基于网络药理学分析金铃子散治疗消化性溃疡作用机制研究

目的运用网络药理学分析方法探索金铃子散治疗消化性溃疡的潜在机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、HERB本草组鉴数据库并参考已发表的文献筛选金铃子散的活性成分和潜在作用靶点,利用人类基因数据库(GeneCards)、疗效药靶标数据库(TTD)和在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)筛选消化性溃疡的相关靶点,预测金铃子散治疗消化性溃疡的潜在靶点。利用STRING数据库和Cytoscape软件构建共同靶标的PPI网络。利用DAVID数据库及微生信云平台进行GO和KEGG通路富集分析。结果共筛选出49个活性化合物和172个潜在靶标,其中槲皮素(quercetin)、豆甾醇(Stigmasterol)、金黄紫堇碱[(S)-Scoulerine]、四氢非洲方己碱(Isocorypalmine)、延胡索甲素(Corydaline)、延胡索乙素(Tetrahydropalmatine)、延胡索丙素(Fumarine)、川楝素(Toosendanin)为金铃子散主要活性成分。PPI网络显示信号传导与转录激活因子3(STAT3)、重组人有丝分裂原激活蛋白激酶1(MAPK1)、蛋白激酶(AKT1)、抑癌基因(TP53)、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)是关键靶蛋白。KEGG通路富集分析结果显示,癌症相关通路、TNF信号通路、HIF-1信号通路及Toll样受体信号通路可能是金铃子散治疗消化性溃疡的潜在机制。结论金铃子散可以通过多组分、多靶点及多通路起到治疗消化性溃疡的作用。

对金铃子散中延胡索和川楝子不同炮制品之间配伍后镇痛抗炎作用研究

[目的]观察金铃子散中延胡索和川楝子不同炮制品之间配伍后对小鼠镇痛抗炎作用的影响。[方法]镇痛实验研究:以热板法和醋酸扭体法观察金铃子散不同炮制品配伍后的镇痛作用。抗炎实验研究:制作由二甲苯致耳廓肿胀模型,观察金铃子散不同炮制品配伍后的抗炎作用。[结果]延胡索和川楝子不同炮制品之间配伍后均具有明显的镇痛和抗炎作用,其中以醋炙延胡索和炒川楝子配伍后作用较为明显。[结论]提示金铃子散中延胡索和川楝子具有协同作用,且经炮制后效果尤为明显。

一测多评法对金铃子散中来源于延胡索的5个生物碱成分含量的同时测定

目的:建立同时测定金铃子散中延胡索乙素、黄连碱、紫堇碱、巴马汀和去氢紫堇碱含量的一测多评法(quantitative analysis of multi-components with single marker,QAMS),验证该方法在金铃子散质量控制应用中的科学性和可行性。方法:采用Agilent 5 TC-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL/min,检测波长280 nm;以延胡索乙素为内参物,建立该成分与其他4种成分的相对校正因子,以相对校正因子计算各成分含量,同时借助余弦相似度评价一测多评法计算结果和外标法实测值的差异。结果:5种成分在各自范围内线性关系良好,平均加样回收率在96.79%~102.41%之间,RSD在0.45%~2.67%之间;建立的各相对校正因子耐用性良好,一测多评法和外标法含量测定结果无显著差异。结论:利用相对校正因子对金铃子散中5种生物碱含量测定可行,所建立的一测多评法可用于金铃子散的质量评价。

基于网络药理学研究金铃子散治疗乳腺癌作用机制

目的:运用网络药理学对金铃子散治疗乳腺癌(BC)的机理进行数据挖掘和分析。方法:通过TCMSP数据库选出金铃子散活性成分的对应靶点,与Gene Cards网站选取的乳腺癌靶点取交集后获得潜在靶标基因。应用Cytoscape软件构建金铃子散-活性成分-靶点-乳腺癌可视化网络图;应用STRING在线软件展示蛋白-蛋白间的相互作用关系,并应用Cyto NCA插件进行度中心性分析得到核心靶点。使用DAVID在线工具和R计算机语言进行GO和KEGG注释。结果:金铃子散治疗乳腺癌的共同靶标蛋白有107个,其中核心靶标蛋白包括蛋白激酶B(AKT1)、雌激素受体(ESR1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)等。GO分析得到BP生物过程,MF分子功能和CC细胞功能。KEGG通路分析显示40个条目,涉及与肿瘤疾病类相关通路、炎症有关通路、感染相关疾病类通路、信号转导通路等。结论:金铃子散通过核心靶点参与了一系列通路,通过发挥分子功能及多种生物过程防治乳腺癌,其中PI3K/AK信号通路很可能是其中的关键通路。

十全大补汤合金铃子散对移植性肝癌大鼠的免疫抑瘤作用

目的:初步研究十全大补汤合金铃子散对移植性肝癌大鼠的免疫抑瘤作用。方法:以大鼠CRL-1548瘤株移植入雄性SD大鼠为模型,系统地观察十全大补汤合金铃子散对瘤重和脾细胞免疫功能的影响。结果:十全大补汤合金铃子散对移植性肝癌大鼠的平均抑瘤率高达51.3%,且剂量依赖性地抑制瘤重量,明显促进NK活性和IL-2分泌,增强腹腔巨噬细胞吞噬能力。结论:十全大补汤合金铃子散增强荷瘤大鼠细胞免疫功能是其抑制肿瘤效应的可能机制。

金铃子散对急性胆管炎肝胆蕴热证术后炎症调控初探

目的观察金铃子散对急性胆管炎肝胆蕴热证术后炎症反应的调控作用,进一步优化急性胆管炎的治疗方案。方法将60例急性胆管炎肝胆蕴热证术后患者采用随机数字表法分为2组,各30例。观察组给予金铃子散治疗,对照组给予常规西医治疗,分别于术后第3天、术后第1周、第2周检测血液及胆汁中的IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IL-10。结果金铃子散治疗急性胆管炎肝胆蕴热证术后患者,血液及胆汁中的促炎因子(IL-2、IL-6、TNF-α)水平较对照组明显下降,抗炎因子(IL-4、IL-10)水平较对照组明显上升。结论金铃子散对急性胆管炎肝胆蕴热证术后炎症反应的调控作用确切,值得临床推广应用。

金铃子散作用机制的网络药理学分析

目的基于网络药理学方法分析金铃子散的作用机制。方法通过TCMSP数据库和BATMAN-TCM分析平台对金铃子散的主要成分及作用靶点进行筛选,将得到的靶点导入Cytoscape 3.7.0软件中构建金铃子散活性成分-靶点网络。运用STRING平台构建靶蛋白互作网络(PPI),利用Cytoscape软件中的BINGO及MCODE插件对靶点基因本体(GO)进行生物过程富集和聚类分析,借助DAVID数据库对关键靶点进行KEGG信号通路分析。结果共获得川楝素、延胡索乙素、延胡索甲素、四氢小檗碱、去氢延胡索甲素、四氢非洲防己碱、黄藤素等20个主要活性成分及220个作用靶点;其中发现了细胞肿瘤抗原p53(TP53)、转录因子AP-1(JUN)、RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、白细胞介素6(IL6)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、肿瘤坏死因子(TNF)、原癌基因c-fos(FOS)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)等41个关键靶点。聚类分析1 169个GO生物过程,得到炎症反应调节、白细胞增殖及趋化调节、细胞迁移、细胞周期、免疫反应、转录因子活性调节等40个主要子簇,以及肿瘤坏死因子、T/B细胞受体信号通路、幽门螺杆菌感染上皮细胞信号转导、癌症通路、p53信号通路、细胞凋亡等88条通路。结论金铃子散不仅具有抗炎、镇痛的药理作用,主治消化及心血管系统炎性、疼痛性疾病,还可能具有显著的抗癌功效,值得进一步研究。

国医大师熊继柏运用金铃子散复方治疗痛症验案5则

国医大师熊继柏教授临床上治疗肝经所经过之处的痛症常在辨证论治的基础上,针对病机选方用药必合以金铃子散。列举熊老师运用金铃子散复方治疗肝经所过之处痛症案例:会阴胀痛、尿痛、胁痛、睾丸肿痛、胃痛验案5则,通过对上述异病同治案例的分析,总结其运用金铃子散的临证经验,以示熊继柏教授的辨证思路,为临床上应用金铃子散提供参考。

金铃子散治疗附睾炎机制探讨:基于网络药理学

目的:采用网络药理学研究方法探讨金铃子散治疗附睾炎的作用机制。方法:从TCMSP数据库按照OB≥30%和类药性DL≥0.18筛选活性成分,并通过文献检索补充活性成分并预测其相关靶点,然后与附睾炎疾病靶点相融合,进一步筛选潜在治疗靶点,探讨其机制。结果:通过成分靶点与疾病靶点融合,对交集靶点进行蛋白质相互关系网络的构建,得到86个相互作用靶点。GO分析结果显示,金铃子散主要影响细胞组成、生物途径和分子功能。KEGG通路富集分析显示,52个潜在治疗靶点参与到细胞因子-细胞因子受体相互作用,以及钙信号通路、Jak-STAT信号通路和凋亡等15条信号通路。结论:金铃子散可能主要通过调控炎症反应、凋亡等信号通路对附睾炎起到治疗作用。

天王补心丹合金铃子散化裁方对冠心病心律失常心肌缺血的保护作用

目的：观察天王补心丹、金铃子散化裁方对冠心病心律失常患者心肌缺血的保护作用。方法：选取2012年9月~2014年9月医院收治的76例冠心病心律失常患者作为研究对象,采用随机对照表法将患者分为对照组和观察组各38例,对照组给予西药常规治疗,观察组在对照组基础上给予天王补心丹、金铃子散化裁方治疗,两组均持续治疗4周。评估两组临床疗效,检测超敏C反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素18（IL-18）、凋亡反应指标（C-myc及Bcl-2蛋白表达）。结果：观察组治疗总有效率为86.84%明显高于对照组68.42%（P〈0.05）,观察组治疗后心悸、胸闷、气短乏力评分明显低于对照组（P〈0.05）,观察组治疗后hs-CRP、TNF-α、IL-18、Bcl-2蛋白表达量明显低于对照组,C-mye蛋白表达量明显高于对照组（P〈0.05）。结论：天王补心丹、金铃子散化裁方治疗冠心病心律失常疗效确切,可以降低炎性水平,抑制细胞凋亡,发挥心肌缺血保护作用。

基于网络药理学探讨金铃子散改善痛经的作用机制

目的:利用网络药理学方法探讨金铃子散治疗原发性痛经的作用机制。方法:通过TCMSP检索金铃子散中两味中药的化合物,筛选出有效成分及对应靶点;利用人类基因(GeneCards)、在线人类孟德尔遗传(online mendelian inheritance in man,OMIM)数据库、药物靶点(therapeutic target database,TTD)数据库获取疾病靶点并构建蛋白质-蛋白质相互作用关系(protein-protein Interaction,PPI);利用David数据库进行基因功能(gene ontology,GO)和基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and ge-nomes,KEGG)分析;运用Cytoscape软件构建金铃子散“活性成分-靶点-通路”网络。结果:得到金铃子散的有效成分55种,作用靶点207个,疾病靶点683个;得到交集靶点59个,将交集靶点上传到STRING数据库得到由59个节点、155条边构成的平均节点度值为5.25、平均局部聚类系数为0.518的“药物-疾病”PPI;GO分析得到156个生物过程、15个细胞组分、40个分子功能;KEGG分析得到53条信号通路,取前20位绘制气泡图。结论:金铃子散可能通过多成分、多靶点、多通路实现治疗原发性痛经的目的。

小柴胡汤合金铃子散治疗慢性胆囊炎40例临床分析

目的评价小柴胡汤合金铃子散治疗慢性胆囊炎临床疗效,为临床医生参考。方法选择两年内就诊于河南中医学院一附院消化科门诊的慢性胆囊炎患者76例,随机分为对照组36例,治疗组40例。两组均予低脂饮食及西医对症支持治疗,治疗组予小柴胡汤合金铃子散加减口服,观察其临床症状改善情况,评价疗效。结果治疗组有效率高于对照组,P<0.05,无明显不良反应。结论在慢性胆囊炎患者治疗过程中,本方案具有良好疗效,不良反应轻微,可供临床医生参考。

加味左金丸合金铃子散治疗消化性溃疡临床观察

目的:观察加味左金丸合金铃子散治疗消化性溃疡的临床疗效。方法:将70例Hp感染消化性溃疡患者,随机分为治疗组和对照组,各35例,2组均采用三联抗Hp方案,治疗组在上述治疗方案基础上加服加味左金丸合金铃子散2周。结果:停药4周后观察比较,治疗组治愈率高于对照组(P<0.05);1年后随访,治疗组复发率明显低于对照组(P<0.05)。结论:加味左金丸合金铃子散治疗消化性溃疡临床疗效显著,治愈率高,复发率低。

雷火灸疗法联合金铃子散治疗寒凝血瘀兼气滞型痛经的临床观察

目的研究雷火灸疗法合并金铃子散加减治疗寒凝血瘀兼气滞型痛经的临床疗效。方法选取2019年7月—2020年4月辽宁省沈阳市妇婴医院中医科收治的寒凝血瘀伴气滞型痛经患者60例,随机分为治疗组、对照组,各30例。治疗组应用雷火灸疗法合并金铃子散加减治疗,对照组采用金铃子散加减治疗,对比2组患者治疗3个月经周期后痛经程度的改善情况及痛经症状积分变化情况。结果治疗组痛经程度改善情况及痛经症状积分下降情况明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组及对照组均无明显不良反应。结论雷火灸疗法联合金铃子散加减辨证施治可以有效缓解寒凝气滞型痛经的临床症状及降低痛经症状积分,具有较高的药物安全性及临床可应用性,值得推广。

金铃子散不同配比方对大鼠肝药酶CYP1A2活性的影响

目的:通过比较金铃子散不同配比方对大鼠肝药酶CYP1A2活性的影响,探讨其配伍规律。方法:按L9(34)正交表,设计9个不同配比组方。体外实验采用大鼠肝药酶孵育体系,测定不同配比方对CYP1A2的半数抑制浓度(IC50);体内实验采用大鼠口服金铃子散不同配比方5 d后注射探针药物非那西丁,通过微透析探针采集肝脏部位样品,HPLC测定非那西丁及其代谢物对乙酰氨基酚浓度,winNonlin软件统计拟合药代参数。结果:川楝子、延胡索单味提取物和配比方1～9对肝药酶CYP1A2的IC50分别为(0.025 2±0.005 2),(0.012 1±0.007 9),(0.091 9±0.015 0),(0.071 9±0.005 3),(0.028 2±0.004 5),(0.075 4±0.015 5),(0.062 8±0.003 3),(0.091 9±0.015 0),(0.197 6±0.027 3),(0.159 1±0.008 1),(0.131 1±0.008 5)g.L-1,无显著抑制酶CYP1A2活性。体内实验,药代参数显示金铃子散不同配比方均能诱导CYP1A2活性,影响酶活性强弱顺序是:诱导剂组(方3)>方4(方5)>方9(方6,方1,方2,方8,川楝子,延胡索组)>方7>正常对照组。结论:金铃子散不同配比方对肝药酶CYP1A2活性有诱导作用,且诱导作用的强弱与配比有一定的相关性。

理气开郁法板块方镇痛作用的动态分析

目的:探讨理气开郁法中药板块方的镇痛作用特点。方法:将150只清洁级昆明种小鼠,按体重随机区组法分为15组,包括对照组,柴郁汤、芍甘汤、痛泻要方、金铃子散高中低剂量各组,吗啡和布洛芬组,采用45℃、50℃、55℃水浴引致小鼠疼痛模型,动态测定痛阈潜伏期,用药前测定基础痛阈。采用重复测量设计的方差分析。结果:柴郁汤、芍甘汤和痛泻要方的镇痛作用以高剂量更明显;柴郁汤对45℃、50℃、55℃水浴的痛阈潜伏期均有延长作用,柴郁汤高、中剂量在多个时间点上显示出较好的镇痛作用。结论:柴郁汤的镇痛作用较强,作用特点类似于中枢镇痛药或兼有中枢性镇痛作用;芍药甘草汤、痛泻药方、金铃子散属于作用于外周的镇痛药。

理气开郁法板块方对慢性应激大鼠胃及下丘脑胃动素的影响

目的:探讨四个理气开郁法板块方对慢性应激大鼠胃和下丘脑胃动素的影响。方法:采用多因素随机性反复刺激引起慢性应激大鼠模型,再分别使用四个理气开郁小复方及阳性对照药进行治疗。应用放射免疫法测定组织匀浆中的胃动素。结果:慢性应激大鼠的外在表现类似于中医症候中的肝郁脾虚证。与正常组大鼠比较,模型组大鼠胃和下丘脑胃动素水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,4.5g/kg芍甘汤可提高胃组织胃动素水平(P=0.055),4.5g/kg芍甘汤的作用强于13.5g/kg芍甘汤、4.5g/kg痛泻要方和马普替林(P<0.05);与模型组比较,13.5g/kg痛泻要方可提高下丘脑胃动素水平(P=0.091),作用强于氯米帕明和马普替林(P<0.05),结论:多因素随机性反复刺激可引起慢性应激大鼠胃和下丘脑胃动素水平降低,芍甘汤可提高胃组织胃动素水平,痛泻要方可提高下丘脑胃动素水平。

理气开郁法板块方对慢性应激大鼠下丘脑和胃P物质的影响

目的:探讨理气开郁法四个小复方对慢性应激大鼠胃和下丘脑P物质的影响。方法:采用多因素随机性反复刺激引起慢性应激大鼠模型,再分别使用四个理气开郁小复方及阳性对照药进行治疗。应用放射免疫法测定组织匀浆中的P物质。结果:慢性应激大鼠出现类似肝郁脾虚的表现。与正常组大鼠比较,模型组大鼠胃和下丘脑SP含量显著降低(P<0.05);13.5g/kg痛泻要方可提高胃组织SP,且作用强于4.5g/kg痛泻要方和氯米帕明(P<0.05);13.5g/kg会铃子散的作用也强于氯米帕明(P<0.05)。13.5g/kg柴郁汤能提高下丘脑SP,且作用强于1.5g/kg柴郁汤(P<0.05)。结论:采用多因素随机性反复刺激引起慢性应激大鼠胃和下丘脑SP水平降低,痛泻要方提高胃组织SP的作用较强,柴郁汤提高下丘脑SP的作用较强。

张磊治疗内科疑难杂症验案4则

以益气养阴与涤浊化痰法并行治疗气道灼伤；以益气养阴、疏肝理气法治疗咳嗽；以涤浊法治疗长期嗜睡；以清热疏风，疏肝理气法治疗顽固性头痛，皆取良效。

基于液质联用技术的金铃子散亚急性毒性代谢组学

为进一步了解金铃子散毒性影响的代谢特征,探索金铃子散在治疗过程中对未知生物通路的作用。该实验通过以金铃子散3组剂量的水煎剂对大鼠肝肾的影响,来研究金铃子散对大鼠体内代谢组改变的特点和规律。首先对给药2周和给药后1周大鼠尿液和血清样本采用质谱分析方法,通过XCMS在线分析大鼠正负模式离子检测谱,对代谢谱分析的代谢物进行鉴定,结果得到44个差异性物质。最后以Met PA对液质实验中筛选出的代谢物组进行代谢通路富集和分析,结果得到:类固醇激素合成代谢途径,戊糖和葡萄糖醛酸转换,赖氨酸代谢,谷胱甘肽代谢和抗坏血酸代谢5条相关的代谢通路。由代谢网络图可以看出,与毒性相关的通路主要和生物体赖氨酸代谢、葡萄糖醛酸转化及激素代谢有关,尤其是赖氨酸和谷胱甘肽的代谢失衡,造成机体能量代谢或氧化应激调节的紊乱,产生大鼠体内的损伤。从金铃子散低、中、高3组剂量的亚急性毒性实验结果观察发现,金铃子散19.7 g·kg^(-1)和39.4 g·kg^(-1)剂量组造成了明显的毒性作用,说明金铃子散在生物体内可产生毒性作用,且毒性随着给药剂量的增加而增加,造成不可逆的机体损伤。