FXR1P相互作用RNA的研究

目的:本研究利用酵母三杂交系统从人脑海马回cDNA文库中筛选FXR1P的靶RNA,以进一步阐明FXR1基因的功能。方法:将表达FXR1P全长的质粒pYESTrp3/FXR1转化酵母菌株L40ura3/pHybLex/Zeo-MS2,检测毒性和自激活性;应用酵母三杂交技术从人脑海马回pRH3′-cDNA文库中筛选FXR1P的相互作用RNA;分离初步筛选的结果,再次转化含有诱饵质粒的融合菌株L40ura3/pHybLex/Zeo-MS2/pYESTrp3/FXR1,重新验证阳性结果;最后对阳性结果的外源插入片段进行测序和生物信息学分析。结果:酵母三杂交的筛选得到了3个阳性结果,经过测序和同源性分析,其中一个阳性结果中的插入片段为K-ALPHA-1 mRNA的部分序列。结论:K-ALPHA-1 mRNA可能是一种新的FXR1P的靶RNA。

ATP1A1在结肠腺癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨Na^(+)/K^(+)转运ATP酶α亚单位1(ATP1A1)在结肠腺癌(COAD)组织中的表达及其与COAD患者临床病理特征和预后的关系。方法实时荧光定量PCR检测ATP1A1在COAD组织和配对的癌旁组织中的表达,分析ATP1A1在COAD组织中的表达与患者临床病理特征和预后的相关性。结果与癌旁组织(5.70±5.87)相比,ATP1A1在COAD组织中的表达显著降低(2.96±3.98,t=4.966,P<0.001)。COAD组织中ATP1A1的表达与肿瘤大小(χ^(2)=5.537,P=0.019)、浸润深度(χ^(2)=5.326,P=0.021)和远处转移有关(χ^(2)=5.103,P=0.024)。ATP1A1低表达组COAD患者的中位生存时间(42.062个月)显著低于ATP1A1高表达组COAD患者(52.099个月,χ^(2)=9.954,P=0.002)。多因素COX回归模型分析表明,ATP1A1是COAD患者的独立预后因素,低表达ATP1A1预示着COAD患者的较差预后。结论ATP1A1在COAD组织中表达降低,与患者的预后密切相关,是COAD预后预测及治疗的潜在靶点。

血清PIVKA-Ⅱ、TK1和AFP联合检测在肝细胞癌诊断中的价值

目的探讨血清异常凝血酶原复合物(PIVKA-Ⅱ)、细胞质胸苷激酶1(TK1)和甲胎蛋白(AFP)联合检测在肝细胞癌(HCC)中的诊断价值。方法选择2018年1月至2019年12月在连云港市东方医院住院的61例HCC患者为HCC组、50例肝硬化(LC)患者为LC组、58例慢性肝炎(CH)患者为CH组,另选择60例体检健康者作为对照组。采用化学发光法检测血清PIVKA-Ⅱ和AFP水平,免疫印迹增强化学发光法检测血清TK1水平。采用二分类变量Logistic回归进行分析,产生新变量(预测概率),并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标,评估PIVKA-Ⅱ、AFP、TK1单项及联合检测诊断HCC的ROC曲线下面积(AUC)、灵敏度及特异度。结果HCC组、LC组、CH组及对照组血清PIVKA-Ⅱ、TK1和AFP水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。单独检测诊断HCC时,PIVKA-Ⅱ的灵敏度(86.89%)和TK1特异度(86.62%)最高;2项联合检测诊断HCC时,AFP/TK1并联检测(其中一项阳性即为阳性)的灵敏度(91.80%)和AFP+PIVKA-Ⅱ串联检测(2项均阳性才为阳性)的特异度(95.88%)最高;3项联合检测诊断HCC时,AFP/TK1/PIVKA-Ⅱ并联检测的灵敏度(95.08%)和AFP+TK1+PIVKA-Ⅱ串联检测的特异度(96.29%)较高。PIVKA-Ⅱ、TK1、AFP单独检测诊断HCC的最佳临界值分别为35.88 mAU/mL、2.15 pmol/L和11.70 ng/mL,3项联合检测诊断HCC的AUC[0.928(95%CI:0.799~0.952)]高于PIVKA-Ⅱ、TK1、AFP单独检测诊断HCC的AUC[0.839(95%CI:0.753~0.886)、0.801(95%CI:0.720~0.843)、0.708(95%CI:0.549~0.740)],差异均有统计学意义(P<0.05)。在AFP阴性的HCC患者中,PIVKA-Ⅱ和TK1联合检测的灵敏度(92.31%)高于二者单独检测的灵敏度(80.77%、57.69%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PIVKA-Ⅱ、TK1和AFP联合检测可明显提高HCC的早期诊断率,能有效地避免一些AFP阴性的HCC病例的漏检。

子宫平滑肌大电导钙激活钾通道与小窝蛋白相互作用和宫缩乏力性产后出血的关系研究

目的:探讨产妇子宫平滑肌大电导钙激活钾通道(BKCa)与小窝蛋白相互作用在宫缩乏力性产后出血发病中的作用。方法:采用免疫荧光双染法及激光共聚焦显微镜观察30例宫缩乏力性产后出血产妇(病例组)和30例宫缩正常无产后出血产妇(对照组)子宫平滑肌BKCa(α亚基)与小窝蛋白-1、BKCa(α亚基)与小窝蛋白-2的共定位情况;采用免疫共沉淀法检测两组产妇子宫平滑肌BKCa(α亚基)与小窝蛋白-1、BKCa(α亚基)与小窝蛋白-2的相互作用关系。结果:(1)两组子宫平滑肌细胞均有BKCa(α亚基)、小窝蛋白-1和小窝蛋白-2表达,其中BKCa(α亚基)主要位于细胞膜表面,而小窝蛋白-1和小窝蛋白-2在细胞膜表面和细胞质均有表达;且BKCa(α亚基)与小窝蛋白-1、BKCa(α亚基)与小窝蛋白-2均有部分区域共表达于细胞膜。(2)病例组子宫平滑肌BK-Ca(α亚基)免疫沉淀物中小窝蛋白-1、小窝蛋白-2蛋白水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:宫缩乏力性产后出血产妇子宫平滑肌细胞中BKCa(α亚基)免疫沉淀物中小窝蛋白-1、小窝蛋白-2蛋白水平升高,提示小窝蛋白与BKCa(α亚基)相互作用增强可能是宫缩乏力性产后出血发病的重要原因之一。

芪参颗粒中獐牙菜苷对过量异丙肾上腺素致小鼠心力衰竭的保护作用

[目的]心力衰竭(简称心衰)是许多心血管疾病的终末阶段。芪参颗粒治疗心衰疗效确切,獐牙菜苷可能是其主要活性成分之一。本研究旨在评价獐牙菜苷对异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心衰的保护作用,并初步探讨其作用靶点与机制。[方法]通过皮下注射过量ISO构建心衰小鼠模型,随机分为空白组、模型组、卡托普利组、獐牙菜苷组。超声心动评价心功能、苏木精-伊红(HE)染色法检测心肌病理变化、BATMAN-TCM数据库预测作用靶点,蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测靶点蛋白表达水平。[结果]与空白组相比,模型组小鼠射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)显著降低(P<0.01),左室收缩末内径(LVIDs)显著增大(P<0.01)。同模型组比,獐牙菜苷组小鼠EF值、FS值增加,LVIDs值降低(P<0.01)。组织病理学检查可见模型组小鼠心脏左心室壁变薄、心肌纤维变细,局部心肌纤维坏死,或伴炎细胞浸润等,獐牙菜苷组心肌细胞形态较为正常。BATMAN-TCM数据库提示,钠钾ATP酶α1亚基(ATP1A1)是獐牙菜苷治疗心衰的靶标。Westernblot结果显示,模型组ATP1A1蛋白表达下调,獐牙菜苷可增加ATP1A1蛋白含量。[结论]本研究通过基础药理学与网络药理学相结合的研究方法,证明了獐牙菜苷能显著改善ISO诱导的小鼠心衰,初步证明其机制可能与增加ATP1A1蛋白表达,改善心肌能量代谢有关。