基于网络药理学和实验研究Jolkinolide B治疗结肠肿瘤的作用机制

通过网络药理学方法及生物学实验研究Jolkinolide B治疗结肠肿瘤的作用机制。通过TCMSP等数据库预测Jolkinolide B作用靶点,并通过靶点富集分析及分子对接预测其防治结肠肿瘤的作用机制,基于预测结果,体内生物学实验初步验证Jolkinolide B对移植瘤小鼠肿瘤的抑制作用,MTT法检测不同浓度的Jolkinolide B对HCT116细胞的增殖抑制活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞划痕实验观察其对HCT116细胞迁移能力的影响。Western blot检测相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2、金属基质蛋白酶MMP3和MMP12的表达。网络靶点分析结果显示Jolkinolide B与结肠癌(CRC)匹配后得到78个靶点,富集信号通路主要有IL-17信号通路、PD-1/PD-L1信号通路等。分子对接结果显示Jolkinolide B以氢键与STAT3、MAPK8、JUN核心蛋白结合,结合构象较稳定。体内实验结果表明,Jolkinolide B能有效抑制移植瘤小鼠肿瘤体积;细胞水平验证实验结果表明,Jolkinolide B能够有效地抑制结肠肿瘤细胞HCT116的增殖,促进细胞的凋亡,抑制细胞的迁移;Western blot结果表明Jolkinolide B明显上调Bax/Bcl-2蛋白的表达,诱导了HCT116细胞的凋亡;同时,Jolkinolide B明显下调金属基质蛋白酶MMP3、MMP12的表达,抑制肿瘤细胞侵袭和转移。综上,Jolkinolide B可通过多靶点、多途径实现干预CRC的作用,其抗肿瘤活性可能与影响凋亡基因Bax及Bcl-2、金属基质蛋白酶MMP3、MMP12的表达有关。本研究为Jolkinolide B的临床用药和防治的作用机制研究提供了参考。

超声波辅助提取狼毒大戟中二萜类物质Jolkinolide B

以w(C2H5OH)=95%的乙醇为提取剂,HPLC法测定的Jolkinolide B提取率为指标,考察了利用超声波辅助技术提取狼毒大戟中二萜类物质的适宜提取条件。测定出狼毒大戟中w(Jolkinolide B)=0.0216%。考察了提取时间、提取温度、料液质量比等因素对Jolkinolide B提取率的影响。室温下,提取时间从10 min到60 min,Jolkinolide B的提取率由0.014%提高至0.0149%;温度从室温到85℃,提取率从0.014%提高到0.020 5%;超声波辅助提取10 min,提取率与浸泡提取200 h的提取率相当;超声波辅助提取中适宜的m(狼毒大戟)∶m(提取剂)=1∶8。该文报告工作的新颖性已为内蒙古自治区科学技术信息技术研究所2007年3月12日出具的第20071500100031号《科技查新报告》所证实。

狼毒大戟水提取物中化学成分的分离与鉴定

为了研究狼毒大戟水提取物的化学成分,依次用乙醚、丙酮等不同溶剂对狼毒大戟水提取物进行了萃取,乙醚萃取物真空浓缩后用硅胶柱色谱分离,不同溶剂洗脱,分离得到了5个化合物,经质谱、红外和核磁测定,证明3个为萜类,2个为苯乙酮类。石油醚洗脱得到β-香树脂醇乙酸酯(-βamyrin acetate);V(石油醚)∶V(乙醚)=9∶1洗脱得到Jolk inolide A;氯仿洗脱得到3,3′-二乙酰基-4,4′-二甲氧基-2,2,′6,6′-四羟基二苯甲烷;V(氯仿)∶V(乙醚)=8∶1洗脱得到2,4-二羟基-6-甲氧基-3-甲基苯乙酮(狼毒乙素)和Jolk inolide B。

大狼毒化学成分的研究

从云南产大狠毒Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｎｅｍａｔｏｃｙｐｈａ根中分离出４个化合物，其中３个化合物结构已被鉴定。晶Ⅱ为Ａ＇－ｎｅｏｇａｍｍａｃｅｒ－２２（２９）－ｅｎ－３β－ｏｌ（１８β，３α），晶Ⅲ为ｊｏｌｋｉｎｏｌｉｄｅＥ，晶Ⅳ为β－谷甾醇。晶Ⅱ系首次从本属植物中分得，晶Ⅲ是首次从本植物中得到。