三个山羊品种KAP8基因的PCR-SSCP分析

目的:为了筛选绒山羊产绒性状的候选基因。方法:采用PCR-SSCP法对三个山羊品种角蛋白辅助蛋白8(KAP8)进行了多态性研究。结果:三个品种中KAP8.1均未出现多态,而KAP8.2均出现了三种带型:AA、BB和AB。Hardy-Weinberg分析表明辽宁绒山羊和黎城大青羊未达到平衡状态,辽-苛高代杂种山羊达到了平衡。测序结果显示,和Genebank登陆序列相比,AA和BB均发生了碱基变化。其中AA型出现了以下变异:216bp(G-A),217(A-G),BB型出现了以下变异:216bp(G-A),232bp(C-T)。分析表明AA型变异造成了氨基酸序列发生了变化(R-K),而BB型突变未造成氨基酸发生改变。结论:KAP8.2可能是影响绒山羊产绒性状的基因之一。

绵羊KAP8-1基因克隆与表达分析

本文旨在克隆绵羊角蛋白关联蛋白8-1(KAP8-1)基因c DNA并分析该基因在不同组织器官的表达分布。提取小尾寒羊与新吉细毛羊皮肤及不同组织总RNA,RT-PCR法克隆KAP8-1基因,定量RT-PCR方法分析2个品种间KAP8-1基因的表达谱差异。结果表明:已成功克隆出绵羊KAP8-1基因,该基因片段长225 bp,其中ORF区189 bp,编码62个氨基酸,分析显示该KAP8-1基因属于典型的HGT KAP家族,甘氨酸和酪氨酸含量分别为22.6%和17.7%;小尾寒羊与新吉细毛羊间存在丰富的多态性,且多态位点均引起关键性氨基酸的突变;组织表达谱检测表明KAP8-1基因为多组织表达基因,小尾寒羊与新吉细毛羊中不同组织表达谱丰度存在显著差异,表现为小尾寒羊脾脏、肝脏中高表达,而新吉细毛羊则皮肤、心脏中高表达。结果显示,小尾寒羊与新吉细毛羊KAP8-1基因在基因多态性还是组织表达分布上存在显著差异,提示该基因可能与毛表型性状密切相关。

和田羊KAP7、KAP8基因遗传多样性及其与羊毛长度的关联性分析

以采集的600只和田羊个体的血样为材料,利用PCR-SSCP、DNA测序等技术研究分析和田羊KAP7、KAP8基因的多态性,并与羊毛长度进行关联。结果表明,和田羊KAP8基因没有发现多态性;KAP7基因具有多态性,存在3种基因型:AA、AB和BB,且处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),多态信息含量为0.2376,属于低度多态。测序结果显示,与原基因碱基序列相比,KAP7基因碱基序列在110(T→G)和268(G→A)处发生突变。关联分析表明,和田羊不同基因型之间羊毛长度差异显著。

不同品种绵羊皮肤毛囊中角蛋白关联蛋白8-1基因差异表达研究

试验旨在研究不同品种绵羊皮肤毛囊中角蛋白关联蛋白8-1(keratin associated protein 8-1,KAP8-1)基因相对表达量,从而明确KAP8-1基因对绵羊皮肤毛囊发育的调控作用。采用Real-time PCR SYBR GreenⅠ染料法,测定KAP8-1基因荧光定量Ct值,所得结果采用2-△△Ct法计算相对表达量。结果表明,南非肉用美利奴羊(♂)×东北细毛羊(♀)组、南非肉用美利奴羊(♂)×小尾寒羊(♀)组、杜泊羊(♂)×小尾寒羊(♀)组3个品种羊皮肤毛囊内KAP8-1基因均有表达,且三者相对表达量的比值为7.56∶2.19∶1。说明KAP8-1基因对皮肤毛囊发育、羊毛品质差异均具有一定的调控作用,且品种之间存在一定的差异。