市政污泥及其热处理渣对CHO-K1细胞的毒性研究

评估市政污泥资源化产物的健康风险对其安全规范利用具有指导意义。分别对某污水处理厂的污泥进行了热解和好氧发酵处理,运用中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)对市政污泥及其热处理渣开展细胞毒性试验和遗传毒性试验,评估其对典型哺乳动物细胞的危害和潜在风险。结果显示,与原污泥样品相比,污泥热解渣和好氧发酵渣的细胞毒性和遗传毒性均降低。与原污泥样品相比,RTCA细胞增殖试验结果显示,污泥热解渣和好氧发酵渣对CHO-K1细胞的生长抑制性明显减弱;CCK-8细胞毒性试验结果显示,污泥热解渣和好氧发酵渣的细胞相对存活率分别增加了161%和137%;Caspase 3细胞凋亡蛋白酶活力试验结果显示,暴露于污泥热解渣和好氧发酵渣中的CHO-K1细胞的Caspase 3凋亡蛋白酶的活性分别降低了29.3%和20.1%;彗星试验结果显示,污泥热解渣和好氧发酵渣的尾长分别缩短了64.5%和25.9%,尾矩分别减少了78.4%和28.1%。研究结果表明,热处理技术(热解处理和好氧发酵处理)可减少市政污泥的细胞毒性和遗传毒性,降低市政污泥对生态环境和人体健康的潜在风险。

沉默FOXK1基因对胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨沉默叉头框K1(FOXK1)对胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:基于基因表达水平值的交互式分析平台(GEPIA)数据库查询在胃癌组织和正常胃组织中FOXK1 mRNA表达水平;利用化学合成的si-FOXK1体外转染胃癌HGC-27细胞,实验分为空白对照组、nc-FOXK1组和si-FOXK1组,采用Western blotting法评估各组的转染效率,MTT法检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的增殖能力,克隆形成实验检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的克隆形成数,细胞划痕实验检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的迁移率,Transwell小室实验检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞的细胞迁移数和细胞侵袭数,Western blotting法检测si-FOXK1转染后各组胃癌HGC-27细胞中核因子κB(NF-κB)通路相关蛋白[NF-κB p65和磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)]的表达水平。结果:GEPIA数据库查询,在胃癌组织中FOXK1 mRNA表达水平高于正常胃组织(P<0.05);Western blotting法检测,在胃癌HGC-27细胞中FOXK1蛋白表达水平高于人正常胃黏膜GES-1细胞(P<0.01);与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组FOXK1蛋白表达水平明显降低(P<0.01);MTT法检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞的增殖能力降低(P<0.05);克隆形成实验检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞克隆形成数减少(P<0.05);细胞划痕实验检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌细胞的迁移率降低(P<0.05);Transwell小室实验检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.05);Western blotting法检测,与空白对照组和nc-FOXK1组比较,si-FOXK1组胃癌HGC-27细胞中p-NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:FOXK1在胃癌HGC-27细胞中高表达,沉默FOXK1可抑制胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与NF-κB通路有关。

基于TMT蛋白组学的硝酸铀酰诱导CHO-K1细胞损伤研究

应用蛋白组学技术筛选硝酸铀酰暴露诱导CHO-K1细胞损伤的差异表达蛋白,为铀毒性机制研究提供数据.CHO-K1细胞经500μmol/L硝酸铀酰染毒24 h,以差异倍数大于1.5倍,差异显著性小于0.05为标准,采用串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)标记蛋白组学技术筛选差异表达蛋白,应用生物信息学技术对差异表达蛋白进行聚类分析、基因本体(Gene Ontology,GO)分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析及蛋白相互作用分析.共鉴定出蛋白4772个,硝酸铀酰染毒组筛选出差异表达1.5倍以上的蛋白309个,其中164个表达上调,145个表达下调.GO分析结果显示差异表达的蛋白主要参与1086种生物过程、282种细胞成分以及377类分子功能.KEGG分析结果显示差异表达蛋白主要富集于40条信号转导通路,参与核糖体生物合成、RNA运输、辅因子代谢、Notch信号通路、吞噬体、染色体及相关蛋白、蛋白质外排、生理节律、IL-17信号通路、类脂物代谢等信号通路.差异蛋白相互作用网络分析结果显示蛋白RPS3A和RPS17的关联度最高.研究结果表明,CHO-K1细胞经500μmol/L硝酸铀酰染毒24 h后,蛋白发生差异表达,核糖体生物合成、RNA运输等多条信号通路发生改变,蛋白RPS3A和RPS17可能是硝酸铀酰暴露致CHO-K1细胞损伤的关键蛋白.

微小RNA-K1-5p调控G1/S期相关基因的表达影响内皮细胞周期

目的探讨卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)相关疱疹病毒(KSHV)编码的微小RNAs(miR),如miR-K1-5p,对KS细胞周期的调控作用及其机制。方法该研究进行于2020年1—12月,人脐静脉内皮细胞购自美国ScienCell。生物信息学软件预测miR-K1-5p的靶基因。双萤光素酶试验验证miR-K1-5p的靶基因[细胞周期素依赖性激酶抑制剂4(CDKN4)]。将miR-K1-5p模拟物转染后,行蛋白质印迹法(Western blotting)和q-PCR检测,分析G1/S期相关基因CDKN4、细胞周期蛋白A/细胞周期素依赖性激酶2(Cyclin A/CDK2)、细胞周期蛋白D2/细胞周期素依赖性激酶4(Cyclin D2/CDK4)的表达。碘化丙啶(PI)染色检测miR-K1-5p对内皮细胞(HUVECs)周期的影响。结果miR-K1-5p靶向CDKN4(miR-K1-5p mimics+CDKN4-WT组、mimics NC+CDKN4-WT组、miR-K1-5p mimics+CDKN4-MUT组、mimics NC+CDKN4-MUT组萤光素酶活性分别为0.42±0.05、0.81±0.04、0.82±0.03、0.80±0.05),负性调控CDKN4的表达(P<0.001),正性调控Cyclin A/CDK2和CyclinD2/CDK4的表达(P<0.05)。此外,miR-K1-5p可以加速细胞周期进程,促进G1/S期转换[S+G2期/G1+S+G2期:mimics组(23.37±0.29)%比mimics NC组(15.00±0.75)%,G1期:mimics组(76.63±0.28)%比mimics NC组(85.00±0.76)%,S期:mimics组(15.34±0.36)%比mimics NC(8.45±0.20)%,G2期:mimics组(8.02±0.17)%比mimics NC组(6.55±0.80)%]。结论miR-K1-5p调控G1/S期相关基因的表达影响内皮细胞周期。

Effect of Vitamin K1 on Cell Growth Inhibition and Apoptosis on the U937 Cell Line

This experiment was conducted in order to verify the role of Vitamin K1 as a cell growth inhibitor on the U937 cell line. This experiment was performed in two parts—one with a lesser concentration of Vitamin K1, and the other with a range of concentrations from low-to-high. Through the remaining number of U937 cells, as well as cell areas, it was concluded that the presence of Vitamin K1 reduces the number of cancer cells. It was also concluded that as Vitamin K1 concentration increases, so does the frequency and effects of apoptosis.

猪催乳素的真核表达与生物活性验证

【目的】催乳素(Prolactin,PRL)具有广泛的生理调节作用,但其多效性机制仍不清楚。为了更好地研究猪PRL的多效性,本研究制备猪源PRL真核重组蛋白并验证其生物活性。【方法】利用分子克隆技术将猪PRL基因克隆到慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro中,经慢病毒包装获得携带猪PRL基因的PRL-慢病毒;用浓缩的PRL-慢病毒感染CHO-K1细胞,经嘌呤霉素筛选后,获得能够分泌PRL重组蛋白的阳性细胞系CHO-K1-PRL;利用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化并进行LC-MS/MS质谱鉴定,利用HC11细胞体外培养体系验证PRL重组蛋白的生物活性。【结果】成功构建了携带猪PRL基因的pCDH-CMV-6His-PRL-6HisEF1-GFP+Puro慢病毒表达载体;包装及浓缩后的PRL-慢病毒滴度为9.9×10^(8) TU/mL,其感染的CHO-K1细胞经嘌呤霉素筛选后得到阳性细胞系CHO-K1-PRL;从CHO-K1-PRL细胞培养液中成功纯化出重组蛋白,质量浓度为50μg/mL,LC-MS/MS质谱分析的覆盖率达94%,鉴定为猪PRL重组蛋白;重组PRL具有促进HC11细胞增殖及酪蛋白表达的生物活性。【结论】构建的细胞系CHO-K1-PRL可稳定表达具有生物活性的猪重组PRL,为猪PRL功能的研究和生产应用奠定了基础。

siRNA抑制HMGA1基因表达对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的影响

目的研究HMGA1-siRNA基因对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的影响。方法 HMGA1-siRNA组转染HMGA1的小干扰RNA(siRNA);阴性对照组转染HMGA1的无关序列,并转染甲状腺乳头状癌K1细胞。采用CCK-8法检测转染HMGA1-siRNA基因后对K1细胞增殖的影响;RT-PCR法检测正常组、HMGA1-siRNA组和阴性对照组的HMGA1-mRNA表达;Western blot法检测三组的HMGA1蛋白表达;Transwell侵袭实验检测三组HMGA1-siRNA基因转染后K1细胞的侵袭能力。结果 HMGA1-siRNA基因对K1细胞的抑制增殖作用明显,呈现时间-剂量依赖关系;HMGA1-siRNA基因在K1细胞中mRNA和蛋白的表达显著低于正常组和阴性对照组;HMGA1-siRNA组K1细胞侵袭能力显著低于正常组和阴性对照组。结论 siRNA可以沉默HMGA1基因,减缓甲状腺乳头状癌K1细胞增殖。

淀粉微载体的制备及对CHO-K1细胞培养的初步应用

以普通市售马铃薯淀粉为原材料,在常温下利用W/O乳化方法制备了交联淀粉微球,并以二乙胺基乙基修饰了微球的表面电荷。同时研究了制备淀粉微球的制备工艺和改性工艺,成功制备了适合细胞培养用的淀粉微载体。利用扫描电镜(SEM)、红外(FT-IR)、X射线衍射仪(XRD)对微球进行了表征。结果表明,最佳制备条件为:淀粉溶液浓度为7%,搅拌速度为500 rpm,交联剂用量为8%,水油相体积比1∶6;微球表面修饰最佳条件为:加入微球质量2倍体积的3.5 mol/L NaOH溶液和2.5 mol/L DEAE-HCl溶液,60℃密闭反应4 h。对比Cytodex-1微载体,培养CHO-K1细胞至144 h时,淀粉微载体表面细胞密度达到1.8×10~6cells/mL,且两者培养效果相似,表明了自制淀粉微载体是一种潜在的贴壁细胞培养用高分子材料。

猪CD163 cDNA扩增及其稳定表达细胞系(CHO-K1)的建立

猪CD163是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的重要受体之一。为探讨此受体在病毒感染过程中与PRRSV的相互作用,需要建立稳定表达猪全长CD163基因的细胞系。首先通过RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞中扩增猪全长CD163cDNA,然后通过KpnI和XhoI将其插入到pcDNA3.1A质粒中,构建成真核表达载体。将表达载体转染CHO-K1细胞,通过G418加压,筛选出在细胞膜上稳定表达猪CD163的细胞系。结果显示,扩增出的猪CD163基因与基因库的序列基本一致,个别碱基的突变没有引起编码氨基酸的改变。通过转染表达载体和G418筛选,成功构建了稳定表达猪全长CD163基因的CHO-K1细胞系。经流式细胞仪检测证实,重组猪CD163可在CHO-K1细胞膜上进行表达,这为进一步研究PRRSV与CD163受体相互作用提供了必要条件。

1,4-二氢吡啶类化合物对CHO-K1细胞的辐射防护作用

为探究1,4-二氢吡啶类化合物对于CHO-K1细胞的体外防护活性,实验分为DHP(2,6-二甲基-3,5-二乙酯基-l,4-二氢吡啶)给药照射组(DHP)、单纯照射组(Rad)和对照组(Con)。采用中性红法测定DHP对CHO-K1细胞的细胞毒性和照射后细胞的存活率;DCFH-DA法检测活性氧(Radical oxidative spices,ROS)水平;彗星实验测定DNA损伤情况。通过以上指标来评价DHP的辐射防护活性。结果显示,与Con相比,Rad的ROS水平、DNA百分含量和尾距等指标均上升,并且ROS探针荧光强度达到1 800,尾部DNA含量和尾距分别达到3.5%和1.7%,其差异具有统计学意义(p<0.05),提示照射后CHO-K1细胞中产生了过多的ROS和DNA链断裂损伤。与Rad相比,DHP的ROS探针荧光强度降为945、尾部DNA含量和尾距分别降为0.83%和0.7%,3个指标均明显降低,其差异均具有统计学意义(p<0.05),提示DHP给药能显著降低照射引起的CHO-K1细胞ROS水平升高,通过清除照射产生的过多ROS,减轻照射所致的DNA损伤,发挥细胞保护作用。这说明DHP具有良好的辐射防护作用。

生长分化因子11对高糖环境中人甲状腺乳头状癌K1细胞凋亡的影响

目的探讨生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF1)对高糖环境中人甲状腺乳头状癌K1细胞凋亡的影响。方法将人甲状腺乳头状癌K1细胞分为3组:对照组(Vehicle)、高糖组(HG)和GDF11组(HG+GDF11;GDF11)。各组细胞培养3 d后,流式细胞术检测细胞凋亡率,western blot检测凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2的蛋白水平,实时荧光定量逆转录PCR检测核转录因子E2相关因子(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)的转录表达,活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内的ROS水平。结果与对照组相比,高糖环境中K1细胞的凋亡率降低,Bcl-2/Bax蛋白表达比升高,Nrf2基因表达上调,细胞内ROS水平下降;而GDF11干预显著提高高糖环境中K1细胞的凋亡率,降低Bcl-2/Bax蛋白表达比,下调Nrf2基因转录表达,并提高细胞内的ROS水平。结论GDF11可能通过提高高糖环境中K1细胞内的氧化应激反应促进细胞凋亡。

牛pAcGFP-FADD融合蛋白真核表达载体构建及在CHO-K1细胞中的表达

FADD是Fas/FasL系统的一个信号连接蛋白,通过传递凋亡信号,介导细胞凋亡。为了揭示FADD在牛卵泡发育过程中的调控作用,采用RT-PCR从牛卵巢组织中扩增FADD基因,将其cDNA终止密码子删除,采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-Nl中,构建融合蛋白重组质粒,经BglⅡ/EcoRⅠ酶切、测序鉴定后,用脂质体介导质粒转染CHO-K1细胞,观察有无荧光的表达及用RT-PCR和Western blotting方法检测基因转录、表达情况。结果表明,成功克隆牛FADD基因,通过PCR方法在FADD阅读框两端引入了BglⅡ和EcoRⅠ克隆位点,并于起始位点前加入Kozak序列,成功构建pAcGFP-bFADD融合蛋白真核表达载体,重组质粒转染CHO-K1 24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,转染效率可达65%,通过RT-PCR扩增出654 bp的转录产物,并用Western blotting检测到51.4 kD目的蛋白的表达。

人凝血因子Ⅶ基因在CHO-K1细胞中的瞬时表达与鉴定

目的在CHO-K1细胞中瞬时表达所克隆的人凝血因子Ⅶ(FⅦ)的cDNA序列并表达其产物。方法首先从HepG2细胞中克隆人FⅦcDNA序列,将克隆得到的序列连接到pMD18-T载体上经测序验证后,将其与pcDNA3.1载体连接,构建得到重组表达质粒pcDNA3.1-FⅦ。将构建得到的表达质粒瞬时转染CHO-K1细胞,72 h取样,采用ELISA、Western blotting等方法对细胞上清液和细胞裂解物作鉴定。结果克隆得到的序列经NCBI比对后为FⅦ转录突变体Ⅱ基因序列,克隆得到的基因未见氨基酸突变,重组表达质粒pcDNA3.1-FⅦ经PCR、双酶切、测序验证正确。ELISA法未在上清中检测到目的蛋白,而在细胞裂解液中检测到了目的蛋白;Western blotting检测到表达产物有与FⅦ标准品类似的分子量为50 kD左右的特异性条带。结论在转染后的CHO-K1细胞裂解液上清中成功表达了hFⅦ蛋白。

大肠杆菌K1株毒力岛基因ibeT参与调节脑微血管内皮细胞骨架重排

目的探讨大肠杆菌K1株毒力岛基因ibeT与人脑微血管内皮细胞(HBMEC)骨架重排的关系。方法从大肠杆菌K1 E44中剔除侵袭基因ibeT,利用ibeT基因缺失突变株侵袭HBMEC 10 min后,再用罗丹明标记的毒伞素对细胞骨架进行染色,荧光显微镜观察。结果 E44与E44:△ibeT均能引起HBMEC的微丝发生重新分布。与E44相比,E44:△ibeT侵袭HBMEC的微丝向细胞周边延伸的程度较E44侵袭后的HBMEC弱,所形成的膜皱褶结构较少。E44侵袭细胞皮质区的肌动蛋白纤维基本消失,E44:△ibeT侵袭HBMEC细胞皮质区的肌动蛋白纤维仍然清晰可见。结论侵袭基因ibeT参与大肠杆菌K1侵袭HBMEC骨架重排。

乳腺癌组织中ELMO3,FOXK1的表达及其临床意义

目的:检测乳腺癌组织中吞噬和运动蛋白3(engulfment and cell mobility 3,ELMO3)、叉头框转录因子1(forkhead box k1,FOXK1)的表达情况,并探讨两者在乳腺癌组织中表达的相关性及与乳腺癌患者临床病理参数、预后的关系。方法:收集2013年1月至2018年1月惠州市第三人民医院乳腺癌患者手术标本80例,应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫组织化学检测乳腺癌组织及癌旁组织中ELMO3与FOXK1的表达情况;并分析乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1表达的相关性,及其的表达与乳腺癌患者临床病理参数、预后的关系。结果:qRT-PCR检测ELMO3mRNA,FOXK1mRNA在乳腺癌组织中表达分别为1.16±0.48,1.34±0.60,在癌旁组织中表达分别为0.81±0.36,0.95±0.49;乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1表达水平均高于癌旁组织(均P<0.05),且乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1的表达呈正相关(r=0.423,P=0.037)。免疫组织化学检测EL MO3与FOX K1在乳腺癌组织中阳性表达分别为58例(72.52%),6 2例(7 7. 5 0%),在癌旁组织中阳性表达分别为2 8例(3 5. 0 0%), 2 9例(3 6. 2 5%),乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1阳性表达率均高于癌旁组织(均P<0.05)。ELMO3与肿瘤TNM分期、淋巴结转移显著相关,FOXK1与肿瘤组织TNM分期、淋巴结转移和组织分级显著相关(均P<0.05)。KaplanMeier生存曲线分析显示乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1高表达患者生存期较短。结论:乳腺癌组织中ELMO3与FOXK1呈高表达,并与肿瘤发生发展及预后有关。ELMO3与FOXK1在乳腺癌组织中表达呈正相关,可能协同参与了乳腺癌的发生发展。ELMO3与FOXK1具有作为乳腺癌新的标志物、治疗靶标及评估预后的潜在价值。

重组人纤溶酶原k1-3基因转染对血管内皮细胞的作用研究

目的观察脂质体介导人纤溶酶原k1-3基因转染人脐静脉内皮细胞导致细胞凋亡和移动抑制的效应,初步探讨k1-3基因的抗血管生成机制。方法以阳离子脂质体介导人纤溶酶原k1-3基因真核表达载体pcDNA-k13转染体外培养人脐静脉内皮细胞,经细胞凋亡检测和移动抑制试验,比较对照组和实验组的凋亡率和抑制率。结果转染pcDNA-k13组有明显的细胞凋亡效应和移动抑制。结论人纤溶酶原k1-3基因在人血管内皮细胞表达,并可能通过诱导细胞凋亡及抑制细胞迁移而抑制肿瘤新生血管的生成。

脂质体介导人纤溶酶原k1-3基因诱导人肝癌细胞凋亡

目的观察脂质体介导人纤溶酶原k13基因诱导体外培养人肝癌细胞凋亡的效应。方法构建人纤溶酶原k13基因真核表达载体pcDNAk13并以阳离子脂质体介导pcDNAk13转染体外培养人肝癌细胞,经Heochst33258染色后,在荧光显微镜下观察细胞核的形态。结果转染pcDNAk13组可见致密浓染的凋亡细胞核。结论脂质体介导人纤溶酶原k13基因能诱导体外培养人肝癌细胞凋亡。

丝裂霉素诱导CHO-K1细胞凋亡及对其细胞周期的影响

采用荧光探针染色法,琼脂糖凝胶电泳分析方法,流式细胞仪技术研究丝裂霉素诱导CHO K1细胞凋亡及对其细胞周期的影响.结果显示,丝裂霉素处理CHO K1细胞后,细胞核质收缩凝集,核碎裂及出现凋亡小体;琼脂糖电泳呈现典型的DNA梯带;流式细胞仪检测到典型的细胞凋亡峰(亚G1峰),分别用10,15,20,25mg/L丝裂霉素处理CHO K1细胞,其细胞凋亡率分别为4.76%,9.20%,14.51%,37.46%,且凋亡率随药物浓度的升高而升高,显示两者的正相关性;作用浓度相同而改变处理时间时,发现细胞凋亡率随处理时间的延长而呈上升趋势;流式细胞仪细胞周期分析,显示随着丝裂霉素浓度提高或作用时间延长,G1 S期细胞百分比降低,G2/M期细胞百分比升高,Ap峰与G1 S期负相关,与G2/M期正相关.

稳定表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的CHO-K1细胞系的建立及免疫原性分析

建立高表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,鉴定蛋白的免疫原性,为开发新型且有效防治猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定基础。构建重组质粒pEE12.4-PCV2-Cap,转染CHO-K1细胞,通过加压筛选,有限稀释,细胞悬浮驯化及Western blot检测得到高表达Cap蛋白的悬浮稳转单克隆细胞株,并对该细胞株进行发酵,纯化得到的目的蛋白,通过小鼠免疫验证其免疫原性。结果表明PCV2-Cap蛋白能够在CHO-K1细胞中正确表达;发酵过程中活细胞密度高达6×10~6个·mL^(-1),细胞活力在80%以上,PCV2-Cap蛋白表达量约为370 mg·L^(-1);利用间接ELISA检测小鼠免疫后血清中的抗体水平,证明了利用CHO-K1细胞生产的Cap蛋白具备良好的免疫原性。本研究成功构建了表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,并进一步对目的蛋白进行免疫原性分析,为猪圆环病毒亚单位疫苗的开发打下扎实的基础。

金纳米粒子对CHO-K1细胞毒性的谷胱甘肽作用机制

目的探讨金纳米粒子(AuNP)对卵巢细胞CHO-K1的毒性作用及谷胱甘肽(GSH)的对抗作用。方法 AuNP 10～100μmol.L-1作用卵巢细胞CHO-K1 72 h,MTT比色法检测细胞存活。AuNP10μmo.lL-1,丁硫氨酸-亚砜亚胺(BSO)20μmo.lL-1及GSH 1 mmo.l L-1单独或联合作用细胞72 h,MTT比色法检测细胞增殖,倒置相差显微镜观察细胞形态,AnnexinⅤ-FITC和PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡;AuNP 10μmo.l L-1,BSO 20μmo.l L-1及GSH 1 mmo.l L-1单独或联合作用细胞48 h,共聚焦显微镜检测细胞骨架微丝,JC-1染色流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果 AuNP 10～100μmo.lL-1对正常的CHO-K1细胞存活无明显影响。与正常对照组相比,AuNP 10μmol.L-1和BSO 20μmol.L-1联合作用,可明显抑制CHO-K1细胞存活,抑制率为(80±2)%(P<0.01),胞体皱缩、变圆,细胞骨架微丝破坏;凋亡率为(66±6)%(P<0.01);细胞线粒体膜电位显著增加(P<0.01);加入外源性的GSH可逆转AuNP对因细胞GSH水平受抑而产生的细胞毒性。结论 AuNP对CHO-K1细胞损伤可能与GSH水平降低有关。