Wnt3a信号通路通过JMJD6的表观遗传修饰参与神经病理性疼痛

目的:探讨Wnt3a通过Jumonji C结构域6(Jumonji C domain 6,JMJD6)的表观遗传修饰在神经病理性疼痛中发挥作用的机制。方法:将SD大鼠分为4组:Sham组,慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)组,CCI+阴性慢病毒表达载体(LV-NC)组;CCI+慢病毒过表达载体(LV-JMJD6)组。构建SD大鼠坐骨神经CCI模型和JMJD6慢病毒表达载体。CCI术后第3天通过鞘内导管给药,按照分组分别给予生理盐水和含慢病毒的试剂(病毒滴度1×108 TU/mL)各20μL。监测大鼠的机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL),并运用蛋白质印迹法检测脊髓水平Wnt3a及NR2B蛋白的表达变化,免疫共沉淀检测JMJD6与Wnt3a之间是否存在直接相互作用。结果:与Sham组相比,CCI术后各组大鼠的PWMT明显降低和PWTL明显缩短(P<0.05)。与CCI组和CCI+LV-NC组相比,CCI+LV-JMJD6组的PWMT在术后第10和14天明显升高,PWTL在术后第14天明显延长(P<0.05)。CCI术后第14天,CCI组及CCI+LV-NC组Wnt3a和NR2B蛋白表达水平较Sham组明显升高,鞘内注射慢病毒载体后,CCI+LV-JMJD6组的Wnt3a和NR2B蛋白表达水平较CCI+LV-NC组降低(P<0.05)。免疫共沉淀结果显示Wnt3a与JMJD6之间无直接相互作用。结论:Wnt3a参与调节神经病理性疼痛,其作用可能与JMJD6的表观遗传修饰相关,两者可能通过间接相互作用进行调节。

JMJD6参与调节肿瘤抑制因子p53的转录活性

目的确定JMJD6与转录因子p53的相互作用,研究JMJD6对p53转录活性的影响,并通过鉴定JMJD6的赖氨酸羟化酶活性探讨其可能的作用机制。方法免疫共沉淀技术和GST pull-down实验分析JMJD6和p53的相互作用及其作用区域;荧光素酶双报告基因系统检测JMJD6对p53靶基因启动子活性的影响;体外羟基化实验和质谱鉴定JMJD6的羟化酶活性。结果 JMJD6与p53相互作用,并由p53的C端结构域介导;JMJD6参与激活p53的转录活性;JMJD6具有赖氨酸羟化酶活性,可以催化组蛋白H4发生羟基化。结论赖氨酸羟化酶JMJD6可以结合肿瘤抑制因子p53并参与调节其转录活性。

宫内缺氧对幼年大鼠海马CA3区SYN、Jmjd6的表达与学习、记忆能力的影响

目的探讨宫内缺氧对幼年大鼠海马CA3区突触体素(SYN)、Jmjd6表达的影响,研究宫内缺氧对幼年大鼠海马CA3区神经元与学习、记忆能力的影响机制。方法将健康SD孕鼠随机分为对照组(6只)和缺氧组(8只),于孕14 d开始将缺氧组孕鼠置于三气培养箱制作胎鼠宫内缺氧模型,对照组不做缺氧处理。产后,两组每窝随机选取新生鼠饲养至30 d行Morris水迷宫实验,实验后取脑组织,行SYN及Jmjd6免疫组织化学染色。结果通过实验发现,缺氧组幼年大鼠探查测试时间和对位探查测试时间均较对照组短(P<0.05)。利用免疫组化法比较两组SYN和Jmjd6阳性细胞的积分光密度(IOD)值,缺氧组SYN阳性细胞的IOD值均显著小于对照组(P<0.05);缺氧组Jmjd6阳性细胞的IOD值均显著高于对照组(P<0.05)。结论一定时间(2 h/d,持续5 d)、一定浓度(氧浓度130 ml/L)的宫内缺氧可以导致幼年大鼠学习、记忆能力下降,其机制可能与缺氧导致幼年大鼠海马CA3区SYN含量降低、表达减少及Jmjd6功能减弱有关。

JMJD6与Ki67在胶质瘤中的表达及相关性

目的探讨包含Jumonji C结构域蛋白6(Jumonji C-domain containing protein 6,JMJD6)和Ki67在不同病理级别胶质瘤中的表达及三者的相关性和意义。方法从2018至2020年我科收治的胶质瘤患者中,按病理级别和发病率随机抽取42例肿瘤标本,用免疫组化法检测瘤组织JMJD6与Ki67的表达;分析各级别胶质瘤JMJD6、Ki67表达的差异;Pearson相关分析法分析JMJD6、Ki67表达水平与病理级别之间的相关性。结果JMJD6表达的中位数为Ⅰ级0.05,Ⅱ级4.50,Ⅲ级7.50,Ⅳ级8.00,JMJD6的表达水平随着胶质瘤级别的增加而升高,级别间的差异有统计学意义(H=25.397,P?0.001);Ki67表达的中位数为Ⅰ级0.010,Ⅱ级0.050,Ⅲ级0.325,Ⅳ级0.550,Ki67的表达水平也随着胶质瘤级别的增加而升高,级别间的差异有统计学意义(H=30.804,P?0.001);JMJD6的表达水平与病理级别呈正相关(r=0.782,P?0.001);Ki67的表达水平与病理级别呈正相关(r=0.852,P?0.001);JMJD6与Ki67两者的表达水平呈正相关(r=0.709,P?0.001)。结论JMJD6和Ki67与胶质瘤病理级别三者之间存在正相关关系,JMJD6与胶质瘤的恶性程度及增殖有关,可作为预测预后的指标。

基于TCGA数据库分析JMJD6在肝癌组织中的表达及临床意义

目的:分析JMJD6在肝癌中的表达及与预后的关系。方法:从TCGA数据库中下载肝癌患者的mRNA表达数据及患者临床信息。利用Wilcoxon检验比较肝癌组织和正常组织中JMJD6的表达差异,单因素Logistic回归分析JMJD6表达量与临床特征的关系。通过Kaplan-Meier法和Cox回归分析JMJD6表达量与患者生存率的关系。将肝癌组织分成JMJD6高表达组和低表达组并进行基因集富集分析(GSEA)。结果:与正常组织相比,JMJD6在肝癌组织中高表达(W=2506,P<0.001),且表达量与临床分期和病理分级相关(均P<0.05)。JMJD6高表达导致患者生存率下降(χ^(2)=5.541,P<0.05),并且是肝癌患者预后的独立危险因素(HR=1.109,95%CI:1.039~1.184,P<0.01)。此外,GSEA结果显示JMJD6高表达组在DNA复制、RNA剪接等通路富集,低表达组在脂肪酸和氨基酸代谢通路富集。结论:JMJD6高表达与肝癌的发生、发展及患者不良预后相关。

过表达JMJD6基因的293T细胞系的构建及对水疱性口炎病毒增殖效率的评价

为提高水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建Jumonji C结构域蛋白6(Jumonji domain-containing protein 6,JMJD6)过表达的HEK-293T/JMJD6细胞系,分析VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系与HEK-293T细胞中的复制差异。首先以JMJD6基因为目标,构建重组质粒pLV-puro-3×Flag-JMJD6,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装。将包装好的慢病毒感染HEK-293T细胞并通过嘌呤霉素筛选获得过表达JMJD6基因的阳性细胞。利用Western-blot、间接免疫荧光试验、流式细胞术和蚀斑试验检测VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系中的复制能力。结果显示,在HEK-293T/JMJD6细胞系中,VSV的复制能力显著增强。实时荧光定量检测VSV感染的HEK-293T/JMJD6细胞系和野生型HEK-293T细胞中干扰素下游基因的表达,结果显示HEK-293T/JMJD6细胞系抑制VSV诱导的Ⅰ型干扰素下游基因的产生。总之,本研究构建的HEK-293T/JMJD6细胞系能显著促进VSV的增殖并抑制Ⅰ型干扰素信号通路,为VSV疫苗候选细胞株的筛选奠定了基础。

JMJD6在氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型中的表达

颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)是临床中最常见的难治性癫痫。Jumonji结构域家族蛋白6(the jumonji domain-containing protein 6,JMJD6)与神经系统密切相关且被发现在恶性肿瘤中高表达,而JMJD6与TLE之间的关系目前尚未明确。本研究旨在探讨JMJD6是否参与TLE的发生发展,为阐明TLE的发病机制提供新的思路。方法 该研究运用qRT-PCR和Western blot检测氯化锂-匹罗卡品TLE大鼠中,mRNA及JMJD6指标情况。结果 样本大鼠JMJD6在氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型中的表达情况高于正常大鼠。结论 mRNA及JMJD6有可能参与TLE的发生发展。

JMJD6在胃癌组织中的表达及意义

目的:检测JMJD6蛋白在胃癌组织及相应癌旁正常组织中的表达情况,并分析JMJD6蛋白表达与胃癌患者临床病理参数及预后的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测JMJD6蛋白在胃癌组织及相应癌旁正常组织中的表达情况,进一步用Kaplan-Meier生存分析、COX比例风险回归模型等统计学方法研究JMJD6表达与胃癌患者临床病理参数及预后的关系。结果:JMJD6在胃癌组织中的表达阳性率显著高于癌旁正常组织(P=0.001);JMJD6在胃癌组织的高表达与肿瘤临床分期(P=0.008)、病理分级(P=0.001)、局部浸润深度(P=0.028)、有无淋巴结转移(P=0.001)等显著相关;Kaplan-Meier生存分析结果表明JMJD6高表达的胃癌患者术后总体生存率显著低于JMJD6低表达的患者(P=0.023)。结论:JMJD6在胃癌的发生发展中可能发挥了癌基因样作用,可能作为胃癌治疗的潜在靶点。

JMJD6通过正向调控H2A.XY39ph促进三阴性乳腺癌发生发展

JMJD6(Jmjc domain-containing 6)具有组蛋白精氨酸去甲基化酶和赖氨酸羟基化酶活性,在包括乳腺癌在内的多种肿瘤中高表达,并与肿瘤发生发展密切相关。但是,JMJD6在乳腺癌的三阴性亚型中的表达状况以及在三阴性乳腺癌发生发展过程中的作用尚不十分明确。本研究经三阴性乳腺癌患者样本的免疫组织化学分析发现,JMJD6在三阴性乳腺癌组织中的表达水平高于配伍癌周组织,而且与H2A.XY39ph水平呈正相关。在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,经瞬时转染JMJD6过表达质粒或小干扰RNA分子,通过Western blot检测证实了JMJD6能够正向调控H2A.XY39ph修饰水平。本研究进一步通过CCK-8和Transwell实验证实JMJD6高表达能够促进MDA-MB-231细胞增殖、迁移能力,并呈现时间依赖性和计量依赖性。随后又通过小鼠成瘤实验证实JMJD6能促进裸鼠体内三阴性乳腺癌的发生发展。但是,H2A.XY39位点去磷酸化能够减弱JMJD6的上述功能。综上,本研究结果提示,JMJD6通过促进H2A.XY39位点磷酸化正向调控三阴性乳腺癌发生发展,为乳腺癌机制研究提供了新思路。

肽酰精氨酸的翻译后修饰

肽酰精氨酸残基甲基化作用是细胞质与细胞核内蛋白质翻译后修饰的普遍方式。精氨酸残基甲基化蛋白质与许多细胞生物学过程有关,包括转录调节、RNA代谢和DNA损伤修复等。生物体内精氨酸N-甲基转移酶类、肽酰精氨酸脱亚氨酶类与JMJD6等催化肽酰精氨酸残基进行甲基化、瓜氨酸化和去甲基化的动态修饰。这种动态修饰对细胞生物学功能有重要调节作用。

组蛋白修饰与癫痫的发生发展研究进展

癫痫是由脑部神经元异常同步或过度放电导致的一种慢性脑部疾病。在神经系统疾病中,癫痫已成为仅次于脑血管病的第二大严重威胁人类健康的疾病,且其发病机制至今未明。表观遗传机制是调节基因表达的一种方式,其中组蛋白修饰是主要的表观遗传修饰之一。组蛋白修饰的异常与癫痫的发生发展密切相关,本文对组蛋白修饰与癫痫的关系进行综述,以期从组蛋白修饰的角度阐明两者之间的关系,为癫痫的防治提供新思路。

27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)及其修饰酶在小鼠不同组织中分布

目的研究出生后7日龄和2月龄小鼠各组织器官中27位氨基酸三甲基化的组蛋白3(H3K27me3)的水平及其修饰酶Zeste基因增强子同源物2(EZH2)、赖氨酸特异性脱甲基酶6B(Kdm6B/JMJD3)和赖氨酸特异性脱甲基酶6A(Kdm6A/UTX)的表达。方法免疫组织化学染色法检测7日龄和2月龄小鼠脑、涎腺、背部脂肪、胸腺、肺、心脏、胃、肠、肝、睾丸、皮肤组织中H3K27me3、EZH2、JMJD3和UTX表达,实时定量PCR验证,统计分析H3K27me3水平与EZH2、JMJD3和UTX表达之间的关系。结果 H3K27me3在7日龄和2月龄小鼠被检测组织中均持续存在;EZH2在7日龄和2月龄小鼠脑、心肌、肝及皮肤中表达,但仅在2月龄小鼠涎腺、肠、睾丸、肺、脂肪组织、胸腺中持续表达;JMJD3在7日龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、肠、睾丸、肺、脂肪组织、胃中表达,但在2月龄小鼠的肺、脂肪组织、胃中不再表达;UTX在7日龄小鼠的脑、皮肤、涎腺、心肌、睾丸、肺及脂肪组织中表达,但仅在2月龄小鼠睾丸中表达;大部分免疫组织化学染色阳性的H3K27甲基调节酶相应的mRNA呈中等或较高水平表达。结论 H3K27me3在小鼠不同时期各组织中均持续存在;EZH2多存在于2月龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、肠、睾丸、肺、脂肪组织、肝、胸腺;JMJD3、UTX多存在于7日龄小鼠脑、皮肤、涎腺、心肌、睾丸、肺、脂肪组织;H3K27me3分布与EZH2的表达之间无明显一致关系,与JMJD3或UTX不存在明显反向分布关系,EZH2与JMJD3或UTX的表达分布也不存在反向关系。提示EZH2、JMJD3和UTX在小鼠出生后多种组织中可能起重要作用;在体内H3K27me3水平及其修饰酶可能受多因素控制,以完成复杂的生理功能。