基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂改善关节炎症的机制

目的基于Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路调控巨噬细胞极化探讨复方雷公藤制剂对佐剂关节炎大鼠关节炎症的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组,每组6只,除正常组外,其余组大鼠构建佐剂关节炎模型。致炎后第19天开始,复方雷公藤组给予340 mg/L复方雷公藤制剂混悬液灌胃,每天1次;甲氨蝶呤组给予0.95 mg/L甲氨蝶呤混悬液灌胃,每周1次;Notch1抑制剂组给予0.56 mg/L Notch1抑制剂混悬液尾静脉注射,隔天1次;正常组及模型组给予生理盐水灌胃,每天1次。各组均连续干预30 d。检测各组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数;末次灌胃结束后,HE染色观察关节滑膜组织病理学形态,ELISA法检测血清IL-1β、IL-4、IL-10、IL-13、TNF-α水平,流式细胞术检测外周血炎症极化标志物CD86、CD206表达情况,免疫组化及免疫印迹法检测关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显升高(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,复方雷公藤组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(除Notch1抑制剂组)、外周血CD86表达占比及血清IL-1β、TNF-α水平和关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白相对表达占比均明显降低(P均<0.05),外周血CD206表达占比及血清IL-4、IL-10、IL-13水平均明显升高(P均<0.05)。结论复方雷公藤制剂可有效减轻佐剂关节炎大鼠关节炎症反应,其机制可能与抑制Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路轴调控巨噬细胞极化,抑制促炎细胞因子的分泌有关。

MiR-15a-3p调节Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-15a-3p通过调节碱性螺旋环螺旋转录因子1(Twist1)/Jagged1/Notch/Kruppel样因子4(KLF4)信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:采用RT-qPCR实验检测肺腺癌组织、癌旁组织和肺腺癌细胞系(A549、HCC827)及人肺正常上皮细胞(BEAS-2B)中miR-15a-3p和Twist1 mRNA水平。A549细胞分成Control组(未转染)、NC mimics组(转染NC mimics)、miR-15a-3p mimics组(转染miR-15a-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-Twist1组(转染si-Twist1)、miR-15a-3p mimics+pcDNA组(共转染miR-15a-3p mimics和pcDNA)、miR-15a-3p mimics+pc-Twist1组(共转染miR-15a-3p mimics和pc-Twist1)。CCK-8法检测细胞增殖情况;TUNEL凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况;Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告分析实验确定miR-15a-3p和Twist1的靶向作用关系;Western blotting实验检测Twist1、Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达水平。结果:在肺腺癌组织和细胞系中,miR-15a-3p表达降低,Twist1 mRNA表达升高(P<0.05)。A549细胞通过转染miR-15a-3p mimics或si-Twist1,上调miR-15a-3p或下调Twist1后,细胞增殖率(24 h、48 h、72 h)显著下降,TUNEL阳性细胞比显著增加,细胞迁移数和侵袭数显著降低(P<0.05)。Twist1是miR-15a-3p的下游靶基因,被miR-15a-3p直接负调控。Twist1的上调明显逆转了miR-15a-3p过表达对A549细胞进展的抑制作用。miR-15a-3p过表达抑制Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达,而继续上调表达Twist1后Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:miR-15a-3p通过靶向抑制Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路,降低A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进凋亡。

藤黄健骨胶囊对膝骨关节炎鼠软骨组织Notch1、Jagged1、炎性反应因子及基质金属蛋白酶表达的影响

目的探讨Notch/Jagged1信号通路对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型鼠软骨组织炎性反应因子及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)表达的影响,并揭示藤黄健骨胶囊可能的干预机制。方法60只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、仙灵骨葆胶囊组[0.27 g/(kg·d)]及藤黄健骨胶囊干预组[高剂量0.36 g/(kg·d)、中剂量0.18 g/(kg·d)、低剂量0.09 g/(kg·d)],每组10只。除假手术组外,其余5组采用改良Hulth法构建KOA大鼠模型,模型制备成功后,分别给予仙灵骨葆胶囊及相应剂量的藤黄健骨胶囊灌胃给药,假手术组和模型组给予0.9%(质量分数)氯化钠注射液。给药2个月后股动脉采血处死大鼠,取患侧膝关节软骨采用苏木精-伊红(HE)染色观察关节软骨组织的形态变化;ELISA法检测关节软骨组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Notch1和Jagged1含量变化;免疫组化法观察关节软骨组织中Col-Ⅱ、MMP-9、MMP-13、Notch1和Jagged1蛋白表达变化。结果与假手术组比较,模型组关节面脱落、严重破坏,软骨细胞分布紊乱;模型组软骨细胞Mankin(5.56±0.85)评分、IL-1β(11.13±2.19)、TNF-α(98.29±9.13)、Notch1(5.03±0.37)和Jagged1(222.54±36.87)含量均显著升高,MMP-9(1.54±0.72)、MMP-13(0.41±0.04)、Notch1(0.39±0.05)和Jagged1(0.38±0.05)等蛋白的免疫反应性均显著增强,Col-Ⅱ(0.15±0.04)蛋白的免疫反应性则显著降低(P<0.05)。与模型组比较,藤黄健骨胶囊0.36 g/(kg·d)剂量组软骨细胞形态和分布趋于正常;其软骨组织Mankin(2.86±0.48)评分显著降低,Col-Ⅱ(0.39±0.03)蛋白的免疫反应性则显著增强(P<0.05);藤黄健骨胶囊0.36、0.18 g/(kg·d)剂量组Jagged1(170.54±41.09、183.46±33.12)含量显著降低,MMP-9(0.68±0.25、1.14±0.49)和Jagged1(0.21±0.05、0.26±0.07)等蛋白的免疫反应性也均显著降低(P<0.05);藤黄健骨胶囊0.36、0.18、0.09 g/(kg·d)剂量组IL-1β(5.71±1.03、8.71±1.53、8.81±2.31)、TNF-α(63.42±10.01、67.46±11.68、71.88±15.63)和Notch1(2.95±0.39、3.56±0.37、4.22±0.33)含量均显著降低,同时MMP-13(0.21±0.02、0.27±0.04、0.31±0.09)和Notch1(0.19±0.06、0.24±0.05、0.28±0.04)等蛋白的免疫反应性也均显著降低。结论藤黄健骨胶囊可能通过促进KOA模型鼠关节软骨组织Notch/Jagged1信号通路下游蛋白Col-Ⅱ表达,抑制其Notch/Jagged1信号通路关键蛋白Notch、Jagged1、炎性反应因子及MMPs表达,延缓关节软骨退变,从而改善KOA的临床症状。

丹皮酚抑制Notch1/Jagged1信号通路对妊娠糖尿病大鼠糖代谢紊乱的改善作用

目的探讨丹皮酚(PAE)抑制Notch受体(Notch1)/Notch配体(Jagged1)信号通路对妊娠糖尿病(GDM)大鼠糖代谢紊乱的改善作用。方法大鼠分为正常对照组(NC组)、模型组(GDM组)、低剂量PAE组(L-PAE组,100 mg/kg)、中剂量PAE组(M-PAE组,200 mg/kg)、高剂量PAE组(H-PAE组,400 mg/kg),高剂量PAE+Notch1信号激活剂Jagged1/FC嵌合蛋白组(H-PAE+JFC组,400 mg/kg+500 g/kg),每组12只。血糖仪测定大鼠空腹血糖(FBG)水平;胰岛素放射免疫分析试剂盒检测空腹胰岛素(FINS)水平;采用生化分析仪测定大鼠血清脂代谢指标;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、介素-6(IL-6)、瘦素(Leptin)、脂联素(APN)水平;微量法检测大鼠血清氧化应激指标;western blot法检测大鼠肝脏组织中Notch1、Jagged1、Hes1蛋白水平。结果与NC组比较,GDM组大鼠FBG(0 d、7 d、14 d)、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6、Leptin、MDA、Notch1、Jagged1、Hes1升高,FINS(0 d、7 d、14 d)、HDL-C、APN、GSH-PX、SOD、CAT降低(P<0.05);与GDM组比较,L-PAE组、M-PAE组、H-PAE组大鼠FBG(7 d、14 d)、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-6、Leptin、MDA、Notch1、Jagged1、Hes1降低,FINS(7 d、14 d)、HDL-C、APN、GSH-PX、SOD、CAT升高(P<0.05),且具有剂量依赖性;Notch1信号激活剂可减轻高剂量PAE对GDM大鼠糖代谢紊乱的改善作用(P<0.05)。结论PAE可能通过抑制Notch1/Jagged1信号通路,改善GDM大鼠糖代谢紊乱。

APEX1介导Jagged1上调驱动结肠癌进展的机制

目的探讨APEX1介导Jagged1上调驱动结肠癌进展的机制。方法APEX1 siRNA转染NCI-H548和DLD1,构建APEX1低表达细胞;SW480和HT29转染APEX1 shRNA,构建APEX1超表达细胞。NCI-H548细胞用于构建APEX1超表达、Jagged1低表达、Jagged1超表达。将构建的NCI-H548-APEX1、NCI-H548-APEX1+Jagged1siRNA,NCI-H548-APEX1+Jagged1细胞注射小鼠体内用于肿瘤生长检测。通过Western blot分析人结肠癌细胞系中APEX1、Jagged1、Notch1和Notch3的蛋白表达。通过MTT试验检测细胞增殖。通过Transwell小室试验检测细胞迁移侵袭。用指定细胞的上清液培养HUVECs成管进行血管生成试验。通过卡尺测量异种移植小鼠肿瘤大小。结果NCI-H548和DLD1中APEX1、Jagged1、Notch1和Notch3蛋白表达较SW480、HT29升高(P<0.05),在APEX1高表达的NCI-H548和DLD1中,Jagged1和Notch蛋白表达较高。相反,在APEX1低表达的SW480、HT29中,Jagged1和Notch蛋白表达较低。在NCI-H548、DLD1等结肠癌细胞中转染APEX1 siRNA敲低APEX1后,Jagged1蛋白和/Notch蛋白水平显著降低(P<0.05),而在SW480-APEX1和HT29-APEX1细胞中,Jagged1蛋白/Notch蛋白平显著升高(P<0.05)。NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA细胞增殖较NCI-H548-APEX1降低(P<0.05),NCI-H548-APEX1+Jagged1细胞增殖较NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA升高(P<0.05)。NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA细胞迁移、侵袭能力较NCI-H548-APEX1降低(P<0.05),NCI-H548-APEX1+Jagged1细胞迁移侵袭能力较NCI-H548-APEX1+Jagged1siRNA升高(P<0.05)。NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA细胞血管生成量较NCI-H548-APEX1减少(P<0.05),NCI-H548-APEX1+Jagged1细胞血管生成量较NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA增多(P<0.05)。注射NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA细胞的小鼠肿瘤体积较注射NCI-H548-APEX1细胞减小(P<0.05),注射NCI-H548-APEX1+Jagged1细胞的小鼠肿瘤体积较注射NCI-H548-APEX1+Jagged1 siRNA细胞增大(P<0.05)。结论APEX1通过上调Jagged1的表达,正向调节Notch信号通路,从而促进结肠癌在体内和体外的肿瘤发生。由于APEX1、Jagged1和cleaved Notch的水平在人类结肠癌细胞中密切相关,因此通过强烈激活Jagged1/Notch信号,药物靶向APEX1过表达可能是治疗或预防结肠癌的一种很有前景的方法。

β-catenin、Notch1、Jagged1在胃癌变过程中的表达及意义

目的研究Wnt和Notch通路分子β-catenin、Notch1、Jagged1在胃癌变过程中的表达及意义。方法收集浅表性胃炎(n=30)、低级别上皮内瘤变(n=30)、高级别上皮内瘤变(n=30)及胃癌的胃镜活检组织标本,采用免疫组织化学法检测各组标本中β-catenin、Notch1、Jagged1的表达,并进行统计学分析。结果β-catenin、Notch1、Jagged1在浅表性胃炎、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变、胃癌4种组织中的表达阳性率随病变级别的加重均逐渐上调(P<0.05),且三者表达水平之间均呈显著正相关(P<0.001)。结论β-catenin、Notch1、Jagged1在胃癌变过程中的表达逐级上调,且三者可能互相协同,共同促进胃癌的发生。

融合蛋白hJagged1^(ext)-Fc毕赤酵母表达载体的构建及表达

本研究旨在构建人IgG1 Fc蛋白及融合蛋白hJagged1ext-Fc,并在毕赤酵母GS115中表达。用RT-PCR法从人骨髓细胞中扩增hJagged1基因的胞外段。在测序正确后,将hJagged1基因的胞外段插入构建好的PIC-Fc载体,得到PIC-hJagged1ext-Fc。用MD平板筛选重组子,G418法筛选高拷贝转化子,经甲醇诱导表达后,采用SDS-PAGE分析表达蛋白。结果表明:hJagged1基因的胞外段被有效地扩增。序列分析显示所构建的含phJagged1ext-Fc融合基因的质粒与设计相同,人IgG1 Fc蛋白及融合蛋白hJagged1ext-Fc得到正确表达。结论:成功地构建了hJagged1ext-Fc融合基因的毕赤酵母表达载体,并在毕赤酵母中正确表达,为进一步研究Jagged1在造血干/祖细胞的体外扩增奠定了基础。

Notch1,Jagged1和VEGF蛋白在非小细胞肺癌的表达及其意义

目的:检测Notch1,Jagged1和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织的表达及其临床病理学意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测65例NSCLC组织、15例正常支气管上皮组织中Notch1,Jagged1和VEGF蛋白的表达并分析它们与临床病理参数间的关系。结果:Notch1,Jagged1和VEGF蛋白在非小细胞肺癌中表达的阳性强度分别为81.5%(53/65),83.1%(54/65)和93.8%(61/65),均明显高于正常支气管上皮组织的阳性强度(P<0.05);NSCLC中Notch1和VEGF蛋白表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05);Jagged1蛋白表达与患者病理类型和淋巴结转移有关。Notch1,Jagged1和VEGF蛋白的表达三者两两间均呈显著正相关。结论:Notch1,Jagged1和VEGF蛋白可能在肺癌发生发展中起重要作用;其高表达有可能作为预测NSCLC侵袭、转移的重要指标。

大鼠单侧输尿管梗阻后肾脏Notch1/Jagged1的表达及其意义

目的:观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后不同时期Notch1/Jagged1、纤维连接蛋白(FN)表达的变化,探讨在肾脏间质纤维化发病机制中的意义。方法:建立大鼠UUO模型,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和westernblotting动态观察(第1、3、7、14天)梗阻侧肾脏及假手术对照组Notch1/Jagged1mRNA、蛋白和FN的表达。结果:UUO模型梗阻侧肾脏Notch1/Jagged1mRNA蛋白及FN蛋白在输尿管结扎后第1、3、7、14天不同时间点均显著高于对照组和非梗阻侧肾脏(P<0.05或P<0.01),Notch1/Jagged1mRNA在第7天达高峰,但Jagged1于第1天达高峰,Notch1、FN在第14天达高峰。结论:在整体条件下,随着肾间质纤维化程度的加重,FN聚积也随之增加,同时Notch1/Jagged1表达增强,提示Notch1/Jagged1信号通路在肾间质纤维化发病机制中起重要作用。

Jagged1活化Notch通路促进RAW 264.7向破骨分化但抑制增殖

目的:探讨Jagged1通过活化Notch通路对RAW 264.7细胞向破骨分化及增殖的影响。方法:将RAW 264.7细胞分三组培养:对照组(细胞培养基+鼠RANKL 50 ng/L)、Jagged1组(细胞培养基+鼠RANKL+Jagged1重组蛋白)、γ-分泌酶抑制剂(DAPT)组(细胞培养基+鼠RANKL+Jagged1重组蛋白+DAPT),实时荧光定量PCR检测各组破骨细胞标志基因组织蛋白酶K(Cathepsin K,CK)、抗酒石酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、降钙素受体(Calcitionin receptor,CTR)及Notch靶基因HES-1、HEY-1 mRNA的表达,TRAP染色鉴定破骨细胞,扫描电镜检测破骨细胞溶骨功能。免疫荧光检测NICD的表达变化,CCK-8检测RAW 264.7细胞增殖。结果:Jagged1组TRAP、CK、CTR及HES-1、HEY-1 mRNA的表达、TRAP+细胞数较对照组及DAPT组明显升高(P<0.05),而DAPT组与对照组均无明显变化;细胞免疫荧光显示Jagged1组NICD除表达于细胞膜、细胞质外,细胞核也有较高表达,对照组及DAPT组细胞核中NICD无明显表达;细胞培养48 h,Jagged1组细增殖较对照组及DAPT组出现明显抑制。结论:Jagged1通过活化Notch通路促进RAW 264.7向破骨细胞分化、抑制其增殖。

胃癌组织中Notch1、Jagged1及NF-κB的表达及临床意义

目的:研究Notch1、Jagged1和NF-κB在胃癌组织中的表达状况,探讨其与临床病理特征及幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的关系。方法:采用组织芯片技术和免疫组化法检测60例胃癌、60例癌旁及20例正常胃黏膜组织中Notch1、Jagged1和NF-κB的表达,用Warthin-Starry银染法检测各组织中Hp的感染状况。结果:Notch1和Jagged1在胃癌组织中的阳性表达率(40.0%、70.0%)显著低于其癌旁(81.7%、96.7%)和正常组织(85.0%、100.0%),差异均有统计学意义(P<0.05)。NF-κB在胃癌组织中的阳性表达率(66.7%)显著高于其癌旁(36.7%)和正常组织(0.0%),差异均有统计学意义(P<0.05)。Hp在胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织中的阳性感染率分别为76.7%、93.3%和10.0%,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Notch1、Jagged1表达及Hp感染均与胃癌的临床病理特征无关(P>0.05),NF-κB表达与胃癌的分化程度和TNM分期有关(P<0.05)。Notch1在胃癌组织中的表达与Jagged1呈正相关(r=0.460,P<0.05),与NF-κB呈负相关(r=-0.361,P<0.05)。Notch1、Jagged1及NF-κB在胃癌组织中的表达均与Hp感染无关(r=-0.032,r=0.155,r=0.028,均P>0.05)。结论:胃癌中存在Notch1、Jagged1和NF-κB的异常表达,但均与Hp感染无关,Notch1与Jagged1低表达可能诱导NF-κB高表达,进而导致胃癌的发生。

雷帕霉素对肾间质成纤维细胞Notch1/Jagged1信号通路及FN表达的影响

目的:研究雷帕霉素(RAP)在体外抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)激活肾间质成纤维细胞(NRK-49F)作用及探讨RAP抗纤维化的作用机制。方法:以TGF-β1(2ng/ml)刺激培养的NRK-49F,采用Western印迹观察20～100ng/mlRAP对Notch1/Jagged1表达的影响,同时检测纤维连接蛋白(FN)表达水平以评价细胞外基质合成的变化。结果:以2ng/mlTGF-β1诱导的NRK-49F细胞经不同浓度的RAP干预后培养24、48、72h,呈剂量依赖性和时间依赖性抑制Notch1/Jagged1、FN表达,其中RAP(40ng/ml)抑制效应最为明显(P<0.01),Notch1/Jagged1蛋白表达分别下调53.12%、48.54%、44.55%和46.14%、47.22%、52.15%(P<0.01);FN分别下降37.84%、45.68%、51.65%(P<0.01)。结论:在体外条件下,RAP可以抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞FN表达增加,下调Notch1/Jagged1表达可能是其作用机制之一,提示RAP可能用于防治肾间质纤维化。

Notch信号通路配体Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中的表达

目的:探讨Notch信号通路配体Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中的表达及意义。方法:选取轻度子痫前期患者30例(轻度组)、重度子痫前期患者30例(重度组)、正常妊娠孕妇30例(对照组),采用免疫组化法检测其胎盘组织中Jagged1、Dll4的定位表达,采用荧光定量PCR技术和Western blot法分别检测胎盘组织中Jagged1、Dll4 mRNA及蛋白的表达。结果:Jagged1主要表达于血管内皮细胞和绒毛滋养层细胞,Dll4主要表达于血管内皮细胞。轻、重度组胎盘组织中Jagged1、Dll4 mRNA及蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.05),且重度组低于轻度组(P<0.05);对照组胎盘组织中Jagged1与Dll4在mRNA和蛋白水平上的表达均呈正相关(r=0.806和0.808,P<0.05),轻度组中两者表达的相关性减弱(r=0.675和0.560,P<0.05),而在重度组中未发现两者的相关性。结论:Jagged1、Dll4在子痫前期胎盘组织中表达失衡,与子痫前期的发病关系密切。

地黄多糖诱导大鼠BMSCs向神经元样细胞分化及对Notch1和Jagged1蛋白表达的影响

目的探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的作用及对Notch1和Jagged1蛋白表达的影响。方法取大鼠P3-P5代BMSCs,随机分为正常对照组(CON组)、神经生长因子组(BDNF组,10μg/ml)和地黄多糖诱导A、B、C组(RGP组,浓度分别为50、100、200μg/ml),诱导后连续培养7d。观察细胞一般形态。采用Western blotting检测CON组与RGP C组神经标志物相关蛋白神经巢蛋白(Nestin)、βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,免疫荧光法和Western blotting分别检测各组诱导后0、1、3、7d时Notch1、Jagged1蛋白和Notch1胞内段NICD的表达。结果 CON组始终以梭形细胞为主,RGP C组第5天起出现神经元样细胞。Western blotting检测到RGP C组Nestin蛋白表达由强到弱,NSE和βⅢ-tubulin蛋白表达由弱到强,GFAP蛋白呈弱表达。免疫荧光结果显示,RGP各组各时间点Notch1蛋白阳性细胞率均显著低于CON组(P<0.05),且随时间延长Notch1蛋白表达阳性率逐渐降低;RGP C组中Jagged1阳性细胞率诱导后1d时具有明显的上升趋势,而后显著下降(P<0.05),BDNF组基本无Jagged1蛋白表达。Western blotting检测结果与免疫荧光检测结果类似。结论地黄多糖具有诱导BMSCs向神经元样细胞分化的作用,且可影响Notch1和Jagged1蛋白的表达。

Notch1 Jagged1和COX-2蛋白在胃癌中的表达及相关性研究

目的:研究Notch1、Jagged1和COX-2在胃癌组织中的表达情况,分析其与临床病理特征及Hp感染的关系。方法:应用免疫组织化学S-P法,采用组织芯片技术,检测60例胃癌组织、60例癌旁组织及20例正常胃黏膜组织中Notch1、Jagged1和COX-2蛋白的表达;采用Warthin-starry染色法检测各组织中Hp感染状况。结果:Notch1与Jagged1在胃癌组中阳性表达率(40.0%,70.0%)低于癌旁组(81.7%,96.7%)和正常组(85.0%,100.0%),差异有统计学意义(P<0.05)COX-2在胃癌组中的阳性表达率(60.0%)高于癌旁组(35.0%)和正常组(0),差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1和Jagged1与胃癌的临床病理特征均无关(P>0.05)。COX-2的表达与胃癌的分化程度、浸润深度(P=0.013,P=0.013)有关。Notch1与Jagged1在胃癌组中的表达呈正相关(r=0.460,P<0.005);Notch1与COX-2表达呈负相关(r=-0.314,P>0.05);Jagged1与COX-2表达无相关性(r=-0.175,P>0.05)。Hp在胃癌组中阳性感染率低于癌旁组(76.6%,91.7%),差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1、Jagged1和COX-2在胃癌组中Hp感染阳性与Hp感染阴性的阳性表达率相比,差异无统计学意义(均P>0.05)。胃癌组织中Notch1、Jagged1和COX-2的表达与Hp感染率无关(P>0.05)。结论:胃癌中存在Notch信号通路的异常,Notch1和Jagged1的低表达可能导致COX-2的高表达,最终导致胃癌的发生发展;Hp感染可能在早期胃癌的发生中起重要作用。

活血通络汤中药对激素性股骨头坏死造模家兔中BMP2和Jagged1表达的影响

目的:探讨中药预防性治疗激素性股骨头坏死(SANFH)的疗效及作用机制。方法:将192只日本大耳兔随机分为模型组A(48)、模型组B(48)、模型对照组C(48)、空白对照组D(48),A组第2周开始喂服中药饲料,B组第3周开始喂服中药饲料,C、D组均喂服等量普通饲料,A、B、C组第3周开始造模,每组分别于第2周末、第5周末、第8周末随机抽取8只取双侧股骨头标本,做病理镜检及计算空骨陷窝率,并采用酶联免疫吸附法(ELISA)对兔血清BMP2的含量进行测定,实时荧光定量PCR(RT-PCR)对兔血清Jagged1蛋白基因表达进行测定。结果:病理镜检及空骨陷窝率显示造模成功,BMP2阳性表达的强度及面积均明显高于造模组,结果有统计学意义(P<0.05),模型组A、模型组B、模型对照组C的Jagged1均呈上调趋势。结论:1表明活血通络汤中药对股骨头坏死的预防治疗作用确切;2活血通络汤中药可能是通过促进Jagged1的上调并维持股骨头BMP2浓度,共同促进骨修复和血管生成起治疗作用。

重度子痫前期患者胎盘组织中Notch1、Jagged1表达变化及意义

目的观察重度子痫前期患者胎盘组织Notch1、Jagged1 mRNA和蛋白表达变化,并探讨其意义。方法选择重度早发型子痫前期患者为A组,重度晚发型子痫前期患者为B组,正常孕妇为C组,各25例。均行剖宫产,取胎盘组织,用实时荧光定量PCR法检测胎盘组织Notch1、Jagged1 mRNA,用免疫组化法检测胎盘组织Notch1、Jagged1蛋白。结果与C组相比,A、B组Notch1、Jagged1 mRNA表达水平降低(P均<0.05);与B组相比,A组Notch1、Jagged1 mRNA表达水平降低(P均<0.05)。Notch1、Jagged1蛋白主要连续表达于绒毛外滋养细胞胞质及血管内皮细胞胞质。A、B、C组Notch1蛋白阳性表达率分别为36.67%、50.00%、83.33%,Jagged1蛋白阳性表达率分别为43.33%、50.00%、83.33%,Notch1、Jagged1蛋白阳性表达率A组低于B组,B组低于C组,P均<0.05。结论Notch1、Jagged1在重度子痫前期患者胎盘组织中呈低表达,二者可能参与重度子痫前期尤其是重度早发型子痫前期的发生。

Notch1、Jagged1、p-Akt和NF-κB在胃癌中的表达及意义

目的探讨胃癌组织中Notch1、Jagged1、p-Akt和NF-κB的表达与临床病理特征及幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法利用组织芯片和免疫组织化学法检测60例胃癌、60例癌旁和20例正常胃黏膜组织中Notch1、Jagged1、p-Akt及NF-κB的表达,用Warthin-Starry银染法检测所有组织中Hp的感染状态。结果 Notch1、Jagged1、p-Akt和NF-κB在胃癌组织中的阳性表达率分别为40.0%、70.0%、55.0%和66.7%,与癌旁组织(81.7%、96.7%、30.0%和36.7%)和正常组织(85.0%、100.0%、5.0%和0.0%)比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。Hp在胃癌、癌旁组织及正常胃黏膜组织中的阳性感染率分别为76.7%、93.3%和10.0%,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。Notch1、Jagged1表达及Hp感染均与胃癌临床病理特征无关(P>0.05)。p-Akt及NF-κB表达与胃癌的分化程度和TNM分期有关(P<0.05)。胃癌组织中Notch1表达与Jagged1呈正相关(r=0.460,P<0.05),与p-Akt及NF-κB均呈负相关(r=-0.287,r=-0.361,P<0.05),p-Akt的表达与NF-κB呈正相关(r=0.284,P<0.05)。Notch1、Jagged1、p-Akt及NF-κB表达均与Hp感染状态无关(r=-0.032,r=0.155,r=0.055,r=0.028,P值均>0.05)。结论 Notch1和Jagged1在胃癌中低表达,p-Akt和NF-κB在胃癌中高表达,它们均参与了胃癌的发生、发展,但都与Hp感染无关,Notch1/Jagged1信号通路下调可能通过调控p-Akt和NF-κB的高表达促进胃癌的发生。

益胃汤对EMs模型大鼠异位子宫内膜Notch1、Delta1和Jagged1表达的影响

目的考察益胃汤对自体移植子宫内膜异位症(EMs)大鼠异位内膜Notch1、Delta1及Jagged1表达的影响,为其干预EMs提供依据。方法建立SD大鼠自体移植EMs模型,将造模成功的大鼠随机分成模型对照组,丹那唑组(0.20 g/kg),益胃汤高(27.00 g/kg)、中(13.50 g/kg)、低剂量(6.75 g/kg)组,药物连续干预4周后,测量异位子宫内膜体积,并采用Western blot法检测各组动物子宫内膜中NOTCH1蛋白表达;采用免疫组化法检测各组大鼠内膜DELTA1及JAGGED1蛋白表达。结果与模型对照组比较,益胃汤给药后,EMs模型大鼠异位子宫内膜体积显著缩小(P<0.01),益胃汤高剂量大鼠异位内膜中NOTCH1相对表达量和DELTAL1平均光密度显著减少(P<0.01);益胃汤高、中剂量组中JAGGED1平均光密度明显降低(P<0.05)。结论益胃汤改善EMs与降低异位子宫内膜Notch1、Delta1和Jagged1的表达有关。

Jagged1在增生性糖尿病视网膜病变纤维血管膜中的表达及其意义

目的观察Notch配体Jagged1在增生性糖尿病视网膜病变(PDR)纤维血管膜中的表达及其意义。方法于2014年7月至2015年7月在青岛大学附属医院眼科收集PDR患者57例60眼玻璃体切割术中纤维血管膜标本。根据术前是否行抗血管内皮生长因子药物玻璃体内注射将患眼分为未注药组30例32眼和注药组27例28眼,其中注药组患眼于手术前2~7 d行雷珠单抗玻璃体内注射。收集同期非糖尿病伴特发性黄斑前膜患者18例18眼黄斑前膜标本为对照组。采用苏木精-伊红染色观察各组标本结构特征;采用免疫组织化学染色法检测未注药组与注药组病理标本中Jagged1、Delta样配体4(Dll4)和Notch1蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR测定各组标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量。采用Pearson线性相关分析评估PDR纤维血管膜标本中Jagged1 mRNA相对表达量与Dll4 mRNA和Notch1 mRNA相对表达量关系。结果光学显微镜下可见PDR纤维血管膜中新生血管生成,且注药组血管管腔狭窄,未注药组血管管腔相对扩张,黄斑前膜中未见新生血管。未注药组和注药组病理标本中均有Jagged1、Dll4和Notch1蛋白表达,主要位于新生血管内皮组织中。未注药组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1蛋白阳性染色吸光度(A)值分别为6.25±1.82、6.87±1.89和5.12±2.14,高于注药组的1.46±0.37、1.55±0.24和1.32±0.53,差异均有统计学意义(t=5.168,P=0.014;t=6.012,P=0.008;t=3.453,P=0.030)。未注药组、注药组和对照组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量总体比较,差异均有统计学意义(F=77.337、62.305、51.869,均P<0.01);其中,未注药组和注药组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量均显著高于对照组,注药组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量均较未注药组明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Jagged1 mRNA相对表达量与Dll4和Notch1 mRNA相对表达量均呈显著正相关(r=0.925、0.950,均P<0.05)。结论Jagged1在PDR纤维血管膜血管内皮中呈高表达,且与Dll4和Notch1的表达均呈正相关,Jagged1参与新生血管形成的作用途径可能与Dll4及Notch1相关。