头痛宁对偏头痛模型大鼠硬脑膜、三叉神经节及脑干区JNK-1和PAR-2表达的影响

目的：观察偏头痛模型大鼠硬脑膜、三叉神经节及脑干区丝裂原活化蛋白激酶家族c-Jun氨基末端激酶-1（JNK-1）和G-蛋白耦联受体家族蛋白酶激活受体-2（PAR-2）的表达以及中药头痛宁对其影响。方法：成年SD大鼠30只随机均分为正常对照组、模型组和头痛宁治疗组3组,每组10只。模型组、治疗组大鼠皮下注射硝酸甘油注射剂10mg/kg建立实验性偏头痛模型,模型组造模30min后蒸馏水1.04mL/kg灌胃,治疗组造模15~20min后头痛宁1.2g/kg灌胃。1周后用免疫组化法检测各组大鼠硬脑膜、三叉神经节及脑干区JNK-1和PAR-2的表达。结果：模型组硬脑膜、三叉神经节及脑干区JNK-1和PAR-2的表达均高于其他2组（JNK-1：F硬脑膜=288.665,F三叉神经节=20016.775,F脑干=333774.771,P均〈0.001;PAR2：F硬脑膜=25790.690,F三叉神经节=820.497,F脑干=198.165,P均〈0.001）,治疗组和对照组上述指标差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：头痛宁可通过下调偏头痛模型大鼠硬脑膜、三叉神经节及脑干区JNK-1和PAR-2的表达,防治偏头痛。

基于TRAF2/AP-1信号通路探讨柴苓合剂对痰瘀互结MS-IR大鼠炎症因子影响

目的基于TRAF2/AP-1信号通路探讨柴苓合剂对痰瘀互结代谢综合征胰岛素抵抗(MS-IR)大鼠糖代谢、脂代谢、炎症因子的部分作用机制。方法48只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组和造模组。造模组大鼠采用高脂高糖饲料喂养,注射小剂量链脲佐菌素(STZ)(35 mg/kg),同时用物理刺激方法,建立痰瘀互结型MSIR大鼠模型。造模成功后将大鼠随机分为模型组,柴苓合剂低、中、高剂量组,西药组进行干预。给药各组分别进行柴苓合剂、吡格列酮干预治疗3周,空白组、模型组给予等体积的蒸馏水灌服。生化检测大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Western Blot检测肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达;HE染色切片,光学显微镜观察用药前后肝细胞损伤、肝细胞坏死、脂质堆积、炎症细胞浸润等情况。结果(1)糖代谢指标水平。与空白组相比,模型组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR水平均升高(P<0.01);与模型组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组FBG、FINS、HOMA-IR水平均降低(P<0.01);与西药组比较,柴苓合剂高剂量组FBG、FINS、HOMA-IR水平差异无统计学意义(P>0.05);与柴苓合剂低剂量组比较,柴苓合剂高、中剂量组及西药组FBG、FINS、HOMA-IR水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂中剂量组比较,柴苓合剂高剂量组及西药组FBG、FINS、HOMA-IR水平降低(P<0.01)。(2)脂代谢指标水平。与空白组相比,模型组大鼠甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)水平均升高(P<0.01);与模型组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组TG、CHO水平均降低(P<0.01);与西药组相比,柴苓合剂中、高剂量组TG、CHO水平均降低(P<0.05,P<0.01),柴苓合剂低剂量组TG、CHO水平差异无统计学意义(P>0.05);与柴苓合剂低剂量组相比,柴苓合剂中、高剂量组TG、CHO水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂中剂量组相比,柴苓合剂高剂量组TG、CHO水平均降低(P<0.01)。(3)TNF-α、IL-6水平。与空白组相比,模型组大鼠TNF-α、IL-6水平均升高(P<0.01);与模型组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.01);与西药组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂低剂量组相比,柴苓合剂中、高剂量组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.05,P<0.01);与柴苓合剂中剂量组相比,柴苓合剂高剂量组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.01)。(4)肝组织TRAF2/JNK/AP-1信号通路蛋白表达。与空白组相比,模型组大鼠肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达均上调(P<0.01);与模型组比较,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.05,P<0.01);与西药组比较,柴苓合剂高剂量组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.01),柴苓合剂低、中剂量组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与柴苓合剂低剂量组比较,柴苓合剂高剂量组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.01),柴苓合剂中剂量组肝组织AP-1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),TRAF2、JNK蛋白表达水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂中剂量组比较,柴苓合剂高剂量组TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.05,P<0.01)。结论柴苓合剂高剂量能显著改善痰瘀互结MS-IR大鼠糖代谢、脂代谢和炎症因子,其作用机制可能是柴苓合剂通过调控TRAF2蛋白作用于JNK蛋白,引起它的下游反应,又通过JNK的磷酸化作用于AP-1,释放炎症因子,从而TRAF2作用于JNK,然后磷酸化于AP-1使炎症因子降低有关。

转染DPP-4 siRNA或(和)加入SP600125的小鼠肺泡巨噬细胞极化及JNK/AP-1信号通路激活情况观察

目的观察转染二肽基肽酶-4(DPP-4)siRNA或(和)加入c-Jun N-末端激酶(JNK)抑制剂(SP600125)的小鼠肺泡巨噬细胞极化情况、JNK/AP-1信号通路激活情况。方法体外培养小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S),并随机分组:Control组转染空载siRNA、siDPP-4组转染DPP-4 siRNA、LPS组转染空载siRNA+LPS、siDPP-4+LPS组转染DPP-4 siRNA+LPS、LPS+SP600125组转染空载siRNA+LPS联合SP600125、siDPP-4+LPS+SP600125组转染DPP-4 siRNA+LPS联合SP600125。采用Western boltting法检测巨噬细胞中M1型和M2型极化标志物CD86、CD206蛋白及JNK、激活蛋白-1(AP-1)转录蛋白(c-Jun、c-Fos)磷酸化,RT-qPCR法检测巨噬细胞中M1型标志物(CD86、TNF-α、iNOS、IL-1β)和M2型标志物[CD206、精氨酸激酶-1(ARG-1)、IL-4、IL-10]mRNA,一氧化氮(NO)测定试剂盒、免疫荧光检测巨噬细胞上清液中M1型促炎因子NO和细胞内活性氧(ROS)生成情况。结果与Control组比较,LPS组M1型促炎型因子NO、ROS生成含量及M1型极化标志物(CD86蛋白及CD86、TNF-α、iNOS、IL-1βmRNA)表达升高,M2型极化标志物(CD206蛋白及CD206、ARG-1、IL-4、IL-10 mRNA)表达降低,P均<0.05。与LPS组比较,siDPP-4+LPS组M1型促炎型因子NO、ROS生成含量及M1型极化标志物(CD86蛋白及CD86、TNF-α、iNOS、IL-1βmRNA)表达升高,M2型极化标志物(CD206蛋白及CD206、ARG-1、IL-4、IL-10 mRNA)表达降低,P均<0.05。与LPS组比较,siDPP-4+LPS组p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、p-c-Fos/c-Fos蛋白磷酸化相对表达量升高,P均<0.05。与siDPP-4+LPS组比较,siDPP-4+LPS+SP600125组p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、p-c-Fos/c-Fos蛋白磷酸化相对表达量降低,P均<0.05。结论转染DPP-4 siRNA可促进LPS诱导的小鼠肺泡巨噬细胞M1型极化,抑制肺泡巨噬细胞M2型极化,并增加JNK、c-Jun、c-Fos蛋白磷酸化表达;加入JNK抑制剂后,可降低由转染DPP-4 siRNA引起的JNK、c-Jun、c-Fos蛋白磷酸化表达升高。转染DPP-4 siRNA促进LPS诱导的小鼠肺泡巨噬细胞M1型极化的作用机制可能与激活JNK/AP-1信号通路有关。

汉黄芩素通过调控JNK/AP-1信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经功能障碍、脑组织损伤的影响

目的探讨汉黄芩素通过调控c-Jun氨基末端激酶(JNK)/激活蛋白-1(AP-1)信号通路对缺血性脑卒中(CIS)大鼠神经功能障碍及脑组织损伤的影响。方法大鼠随机分为对照组、模型组、汉黄芩素低剂量组(0.07 mg/kg)、汉黄芩素高剂量组(0.14 mg/kg)、丁苯酞组(20 mg/kg)、汉黄芩素高剂量+JNK激活剂(Anisomycin)组(0.14 mg/kg+5 mg/kg),每组20只。对照组大鼠仅切开皮肤、分离血管,不进行拴线处理,其余各组均按照改良的线栓法构建CIS模型。建模成功后,各组给予相应剂量药物,每天1次,连续14 d。Zea-Longa评分法评价大鼠神经功能,TTC染色测定大鼠脑梗死体积,干湿重法测定大鼠脑组织含水量,HE染色观察大鼠脑组织海马CA1区神经细胞病理变化,试剂盒检测大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平,TUNEL染色检测大鼠脑组织神经细胞凋亡,Western blot法检测大鼠脑组织p-JNK1、p-c-Jun、p-c-Fos蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠海马CA1区神经细胞病理损伤严重,神经功能评分、脑梗死体积百分比、脑组织含水量、MDA水平、神经细胞凋亡率、p-JNK1、p-c-Jun、p-c-Fos蛋白表达升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05);与模型组比较,汉黄芩素各剂量组和丁苯酞组以上指标改善(P<0.05);Anisomycin减弱了高剂量汉黄芩素对CIS大鼠神经功能障碍及脑组织损伤的改善作用。结论汉黄芩素可能通过抑制JNK/AP-1信号通路来改善CIS大鼠神经功能障碍及脑组织损伤。

DLEU1通过调控p38/JNK信号通路促进高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖和血管重塑的实验研究

目的:探讨淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)促进高血压大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和血管重塑的机制及相关信号通路。方法:将12只DLEU1转基因大鼠(DTRs)随机分为DTRs组、p38组、JNK组,每组4只,分别经腹腔注射二甲基亚砜溶液、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125,并以Wistar大鼠(4只)为对照组,采用苏木精-伊红(HE)染色确定主动脉、心脏和肾脏的形态结构。通过转染DLEU1过表达质粒,构建DLEU1过表达的VSMCs,同时给予SB203580、SP600125干预,通过溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)实验、细胞周期及迁移实验比较不同干预细胞的生物活性的差异。结果:DTR组大鼠血管腔面积显著减小、中膜增厚,肾组织中可见小动脉增生,血管壁和肾小球增厚,p38及JNK抑制剂可减轻DLEU1介导的血管中膜增厚的效应,增加中膜/管腔面积比,肾脏小动脉的病理改变也有所改善。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测显示,转染过表达DLEU1质粒后,VSMCs中DLEU1的相对表达量显著提高(P<0.05),表明细胞模型构建成功。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测发现,磷酸化p38和JNK蛋白的表达上调。DLEU1过表达导致细胞增殖率显著增加。经p38和JNK抑制剂处理后,细胞增殖率均有所下降(P<0.05)。p38和JNK抑制剂可显著阻断细胞周期,处理后,G0/G1期细胞比例均有所上升。过表达DLEU1可显著提高细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的蛋白表达水平,而阻断p38和JNK可部分消除DLEU1对MMP-2和MMP-9蛋白表达的促进作用。Western Blot检测显示,DLEU1过表达细胞骨桥蛋白(OPN)蛋白表达水平明显上调,平滑肌22α(SM-22α)蛋白表达显著下调,经p38抑制剂和JNK抑制剂干预后,OPN蛋白表达水平明显降低,SM-22α蛋白表达水平上调。结论:高血压时DLEU1介导的VSMCs增殖和表型改变需要p38/JNK通路介导。

壮骨镇痛胶囊对乳腺癌细胞迁移运动信号通路关键蛋白P-JNK和Rac-1表达的影响

目的:研究壮骨镇痛胶囊对高转移人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移及其运动信号通路关键蛋白p-JNK和Rac-1表达水平的影响。方法:采用划痕法测定高(5.0%)、中(1.25%)、低(0.63%)不同浓度壮骨镇痛胶囊含药血浆对MDA-MB-231细胞迁移的影响,采用免疫细胞化学法检测不同浓度壮骨镇痛胶囊对MDA-MB-231细胞p-JNK和Rac-1蛋白表达水平的影响。结果:高、中浓度壮骨镇痛胶囊含药血浆显著抑制了乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和p-JNK、Rac-1蛋白表达,低浓度血浆对细胞迁移和p-JNK、Rac-1蛋白表达无显著影响。结论:壮骨镇痛胶囊可通过改变运动信号通路关键蛋白p-JNK和Rac-1的表达来抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移,且该作用与浓度密切相关。

导痰汤对颈动脉硬化家兔细胞间黏附分子-1及JNK表达的影响

目的研究导痰汤是否能通过对细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和JNK通路的调节而干预颈动脉粥样硬化。方法将25只雄性新西兰白兔随机分为对照组、模型组及导痰汤大、中、小剂量组。对照组给予基础饲料喂饲,模型组和导痰汤治疗组予以高脂饲料喂饲,并在喂饲1周后实施颈动脉内膜空气干燥术,术后治疗组分别予10、8、6 mL/kg导痰汤灌胃,每日给药1次。4周后处死家兔,取每只家兔右侧颈动脉远端1 cm,固定后行HE染色观察病理改变。应用免疫组化SABC法检测ICAM-1和JNK表达情况。结果模型组血管壁泡沫细胞、平滑肌细胞和内皮细胞的胞浆中有ICAM-1和JNK强阳性表达,明显高于对照组(P<0.01)。导痰汤治疗组细胞内ICAM-1和JNK阳性表达明显低于模型组(P<0.01),且随剂量的增加,对ICAM-1和JNK的抑制逐渐增强;JNK活性与ICAM-1水平呈显著正相关(r=0.848,P<0.01)。结论导痰汤可以有效抑制颈动脉硬化家兔血管内皮细胞中ICAM-1和JNK的表达。

JNK/MCP-1信号通路在姜黄素抗糖尿病神经病理性疼痛中的作用

目的：观察JNK/MCP-1通路在姜黄素抗大鼠糖尿病神经病理性疼痛（DNP）中的作用及机制。方法：雄性SD大鼠诱导为2型糖尿病神经病理性痛大鼠（DNP）模型,将其随机分为6组（n=27）：DNP组、姜黄素组（Cur组）、溶剂对照组（DSC组）、JNK抑制剂组（DJ组）、JNK抑制剂溶剂对照组（DJS组）、姜黄素＋单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）激动剂组（DM组）。另取27只正常大鼠为正常对照组（C组）,给药后3 d、7 d、14 d时测定机械缩足痛阈和热缩足潜伏期,并在同一时点取脊髓腰膨大及L4-6背根神经节（DRG）,用免疫印迹法测定脊髓和DRG中p-JNK水平,用ELISA测定脊髓和DRG中的MCP-1含量。结果：与DNP组相比,在给药后的7 d、14 d Cur组、DJ组、DM组p-JNK的表达明显下降（P〈0.05）;与C组相比,链脲佐菌素给药后其它6组MCP-1含量出现明显下降;与DNP组相比,在给药后的7 d、14 d Cur组、DJ组MCP-1出现明显上升,而DM组出现进一步下降（P〈0.05）。结论：DNP大鼠脊髓和DRG中的p-JNK、MCP-1表达明显升高,姜黄素减轻2型糖尿病大鼠神经病理性疼痛的机制可能与JNK/MCP-1信号通路有关。

吡那地尔对术后持续性疼痛大鼠脊髓JNK/MCP-1释放的影响

目的:观察吡那地尔(pinacidil)对术后持续性疼痛大鼠脊髓JNK/MCP-1释放的影响。方法:随机将35只大鼠分为正常组(Control组)、假手术组(Sham组)、切割+牵拉皮肤肌肉组(SMIR组)、溶剂+SMIR组(Vehicle组)、吡那地尔+SMIR(Pina组)、吡那地尔+格列苯脲+SMIR组(Pina+Gli组)、格列苯脲+SMIR组(Gli组)等7组。检测各组机械刺激缩足反射痛阈值(MWT),Western blot/ELISA法检测脊髓JNK/MCP-1蛋白表达。结果:(1)与Sham组相比,SMIR组MWT在术后3 d开始降低(P<0.01),并持续21 d(P<0.001)以上;(2)SMIR术后持续显著上调脊髓JNK/MCP-1的表达(P<0.01);(3)鞘内注射吡那地尔显著下调术后SMIR诱导的脊髓JNK/MCP-1表达(P<0.01)和上调MWT(P<0.01),格列苯脲能阻断吡那地尔所引起的上述变化(P<0.05)。结论:吡那地尔能抑制切割及牵拉皮肤肌肉所致的术后持续性疼痛,其机制可能与抑制JNK/MCP-1的上调有关。

川崎病中IgM-AECA通过JNK、p38及NF-κB诱导内皮细胞ICAM-1的表达

目的川崎病(Kawasaki Disease,KD)大部分病人血清中存在抗内皮细胞受体抗体-IgM(IgM An-ti-endothelial cell antibodies,IgM-AECA)。该研究旨在探讨抗内皮细胞受体抗体(AECA)通过何种途径诱导内皮细胞细胞内吸附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达以激活血管内皮细胞。方法检测30名KD患儿血清IgM-AECA浓度,并从17名AECA阳性KD患儿血清中提纯IgM-AECA,用IgM-AECA直接刺激人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAEC)后,通过R T-PCR及ELISA方法检测ICAM-1 mR NA及蛋白的表达,同时应用了PD98059,SB203580,dimethylaminopurine(DMAP)和parthenolide,4种蛋白激酶阻断剂观察IgM-AECA通过何种途径激活HCAEC。结果 KD病人血清中的IgM-AECA可使HCAEC的ICAM-1 mRNA及蛋白表达明显增加,SB203580(p38阻断剂)、DMAP(JNK阻断剂)及parthenolide(NF-κB阻断剂)明显抑制ICAM-1的表达(均P<0.01),而PD98059(ERK1/2阻断剂)不能抑制ICAM-1的表达(P>0.05)。结论 KD病人血清中的IgM-AECA通过增强ICAM-1的表达来激活内皮细胞,IgM-AECA通过p38、JNK MAPK及NF-κB通路诱导ICAM-1的表达,IgM-AECA可能在KD冠状动脉病变的发生中发挥重要作用。

Grx1抑制高糖诱导的H9c2细胞中Caspase-8/3和JNK/c-Jun凋亡通路的激活

谷氧还蛋白1(glutaredoxin 1,Grx1)作为一种重要的抗氧化剂,通过响应多种重要蛋白质的活动和功能调节细胞的关键过程.了解Grx1功能,对寻求糖尿病和心肌病等,以凋亡失调和氧化还原稳态改变为发病机制的疾病的新颖治疗策略至关重要.为研究Grx1对高糖诱导的大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及相关信号机制,本研究以高糖诱导大鼠心肌细胞H9c2建立高糖损伤模型,采用免疫印迹实验检测caspase-3、8、9蛋白活性片段的表达和凋亡信号蛋白JNK/c-Jun的磷酸化水平.结果显示,与正常对照组相比,高糖组caspase家族中,剪切的caspase-3、caspase-8、caspase-9相对含量均显著增多,JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平均显著上调.但给予外源性Grx1保护后,剪切的caspase-3和caspase-8相对含量均显著降低,JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平均显著下调.上述结果表明,高糖通过介导caspase-8/3和caspase-9/3凋亡通路,并激活凋亡相关信号通路JNK/c-Jun诱导H9c2心肌细胞凋亡.给予外源性Grx1保护后,可通过抑制caspase-8/3凋亡通路和JNK/c-Jun信号通路的激活,拮抗高糖诱导的心肌细胞凋亡.

EB病毒编码的BARF1基因通过JNK/c-Jun信号通路调节鼻咽癌细胞bcl-2的表达

目的:探讨EB病毒编码的BARF1基因对鼻咽癌细胞JNK/c-Jun信号通路活性及bcl-2表达的影响。方法:以p SG5空载体转染鼻咽癌细胞系CNE1(CNE1-SG)为对照,采用蛋白质印迹法检测稳定表达BARF1的CNE1细胞(CNE1-BARF1)中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达;经JNK特异性抑制剂SP600125处理后,检测CNE1-BARF1细胞中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达。结果:与CNE1-SG细胞相比,CNE1-BARF1细胞中cJun、BCL-2表达以及JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平明显增加(P<0.05)。经SP600125处理后,CNE1-BARF1细胞中c-Jun及BCL-2表达明显降低(P<0.05),c-Jun磷酸化水平也降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BARF1基因可能通过激活JNK/c-Jun信号通路上调原癌基因bcl-2的表达。

LncRNA Mirt2通过调控MKP-1/JNK通路保护心肌细胞避免缺氧复氧损伤

目的探讨LncRNA Mirt2在心肌细胞H9C2缺氧复氧损伤过程中的作用及其机制。方法检测LncRNA Mirt2在急性心肌损伤患者血液中的水平。建立H9C2心肌细胞缺氧复氧模型,检测LncRNA Mirt2在H9C2缺氧复氧模型中的表达。采用脂质体转染法将LncRNA Mirt2 mimics和阴性对照转染入H9C2细胞中,qRT-PCR验证转染效率。实验分为对照组、缺氧复氧组、过表达对照组和Mirt2过表达组。Western blot分析IL-1β和IL-6的蛋白表达;EILSA分析IL-1β和IL-6浓度变化;CCK-8分析细胞活力,Caspase-3相对活性检测,TUNEL染色分析细胞凋亡;Western blot分析核糖聚合酶(PARP)、剪切的核糖聚合酶(Cleaved PARP)、Caspase-3前体(Pro-Caspase-3)、Caspase-3剪切体(Cleaved Caspase-3)、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)、c-Jun氨基末端激酶(t-JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK),t-c-Jun,磷酸化c-Jun蛋白(p-c-Jun)的蛋白表达。结果Mirt2在急性心肌损伤患者血液中表达下调,同时在H9C2缺氧2 h复氧12 h细胞中表达下调。在H9C2细胞缺氧复氧模型中:与对照组相比,Mirt2过表达组炎性因子IL-1β和IL-6的表达显著降低;CCK-8实验和凋亡实验检测结果表明,与过表达对照组相比,Mirt2过表达组细胞活力增强,凋亡数减少;Western blot结果表明,与过表达对照组相比,过表达Mirt2减少Cleaved PARP/Cleaved Caspase-3的表达,p-JNK、p-c-Jun的表达并增加了MKP-1的蛋白表达。结论Mirt2在缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤过程中发挥保护作用,其作用机制可能是通过激活MKP-1/JNK通路。

白细胞介素-1通过JNK信号通路调控Schlafen2基因的表达

目的:在多效生长因子(Ptn)基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞Ptn-siRNA B/MEF241中,研究白细胞介素-1(IL-1)调控Schlafen2(Slfn2)基因表达的机制。方法:应用Northernblot检测Ptn沉默细胞Ptn-siRNAB/MEF241处于不同生长密度时Slfn2基因的表达变化,以确定Ptn沉默细胞中Slfn2基因的表达是否受到某种分泌性细胞因子的调控;用不同浓度的IL-1α中和抗体及IL-1受体拮抗剂处理Ptn沉默细胞,通过Northern blot检测细胞内Slfn2表达的抑制情况;用不同浓度的IL-1α中和抗体及IL-1受体拮抗剂处理Ptn沉默细胞不同时间,通过Western blot检测细胞中JNK磷酸化水平;Northern blot检测SP600125(JNK/MAPK通路抑制剂)对Ptn沉默细胞中Slfn2基因表达的影响。结果:Ptn沉默细胞中Slfn2基因的表达水平同细胞密度相关;用中和抗体和受体拮抗剂阻断IL-1通路,Slfn2表达受到显著抑制;IL-1受到抑制会影响JNK通路的活化;阻断JNK通路,Slfn2的表达受到显著抑制。结论:IL-1可以通过JNK通路诱导Slfn2的表达。

IL-1β上调大鼠HSCs TIMP-1 mRNA表达与JNK和P38通路的关系

目的探讨IL-1β调控大鼠HSCs TIMP-1mRNA表达与JNK、p38MAPK通路的关系。方法RT-PCR用于检测大鼠HSCsTIMP-1 mRNA表达;Western blot用于测定IL-1刺激HSCs后JNK、p38的活化程度。结果IL-1β(10ng/mL)作用培养的HSCs24h后,TIMP-1mRNA表达(1.191±0.079)明显高于对照组(0.545±0.091),有统计学意义(P<0.01);IL-1β以时间依赖方式激活JNK、p38通路。用不同浓度JNK阻断剂-SP600125预处理HSCs后,IL-1β上调HSCs TIMP-1 mRNA表达作用受到抑制,分别为10μmol/L,1.022±0.113;20μmol/L,0.869±0.070;40μmol/L,0.666±0.123,与对照组相比(1.163±0.107),各浓度组均有显著性差异(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。用不同浓度p38阻断剂-SB203580预处理HSCs后,HSCs表达TIMP-1 mRNA逐渐增多,分别为10μmol/L,1.507±0.099;20μmol/L,1.698±0.107;40μmol/L,1.857±0.054。与对照组相比(1.027±0.061),各浓度组均有显著性差异(P均<0.01)。结论IL-1β可通过上调HSCs TIMP-1 mRNA的表达来加速肝纤维化的发生发展,JNK和p38信号蛋白参与了此过程,HSCs中两条通路均可被IL-1激活,但所起作用完全不同,它们相互作用相互调节,共同调控TIMP-1 mRNA的表达。

JNK信号通路在TGF-β_1诱导肺间质成纤维细胞基质分泌中的作用

目的:探讨C-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase,JNK)、P38信号通路的激活在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导人肺间质成纤维细胞基质分泌中的作用及意义。方法:将肺间质成纤维细胞株分为TGF-β1组、TGF-β1+SB203580组、TGF-β1+DMSO组、TGF-β1+SB600125组、正常对照组。采用免疫印迹法(Western blot)测定总JNK(T-JNK)、磷酸化JNK(p*-JNK)、总P38(T-P38)、磷酸化38(p*-P38)、纤维连接蛋白(FN)、层连粘蛋白(LN)水平的表达变化,采用3H-thymidine incorporation(3H-TdR)检测细胞增殖水平。结果:正常体外培养的肺间质成纤维细胞经TGF-β1刺激后p*-JNK水平显著升高,p*-P38蛋白表达无明显变化;FN、LN蛋白表达水平在TGF-β1诱导48 h后表达显著升高,JNK的特异性化学抑制剂SB600125可以减少p*-JNK、FN、LN蛋白表达水平和细胞增殖水平,P38的特异性化学抑制剂SB203580对上述指标表达无影响。结论:JNK信号通路在TGF-β1诱导的肺间质成纤维细胞分泌基质过程中被激活,并且参与TGF-β1诱导的肺间质成纤维细胞分泌基质过程。

血红蛋白诱导的HO-1对离体星形胶质细胞损伤作用的研究

目的探讨血红蛋白(hemoglobin,Hb)诱导的血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对离体星形胶质细胞的损伤作用。方法体外培养纯化获得星形胶质细胞,采用荧光标记胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)鉴定细胞;实验分为正常组、Hb组及HO-1活性抑制剂锌原卟啉(ZnPPIX)+Hb组。Hoechst 33342及CCK-8法检测细胞损伤情况;Western blot检测HO-1、p-JNK、JNK、Bcl-2及Bax等蛋白的表达情况;RT-PCR检测HO-1的mRNA表达情况。结果 GFAP鉴定显示97%以上的细胞为星形胶质细胞;HO-1检测结果显示:40μmol/L的Hb可显著诱导HO-1 mRNA及蛋白的表达(P<0.001);Hoechst33342及CCK-8检测结果显示:40μmol/L的Hb对离体星形胶质细胞具有损伤作用,而ZnPPIX可明显减轻上述损伤;Western blot检测结果显示:HO-1被诱导高表达时p-JNK及Bax蛋白的表达水平也显著升高而Bcl-2蛋白的表达水平显著下降(P<0.01),ZnPPIX处理后与Hb组相比p-JNK及Bax蛋白表达水平有所降低而Bcl-2蛋白表达水平则有所升高(P<0.05)。结论 40μmol/L Hb诱导的HO-1对离体星形胶质细胞具有损伤作用。

肾小球系膜细胞的JNK/SAPK活性及其对ICAM-1表达的调控研究

目的 检测体外培养的系膜增生性肾小球肾炎 (MSPGN)肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性 ,并探讨其对细胞间粘附分子 1(ICAM- 1)的调控作用。方法 选取 6例正常人和 7例 MSPGN患者的肾组织 ,分别采用免疫沉淀和免疫印迹法检测体外培养的肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性 ,RT- PCR检测 ICAM- 1m RNA表达 ,流式细胞仪检测细胞表面 ICAM- 1平均荧光强度。结果 在自发培养条件下 ,与正常对照组相比 ,MSPGN组肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK明显增高 (P<0 .0 5 )。在 TNFα诱导下 ,两组肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性均有增加 ,但 MSPGN组仍高于正常对照组 (P<0 .0 5 )。经 TNFα诱导后 ,随着 JNK/ SAPK活性增强 ,ICAM- 1m RNA及其平均荧光强度也均增加 (P<0 .0 5 )。经蛋白激酶抑制剂 DMAP阻断后 ,随着 JNK/ SAPK活性下降 ,ICAM- 1m RNA及其平均荧光强度亦下降 (P<0 .0 1)。 MSPGN的 JNK/ SAPK活性与 ICAM- 1m RNA表达和ICAM- 1平均荧光强度呈正相关关系 (r=0 .6 94,P<0 .0 1)。结论 MSPGN的肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK存在异常活化 ,这种异常活化可能介导了 ICAM- 1的过度表达。

白毛藤多糖通过抑制JNK信号通路活性促进人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡及机制的初步探讨

目的探索白毛藤多糖对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的影响及其调控机制.方法在体外用不同浓度(0、0.4、0.8、1.6 mg/ml)的白毛藤多糖处理人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,白毛藤多糖对TPC-1细胞增殖活性的影响采用MTT法检测,对TPC-1细胞凋亡的影响采用Hoechest 33258染色法检测,同时通过Western印迹检测白毛藤多糖对TPC-1细胞JNK蛋白表达及JNK磷酸化的影响.结果MTT结果显示,与空白组相比,不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞增殖抑制率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);且白毛藤多糖浓度越高、处理时间越长,对TPC-1细胞增殖活性的抑制作用越明显(P<0.05).Hoechest 33258染色结果显示,与空白组相比,不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞凋亡率显著升高,且呈浓度依赖(P<0.05);同时,Western印迹结果表明,与空白组相比,不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞中Bcl-2/Bax比率凋亡率显著降低,且呈浓度依赖(P<0.05).经不同浓度白毛藤多糖处理后TPC-1细胞中,JNK及p-JNK蛋白表达均显著降低,且随着白毛藤多糖浓度的增加,其对JNK及p-JNK蛋白表达的抑制逐渐增强(P<0.05);此外,白毛藤多糖对p-JNK的抑制更为显著,随着白毛藤多糖浓度的增加,p-JNK/JNK比值逐渐下降(P<0.05).结论白毛藤多糖对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖具有抑制作用,其机制可能与凋亡通路中活化Bax蛋白、抑制Bcl-2蛋白及抑制JNK磷酸化有关.

凋亡信号调节激酶1通过c-Jun氨基末端激酶通路调控高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤

目的研究细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase1,ASK1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)损伤的保护作用及其可能的机制。方法建立大鼠RGC细胞的分离培养和体外高糖(50 mmol/L葡萄糖)损伤模型。转染ASK1 siRNA沉默ASK1的表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASK1 mRNA表达水平;Western blot检测ASK1、JNK蛋白表达量和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平;MTT和CCK-8方法、Ki67染色分别检测RGC生长活力和增殖情况;Annexin-V FITC/PI方法和TUNEL检测RGC凋亡情况;试剂盒方法检测Caspase-3活性。结果 RGC高糖环境下培养4d,细胞生长活力降低明显(P<0.05);ASK1表达水平在高糖损伤的RGC中明显上升(P<0.05);ASK1 siRNA的转染实验结果显示:ASK1的表达水平明显下降(P<0.05),说明沉默表达实验成功;ASK1表达被抑制后RGC的生长活力(P<0.05)和增殖能力(P<0.05)明显上升,RGC的凋亡(P<0.01)和Caspase-3的活力(P<0.01)明显降低。沉默ASK1的表达有效地降低JNK蛋白的磷酸化水平。结论抑制ASK1的表达对RGC的高糖损伤有保护作用,其机制可能与抑制JNK通路有关。