苦参碱抑制JM细胞株增殖和诱导凋亡的研究

目的 :观察苦参碱对T细胞白血病细胞株JM的作用。方法 :Wright Giemsa染色及Hoechst 332 5 8荧光染色观察苦参碱作用JM细胞株前后形态学变化 ,电镜观察超微结构的改变 ;流式细胞仪分析不同剂量加药组第4天及 0 .8g·L-1加药组 1～ 4d细胞周期的改变 ;DNA琼脂糖凝胶电泳检测“梯状”DNA。结果 :第 3天起各加药组细胞形态学观察见典型凋亡特征改变 ,随时间延长更加明显 ;流式细胞仪检测第 4天各组均可见亚二倍体峰。0 .1,0 .2 ,0 .4 ,0 .6 ,0 .8g·L-1各处理组凋亡细胞比率分别为 3.1% ,2 .5 % ,13.3% ,4 0 .4 % ,4 8.6 % ,对照组为1.4 % ;各处理组S期细胞比率分别为 2 8.9% ,2 6 .1% ,2 7.7% ,2 0 .9% ,14 .2 % ,对照组为 30 .4 % ;各处理组G1期细胞比率分别为 6 3.2 % ,6 7.5 % ,6 8.1% ,75 .2 % ,83.6 % ,对照组为 4 1.8%。 0 .8g·L-1加药组 1～ 4d ,G1期细胞比率分别为 4 5 .5 % ,77.3% ,77.2 % ,83.6 % ;S期细胞比率分别为 2 8.6 % ,17.5 % ,19.1% ,14 .2 % ;凋亡细胞比率分别为 3.0 % ,3.7% ,9.1% ,4 8.6 %。DNA电泳 :0 .4 ,0 .6 ,0 .8g·L-1组见DNA“梯形”图谱 ,0 .1,0 .2g·L-1及对照组未见。结论 :苦参碱可以抑制JM细胞的DNA合成 ,造成G1期阻滞 ,从而抑制了细胞的增殖。同时 。

苦参碱诱导T淋巴细胞白血病JM细胞凋亡相关基因表达变化及其机制的研究

本研究探讨苦参碱诱导T淋巴细胞白血病JM细胞凋亡相关基因的表达变化,并进一步分析其机制。用0.4mg/ml苦参碱诱导JM细胞4天,分别提取对照组及苦参碱诱导组细胞总RNA,采用凋亡相关基因Atlas cDNA Expression ArrayKit筛选出苦参碱诱导JM细胞前后差异表达的凋亡相关基因,并用Western blot验证部分基因表达变化。结果表明,JM细胞经苦参碱诱导后,基因芯片杂交结果显示31个基因有差异表达,其中caspase8表达上调达5倍以上。Western blot证实caspase8表达变化与苦参碱作用时间呈正相关。结论:苦参碱可诱导JM细胞多个凋亡基因差异表达,其中caspase8表达上调较为显著。

Cathepsin D及Fas ligand在苦参碱诱导急性T淋巴母细胞白血病JM细胞株凋亡中的表达研究

为了检测苦参碱诱导JM细胞发生凋亡过程中Cathepsin D、Fas-L的表达情况,应用光镜及电镜观察加药及未加药组细胞形态学变化。免疫细胞化学染色观察Cathepsin D在细胞内的表达及定位。半定量PCR检测Cathepsin D mRNA在转录水平的变化并用Western Blot检测Cathepsin D、Fas-L蛋白表达。结果显示0.6mg/ml加药组细胞培养72h,出现凋亡形态学改变。免疫细胞化学染色CathepsinD阳性信号主要位于呈凋亡形态学改变的胞浆和胞核内。其阳性细胞率在处理组明显高于对照组,处理组Cathepsin D的mRNA转录上调。处理组前体Cathepsin D(52kD)的条带亮度较对照组强,而切割后产物(32kD)亮度较对照组弱;Fas-L在处理组表达上调。提示:苦参碱诱导JM细胞的凋亡伴随Cathepsin D及Fas-L的表达改变。

不同提取工艺对产油酵母油脂产率的影响

研究了不同的油脂提取工艺对产油酵母油脂产率的影响。以高产油酵母JM-D为原料,以油脂产率为测定指标,比较了蜗牛酶法、超声波破碎法、反复冻融法、细胞匀浆机破碎法、微波破碎法、研磨法以及酸热法对酵母细胞壁的破碎效果,并对有机溶剂提取法与索氏抽提法提取细胞内油脂的效果进行比较。结果显示,蜗牛酶法的细胞破碎效果最好,油脂产率高达46.2%;其次是反复冻融(100℃水浴解冻)法,油脂产率高达43.4%;研磨法+酸热法的油脂提取效果也较好,油脂产率达到37.8%。研磨后,采用索氏抽提法的提取效果优于有机溶剂提取法的。