大鼠缺血心肌中KCNE1,KCNE2基因表达的变化

目的:研究大鼠缺血心肌中KCNE1,KCNE2基因表达变化情况,进一步探讨急性心肌梗死后并发心律失常的机制.方法:成功建立SD大鼠急性心肌梗死模型,通过RT-PCR、免疫印迹方法检测急性心肌梗死后24h及1,2,4wk梗死周边缺血心肌中KCNE1,KCNE2mRNA和蛋白质的水平,并观察各组室性心律失常的发生情况.结果:SD大鼠左室心肌中有KCNE1及KCNE2的表达,在急性心肌梗死后24h,无论是KCNE1还是KCNE2的mRNA和蛋白质表达在缺血心肌中均呈明显增加(P<0.05),并在1～2wk达到高峰,随后开始下降,4wk时KCNE1的mRNA、蛋白质水平和KCNE2的mRNA水平仍显著高于正常心肌中的表达(P<0.05).此外,心梗模型各组尤其是心肌梗死后1wk和2wk组室性心律失常明显多于假手术组.结论:急性心肌梗死后缺血心肌中KCNE1,KCNE2这两个离子通道基因表达的异常变化,可能对心肌细胞的自律性、兴奋性和传导性产生影响,成为梗死后心律失常产生的原因之一.

比索洛尔对急性心肌梗死大鼠梗死周边区心肌组织中KCNE1和KCNE2表达的影响

目的:观察急性心肌梗死(AMI)大鼠梗死周边区心肌组织中KCNE1和KCNE2mRNA和蛋白的表达及比索洛尔的干预作用。方法:40只AMI大鼠随机分为24h组、1周组、4周组和比索洛尔组(给药4周),同时设假手术组,每组10只。分别于各时间点处死大鼠,取左心室梗死周边区心肌组织,假手术组取对应部位的心肌组织,分别采用RT-PCR和Western blot检测KCNE1和KCNE2mRNA和蛋白的表达。结果:各组大鼠梗死周边区心肌组织中KCNE1和KCNE2mRNA和蛋白的表达相比,差异均有统计学意义(mRNA:F=130.418和182.943,蛋白:F=425.815和619.624,P<0.001);梗死后24h,梗死周边区心肌KCNE1、KCNE2mRNA和蛋白的表达逐步增加(P<0.05),在1周时达到高峰,4周时4周组和比索洛尔组KCNE1和KCNE2mRNA和蛋白的表达仍高于假手术组,但比索洛尔组低于4周组(P<0.05)。结论:比索洛尔可抑制AMI后梗死周边区心肌组织KCNE1和KCNE2表达的上调,可能是其抗心律失常的机制之一。

老年人KCNE2、KCNE3基因多态性与房颤的关联性分析

目的探讨老年人KCNE2、KCNE3基因多态性与心房颤动(atrial fibrillation,AF)的相关性。方法收集2016年3月-2017年3月在新疆医科大学第一附属医院心脏中心及神经内科、新疆医科大学第二和第五附属医院心脏内科、喀什地区第二人民医院及和田地区人民医院心脏内科住院的60岁及以上具有房颤史的237例患者作为AF组。按照性别相同、年龄相同或相近的原则,分别从上述医院选取体格检查与心电图检查证实无AF表现的237例患者作为对照组。采集2组外周血,并通过DNA提取试剂盒提取外周血DNA,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术对KCNE3基因rs9516、rs10898993、rs3867279位点及KCNE2基因rs9984281位点单核苷酸多态性进行检测,并分析与房颤的相关性。结果KCNE3基因rs9516、rs10898993、rs3867279位点与KCNE2基因rs9984281位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。KCNE3基因rs9516、rs10898993、rs3867279位点与AF发生无相关,KCNE2基因rs9984281位点GG基因型和G等位基因可降低AF发生的危险性(ORGG=0.418,PGG=0.005;ORG=0.643,PG=0.002)。KCNE2基因rs9984281位点分别与KCNE3基因rs9516、rs10898993、rs3867279位点之间存在较强的拮抗作用;T-A、T-G、A-C-A、G-T-G、A-A-C-A和G-G-T-G单体型与老年人AF发生相关(P<0.05)。结论AF的发生与rs9516、rs10898993、rs3867279多态性无相关,而与rs9984281多态性相关,并位点之间存在一定的交互作用,但其机制尚待进一步研究。

KCNE1、KCNE2基因多态性与家族性房颤的相关性

目的探讨KCNE1、KCNE2基因多态性与家族性房颤的相关性。方法选择房颤患者62例,其中家族性房颤39例,非家族性房颤23例,另选择健康体检者30例作为对照组。采用PCR测定KCNE1基因rs1805127位点和KCNE2基因rs1805120位点多态性分布情况。结果家族性房颤组和非家族性房颤组KCNE1基因rs1805127位点A等位基因分布率明显低于对照组,而G等位基因分布率明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);而家族性房颤组和非家族性房颤组KCNE1基因rs1805127位点A等位基因和G等位基因分布率比较无明显差异(P>0.05)。家族性房颤组和非家族性房颤组KCNE1基因rs1805127位点GG基因型分布率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而家族性房颤组和非家族性房颤组KCNE1基因rs1805127位点GG基因型分布率比较无明显差异(P>0.05)。各组KCNE2基因rs1805120位点C和T等位基因分布率比较无明显差异(P>0.05)。各组KCNE2基因rs1805120位点CC、CT和TT基因型频率比较无明显差异(P>0.05)。结论家族性房颤与KCNE2基因位点rs1805120多态性无明显相关性,与KCNE1基因rs1805127多态性具有相关性,并且认为其携带等位基因G可能为家族性房颤易感基因。

大鼠缺血心肌KCNE基因表达变化及瑞舒伐他汀对其影响

本实验通过检测急性心肌梗死（AMI）后梗死区周围左室心肌KCNE1、KCNE2的基因表达的变化及瑞舒伐他汀对其表达的作用,探讨心梗后心律失常发生和抗心律失常可能机制。资料与方法健康清洁级（SD）大鼠,

KCNE2对Kv4.3通道功能的调节作用

目的研究KCNE2对人类心肌细胞瞬间外向钾电流的主要α亚基-Kv4.3功能的调节。方法通过基因转染技术将Kv4.3或Kv4.3与KCNE2cDNA转入COS-7细胞株,采用膜片钳全细胞记录方式记录通道电流。结果KCNE2对Kv4.3功能有明显调控作用:减小Kv4.3通道电流密度;Kv4.3单独表达组通道电流密度为375.13±112.87pA/pF(n=11),KCNE2与Kv4.3共表达组电流密度为152.96±33.71pA/pF(n=16);减慢Kv4.3通道激活和衰减,在+60mV电压刺激下通道激活达峰值的时间由4.82±0.32ms(n=11)延长至20.41±2.13ms(n=16),P<0.05;通道电压依赖性失活发生正向移位,半数失活电压由-53.62±1.24mV(n=8)移至-46.58±1.6mV(n=10);通道从失活中恢复的速度加快,恢复时间常数由193.43±17.98ms缩短137.71±18.29ms,(n=7,P<0.05)。结论KCNE2可能作为人类心肌细胞膜Kv4.3钾离子通道一个重要的辅助亚基-β亚基参与Ito通道功能的调节。

先天性长QT综合征KCNE1基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的:克隆先天性长QT综合征KCNE1基因,并构建真核表达载体。方法:从人胎盘组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出KCNE1基因;采用T-A克隆法,将KCNE1基因克隆入pCR2.1 TOPO载体中,经限制性酶切基因重组后,构建真核表达载体pEGFP-N1-KCNE1,经DNA测序鉴定,用E ffectene转染试剂介导转染HEK293细胞。结果:采用基因克隆和重组法,得到了KCNE1真核表达载体pEGFP-N1-KCNE1,并在HEK293细胞中得到了表达。结论:KCNE1基因的克隆及其真核表达载体的构建和表达为进一步的功能研究奠定了基础。

人类KCNE1基因单核苷酸多态性与心律失常关系的研究

目的探讨中国汉族人群心肌钾离子通道β亚单位基因KCNE1的单核苷酸多态性(SNPs)与心律失常发生的关系。方法入选心律失常患者197例(病例组)及健康者104名(对照组),病例组根据基础疾病不同又分为心房颤动组(111例)、室上性心动过速组(52例)、室性心动过速组(34例)。采用聚合酶链式反应(PCR)方法扩增KCNE1基因编码区全部序列,直接行DNA测序以明确遗传变异类型,并进行统计分析研究。结果病例组与对照组均存在KCNE1-S38G多态性改变,两组基因型分布和等位基因频率存在一定差异,但无显著性。分组分析显示,室性心动过速组(包括特发性室性心动过速18例)基因型分布与对照组存在统计学差异(P＜0．05),A、G等位基因频率(45．6%和54．4%vs 26．9%和73．1%)相比差异显著(P＜0．01),基因型A/A、A/G与G/G型比较对室性心动过速的OR值分别为3．188(95%CI1．307～7．771)和3．500(95%CI 1．111～11．028)。分组比较各基因型间校正QT间期(QTc)等临床资料无显著差异。结论中国汉族人群中广泛存在KC- NE1-S38G单核苷酸多态性改变,室性心动过速组A等位基因频率明显高于对照组,该位点与室性心动过速有一定关联。

新疆地区哈萨克族心房颤动与钾离子通道KCNE1-G38S基因多态性的相关性

目的研究新疆地区哈萨克族心房颤动与钾离子通道KCNE1-G38S基因多态性的相关性。方法收集新疆地区哈萨克族房颤人群(房颤组)和非房颤人群(对照组)各100例的外周血样标本,提取DNA,经聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)、琼脂糖电泳法鉴定分析KCNE1-G38S基因型和等位基因分布。结果KCNE1-G38S基因AA、AG、GG基因型频率在房颤组分别为0.13(13/100)、0.34(34/100)和0.53(53/100),在对照组分别为0.10(10/100)、0.57(57/100)和0.33(33/100),两组基因型分布有显著性差异(P<0.05),且房颤组G等位基因频率(0.70)明显高于对照组(0.515)(P<0.001)。结论新疆地区哈萨克族心房颤动的发生与KCNE1-G38S基因多态性相关,KCNE1-G38S基因多态性位点可能存在种族、地区差异。

KCNE2、KCNE3基因多态性与新疆汉族老年人房颤的相关性

目的探讨新疆汉族老年人KCNE2、KCNE3基因多态性与心房颤动(AF)的关系。方法采用分层,随机,多级整群抽样方法。收集2013~2015年在新疆南疆和田地区墨玉县、和田县的5个乡镇,乌鲁木齐市新农大社区、和钢社区,抽取有常住户口者、年龄≥55岁的房颤患者251例(AF组)。按照与AF组性别比例相同的原则纳入对照组病例251例。设计特异性引物,提取DNA后,PCR扩增后测序分析汉族老年人KCNE3基因rs9516、rs10898993、rs3867279位点和KCNE2基因rs9984281位点与AF的相关性。结果rs9984281位点在AF组不符合Hardy-Weinberg平衡,其他位点AF组和对照组均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。rs3867279位点基因型及等位基因频率在AF组和对照组之间差异有统计学意义(P<0.05),CT、TT基因型和G等位基因可降低老年人AF发生危险性。MDR分析结果显示,四种模型中三种模型有统计学意义(P<0.05),KCNE3基因rs10898993位点与KCNE2基因rs9984281位点之间存在较强的正交互作用。rs10898993位点和rs9984281位点所组成的AA/AA、AG/AG、GG/AG和GG/GG基因型组合为高危基因型组合。结论在老年汉族群体中,rs3867279位点与AF有相关性,携带CT、TT基因型和T等位基因的老年人发生AF概率更低。KCNE2、KCNE3基因的交互作用影响AF发生。

心肌钾离子通道β亚单位基因KCNE1多态S38G与心房颤动的关系

目的:探讨我国汉族人群心肌钾离子通道β亚单位基因KCNE1多态S38G与心房颤动(房颤)发生间的关系,并分析KCNE1-S38G在该人群中的分布特点。方法:入选房颤患者111例(病例组)及健康者101名(对照组),病例组根据基础疾病不同又分成4个亚组:孤立性房颤、高血压合并房颤、冠心病合并房颤及高血压冠心病合并房颤。采用PCR-DNA测序方法检测病例及对照组KCNE1基因编码序列,并进行统计分析。结果:病例组与对照组间,KCNE1-S38G的3种基因型频率为A/A(6.3%比11.9%)、A/G(36.9%比28.7%)、G/G(56.8%比59.4%)及A、G等位基因频率(24.8%和75.2%比26.2%和73.8%),其存在一定差异,但无显著性。各房颤亚组间比较也无显著差异。病例组各基因型间的校正QT间期(QTc)值无显著差异。结论:KCNE1-S38G在房颤患者中占一定优势,但与正常对照组相比无显著差别。KCNE1-S38G多态性位点可能存在种族、地区差异。

hKCNE5基因克隆及其重组腺病毒表达载体的构建

目的本研究旨在克隆人KCNE5(hKCNE5)基因,构建其重组腺病毒表达载体,以便研究hKCNE5基因过度表达对心房颤动的防治作用。方法首先利用PCR技术克隆hKCNE5基因,并将hKCNE5基因亚克隆到腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV;然后将该重组质粒线性化后电转化含有复制缺陷型腺病毒pAdEasy-1(Ad)的BJ5183-AD-1细胞,经过同源重组,获得复制缺陷型重组腺病毒hKCNE5-Ad,并经酶切鉴定、序列分析证实无误;接着将其转染超级感受态细胞XL10-Gold扩增、纯化、线性化,再感染AD-293细胞进行包装便可获得大量复制的重组腺病毒hKCNE5-Ad。结果hKCNE5基因被成功克隆后正确插入腺病毒载体Ad,其序列与GenBank公布的一致;hKCNE5-Ad可感染AD-293细胞并能在AD-293细胞内进行高效复制;收集含有hKCNE5-Ad的AD-293细胞悬液,-80℃保存备用。结论本研究成功地克隆了hKCNE5基因,构建了hKCNE5基因重组腺病毒表达载体,为进一步研究hKCNE5基因过度表达对心房颤动的防治作用奠定了基础。

KCNE1胞外N段功能的研究

目的:研究电压依赖性钾离子通道-IKs通道的调节亚基KCNE1胞外肽段(氨基端肽段,简称N段)的功能,探究胞外N段在KCNE1调控IKs通道中的作用。方法:通过分子生物学技术制备KCNE1的N段缺失突变体;利用Western Blot方法了解突变体的蛋白表达情况;以细胞免疫染色方法观察突变体的亚细胞定位情况;以全细胞膜片钳记录技术检测突变体(与KCNQ1共表达)的通道电流特征。结果:成功构建KCNE1胞外N段缺失的突变体KCNE1-ΔN,突变体体外表达正常;与野生型相比:KCNE1-ΔN在细胞内的分布出现蛋白集聚现象;通道的电流密度减小,激活电压相比较出现了明显的左移,即通道的激活速率变快。结论:KCNE1的N段对其蛋白表达无明显影响,但对蛋白的转运起重要作用;N段参与了KCNE1对通道电流大小的调节,以及对通道激活特征的调控。

KCNE1基因G38S多态性与新疆维吾尔族射血分数减少型慢性心力衰竭的关联性

目的研究KCNE1基因G38S多态性与新疆维吾尔族慢性心力衰竭(CHF)的关联性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对新疆维吾尔族200例CHF患者(病例组)和200例无CHF患者(对照组) KCNE1基因G38S(rs1805127)多态性进行分析。结果 KCNE1基因mink G38S多态性AA、AG、GG基因型在病例组为24(12. 0%)、89(44. 5%)和87(43. 5%),对照组分别为37(18. 5%)、91(45. 5%)和72(36. 0%)。等位基因A、G频率在病例组分别为137(34. 2%),263(65. 8%),对照组分别为165(41. 2%),235(58. 8%)。两组之间基因型无统计学差异(χ2=4. 208,P=0. 122),两组的等位基因频率有统计学意义(P <0. 05)。经二分类logistic回归分析左室舒张末内径的OR值为1. 473,95%CI:(1. 357~1. 599),QRS时限OR值为1. 028,β=0. 027,95%CI:(1. 009~1. 047),性别OR值为2. 288,β=0. 828,95%CI:(1. 059~4. 943),冠心病的OR值为3. 047,β=1. 114,95%CI:(1. 532~6. 063),糖尿病OR值为3. 200,β=1. 163,95%CI:(1. 345~7. 562)。基因型AG的OR值为0. 489,β=-0. 715,95%CI:(0. 247~0. 966)。结论 (1)维吾尔族CHF患者中KCNE1基因G38S携带G等位基因频率高于对照组(无CHF患者);(2)左室舒张末径增加、QRS波时限延长、男性、冠心病、糖尿病均是CHF的危险因素,携带AG基因型的维吾尔族人群发生CHF的风险小,基因型AG可能为CHF的保护因素。

新疆维、汉民族KCNE2和KCNE3基因多态性与房颤的相关性研究

目的:探讨新疆维、汉不同民族KCEN2、KCNE3基因标签SNP与房颤的关系。方法:采用病例对照研究方法,收集新疆医科大学第一附属医院心脏中心、和田地区人民医院心脏内科等科室。按照与病例组民族和性别相同,年龄相同或相近的原则选出对照。使用DNA提取试剂盒提取外周血DNA,然后对单核苷酸多态性进行检测,分析维吾尔族和汉族KCNE2(rs9984281)、KCNE3(rs9516)、KCNE3(rs10898993)、KCNE3(rs 3867279)、KCNE3(rs626930)与房颤的关系进行统计分析。结果:(1)维吾尔族KCNE2(rs9984281)、KCNE3 SNP1(rs9516)、SNP2(rs626930)、SNP3(rs3867279)、SNP4(rs10898993)与房颤无关。(2)汉族KCNE2(rs9984281)、KCNE3 SNP1(rs9516)、SNP2(rs626930)、SNP3(rs3867279)、SNP4(rs10898993)与房颤无关。结论:在KCNE基因家族中无论是维吾尔族还是汉族,KCNE2(rs9984281)、KCNE3 SNP1(rs9516)、SNP2(rs626930)、SNP3(rs3867279)、SNP4(rs10898993)与房颤患病均无关。

KCNE2的两种突变体I57T和V65M对Kv4.3通道功能的调节

Mink相关蛋白1(MiRP1)是由KCNE基因家族成员KCNE2编码的具有一个跨膜结构的小分子蛋白质,发生在KCNE2上的相关突变能够引起遗传性长QT间期综合症(long QT syndrome,LQT6),但其机制不明.以往的工作表明,MiRP1调节瞬间外向钾电流(transient outward current,Ito)的功能,对维持心电稳定性具有重要的调节作用.在哺乳细胞系COS-7表达系统利用膜片钳全细胞记录方式,研究了两种LQT6相关的突变体I57T和V65M对Kv4.3通道功能的影响,从MiRP1对Ito功能调控的改变探讨LQT6引起心律失常的电生理机制.结果表明,KCNE2与Kv4.3共表达后对通道功能具有明显的调控作用,使通道的激活和失活明显减慢,电压依赖性失活发生正向移位,同时加快Kv4.3通道从失活中的恢复.I57T与Kv4.3共表达的通道,门控动力学以及通道的恢复特性更接近Kv4.3单独表达的通道,表现为丧失KCNE2的功能——"loss of function",而V65M的作用则与之刚好相反,对Kv4.3门控动力学和恢复特性的调节较KCNE2更强,同时,使通道电流密度明显降低,表现为增强KCNE2的功能——"gain of function".由此推论,KCNE2对Ito功能有重要的调节作用,发生在KCNE2基因上的突变,无论是增强(V65M)还是减弱(I57T)KCNE2的功能都可能通过改变Ito在心脏电稳定性中的贡献,从而使心脏在某些条件下发生心律失常.

心肌特异性表达人KCNE4转基因小鼠模型的建立

目的本研究旨在建立心肌特异性表达人KCNE4(hKCNE4)基因小鼠模型,为探索hKCNE4基因对特定类型心房颤动的防治作用奠定基础。方法通过RT-PCR克隆hKCNE4基因,使用核酸内切酶和连接酶构建hKC- NE4基因心肌特异性表达载体hKCNE4-α-MHC-Clone26,经过酶切鉴定、序列分析证实无误后用BamHI酶切获得转基因表达元件hKCNE4-α-MHC-hGH pA。将hKCNE4-α-MHC-hGH pA显微注入小鼠受精卵雄性原核,并将有活力的受精卵移植到代孕小鼠的输卵管。PCR鉴定出代孕鼠所生小鼠中转基因阳性原代(G0)小鼠,运用RT-PCR-测序技术对阳性G0小鼠与野生型小鼠交配所生的一代(G1)小鼠进行检测以识别出表达转基因的阳性小鼠。结果成功克隆了hKCNE4基因,正确构建了hKCNE4基因心肌特异性表达载体hKCNE4-α-MHC-Clone 26。代孕鼠共生产86只仔鼠,9只转基因阳性,2只(分别称其为Line A和Line B)转基因在心脏中高表达。对Line A和Line B的阳性后代进行初步表型分析发现其生长发育良好,繁殖力正常,体表心电图无明显异常。结论成功建立心肌特异性表达hKCNE4转基因小鼠模型,为进一步研究hKCNE4基因对特定类型心房颤动的防治作用提供了一种工具。

定点突变法显示在高龄SHR大鼠心脏组织中KCNE2第98位氨基酸可能存在磷酸化修饰

目的:探究在高龄SHR大鼠心室膜蛋白中,KCNE2蛋白是否发生了磷酸化修饰。方法:用碱性磷酸酶处理高龄SHR大鼠心室膜蛋白,以抗KCNE2的抗体(Ab2)为一抗进行免疫印迹;将在蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,分别以Ab2和抗c-myc的抗体为一抗的免疫印迹;以及一系列的c-myc-hKCNE2的单点(KCNE2Y96F和KCNE2S98A)和双点突变(KCNE2Y96F/S98A)实验。结果:高龄SHR大鼠心室膜蛋白样品经碱性磷酸酶处理后,极大地减弱了Ab2对KCNE2蛋白的识别能力;另外,蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,虽然极大地减弱了Ab2对其融合蛋白的识别能力,却没有影响抗c-myc抗体对KCNE2融合蛋白的识别能力。定点突变的结果显示,虽然以抗c-myc抗体为一抗的免疫印迹结果显示,蛋白质离体翻译系统成功地翻译出了单突变子KCNE2S96A及双突变子KCNE2Y96F/S98A蛋白,但不论样品被碱性磷酸酶处理与否,Ab2在这些样品中均检测出很弱的KCNE2蛋白免疫条带。结论:在高龄SHR大鼠心室组织中,KCNE2第98位丝氨酸可能发生了磷酸化修饰。然而该位点的磷酸化修饰是否会通过影响心脏的电生理,而在SHR大鼠心脏病变过程中起着一定的作用,有待于从电生理的水平上进一步研究。

KCNE2蛋白在自发性高血压大鼠心脏组织中的分布和表达

目的研究KCNE2蛋白在自发性高血压大鼠(SHR)心脏不同部位的分布和表达差异,及鼠龄对其表达水平的影响。方法提取幼龄和高龄SHR心肌不同部位(心室、室隔膜和心房)组织的膜蛋白,利用Western印迹技术和图象分析方法,比较KCNE2蛋白在样品之间免疫强度差异。结果SHR心肌不同部位组织中均有KCNE2蛋白的分布;同龄大鼠心肌不同部位组织中KCNE2蛋白的表达均无显著性差异;但在高龄大鼠的右心室和室隔膜组织中,KCNE2蛋白的表达显著高于其在幼龄大鼠相同组织中的表达。结论KCNE2蛋白在SHR心脏不同部位均有分布;在高龄大鼠右心室和室隔膜组织中,KCNE2蛋白的表达水平均高于其在幼龄大鼠同一组织中的表达。

N-糖基化对KCNE1功能的影响

目的:探究N-糖基化在KCNE1功能中的作用。方法:根据N-糖基化序列特征"Asn-X-Ser/Thr"分析和N-糖基化特异消化酶实验检测KCNE1是否存在N-糖基化,通过点突变构建N-糖基化位点突变体并通过蛋白质印迹法检测其蛋白表达,细胞免疫荧光染色检测突变体亚细胞定位;免疫共沉淀检测突变体与KCNQ1的相互作用。结果:KCNE1存在N-糖基化,N5和N26是其可能位点;点突变获得KCNE1-N5Q、KCNE1-N26Q和KCNE1-N5,26Q 3个突变体。蛋白质印迹法确定N5和N26为KCNE1的两个糖基化位点;与野生型相比,突变体在细胞内呈现不同程度的蛋白囤积现象,KCNE1-N26Q表现尤为显著,KCNE1-N5,26Q和KCNE1-N5Q则表现略轻;KCNE1 N-糖基化突变体仍能与KCNQ1结合。结论:N-糖基化在KCNE1转运中发挥重要作用,其中N26较为关键;N-糖基化在KCNE1与KCNQ1之间的相互作用中不起重要作用。