氯胺酮对人单个心房肌细胞ATP敏感性钾电流(I_(K·ATP))的影响

目的 :探讨氯胺酮对人单个心房肌细胞ATP敏感性钾电流 (IK·ATP)的影响 .方法 :取房缺或室缺修补术患者的右心耳组织 ,置于 1 0 0 %氧饱和的无钙心肌细胞保护液中 ,30min内送至实验室 .将标本剪成 1mm3 的小块 ,用二步酶解法分离出单个心房肌细胞 .采用膜片钳全细胞记录方法 ,观察两种浓度氯胺酮对人单个心房肌细胞IK .ATP的影响 .结果 :在电极内液含ATP(0 .3mmol·L-1 )的条件下 ,记录到一束外向K+ 电流 .该电流可被KATP通道特异阻滞药格列苯脲 (1 0 μmol·L-1 )抑制 ,表明此电流为IK·ATP.在指令电位为 +2 0mV时 ,用含低浓度氯胺酮 (0 .0 1mmol·L-1 )的细胞外液灌流时 ,IK·ATP受到抑制 ,抑制率为 1 1 .1 % (n =3,P <0 .0 1 ) .用含高浓度氯胺酮(0 .1mmol·L-1 )的细胞外液灌流时 ,IK·ATP被大量激活 ,增加率为 5 7.6 % (n =3,P <0 .0 1 ) .结论 :低浓度氯胺酮 (0 .0 1mmol·L-1 )对人心房肌细胞IK·ATP具有抑制作用 ;高浓度氯胺酮 (0 .1mmol·L-1 )

急性分离大鼠新皮层神经元上激活的K_(ATP)单电导多通道电流

目的和方法： 探讨脑缺血时ＡＴＰ敏感钾（ＫＡＴＰ） 通道的变化，在急性分离大鼠皮层神经元上，分别采取膜片钳技术的细胞贴附式和内面向外式记录方法，观察ＮａＣＮ、ＡＴＰ、乳酸和ｐＨ 诱发的ＫＡＴＰ，单电导多通道电流。结果：ＫＡＴＰ多通道电流，均为外向电流；第一级电流电导与第二级电流电导基本相同，即为单电导多通道电流。贴附式记录时，对照组和ＮａＣＮ多通道电导分别为（９７ ．１６ ±９ ．３２）ｐＳ和（９３ ．４９ ±７．４４）ｐＳ，后者出现概率（３３．３ ％） 明显高于前者（５．４ ％ ）。膜内面向外式记录时，ＫＡＴＰ多通道电流出现概率，实验组（１ μｍ ｍｏｌ／ＬＡＴＰ４１．７％ ，ｐＨ６ ．０ ４０ ．０ ％ ，３０ ｍｍｏｌ／ＬＬａｃｔａｔｅ ５７ ．４ ％） 明显比对照组（２ ．９ ％） 高（ Ｐ＜０ ．０１）；低浓度ＡＴＰ及ｐＨ 降低诱发的多通道电导与对照组一致，均为２００ ｐＳ 左右；而高浓度乳酸诱发的通道电导为２５０ ｐＳ左右，即高浓度乳酸可增大电导（ Ｐ＜０ ．０１） ；而且高浓度乳酸诱发的单电导多通道电流需用高浓度ＡＴＰ（１０ ｍｍｏｌ／Ｌ） 和Ｇｌｉｂ（０．２ ｍ ｍｏｌ／Ｌ） 方能阻断，说明高浓度乳酸可降低ＫＡＴＰ通道对ＡＴＰ的敏感?

对吸入麻醉药敏感性不同的果蝇脑神经元钾电流的研究

目的:以对吸入麻醉药具有不同敏感性的果蝇幼虫脑神经元为模型,利用膜片钳技术记录其钾电流,探讨吸入麻醉药的作用机制。方法:分离制备对吸入麻醉药敏感(S)、耐药(R)和野生(H)果蝇品系脑神经元,以膜片钳技术记录其全细胞钾电流。实验数据以“均数±标准差”表示,SPSS软件进行统计分析。结果:在果蝇晚三龄幼虫脑神经元上只记录到外向钾电流,未见其它电流成分。三品系脑神经元大小(细胞膜电容)没有显著性差异(P>0.05),而电流峰值有显著性差异:敏感>野生>耐药(P<0.05)。结论:钾通道可能是吸入麻醉药的中枢作用位点之一。

TEA敏感型钾电流在gp120引起的海马神经元损伤中的作用

目的:探讨gp120对TEA敏感型钾电流的作用以及该电流在gp120引起神经元损伤中的作用。方法 :分离怀孕18d SD大鼠胎鼠的海马神经元作为实验对象,分为对照组和gp120处理组,利用全细胞膜片钳的方法记录外向延迟钾电流的变化,通过MTT和TUNEL的方法分别观察gp120处理后神经元的活力和凋亡情况。Western blot观察Kv2.1钾通道的蛋白表达变化以及在TEA敏感型钾电流中的贡献度。结果:gp120能引起外向钾电流明显增大,具有浓度依赖性,其中TEA敏感型成分参与了外向钾电流的增大。此外,MTT和TUNEL实验发现,gp120能引起神经元活力的下降和凋亡,而钾通道抑制剂TEA能缓解由gp120引起的细胞损伤。进一步实验表明,gp120可上调TEA敏感型成分中Kv2.1钾通道的表达,且其特异性抑制剂Gx TX-1E能显著抑制神经元中TEA敏感型钾电流成分。结论:TEA敏感型钾电流参与了gp120引起的神经元损伤过程,其重要组成成分Kv2.1通道蛋白上调,提示该通道蛋白可能参与了gp120引起的细胞损伤。

冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道电流的特点

目的探讨正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道（BK通道）电流的特点，为研究疾病状况下冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流异常变化提供正常对照。方法酶消化法分离大鼠冠状动脉平滑肌细胞；采用不同阻滞剂，对冠状动脉血管平滑肌细胞上钾通道进行鉴定；采用全细胞和单通道膜片钳实验技术分别记录冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流，计算开放幅度和电导，观察BK通道电压敏感性和钙敏感性及加入特异性BK通道阻滞剂IBTX后BK通道电流的变化。结果正常冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流约占总钾离子流65％±4％（t／,=12），BK通道电导为（258±42）pS（n=6），在刺激电位150mV时，电流密度为（275±40）pA／pF（n=8）；在电极外液钙离子浓度为1μmol／L，刺激电位为0、20、40、60、80、100、120、140和160mV条件下，BK通道开放概率（NP0）分别为0、0．0002、0．0016±0．0005、0．0283±0．0081、0．05694±0．0102、0．3533±0．0514、1．4922±0．1578、2．5975±0．3632和4．6041±0．7834（P〈0．05，n=5）；在刺激电位60mV，电极外液钙离子浓度为0、0．001、0．01、0．1、1、10、50和100μmol／L条件下，BK通道NP。分别为0、0．0001、0．0031±0．0008、0．0042±0．0090、0．0808±0．0105、0．7591±0．1274、2．7242±0．4612和3．2366±0．5728（P〈0．05，n=6）。结论BK通道广泛分布于冠状动脉平滑肌细胞上，具有电压敏感性和钙敏感性，对冠状动脉血管张力调节起重要作用。