棕矢车菊素对胃癌细胞增殖、凋亡和血管生成拟态的影响及作用机制实验研究

目的:探讨棕矢车菊素对胃癌细胞增殖、凋亡和血管生成拟态(VM)的影响及作用机制。方法:采用不同浓度棕矢车菊素(0、10、20、40、80、160μmol/L)作用于人胃癌细胞HGC-27,检测细胞存活率,根据半抑制浓度(IC 50)值选择10、20、40μmol/L棕矢车菊素进行后续实验。将HGC-27细胞随机分为Control组(无干预)、棕矢车菊素-L(加入10μmol/L棕矢车菊素培养)组、棕矢车菊素-M(加入20μmol/L棕矢车菊素培养)组、棕矢车菊素-H(加入40μmol/L棕矢车菊素培养)组和棕矢车菊素-H+K6PC-5(加入40μmol/L棕矢车菊素+10μmol/L SphK1激动剂K6PC-5培养)组。采用平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,血管形成实验检测各组细胞管状结构形成情况,Western blot检测细胞SphK1和S1P蛋白表达。结果:相较于Control组,棕矢车菊素-L组、棕矢车菊素-M组、棕矢车菊素-H组细胞克隆形成数量、管状结构形成数目及细胞中SphK1和S1P蛋白表达水平逐渐降低,而细胞中管状结构损坏程度增加,细胞凋亡率逐渐升高(均P<0.05)。在高浓度棕矢车菊素的基础上加入K6PC-5逆转了以上指标的变化趋势(均P<0.05)。结论:棕矢车菊素能够抑制胃癌细胞增殖和VM发生,并促进其凋亡,其作用机制可能与下调SphK1/S1P信号通路有关。

棕矢车菊素调节SDF-1α/CXCR4信号通路对妊娠糖尿病大鼠炎症反应的影响

目的探讨棕矢车菊素对妊娠糖尿病(GDM)大鼠炎症反应的影响及可能机制。方法将妊娠大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立GDM模型,将建模成功大鼠分为GDM组,棕矢车菊素-L、M、H组,棕矢车菊素+CTCE-0214[基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)/趋化因子受体4(CXCR4)激活剂]组,每组10只;另取10只健康妊娠大鼠作为对照组。棕矢车菊素-L、M、H组分别灌胃2、3、4 mg/kg棕矢车菊素,棕矢车菊素+CTCE-0214组腹腔注射10 mg/kg CTCE-0214并灌胃4 mg/kg棕矢车菊素,对照组和GDM组给予等量生理盐水。比较各组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素以及胰岛素抵抗指数差异;酶联免疫吸附测定法检测大鼠胎盘组织中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;HE染色观察胎盘组织病理变化;TUNEL检测胎盘组织细胞凋亡;Western blot检测大鼠胎盘组织中SDF-1α/CXCR4通路相关蛋白水平。结果不同剂量棕矢车菊素干预GDM大鼠引起大鼠空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数水平降低,促炎细胞因子水平降低,改善GDM大鼠胎盘损伤和细胞凋亡,并抑制SDF-1α/CXCR4信号通路激活,呈剂量依赖性(P<0.05),SDF-1α/CXCR4激活剂和棕矢车菊素联合干预后抑制棕矢车菊素上述作用。结论棕矢车菊素可通过抑制SDF-1α/CXCR4信号通路激活来减轻GDM大鼠炎症反应和胰岛素抵抗。

野马追中黄酮类成分的研究

的 :对野马追的醋酸乙酯提取部位进行黄酮类成分研究。方法 :溶剂提取和硅胶色谱法进行分离 ,理化性质和光谱数据鉴定结构。结果 :从野马追中分离得到 6种黄酮类化合物 ,鉴定为 :棕矢车菊素 (jaceosidin)(Ⅰ )、山柰酚 (kaempferol) (Ⅱ )、槲皮素 (quceritin) (Ⅲ )、黄芪苷 (astragalin) (Ⅳ )、三叶豆苷 (trifolin) (Ⅴ )、金丝桃苷 (hy persoide) (Ⅵ )。结论 :化合物Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅲ ,Ⅳ 。

不同产地艾叶中异泽兰黄素和棕矢车菊素含量的比较

目的考察产地生态因子对艾叶中异泽兰黄素和棕矢车菊素两种成分的影响，为提升艾叶质量标准提供科学依据。方法采用高效液相色谱法对9批不同产地艾叶样品中异泽兰黄素和棕矢车菊素两种活性成分的含量进行测定，色谱柱为Kromasil 100-5C18（4．6mm×150mm，5μm），以磷酸二氢钠缓冲溶液-乙腈（70：30，V／V）为流动相进行等度洗脱，流速1．0mL／min；柱温30℃；检测波长345nm。采用GIS技术，结合对多种空间数据的使用，对全部样品采集地四项生态因子数据进行提取。结果9批艾叶样品异泽兰黄素和棕矢车菊素分别在0．02～0．5mg／mL和0．04～0．1g／mL内与峰面积有良好的线性关系。各样品中两种活性成分含量与样品产地生态因子均存在差异。异泽兰黄素和棕矢车菊素的含量分别为0．110％-0．276％和0．059％-0．072％。异泽兰黄素的含量在9批样品中变化较为明显，而棕矢车菊素含量在9批样品中变化较小。两种成分含量最高样品均为湖北蕲春样品。，结论艾叶中异泽兰黄素和棕矢车菊素两种成分的含量受独特生态因子的影响，表王见为道地药材产区含量明显高于非道地产区，而异泽兰黄素的含量又与药材的品质密切相关，可用于评价和控制艾叶药材的质量。

野马追不同药用部位的质量初步评价

目的 对野马追 (Eupatorium lindleyanum DC.)不同药用部位进行初步质量评价。方法 采用HPL C法 ,测定野马追不同药用部位中槲皮素、山萘素、棕矢车菊素的含量。结果 一年生花、茎、叶中槲皮素、山萘素、棕矢车菊素的含量分别为 0 .735 m g/ g、0 .0 0 7m g/ g、0 .930 m g/ g;二年生花、茎、叶中槲皮素、山萘素、棕矢车菊素的含量分别为 0 .6 36 mg/ g、0 .0 2 2 mg/ g、1.12 7m g/ g;三年生花、茎、叶中槲皮素、山萘素、棕矢车菊素的含量分别为 1.134mg/ g、0 .0 6 3m g/ g、1.5 86 m g/ g。结论 槲皮素、山萘素、棕矢车菊素类成分主要分布在野马追的花和叶中 ,茎中含量较低 。

棕矢车菊素诱导人宫颈癌Hela细胞G_(2)/M期停滞的机制研究

目的:研究棕矢车菊素对宫颈癌(cervical carcinoma,CC)细胞Hela的增殖抑制和周期阻滞能力,探索棕矢车菊素是否具有宫颈癌治疗药物的潜力。方法:MTT比色法检测细胞活力;羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein succinimidyl amino ester,CFSE)法检测细胞增殖水平变化;碘化丙啶(propidium,PI)单染检测细胞周期;免疫印迹法(western blot,WB)检测细胞蛋白表达水平。采用裸鼠成瘤检测棕矢车菊素体外抑制肿瘤效果。结果:棕矢车菊素可以显著抑制Hela细胞活力水平,且具有时间和浓度依赖性;棕矢车菊素抑制Hela细胞增殖,且100μmol/L棕矢车菊素可显著诱导细胞发生G_(2)/M周期阻滞。分子机制上,研究证明了棕矢车菊素可以通过促进细胞周期检验点激酶(checkpoint kinase 2,CHK2)激活,抑制细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cyclin 25 homolog C,CDC25C)活力,从而提高无活性的pCDC2水平。棕矢车菊素同时降低了Cyclin B1表达。因此,棕矢车菊素通过抑制G_(2)/M期调控蛋白Cyclin B1/CDC2复合物活性来诱导细胞发生G_(2)/M期阻滞。同时,体外裸鼠成瘤,棕矢车菊素灌胃4周后,小鼠肿瘤体积显著减小。结论:在Hela细胞上,棕矢车菊素具有抑制细胞增殖和诱导G_(2)/M期阻滞的作用,证明了棕矢车菊素具有抗宫颈癌细胞的治疗潜力。

基于一测多评法对肠胃散中8种物质的质量控制

目的建立一测多评法同时测定肠胃散中棕矢车菊素、异泽兰黄素、柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、肉桂醇、肉桂酸和桂皮醛的含量。方法色谱柱:Waters Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱,流速:1.0 ml/min;检测波长分别为345 nm(检测棕矢车菊素和异泽兰黄素)、215 nm(柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱)和275 nm(肉桂醇、肉桂酸和桂皮醛)。以吴茱萸碱为内参物,分别建立其他7种成分的相对校正因子,并用相对校正因子计算含量,实现一测多评;同时与外标法测定结果进行对比,验证一测多评法的准确性和可行性。结果棕矢车菊素、异泽兰黄素、柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、肉桂醇、肉桂酸和桂皮醛分别在0.98~19.60、2.67~53.40、4.06~81.20、1.98~39.60、2.69~53.80、0.56~11.20、1.49~29.80和8.77~175.40μg/ml范围内线性关系良好(r≥0.9992),平均加样回收率(RSD)分别为98.77%(0.96%)、99.38%(1.01%)、100.02%(0.83%)、97.80%(1.40%)、98.91%(1.18%)、96.99%(1.13%)、98.09%(1.24%)和99.10%(0.67%),一测多评法计算结果与外标法实测值无明显差异。结论所建立的方法简便、准确,可用于肠胃散的质量评价。

醋艾叶饮片HPLC指纹图谱研究暨异泽兰黄素和棕矢车菊素含量测定

目的采用高效液相色谱法建立醋艾叶的指纹图谱,同时测定不同产地醋艾叶中异泽兰黄素和棕矢车菊素的含量,为醋艾叶质量评价提供依据。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以乙腈(B)-0.2%甲酸(A)为流动相,进行梯度洗脱;检测波长330 nm;流速:1.0 mL.min-1;柱温:25℃。结果建立了醋艾叶HPLC指纹图谱,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求,采用该方法共检测了10批醋艾叶,共标定14个共有特征指纹峰;不同产地艾叶异泽兰黄素和棕矢车菊素含量存在差异。结论本法准确、可靠,建立的高效液相色谱指纹图谱为醋艾叶的质量控制提供更全面的信息。

水母雪莲细胞悬浮培养合成黄酮及抗氧化活性(英文)

对水母雪莲细胞悬浮培养过程中细胞生长、黄酮积累和底物消耗的动力学过程进行了研究。经15d液体培养可获得最大生物量干重和黄酮产量分别为17.2g·L-1和607.8mg·L-1,通过调控基本培养基种类和有机添加物可提高雪莲细胞的生长和黄酮积累。获得的水母雪莲细胞培养物具有明显的抗氧化活性,其抗氧化活性与雪莲细胞中的黄酮含量相关。

不同产地艾叶中总黄酮及其3种主要苷元的含量测定

目的:建立HPLC法同时测定9个不同产地艾叶中3种主要黄酮苷元含量的方法,规范艾叶黄酮类化合物的质量标准。方法:采用紫外分光光度法测定不同产地艾叶总黄酮含量,检测波长为510 nm;采用HPLC法同时测定艾叶黄酮中3种主要苷元的含量,色谱柱为戴安Acclaim 120 C_(18)柱(150 mm×4. 6 mm,5μm),流动相为乙腈-0. 2%磷酸溶液(50∶50),柱温为30℃,检测波长为360 nm,进样量为5μl,对比研究含量变化差异。结果:总黄酮含量测定的线性范围为0. 009 7～0. 048 6 mg·ml^(-1),加样回收率为99. 58%(RSD=0. 38%,n=6);异泽兰黄素、棕矢车菊素、山柰酚的检测进样量线性范围分别为0. 190～0. 950μg、0. 047～0. 237μg、0. 049～0. 244μg,加样回收率分别为99. 84%(RSD=0. 99%),100. 04%(RSD=0. 68%),100. 16%(RSD=0. 75%)(n=6)。湖北蕲春产艾叶总黄酮及3种苷元成分含量较高,体现出道地药材特性,但不同产地总黄酮含量变化趋势与其苷元的变化趋势差异较大。结论:该方法可作为不同产地艾叶中山柰酚、棕矢车菊素、异泽兰黄素的含量测定方法,仅通过总黄酮含量并不能全面体现不同产地艾叶黄酮类化合物的特征,结合山柰酚、棕矢车菊素、异泽兰黄素对不同产地艾叶黄酮类化合物的描述更为准确。

一测多评法同时测定痔舒适洗液中7种成分的含量

目的建立能同时测定痔舒适洗液中三叶豆紫檀苷、苦参醇Ⅰ、苦参酮、贝母兰宁、山药素Ⅲ、棕矢车菊素和异泽兰黄素含量的一测多评(QAMS)法。方法色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C 18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温:25℃;流动相:乙腈-2 mL·L^-1甲酸,梯度洗脱;流速:0.9 mL·min^-1;检测波长:295 nm(检测三叶豆紫檀苷、苦参醇Ⅰ和苦参酮),270 nm(检测贝母兰宁和山药素Ⅲ),330 nm(检测棕矢车菊素和异泽兰黄素)。以苦参酮为内参物,建立其他6种成分的相对校正因子(RCFs),计算各成分含量。结果7种成分的质量浓度分别在1.02~25.50(r 1=0.9991),1.98~49.50(r 2=0.9996),7.66~191.50(r 3=0.9993),1.59~39.75(r 4=0.9997),4.38~109.50(r 5=0.9992),0.62~15.50(r 6=0.9994),1.29~32.25μg·mL^-1(r 7=0.9995)范围内线性关系良好;平均回收率(RSD值)分别为96.94%(1.30%),99.59%(0.74%),100.13%(0.65%),98.42%(1.43%),99.37%(1.26%),97.52%(1.11%),98.50%(0.98%);痔舒适洗液中7种成分的含量QAMS法计算结果与外标法(ESM)实测值无明显差异。结论所建立的QAMS法操作便捷、结果准确,可用于痔舒适洗液的质量控制。

棕矢车菊素调节SIRT1/FoxO3信号通路对糖尿病肾病大鼠炎症反应的影响

为探讨棕矢车菊素对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠炎症反应的影响,将SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、棕矢车菊素低(10 mg/kg)剂量组、棕矢车菊素高(20 mg/kg)剂量组、阳性对照组(500 mg/kg二甲双胍)、抑制剂组[20 mg/kg棕矢车菊素+5 mg/kg沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating-type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)抑制剂EX-527],每组12只。除对照组外,其他组大鼠均采用高脂饲料喂养联合化学诱导法构建DN大鼠模型,模型构建成功后,每天药物灌胃1次,持续4周。采用酶标仪检测末次给药后大鼠肾功能变化;ELISA检测大鼠血清炎性因子表达水平;H-E染色观察大鼠肾脏组织病变;免疫组化法检测大鼠肾脏组织足细胞裂孔膜蛋白Nephrin和膜蛋白Podocin表达;Western blotting检测大鼠肾脏组织中SIRT1/叉头状转录因子O3(forkhead box protein O3,FoxO3)信号通路相关蛋白表达。结果显示,与对照组比较,模型组大鼠肾脏组织间质炎性浸润明显,肾小球肥大,肾小管细胞空泡变性,肾功能减弱,血清炎性因子、FoxO3表达显著升高,Nephrin、Podocin、磷酸化SIRT1(phosphorylated SIRT1,p-SIRT1)/SIRT1表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,棕矢车菊素低、高剂量组和阳性对照组大鼠肾脏病变明显改善,肾功能增强,血清炎性因子、FoxO3表达显著降低,Nephrin、Podocin、p-SIRT1/SIRT1表达水平显著升高(P<0.05);加入SIRT1抑制剂EX-527后,减弱了棕矢车菊素对DN大鼠炎症反应的抑制作用。该研究提示,棕矢车菊素可通过调节SIRT1/FoxO3信号通路缓解DN大鼠体内的炎症反应。

基于指纹图谱及非挥发性成分定量结合化学模式识别法评价不同产地艾叶质量

目的以非挥发性化学成分为指标,评价不同产地艾叶Artemisia argyi质量,为其进一步开发利用提供科学依据。方法采用高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC),以指纹图谱定性,绿原酸和黄酮等多指标成分定量,结合聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)对艾叶进行化学模式识别研究。结果建立了20批艾叶的指纹图谱,相似度为0.739~0.983,标定了28个共有峰,指认了绿原酸、木犀草苷、圣草酚、棕矢车菊素、异泽兰黄素5个成分,含量测定表明不同产地艾叶绿原酸和黄酮成分存在显著差异;HCA分析20批艾叶为3类;PCA得到7个主成分的累积方差贡献率为86.676%;OPLS-DA分析表明绿原酸、木犀草苷、圣草酚、棕矢车菊素、异泽兰黄素可能是影响艾叶药材质量的差异标志物。结论指纹图谱定性及多非挥发性成分定量结合化学模式识别可用于艾叶药材鉴别和质量控制。

RP-HPLC法同时测定艾叶及其炮制品中棕矢车菊素和异泽兰黄素的含量

目的：建立同时测定艾叶及其炮制品（醋艾叶、艾叶炭、醋艾炭）中棕矢车菊素和异泽兰黄素含量的方法，为控制艾叶及其炮制品质量提供新的评价指标。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18（250mm×4．6mm，5gm），流动相为乙腈-0．2％磷酸溶液（37：63，V/V），流速为1．0ml／min，柱温为25℃，检测波长为330nm。结果：棕矢车菊素和异泽兰黄素的质量浓度分别在0．0140．20、0．01～0．16mg／ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系（r分别为0．9995、0．9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈3％；平均加样回收率分别为99．72％、101．19％，RSD分别为1．48％、0．90％（n均为6）。两种成分在艾叶、醋艾叶中含量较高，在艾叶炭和醋艾炭中含量极低或未检测到。结论：该方法简便、易行，测定结果准确、重复性好，可用于评价和控制艾叶和醋艾叶饮片的质量。

HPLC波长切换法同时测定乳增宁胶囊中的9个主要成分

目的采用HPLC波长切换法同时测定乳增宁胶囊中9个主要成分的含量。方法采用Venusil MP C18色谱柱（250mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.2%甲酸溶液,梯度洗脱,流速0.8 m L·min-1,温度30℃,进样量10μL。结果淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、土贝母苷甲、土贝母苷乙、土贝母苷丙、棕矢车菊素、异泽兰黄素、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的线性范围分别为8.86-177.20、2.79-55.80、10.08-201.60、2.47-49.40、5.56-111.20、1.12-22.40、4.54-90.80、1.98-39.60、1.86-37.20 mg·L-1,r分别为0.9998、0.9997、0.9999、0.9993、0.9996、0.9999、0.9995、0.9997、0.9998;9种成分的平均加样回收率分别为99.54%、97.84%、100.16%、98.74%、97.79%、98.06%、99.31%、98.50%、97.71%,RSD分别为1.19%、1.40%、0.75%、0.99%、1.66%、1.27%、0.94%、1.13%、1.58%。结论所用方法操作简便、重复性好、精密度高、稳定性好,可同时测定乳增宁胶囊中9种有效成分的含量。

基于HPLC多成分定量控制联合化学计量学的妇科养荣胶囊质量评价研究

目的建立HPLC法同时测定妇科养荣胶囊中梓醇、地黄苷D、益母草苷、棕矢车菊素、异泽兰黄素、洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A和藁本内酯的含量的方法,结合化学计量学对其质量进行评价。方法采用Agilent Extend XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min;柱温30℃,检测波长210 nm(检测梓醇、地黄苷D和益母草苷)、345 nm(检测棕矢车菊素和异泽兰黄素)和280 nm(检测洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A和藁本内酯);采用聚类分析、主成分分析等化学计量学方法对妇科养荣胶囊进行质量评价。结果 9种成分分别在5.53~110.60、1.97~39.40、2.29~45.80、0.66~13.20、1.74~34.80、1.36~27.20、2.68~53.60、3.41~68.20、 9.27~185.40μg/mL线性关系良好(r≥0.999 1),平均加样回收率(RSD)分别为99.91%(0.67%)、98.67%(1.18%)、 97.94%(1.07%)、 96.76%(0.96%)、 98.13%(1.32%)、 97.97%(1.66%)、 99.89%(0.87%)、100.11%(0.75%)、100.03%(0.84%);10批样品聚类分析分为2类,各成分含量差异与生产阶段有关。结论该方法操作简便、重复性好,可用于妇科养荣胶囊的质量控制。

基于古代本草记载的不同产地艾叶中棕矢车菊素和异泽兰黄素的含量研究

为了评价"海艾"、"蕲艾"、"北艾"、"祁艾"和南阳艾叶品质,利用高效液相色谱法同时测定艾叶中棕矢车菊素和异泽兰黄素的含量。采用Agilent Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(35∶65),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长350 nm,柱温25℃。棕矢车菊素和异泽兰黄素分别在0.003~0.126 g·L^(-1)(r=0.999 9),0.005~0.200 g·L^(-1)(r=0.999 9)呈良好的线性关系,平均回收率(n=6)分别为99.14%(RSD 1.2%),99.40%(RSD0.73%),说明该方法准确可靠、重复性好,是用于艾叶的质量控制的有效方法。结果表明不同产地艾叶中棕矢车菊素含量差异较小,不同产地艾叶中异泽兰黄素的含量差异较大,淮河以南的浙江宁波、湖北蕲春、湖北襄阳、河南南阳的艾叶和淮河以北汤阴艾叶、安国艾叶中异泽兰黄素含量相对较高。

棕矢车菊素的药理作用及其作用机制的研究进展

棕矢车菊素是主要存在于艾叶、野马追中的具有药理活性的黄酮类化合物,是一种多靶点的药物,具有抗氧化、抗癌、抗菌、抗炎、抗过敏等多种生物活性。对棕矢车菊素的抗肿瘤、抗炎、抗菌、降血糖、免疫抑制等多种药理活性及其作用机制进行综述,以期为其开发应用提供理论依据。