戟天健脑方对老龄血管性痴呆模型大鼠海马IL-1β、TNF-α的影响

目的观察戟天健脑方对老龄血管性痴呆(VD)模型大鼠海马炎症细胞因子IL-1β、TNF-α的影响。方法70只老龄SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、尼莫地平组,戟天健脑方低、中、高剂量组,每组10只。采用双侧颈总动脉永久性结扎法(2-VO法)制备成VD大鼠模型。戟天健脑方低、中、高剂量组分别给予戟天健脑方5.4 mg/(kg·d)、10.8 mg/(kg·d)、21.6 mg/(kg·d)灌胃,尼莫地平组给予尼莫地平50 mg/(kg·d)灌胃,空白组、模型组和假手术组分别给予等量生理盐水灌胃,均2次/d。各组大鼠均连续灌胃4周,然后进行Morris水迷宫实验,并观察海马CA1区神经元组织形态的变化和测定海马组织IL-1β和TNF-α的含量。结果戟天健脑方高、中剂量组大鼠穿台次数、目标象限活动路程较模型组明显增加(P<0.05),戟天健脑方高剂量组大鼠目标象限活动时间明显增加(P<0.05);戟天健脑方高、中剂量组及尼莫地平组海马锥体细胞较模型组细胞数量增多,排列较整齐,细胞间隙减小;与模型组比较,尼莫地平组TNF-α蛋白含量明显降低(P<0.05),戟天健脑方高剂量组可明显降低IL-1β含量(P<0.05),戟天健脑方中、高剂量组均可明显降低TNF-α含量(P<0.05)。结论戟天健脑方能够改善VD大鼠学习记忆能力,减轻VD大鼠海马CA1区的损伤,下调海马组织炎症因子IL-1β和TNF-α的表达,发挥保护神经元的作用。

邓铁涛教授健脑1方对血管性痴呆大鼠海马NMDAR-CaMKⅡ通路的影响

目的:探讨邓铁涛教授健脑1方对血管性痴呆大鼠的海马NMDAR-CaMKⅡ通路的影响。方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎建立VD动物模型,将60只SD雄性大鼠随机分为假手术组、VD模型组、高剂量组、低剂量组及尼莫地平组,给药30天后采用免疫组化方法测定大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ表达水平。结果:模型组大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ的表达水平与假手术组相比明显降低(P<0.01)。与模型组相比较,高剂量组大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ表达水平均显著提高(P<0.05),尼莫地平组大鼠海马CAl区CaMKⅡ表达水平也明显提高(P<0.05)。结论:NMDAR-CaMKⅡ通路在VD的发生机制中发挥了重要作用。健脑1方可能通过上调VD大鼠海马NR2B及CaMKⅡ的表达,从而改善大鼠学习和记忆功能,起到治疗血管性痴呆的作用。

邓铁涛教授健脑1方对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及NR2B mRNA表达的影响

【目的】探讨邓铁涛教授健脑1方对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力的影响,并从分子生物学角度探讨其作用机制。【方法】采用双侧颈总动脉永久性结扎法复制VD动物模型,将60只SD雄性大鼠随机分为假手术组、VD模型组、中药高剂量组(剂量为57.6 g·kg-1·d-1)、中药低剂量组(剂量为14.4 g·kg-1·d-1)及尼莫地平组(剂量为5.4 mg·kg-1·d-1),给药30 d后采用Morris水迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力,观察大鼠海马组织学改变,采用荧光定量法检测大鼠海马NR2B m RNA表达水平。【结果】水迷宫定位航行试验检测结果提示:第3天,与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长(P<0.05);第4天,中药高剂量组大鼠逃避潜伏期较模型组显著下降(P<0.05)。空间探索试验结果显示:60 s内中药高剂量组大鼠穿越平台的次数显著高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01),各组停留在平台所在象限的时间与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。各组海马组织病理检查可见模型组大鼠海马CA1区神经细胞丢失,神经细胞核碎裂、核膜不清、核仁消失,神经细胞收缩,胞浆嗜酸性增强,胶质细胞反应性增生;中药高、低剂量组海马CA1区可见神经元细胞损伤,病变损伤程度均较模型组显著减轻。尼莫地平组、中药高剂量组NR2B m RNA的表达较模型组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);中药低剂量组有增高NR2B m RNA表达的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】健脑1方可显著改善血管性痴呆大鼠学习记忆能力,其作用可能与减少海马组织神经元损伤程度,上调海马NR2B m RNA表达有关。

自拟健脑安神1号方治疗痰火扰神型躁狂症效果观察

目的观察自拟健脑安神1号方治疗痰火扰神型躁狂症的临床效果。方法选取2016年11月-2018年9月就诊于怀化市第四人民医院门诊及住院的痰火扰神型躁狂症患者70例,根据治疗方法不同分为治疗组40例和对照组30例。治疗组给予自拟健脑安神1号方治疗,对照组给予碳酸锂治疗,2组均治疗8周。比较2组临床疗效及治疗前、治疗4周、8周后贝克—拉范森躁狂量表(BRMS)评分。结果治疗8周后,治疗组患者治疗总有效率为90.00%,高于对照组的76.67%(P<0.05)。治疗4周、8周后2组BRMS评分均降低,且治疗组低于对照组(P<0.05)。结论自拟健脑安神1号方治疗痰火扰神型躁狂症的疗效优于碳酸锂,可改善患者的躁狂状态,值得临床推广应用。

基于Nrf2/NQO1/GCL信号通路探讨益肾健脑方对血管性痴呆大鼠神经元凋亡的影响

目的研究益肾健脑方对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠神经元凋亡的影响及作用机制。方法将60只SPF级大鼠随机分为模型制备组50只和空白组10只,模型制备组分时段结扎双侧颈总动脉,空白组仅分离双侧颈总动脉但不结扎。术后4周通过Morris水迷宫筛选出模型制备成功大鼠28只,随机分为模型组、多奈哌齐组(0.45 mg·kg^(-1)·d^(-1))、益肾健脑方高剂量组(24.3 g·kg^(-1)·d^(-1))、益肾健脑方低剂量组(12.15 g·kg^(-1)·d^(-1))各7只,加上空白组10只,共5组。给药4周后,行Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察大脑皮质和海马CA1区组织病理变化,TUNEL染色观察大脑皮质和海马CA1区神经细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测大脑皮质和海马CA1区天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Caspase-3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-7(cysteinyl aspartate-specific proteinase-7,Caspase-7)蛋白表达水平,Western blot检测海马组织核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,NQO1)、谷氨酰半胱氨酸连接酶(glutamate-cysteine ligase,GCL)蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组定位航行实验第5天逃避潜伏期明显增加,空间探索实验穿越平台次数明显减少,目标象限停留时间明显缩短(P<0.01);模型组脑组织病理损伤明显,神经细胞凋亡率显著升高(P<0.01);模型组大脑皮质区和海马CA1区Caspase-3、Caspase-7阳性表达显著升高(P<0.01);模型组海马组织Nrf2、NQO1、GCL蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组定位航行实验中第5天逃避潜伏期明显缩短,空间探索实验中穿越平台次数增加,目标象限停留时间明显延长(P<0.05,P<0.01);多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组脑组织病理损伤减少,神经细胞凋亡率均显著降低(P<0.01);多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组Caspase-3、Caspase-7阳性表达均显著降低(P<0.01);多奈哌齐组和益肾健脑方高、低剂量组海马组织Nrf2、NQO1、GCL蛋白表达均显著升高(P<0.01)。结论益肾健脑方可以改善VD大鼠学习记忆能力、抑制Caspase-3和Caspase-7蛋白表达及减少神经元凋亡,其机制可能与激活Nrf2/NQO1/GCL信号通路有关。

健脾理气方对功能性消化不良大鼠促肾上腺皮质激素释放因子相关通路的影响

目的研究健脾理气方对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)大鼠中枢神经系统和外周十二指肠促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin releasingfactor,CRF)及CRF受体1(CRF-R1)的分布与表达的影响,探讨健脾理气方对FD治疗作用的可能机制。方法36只雄性大鼠随机分为3组,并接受幼年碘乙酰胺灌胃联合夹尾应激刺激方法建立FD动物模型,其中正常组及模型组予生理盐水灌胃,治疗组予健脾理气方中药汤剂灌胃。分别采用Western Blot(WB)或免疫组化染色(IHC)分析下丘脑、脊髓及十二指肠中CRF的分布及表达,定量PCR(qPCR)检测十二指肠中CRF-R1的表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠下丘脑、脊髓及十二指肠中CRF表达水平均明显升高(P<0.01),十二指肠组织中CRF-R1 mRNA表达水平明显增加(P<0.01);健脾理气方治疗组以上各指标均较模型组显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.01)。结论健脾理气方可能通过调节中枢神经系统及外周十二指肠CRF及CRF-R1的表达,从而对FD起到治疗作用。

基于HIF-1α/VEGF信号通路观察健脾补肾活血方对大鼠脑微血管内皮细胞的影响

目的:基于低氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路观察健脾补肾活血方对大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC)的影响,以期为缺血性中风的治疗提供理论依据。方法:选用SPF级8周龄雄性SD大鼠12只,随机选取其中8只给予3.25 g·m L^(-1)的健脾补肾活血方药液灌胃10 m L·kg^(-1),连续灌胃5 d,提取含药血清,保存备用,余下4只给予同体积生理盐水灌胃,后续操作与上述8只大鼠相同,最终获得正常大鼠血清,保存备用。对RBMEC细胞进行复苏、培养、传代后随机分为正常组(20%正常大鼠血清+80%高糖DMEM培养基)、模型组(缺氧复氧损伤,20%正常大鼠血清+80%无糖DMEM培养基)、含药血清组(20%健脾补肾活血方含药血清+80%无糖DMEM培养基),含药血清+HIF-1α抑制剂组(20%健脾补肾活血方含药血清+HIF-1α抑制剂1 mg+80%无糖DMEM培养基)、含药血清+VEGF抑制剂组(20%健脾补肾活血方含药血清+VEGF1 mg抑制剂+80%无糖DMEM培养基)。观察各组RBMEC中Claudin-l和Claudin-5蛋白相对表达水平、RBMEC培养上清液中HIF-1α、VEGF表达水平、RBMEC的损伤修复能力和RBMEC培养72 h时的节点数目、微血管形成数量和长度。结果:RBMEC细胞在复氧24 h后划痕愈合率比较,与正常组比较,模型组划痕愈合率显著下降(P<0.01);与模型组比较,含药血清组、含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组细胞划痕愈合率明显提高(P<0.05);与含药血清组比较,含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组细胞划痕愈合率明显下降(P<0.05)。RBMEC体外微管形成的节点数目、管腔数目及管腔总长度比较,与正常组比较,模型组体外微管形成能力显著下降(P<0.01);与模型组比较,含药血清组、含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组体外微管形成能力明显提高(P<0.05);与含药血清组比较,含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组体外微管形成能力明显下降(P<0.05)。RBMEC中Claudin-l和Claudin-5蛋白相对表达量比较,与正常组比较,模型组Claudin-l和Claudin-5蛋白表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,含药血清组、含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组Claudin-l和Claudin-5蛋白表达明显提高(P<0.05);与含药血清组比较,含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组Claudin-l和Claudin-5蛋白表达明显下降(P<0.05)。RBMEC培养上清液中HIF-1α、VEGF表达水平比较,与正常组比较,模型组HIF-1α、VEGF表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,含药血清组、含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组HIF-1α、VEGF表达明显提高(P<0.05);与含药血清组比较,含药血清+HIF-1α抑制剂组、含药血清+VEGF抑制剂组HIF-1α、VEGF表达明显下降(P<0.05)。结论:健脾补肾活血方可促进缺氧复氧损伤大鼠脑微血管内皮细胞增殖、迁移和细胞成小管等血管新生活动;其机制可能是通过调控HIF-1α/VEGF信号通路来实现。

健脑1方联合西药治疗血管性痴呆30例临床观察

目的观察健脑1方治疗血管性痴呆的临床疗效及安全性。方法收集血管性痴呆气虚痰瘀证患者60例,随机分为治疗组和对照组各30例。两组均给予基础治疗的同时,治疗组联合健脑1方治疗,每日1剂,对照组予尼莫地平片,每次20 mg,每日3次,两组疗程均为6周。治疗前后记录两组患者的简易精神状态检查量表(MMSE)评分、日常生活自理能力量表(ADL)评分、神经精神科问卷(NPI)评分、中医证候积分的变化,评价认知功能、行为能力、精神行为及中医证候疗效,记录治疗过程中的不良反应。结果认知功能临床疗效比较:治疗组总有效率80.00%,对照组53.33%,治疗组优于对照组(P<0.05);行为能力临床疗效比较:治疗组总有效率23.33%,对照组为30.00%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);精神行为临床疗效比较:治疗组总有效率6.67%,对照组为6.67%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);中医证候疗效比较:治疗组总有效率56.67%,对照组为10.00%,治疗组优于对照组(P<0.01)。两组患者治疗后MMSE评分均较本组治疗前提高,而ADL评分均降低(P<0.01)。治疗组治疗后中医证候积分较治疗前降低(P<0.01)。两组治疗后中医证候积分组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论健脑1方治疗血管性痴呆可提高患者认知功能、日常生活能力,改善患者的中医临床症状,不良反应少。

补阳还五汤及其精简方(脑健片)对脑缺血大鼠海马组织CDK4/Cyclin D1表达的影响

评价补阳还五汤及其精简方(脑健片)对脑缺血体内模型大鼠海马组织周期蛋白CDK4/Cyclin D1的调控。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤干预组(灌胃3.15 g·kg-1)及补阳精简方干预组(灌胃2.41 g·kg-1),每组按给药后1,3,7,14,28 d再各分5组。采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法考察不同时间点各组大鼠海马组织中CDK4/Cyclin D1的表达。结果发现脑缺血模型大鼠海马组织中,CDK4/Cyclin D1的表达上调,与假手术组比P<0.01,提示脑缺血损伤将激活细胞周期信号通路;补阳还五汤及其精简方干预后的3,7,14,28 d均能显著降低周期蛋白的表达,与模型组比P<0.05,提示补阳还五汤及其精简方均可通过细胞周期信号通路对神经细胞发挥保护作用。

固本健脑安神方对衰老失眠模型大鼠学习记忆及海马生物钟基因Clock、Bmal1表达的影响

目的观察固本健脑安神方对衰老失眠模型大鼠学习记忆的影响,并探讨其可能作用机制。方法将60只SD大鼠颈背部皮下注射D-半乳糖40天建立衰老大鼠模型,造模后随机分为衰老组、模型组、固高组、固低组和西药组,每组12只。除衰老组外其余各组大鼠腹腔注射DL-4-氯苯丙氨酸混悬液400 mg/(kg·d),连续给药2天建立衰老失眠模型。造模结束后,固高组、固低组大鼠分别给予固本健脑安神方1.8、0.9 g/(kg·d)灌胃,西药组大鼠给予艾司唑仑0.09 mg/(kg·d)灌胃,衰老组、模型组给予生理盐水0.1 ml/kg灌胃,每日1次,连续给药7天。7天后采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,包括定位航行实验连续5天,记录每天逃避潜伏期;休息1天后,第7天进行空间探索实验,记录大鼠60 s内穿越第三象限平台区域次数。HomeCageScan睡眠分析大鼠睡眠时间及睡眠节律,RT-PCR法和免疫组化法检测大鼠脑海马体CA1区Clock、Bmal1 mRNA及蛋白表达水平,尼氏染色观察海马体CA1区尼氏小体病理变化。结果与模型组同时间比较,第3、4、5天固高组逃避潜伏期明显缩短(P<0.05);模型组大鼠穿越第三象限平台区域次数明显少于衰老组,固高组和西药组大鼠穿越第三象限平台区域次数较模型组明显增多(P<0.05)。与衰老组比较,模型组大鼠日间睡眠时间和总时间明显减少,脑海马体CA1区Clock、Bmal1mRNA表达降低(P<0.05);与模型组比较,固高组和西药组大鼠日间睡眠时间和总时间明显增加,脑海马体CA1区Clock、Bmal1mRNA表达升高(P<0.05);各组大鼠夜间睡眠时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。尼氏染色和免疫组化结果显示,衰老组大鼠海马体CA1区尼氏小体丰富,而模型组大鼠海马体CA1区染色浅,部分尼氏小体溶解,Clock、Bmal1阳性颗粒显著减少;各给药组大鼠海马体CA1区尼氏小体数量,Clock、Bmal1蛋白表达显著增高,且以固高组效果明显。结论固本健脑安神方能改善衰老失眠模型大鼠睡眠节律紊乱,修复海马神经细胞元,提高学习记忆能力,调节脑海马区Clock、Bmal1表达可能是其重要机制。