半定量RT-PCR检测JWA基因在慢性粒细胞性白血病的表达

目的 探讨JWA基因表达与慢性粒细胞性白血病 (CML)的相关意义。方法 应用半定量RT PCR技术检测 2 6例CML患者骨髓和 /或外周血JWA基因的表达。结果 JWA基因表达在CML慢性期高达 15 / 18例 ;而急变期 (含加速期 )为 2 / 8例。结论 JWA基因的下调可能与CML急变的某个过程相关 。

急性非淋巴细胞性白血病中JWA基因表达的意义

目的 :探讨 JWA基因表达与不同病期急性非淋巴细胞白血病 ( ANL L )的相关意义。方法 :应用逆转录 -聚合酶链反应( RT- PCR)技术检测 2 4例不同病期的 ANL L 患者骨髓和 (或 )外周血中 JWA基因的表达。结果 :JWA基因表达在初发 ANL L为13 /13 ( 10 0 %阳性 ) ,完全缓解时为 1/4,复发患者为 3 /4,由骨髓增生异常综合征 ( MDS)转化而来为 1/3。结论 :JWA可能参与原发 ANL L 的某个发病过程 ,其与白血病的发生。

JWA基因在HL-60细胞定向分化中的表达及意义

为了研究JWA基因在HL60细胞定向分化中的表达规律,探讨其在白血病细胞分化和凋亡中的意义及可能的作用机制,应用FCM检测HL60细胞经ATRA(10-6mol/L)、AraC(10ng/ml)、TPA(10-8mol/L)作用后2、4、6、8天CD13、CD14、CD15、CD11b改变及细胞周期变化;应用半定量RT-PCR及蛋白印迹技术检测JWA基因在HL60细胞定向分化中的表达趋势以及相关凋亡因子Bcl2、HSP27和HSP70的表达。结果表明:经上述药物分别处理HL60细胞后,不同时段FCM相关指标检测结果证明其分别向粒、单核、巨噬细胞样分化。JWA基因表达呈时间依赖性升高;Bcl2则呈时间依赖性下降;HSP70在ATRA及TPA组与JWA表达呈正相关,与Bcl2呈负相关,而各组HSP27并无表达。ATRA处理HL60细胞后JWA基因表达趋势与原代细胞相反,且不需要ATRA诱导分化作为前提。分别以AraC10ng/ml和AraC20ng/ml处理HL60细胞后,JWA基因的表达呈反向变化,即前者呈时间依赖性增加,而后者则下降。结论:JWA基因在实现ATRA及TPA诱导白血病细胞分化和凋亡中可能具有双重调节作用;JWA基因表达的高低与AraC诱导分化作用及细胞毒作用有关;HL60细胞与原代白血病细胞在诱导分化机制方面可能不尽相同。

JWA基因多态性与紫杉类药物对晚期胃癌化疗疗效相关性的研究

目的探讨JWA基因723T>G和454A>C多态性位点与含紫杉类药物对胃癌患者化疗疗效的相关性。方法 64例晚期胃癌患者给予含紫杉类药物方案治疗,化疗前检测723和454基因型。观察化疗疗效与723和454位点多态性的关系。结果本组胃癌患者总的化疗疾病控制率为73.4%,且发现与723TT基因型相比,携带723TG/GG基因型者能够显著降低胃癌疾病进展,但是没有发现454 A>C多态性与胃癌化疗疗效相关性具有统计学差异。结论 JWA基因723T>G多态性位点与晚期胃癌对紫杉类药物的化疗疗效相关性有关联,携带G等位基因型的胃癌患者具有较高的疾病控制率,提示JWA多态性可能成为预测胃癌化疗疗效的指标之一。

JWA基因多态性与消化道肿瘤易感性关系的研究

目的:研究中国江苏人群JWA基因单核苷酸多态性(SNPs)与消化道肿瘤易感性的关系。方法:采用聚合酶链式反应—单链构象多态性(PCR-SSCP)方法对年龄、性别相匹配的202例消化道肿瘤患者和215例健康人群的外周血淋巴细胞基因组DNA标本检测了JWA启动子-76G/C和外显子3区723T/GSNPs的频率和分布,用DNA直接测序法证实SNPs变异。分析探讨JWA基因多态性和消化道肿瘤易感性的关系。结果:-76G/C多态性在消化道病例中的频率(19.3%)显著高于对照(10.7%)。-76G/C变异时罹患消化道肿瘤的危险性是正常时的1.99倍(调整的比值比:1.99;95%可信区间:1.14～3.48)。存在上述变异位点的男性患者患消化道肿瘤的危险性增加,而与性别及饮酒的关系不明显。723T/G多态性频率在消化道肿瘤患者和对照人群中的分布无显著差异。结论:在中国江苏汉族人群中,JWA基因5'侧翼区的多态位点-76G/C变异显著增加江苏汉族人群患消化道肿瘤的危险性,外显子3区多态723T/G则无显著性差异。

全反式维甲酸对骨髓基质细胞黏附功能及JWA基因表达变化的影响

目的探讨全反式维甲酸对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)黏附功能及JWA基因表达的影响。方法全反式维甲酸(all trans retinoic acid,atRA)作用BMSC后,流式细胞仪检测BMSC细胞间黏附分子-1(intercellular adhe-sion molecule-1,ICAM-1)和血管黏附分子-1(vascular adhesion molecule-1,VCAM-1)的表达,检测共培养条件下BMSC细胞对Jurkat细胞的黏附率及Jurkat细胞生长曲线变化,RT-PCR方法检测BMSC JWA mRNA表达变化。结果atRA作用后,BMSC表面ICAM-1、VCAM-1蛋白表达增加,BMSC对Jurkat细胞的黏附能力增强,并可促进Jurkat细胞增殖,BMSC内JWA-mRNA表达增强。结论atRA可增强骨髓基质细胞黏附功能,并上调JWA基因表达。

全反式维甲酸对急性白血病骨髓基质细胞JWA基因表达及粘附功能的影响

目的探讨临床患者骨髓基质细胞(BMSC)粘附功能与JWA基因表达之间的关系。方法分离培养临床急性早幼粒细胞白血病(APL)患者全反式维甲酸(ATRA)治疗前后BMSC,检测BMSC粘附能力,ICAM-1、FN表达及JWAmRNA表达变化。结果 ATRA治疗后,APL患者BMSC粘附能力、粘附分子表达及JWAmRAN表达明显增高。结论 ATRA可能通过上调JWA基因表达,促进BMSC粘附功能。

肿瘤细胞JWA基因启动子甲基化的初步研究

目的：探讨肿瘤细胞中JWA基因启动子甲基化的状态及其对基因转录活性的影响。方法用报告基因法检测JWA基因启动子甲基化对基因转录活性的影响，用亚硫酸氢盐测序法检测JWA基因启动子CpG岛内的甲基化位点。用甲基化特异性PCR法（methylation specific PCR，MSP）法检测不同肿瘤细胞株（U937、HL60、K562、NB4）以及在白血病患者外周血单个核细胞中JWA基因启动子甲基化的分布。亚硫氢酸盐测序法检测CpG岛内发生甲基化位点。结果用甲基化酶处理报告基因后JWA基因启动子的转录活性明显下降。用亚硫氢酸盐测序法检测肿瘤细胞株中JWA基因启动子CpG岛未发现甲基化的CpG位点。用MSP法检测U937、HL60、K562、NB4肿瘤细胞和白血病患者外周血单个核细胞的DNA样本均未发现肿瘤细胞启动子甲基化。结论JWA基因启动子甲基化可导致肿瘤细胞JWA基因的转录活性下降，但在所检测的肿瘤细胞及白血病细胞中可能无甲基化现象。

JWA基因-76G>C和454C>A多态性与宫颈癌易感性

目的:探讨JWA基因多态性与江苏人群宫颈癌易感性之间的关系。方法:采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测227例宫颈癌患者和333例年龄、性别相匹配的非肿瘤者JWA-76G>C、454C>A和723T>G多态性的频率和分布,比较不同基因型携带者患宫颈癌的危险性,通过分层分析探讨初潮年龄、初次生育年龄和产次对患宫颈癌的影响。结果:JWA-76GC和454AA基因型均可增加罹患宫颈癌的危险性。携带3～5个危险等位基因者比携带0～2个等位基因者患宫颈癌的危险性更大(OR=1.70,95%CI=1.20～2.42)。分层分析结果显示,初潮年龄早、生育年龄晚和产次多且携带3～5危险等位基因者能增加患宫颈癌的危险性。本研究未发现JWA基因723T>G多态性与宫颈癌之间存在显著相关。结论:JWA基因-76G>C和454C>A多态性显著增加江苏地区汉族人群患宫颈癌的危险性。

JWA基因对肿瘤细胞P-糖蛋白的表达及其功能的影响

目的:研究JWA基因(又称ARL6IP5基因,ADP-ribosylation-like factor 6 interacting protein 5)对肿瘤细胞P-糖蛋白表达及其功能的影响。方法:利用脂质体转染技术将JWA-shRNA重组质粒及其空载质粒转入人绒毛膜癌细胞JAR和人乳腺癌细胞MCF-7,将Flag-JWA重组质粒及其空载质粒转入人绒毛膜癌耐依托泊苷(etoposide,VP16)JAR/VP16细胞;Westernblotting检测JWA和P-糖蛋白的表达,流式细胞术分析细胞内罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)的潴留情况。结果:JWA-shRNA重组质粒转入JAR细胞和MCF-7细胞后,JWA表达水平降低,P-糖蛋白表达水平上调,罗丹明潴留减少;Flag-JWA重组质粒转入JAR/VP16细胞后,JWA表达水平上调,P-糖蛋白表达水平下降,罗丹明潴留增加。结论:JWA基因可以调控肿瘤细胞P-糖蛋白的表达,并影响其转运功能。

JWA基因多态性与消化道肿瘤易感性关系的研究

目的分析JWA基因多态性与消化道肿瘤易感性关系。方法 2011年2月—2013年9月,非肿瘤患者181例,纳入普通疾病组,消化道恶性肿瘤170例,纳入恶性肿瘤组,体检正常患者200例作为对照组,进行JWA基因多态性分析、易感性分析。结果 -76G/C变异有更高的易感性,调整OR（95%CI）=1.99（1.41-3.47）,风险增减2倍左右。结论 JWA基因变异确实可增加消化道肿瘤易感性。

过氧化氢处理K562细胞中JWA基因的表达及其与DNA损伤和凋亡的关系

目的研究过氧化氢(H2O2)诱导K562细胞氧化应激过程中,JWA蛋白、热休克蛋白(hsp70和hsp27)和p53蛋白的表达特点,探讨JWA参与细胞应答氧化应激的作用和可能机制。方法用0.01、0.1、1mmol/L的H2O2处理K562细胞10、30、60、180min建立氧化损伤模型;用0.1mmol/LH2O2处理不同时间(6～48h)和不同浓度(0.5～1000μmol/L)的H2O2处理48h分别诱导K562细胞凋亡,然后用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA损伤和凋亡,用免疫印迹方法检测热休克蛋白(hsp70和hsp27)、p53以及JWA的蛋白表达水平。结果在DNA损伤模型中,H2O2活跃地调节JWA的表达,JWA对氧化应激的应答比热休克蛋白更快速,JWA和hsp70的表达规律相似;在低剂量H2O2(0.01mmol/L)处理时,JWA和热休克蛋白的表达均显著增高;在细胞凋亡模型中,JWA、hsp70、hsp27和p53的表达均显著增高,其中,JWA、hsp70和p53三者的表达规律相似。结论JWA是一个有效的环境应答基因并活跃地参与细胞应答氧化应激所致的DNA损伤和细胞凋亡的信号通路,其介导的信号通路可能与hsp70和p53有关。

小鼠腹水JWA单克隆抗体的制备鉴定

建立小鼠腹水中JWA单克隆抗体(Monoclonalantibody,mAb)的制备方法及鉴定,获得高纯度、高效价的JWA单克隆抗体。对预先用弗氏不完全佐剂处理的小鼠腹腔接种JWA单克隆抗体杂交瘤细胞,收集小鼠腹水、离心,采用Protien G亲和柱层析法进行亲和层析纯化JWA单克隆抗体,并采用SDS-PAGE检测方法分析纯化抗体的纯度。分别运用细胞免疫荧光、免疫印迹技术鉴定纯化的抗体特异性。BCA法测定纯化后JWA单抗的浓度为6.79 mg/mL;SDS-PAGE电泳显示纯化的抗体只有IgG的重链和轻链,而没有其它杂蛋白带;纯化后的JWA单抗在免疫荧光实验可以检测到细胞中JWA蛋白在胞浆中呈丝状均匀分布,与前期实验结果一致。免疫印迹实验中1∶800、1∶400均可以得到清晰的目的条带。用Protein G亲和层析法获得了高纯度和较高效价的JWA单克隆抗体,这将为JWA蛋白的基础和应用研究提供技术支持。

苯并(a)芘作用下人胚肺细胞JWA基因的表达及其与DNA损伤修复的关系

目的研究苯并(a)芘诱导人胚肺(ccc HPF1)细胞DNA损伤修复中基因JWA和热休克蛋白(hsp70)的表达规律,探讨JWA基因参与细胞DNA损伤修复的作用和可能机制。方法建立ccc HPF1细胞DNA损伤模型,在S9活化状态下分别以10～100μmol/L苯并(a)芘处理细胞3h收获细胞或再恢复24h,用碱性单细胞凝胶电泳鉴定DNA损伤和修复情况,免疫印迹方法检测JWA和hsp70的表达水平。结果在DNA损伤模型中,苯并(a)芘活跃地调节JWA的表达,50μmol/L和100μmol/L处理组JWA和hsp70明显上调,在恢复期内10～100μmol/L处理组两者都处于较高的表达水平并且JWA和hsp70的表达规律几乎完全一致。结论JWA是一个有效的环境应答基因,活跃地参与细胞应答与DNA切除修复有关的信号通路。

JWA基因在不同转移潜能人肝癌细胞中的表达及意义

目的探讨JWA基因在不同转移潜能人肝癌细胞中的表达及意义。方法分别应用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测无转移潜能人肝癌细胞株Hep G2、低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L、高转移潜能人肝癌细胞株MHCC97H及较高转移潜能人肝癌细胞株HCCLM3的JWA mRNA和蛋白表达水平。结果 Hep G2细胞JWA mRNA和蛋白水平最高,HCCLM3细胞的JWA mRNA和蛋白水平最低,JWA基因表达水平随着肝癌细胞转移潜能增高而递减。结论 JWA mRNA和蛋白表达水平随着肝癌细胞转移潜能增高而递减,可能与肝癌的发生、发展及转移密切相关。

新的环境应答蛋白JWA在MCF-7细胞应答氧化应激中的表达

目的 研究氧化应激诱导MCF 7 细胞氧化损伤过程中,JWA表达的调节规律及其作用,尤其是与热休克蛋白(HSPs)间的关系。方法 以不同浓度的H2O2(0.01、0.10、1.00 mmol/L)分别处理MCF 7细胞10、30、60、180 min,建立MCF 7细胞氧化损伤模型并用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定;用四唑蓝(MTT)法分析H2O2 对MCF 7细胞的相对细胞增殖率和细胞毒性的影响;采用Western blot方法检测JWA、HSP70、HSP27和热休克转录因子(HSF1)蛋白表达水平的变化。结果 H2O2 对MCF 7细胞的增殖抑制和细胞毒性呈时间和剂量依赖关系,MCF 7细胞在最高剂量、最长处理时间(1.00 mmol/L、180 min)时,细胞增殖几乎完全受抑制。H2O2 活跃地调节JWA的表达,氧化损伤使JWA、HSP70 和HSF1表达上调并呈剂量依赖关系,而且JWA、HSP70和HSF1的表达规律相似,而HSP27 表达似乎与氧化应激的信号调节无关。结论 在H2O2 致MCF 7 细胞氧化应激时,JWA作为有效的环境应答蛋白,其与HSP70共同参与的信号通路可能受HSF1调控。

JWA在N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍诱导的人支气管上皮细胞凋亡中的作用

目的探讨JWA在化学致突变物烷化剂N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导人支气管上皮(HBE)细胞凋亡中的作用及其可能机制。方法用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Western blot法检测JWA蛋白表达,用Southwestern印迹分析法检测JWA基因近端启动子的结合蛋白。结果MNNG处理HBE细胞24 h均可诱导细胞发生凋亡,并呈现明显的剂量-效应关系；MNNG诱导HBE细胞凋亡过程中伴随着JWA蛋白表达升高。进一步用2．0μg/ml MNNG处理HBE细胞24h后,用Southwestern方法从HBE细胞核蛋白中检测出一与JWA近端启动子能特异性结合的转录因子。结论MNNG激活HBE细胞中核转录因子与JWA近端启动子结合后可能激活了细胞内凋亡的信号通路。

体外转染JWA核酶逆转录病毒载体对人骨髓基质细胞黏附功能的影响

目的探讨JWA核酶基因转染对人骨髓基质细胞(BMSC)黏附功能的影响。方法设计合成JWA核酶基因并构建于逆转录病毒载体pLXSN上,转染体外培养的人BMSC(BMSC-JWARZ组),应用半定量RT-PCR法(sqRT-PCR)测定细胞内JWA mRNA的表达,流式细胞仪检测BMSC细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管黏附分子-1(VCAM-1)的表达,并检测共培养条件下BMSC对Jurkat细胞的黏附率及Jurkat细胞增殖变化。以pLXSN空载体转染的BMSC(BMSC-pLXSN组)及未转染细胞(BMSC组)为对照。结果BMSC-JWARZ组JWA mRNA表达量[吸光度(A)值]为0．187±0．045,较BMSC-pLXSN组(0．382±0．039)及BMSC组(0．366±0．048)显著降低;BMSC-JWARZ组细胞表面ICAM-1阳性细胞率为(16．11±3．93)％,较B-pLXSN组[(38．24±5．37)％]及BMSC组[(36．27±6．19)％]显著降低;BMSC-JWARZ组细胞表面VCAM-1阳性细胞率为(12．08±3．34)％,较BMSC- pLXSN组[(26．88±5．17)％]及BMSC组[(24．55±3．68)％]显著降低;B-JWARZ组细胞对Jurkat细胞的黏附率为(23．65±5．27)％,较BMSC-pLXSN组[(35．14±8．11)％]及BMSC组[(33．72±6．29)％]显著降低,与BMSC-JWARZ组细胞共培养的Jurkat细胞倍增时间为58．7 h,明显长于与BMSC-pLXSN组(44．1 h)及BMSC组(43．7 h)细胞共培养时。结论JWA核酶基凶转染可抑制人BMSC内JWA基因的表达,抑制骨髓基质细胞黏附功能。

JWA基因启动子-76G→C多态性和膀胱癌易感性关系的配对研究

目的检测JWA启动子单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs),探讨其对基因转录活性的影响和与膀胱癌遗传易感性的相关性。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性和DNA测序的方法,检测了155例膀胱癌病例和155例非肿瘤对照人群的JWA基因启动子多态性位点;构建启动子多态性片段氯霉素乙酰转移酶报告基因重组质粒,瞬时转染NIH-3T3细胞,检测启动子多态性片段对基因转录活性的影响。结果检测到一个新SNP-76G→C;C等位基因和GC基因型频率在膀胱癌病例组为10·00%、20.00%,比正常对照组(5.16%、10.32%)高,差异有统计学意义(P<0.05);与GG基因型相比,GC基因型启动子的转录活性显著降低(P<0.01)。Logistic多元回归分析结果(P<0.05,OR=2.05)显示这一多态性可能是形成膀胱癌新的独立危险因素。结论JWA基因启动子-76G→C多态性可能影响JWA基因转录和表达,从而增加膀胱癌易感性。