JTE-013介导RhoA/ROCK1/Drp1信号轴调控线粒体损伤和凋亡缓解过敏性鼻炎

目的探究JTE-013通过RhoA/ROCK1/Drp1通路调控线粒体损伤和凋亡对过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)保护作用及机制。方法用卵清蛋白(OVA)建立小鼠AR模型。造模结束后,记录揉鼻、打喷嚏的次数。然后鼻组织切片进行HE、TUNEL和DHE染色。在体外,通过人重组白细胞介素-13(IL-13)刺激人鼻黏膜上皮细胞(HNEpCs),Western blot法检测JTE-013和Y27632对RhoA、ROCK1、Drp1及其相关磷酸化的蛋白和细胞凋亡相关蛋白表达影响。免疫荧光观察JTE-013和Y27632对细胞总ROS、线粒体膜电位和线粒体ROS生成,Drp1易位情况以及Cyt-c的表达情况。结果JTE-013减少了AR小鼠的揉鼻和打喷嚏频率,减轻鼻黏膜增厚并降低嗜酸细胞浸润。TUNEL和DHE染色结果提示,JTE-013可以抑制小鼠鼻上皮细胞凋亡并减少ROS表达。Western blot结果表明,JTE-013和Y27632都能明显降低RhoA、ROCK1、Drp1及p-Drp1(616),抑制凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3、Cyt-c、cleaved-caspase-9表达并上调了p-Drp1(637)、Bcl-2表达。免疫荧光显示JTE-013或ROCK1的抑制剂几乎阻断了IL-13介导鼻黏膜上皮细胞ROS和mtROS生成增加、抑制了线粒体膜电位降低,阻滞了Cyt-c表达和Drp1易位。结论JTE-013能够通过抑制RhoA/ROCK1/Drp1信号轴调节线粒体的形态和功能,从而缓解AR小鼠鼻黏膜上皮细胞炎症。

S1PR2拮抗剂JTE-013抑制白血病细胞增殖

目的:探讨鞘氨醇-1-磷酸受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2,S1PR2)特异性拮抗剂JTE-013对人慢性髓系白血病(CML)K562细胞增殖的影响。方法:将JTE-013(0,0.5,1,5,10,20μmol/L)分别作用于人慢性髓系白血病细胞系K562细胞24、48 h,采用CCK-8法检测细胞活力;用JTE-013(0,5,10,20μmol/L)处理K562细胞24 h,采用碘化丙啶(PI)DNA染色法检测细胞周期变化;采用Western blot检测细胞周期蛋白P21和Cyclin D1表达水平。结果:JTE-013呈浓度依赖性抑制CML细胞系K562细胞增殖(r=-0.971)。实验结果显示,随着JTE-013作用浓度的升高,K562细胞活力逐渐降低(r=-0.971),且这种增殖抑制作用是通过将K562细胞阻滞在G0/G1期来实现的。进一步对G0/G1期调控蛋白进行检测,发现随JTE-013处理浓度升高,周期蛋白P21表达逐渐升高(r=0.835),Cyclin D1蛋白表达逐渐减少(r=-0.803)。结论:S1PR2拮抗剂JTE-013可抑制人CML细胞系K562细胞增殖,可能是通过将细胞阻滞在G0/G1期有关。

JTE-013通过肥大细胞抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化

目的研究JTE-013对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中肥大细胞及其细胞因子表达的变化。方法将40只健康清洁级雄性C57BL/6小鼠随机均分为8组:生理盐水对照组1周组、4周组(C1周组、C4周组);BLM模型组1周组、4周组(B1周组和B4周组);生理盐水+JTE-013对照组1周组、4周组(C+J 1周组和C+J 4周组);博来霉素+JTE-013组1周组、4周组(B+J1周组和B+J 4周组),每组5只,分别于第7天、28天处死。应用HE染色和Masson染色观察小鼠肺组织炎症及肺纤维化情况;通过甲苯胺蓝染色和迪夫快速染色观察肺组织及支气管肺泡灌洗液中(BALF)的肥大细胞的表达情况;ELISA方法检测BALF上清液中细胞因子IL-4、IL-5、TGF-β1及TNF-α的表达水平和血清中的IgE、组胺及S1P表达水平的变化。结果 JTE-013显著降低BLM诱导的小鼠肺组织细胞外胶原沉积;减少小鼠肺组织中肥大细胞浸润和BALF中肥大细胞的数量;减少BALF中IL-4、IL-5、TGF-β1及TNF-α的表达;降低血清中的IgE、组胺及S1P表达水平。结论 JTE-013可通过减少肥大细胞在肺内的浸润及其细胞因子的表达,减轻博来霉素诱导小鼠的肺纤维化。

抑制S1PR2的活性可下调高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞SphK1和MCP-1的表达

目的观察高糖及1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)特异性拮抗剂JTE-013对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)鞘氨醇激酶1(Sph K1)、S1PR2、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响。方法将培养的大鼠GMC分为正常糖对照组(NG,含5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇渗透压对照组(HM,含5.5 mmol/L葡萄糖、24.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(HG,含30 mmol/L葡萄糖)、JTE-013干预组(HJ,含30 mmol/L葡萄糖、10μmol/L JTE-013)。实时定量PCR检测培养0、12、24、48 h的细胞中Sph K1、S1PR2、MCP-1 mRNA的表达,ELISA检测培养细胞上清中MCP-1的蛋白表达。结果与NG组相比,高糖培养下的大鼠GMC中Sph K1、S1PR2 mRNA的表达在12 h下降,之后随着时间延长基因的表达量升高,48 h达最高。MCP-1 mRNA的表达随培养时间的延长而升高,12 h表达已升高,24 h表达为最高,48 h的表达下降。高糖诱导大鼠GMC的MCP-1蛋白分泌增加,呈时间依赖性。GMC经JTE-013处理后,高糖继续培养24 h,与HG组相比,HJ组Sph K1、S1PR2、MCP-1 mRNA及MCP-1蛋白的表达明显下降。结论抑制S1PR2的活性可引起高糖培养下的大鼠GMC中Sph K1、MCP-1表达下调。