绵羊KAP1.3基因遗传多态性分析

本研究以中国美利奴羊(新疆军垦型)为实验材料,采用PCR-RFLP技术和测序分析KAP1.3基因遗传多态性。结果表明:KAP1.3基因经限制性内切酶HapⅡ酶切,得到3种基因型,分别为AA型、BB型和AB型,其中AA型频率为0.7550,BB型频率为0.0741,AB型频率为0.1709,等位基因A频率为0.8405,等位基因B频率为0.1596;KAP1.3基因经限制性内切酶AdeI酶切得到CC型频率为0.6586,DD型频率为0.1248,CD型频率为0.2166,等位基因C频率为0.7668,等位基因D频率为0.2331。证明KAP1.3基因多态性丰富,能够用于优质细毛羊毛性状功能基因的研究。

滩羊角蛋白KAP1.3基因与二毛裘皮主要性状相关性研究

应用PCR-RFLP分子标记技术,研究了258只滩羊角蛋白KAP1.3基因的多态性及其与裘皮品质的相关性.结果表明,检测出A,B两个等位基因,基因频率分别为53%,47%;产生AA,AB,BB基因型,基因型频率分别为25.2%,55.8%,19.0%;BB基因型所对应的毛股弯曲数显著高于AA,AB基因型(P<0.05),AB,BB基因型在A+194 bp处碱基T转换为C,导致氨基酸由异亮氨酸变异为苏氨酸.可通过改变KAP1.3 BB基因型的频率来提高滩羊裘皮弯曲数目,也说明角蛋白KAP1.3基因有望成为提高裘皮弯曲数性状的分子标记辅助选择候选基因.

绵羊高硫角蛋白KAP1.3基因启动子活性分析

旨在研究高硫角蛋白基因启动子及相关调控序列的表达活性。以绵羊基因组为模板,克隆KAP1.3基因启动子序列,对其进行5个系列缺失片段pGL4.10表达载体构建,将不同重组质粒转染小鼠成纤维细胞,通过裂解细胞测定其荧光值方法来检测启动子的表达活性。结果显示,除KAP1.3-P5片段其余片段均具有表达活性,其中KAP1.3-P1片段表达活性最高,而缺失-944至-707处的KAP1.3-P2对启动子的活性没有显著影响,但缺失-944至-394处KAP1.3-P3片段对启动子活性影响比较大,从P3和P4的结果中可以看出,虽然两个片段都缺失了转录因子bHLH的结合位点,但P4的活性比P3高出约20%,由此推测在-394至-195之间可能存在一个负调控元件,在-195和-4之间可能存在一个增强元件,但具体的调控元件还需要再进行细致地分析,优化出活性最高且特异性不变的启动子片段。

绵羊KAP1.3基因与毛品质的关联分析

以702只中国美利奴羊(新疆军垦型)为试验材料,采用PCR-RFLP技术分析KAP1.3基因的多态性,并分析这些多态性位点与羊毛性状的相关性。结果显示:KAP1.3基因编码区存在2个单核苷酸多态性位点(c.240G>A和c.312G>A),均存在3种基因型,经最小二乘拟合线性模型分析,c.240G>A位点的3种基因型(GG、AG和AA)个体间平均毛纤维直径、卷曲度、毛长、污毛量、密度、净毛率和细度离散系数差异不显著(P>0.05);c.312G>A位点的3种基因型(GG、AG和AA)个体间的毛纤维直径、卷曲度、毛长、污毛量、密度、净毛率等性状差异不显著(P>0.05),但GG基因型与AA基因型间毛平均细度离散系数显著小于AG基因型(P<0.05)。因此KAP1.3基因可作为绵羊毛细度离散系数的候选基因之一,其生物学功能有待于进一步研究。

中国羊驼KAP1.3基因的克隆及序列分析

毛纤维中的角蛋白(keratin)和角蛋白关联蛋白(keratin-associatedproteins)的数量遗传性状位点(quantita tivetrait loci)已有学者在绵羊等一些动物身上找到,其中KAP1.1、KAP1.2、KAP1.3等基因作为候选基因来间接选择羊毛细度性状。而羊驼相关候选基因的研究还未见报道,本研究提取成年羊驼的新鲜血液中基因组DNA,并以此为模板采用PCR技术扩增KAP1.3基因进行序列分析,测序后在NCBI工作平台中进行BLASTn同源性比较,得出结论:结果表明多个物种间KAP1.3基因编码区的序列相似性在73%以上。借助DNAstar分子生物学分析软件绘制了相关动物的遗传进化图,并对羊驼的种属地位进行了进一步验证。通过羊驼与绵羊在KAP1.3的氨基酸序列上的比较只有十五处残基的差异。证实KAP1.3基因与羊驼毛细度性状相关。

Ⅰ型IF、KAP1.3和KAP8.1基因多态性及合并基因型与中国美利奴羊羊毛性状的关联分析

采用PCR-RFLP和PCR-SSCP方法对中国美利奴羊和德国美利奴羊Ⅰ型IF、KAP1.3和KAP8.1基因的多态性进行了检测,并分析了多态位点不同基因型及合并基因型与中国美利奴羊羊毛性状的关联性。结果表明:KAP8.1基因CDS区存在g.1026T>C和g.1130C>T突变。关联分析表明,在中国美利奴羊群体中,Ⅰ型IF基因BB基因型个体羊毛细度和羊毛伸直长度均明显低于AA和AB基因型个体,但3者之间差异不显著(P>0.05);KAP1.3不同基因型个体羊毛细度、自然长度和伸直长度差异显著(P<0.05),AA基因型羊毛细度最细,为(22.72±0.30)μm;KAP8.1基因不同基因型个体羊毛细度差异显著(P<0.05),BC基因型羊毛细度最细,为(21.64±0.43)μm;而羊毛自然长度和伸直长度差异不显著(P>0.05);KAP1.3-KAP8.1有利基因型聚合体BC-AA个体羊毛细度显著低于其它合并基因型个体(P<0.05)。结果提示:绵羊Ⅰ型IF、KAP1.3和KAP8.1基因单核苷酸多态性及合并基因型对中国美利奴羊羊毛性状有一定的影响,可以作为进行绵羊羊毛性状分子标记辅助选择的候选基因。

绵羊KAP1．3基因的多态性及其与羊毛性状的关系

利用PCR-RFLP分子标记技术,研究KAP1.3基因与新疆5个不同绵羊品种之间的遗传关系。得出5种绵羊均处于中度多态,不同绵羊品种间遗传信息有所不同;选取在羊毛品质上具有不同表形值的中国美利奴羊,分析KAP1.3基因与毛性状之间的相关性,经多重比较分析得出:AB基因型标记的羊毛平均长度最长为13.54±0.4303cm,但各基因型间差异不显著;AA基因型标记的羊毛细度最细为18.13±0.4529μm,AA基因型与AB基因型间差异达到了显著水平(P<0.05),因此角蛋白关联蛋白的多基因家族的高硫蛋白辅助基因KAP1.3与羊毛细度间可能存在相关性。