bcl-2、Bax和c-Myc蛋白表达水平。结果RT-qPCR检测结果显示,miR-31-5p在OSCC组织和细胞中均高表达(P<0.05);与Control组比较,沉默miR-31-5p可显著降低SCC-25和CAL-27细胞克隆形成和微管形成数目(P<0.05),并提高细胞凋亡率(P<0.05);蛋白印迹实验结果表明,沉默miR-31-5p可降低Ki67、survivin、VEGF和c-Myc蛋白表达水平及Bcl-2/Bax比率(P<0.05)。沉默miR-31-5p可显著降低SCC-25和CAL-27细胞中JC-1线粒体活性(P<0.05),抑制SOD活性并增加MDA含量(P<0.05)。结论沉默miR-31-5p通过破坏线粒体活性抑制OSCC细胞的增殖并诱导其凋亡。

一种5,5′,6,6′-四氯-1,1′-3,3′-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物的合成方法

JC-1作为一种荧光探针,广泛应用于线粒体细胞膜的电位测定。本文以1,2,4-三氯-5-硝基苯为起始底物,经多步反应以18%的总收率获得JC-1。

关于JC—1型旁承支承磨耗板安装部位改进的几点建议

JC-1型双作用常接触弹性旁承的应用，有效地增加了货车在空车状态下的回转阻力矩，提高了转向架的运行平稳性。某公司在进行车辆大修时发现JC-1型旁承支承磨耗板（以下简称支承磨耗板）难以拆卸，约有10％的支承磨耗板在拆卸过程中折断，需要采用其他方式取出。该支承磨耗板的质量保证期为2年，所以该问题在车辆段修时也可能存在。因此，设法使支承磨耗板容易拆分，可提高JC-1型旁承的检修效率。

JC—1型简易测角仪在煤矿测量中的应用

随着煤炭工业的发展,机械化程度越来越高,井下巷道支护及采煤工作面支护逐步实现了钢铁化。由于受磁性的影响,悬挂罗盘仪在井下测量应用范围越来越小。为适应煤炭生产的发展,保证碎部导线的测量精度,试制了JC—1型简易测角仪,通过井上、下现场使用,达到了煤矿生产测量规程中对罗盘仪导线所要求的测量精度,从而填补了井下测量工作中不受磁性影响的低精度测角仪器的空白。现将该仪器介绍如下:

基于VB/GM(1,1)/MATLAB的腐蚀管道剩余寿命预测及结构可靠度分析

以灰色理论GM(1,1)模型为基础,结合ASME B31G标准,考虑缺陷深度、缺陷长度、管道壁厚、管道直径、屈服强度、操作压力等随机性,建立腐蚀管道可靠性模型。使用VB进行腐蚀管道剩余寿命分析,利用MATLAB系统编程实现JC法计算结构可靠度,分析可靠性指标与缺陷深度、管道壁厚、管道压力的关系,为管道剩余寿命预测、复杂结构可靠性分析和腐蚀检测周期的确定提供依据。

白藜芦醇对人黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法 MTT法检测不同浓度(10、20、40、80、160μmol.L-1)Res对人黑色素瘤细胞株Mel-RM和MM200增殖的抑制作用,溴化丙啶(propidium iodide,PI)单染进行流式细胞仪分析,检测Res对黑色素瘤细胞凋亡的影响。通过JC-1染色法检测Mel-RM和MM200细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,△Ψm)。试剂盒检测Caspase-3的活性变化。结果随着Res的浓度的增加,对人黑色素瘤细胞株的增殖产生明显的抑制作用,80、160μmol.L-1的Res可诱导Mel-RM和MM200细胞出现明显的凋亡,JC-1染色结果显示,Res处理后Mel-RM和MM200线粒体膜电位分别降低51.0%和68.8%。Caspase-3活性检测结果显示Res对Caspase-3具有激活作用。结论 Res具有抑制黑色素瘤细胞增殖诱导其凋亡的作用,其机制可能与降低细胞线粒体膜电位及激活Caspase-3有关。

羟氯喹对人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及凋亡的影响

目的观察羟氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)对人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法及克隆形成抑制实验观察HCQ对人乳腺癌MDAMB-435细胞的增殖抑制作用;采用倒置显微镜观察HCQ处理后细胞形态学变化;采用Hoechst 33258荧光染色检测HCQ对人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的作用;采用PI单染流式细胞术检测细胞晚期凋亡水平;采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)观察HCQ处理人乳腺癌MDA-MB-435细胞后线粒体膜电位的转变。结果不同浓度的HCQ作用于乳腺癌MDA-MB-435细胞24、48、72 h后,均能明显抑制细胞增殖;在倒置显微镜下可观察到HCQ作用于乳腺癌MDAMB-435细胞后细胞逐渐萎缩变圆,细胞密度变小,失去正常细胞形态;HCQ能明显抑制MDA-MB-435细胞克隆形成;Hoechst 33258荧光染色结果显示,HCQ可以诱导乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡;PI结果显示,20、40、60μmol·L-1HCQ处理细胞24 h后,晚期凋亡率分别为7.1%、15.9%、35.3%(P<0.05);HCQ作用于乳腺癌MDA-MB-435后JC-1从红色荧光到绿色荧光转变(P<0.05)。结论 HCQ可以明显抑制人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及诱导凋亡。

地塞米松影响小鼠胸腺细胞线粒体膜电势变化研究

目的研究地塞米松刺激小鼠胸腺细胞过程中线粒体膜电势(△Ψm)的变化。方法以终浓度1×10-6mol/L地塞米松(DEX)刺激小鼠胸腺细胞,通过JC-1染色流式细胞术,在0、1、3、5、7、9、11、24和27h时点分别检测小鼠胸腺细胞平均J-aggregate(FL2)和平均J-monomer(FL1)含量,并计算线粒体膜电势(FL2/FL1)。结果本研究中,小鼠胸腺细胞离体后FL1所反映的线粒体质量迅速下降,至5h对照组达到平台期(913.38±70.11),然后缓慢下降到27h的(622.80±22.81)。DEX组FL1在1h和3h与对照组没有显著差异(P>0.05),而从5h(660.91±72.95)开始显著低于对照组(P<0.01),并且随培养时间延长呈下降趋势,至27h的(309.70±53.35)。对照组和DEX组FL2随培养时间延长而降低。1-9h,对照组和DEX的△Ψm没有显著差异(P>0.05)。而在11、24和27h,对照组△Ψm分别为(256.41±21.59)、(214.14±23.21)和(146.14±17.97),而DEX组△Ψm显著低于对照组(P<0.01),分别为(138.28±20.59)、(111.61±29.67)和(72.92±17.86)。结论DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡过程中,线粒体质量降低和△Ψm下降是早期事件,而细胞内现存线粒体△Ψm下降则是较晚期的事件。在本研究中,线粒体质量下降与现存线粒体膜电势的变化之间关系不紧密。

菝葜皂苷元对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响

目的探讨菝葜皂苷元对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响。方法采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测LoVo细胞的凋亡率;采用流式细胞仪检测细胞周期进程;采用流式细胞仪JC-1染色法检测线粒体膜电位(ΔΨm)水平。结果菝葜皂苷元作用细胞48h后可以诱导细胞凋亡,菝葜皂苷元可阻滞细胞于G2/M期,菝葜皂苷元诱导细胞凋亡时伴随着线粒体膜电位的降低。结论菝葜皂苷元能诱导细胞凋亡,其诱导凋亡的途径可能与线粒体通路有关。

流式细胞仪检测线粒体膜电位方法的研究

通过流式细胞仪进行检测,研究选择每种检测线粒体膜电位(Δψm)荧光染料的适用条件.选用罗丹明123、Di OC6(3)、TMRE、JC-14种荧光染料,通过对紫外线诱导后细胞的线粒体膜电位进行检测,分析每种染料的检测条件.结果表明,罗丹明123检测到的Δψm变化较大,这可能与罗丹明123适用于检测细胞急性损伤中线粒体膜电位变化相关.通过比较实验方法,为将来采用流式细胞仪检测线粒体膜电位提供更准确的实验方法.