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Association of Polymorphic Variants of <i>VEGF</i>and <i>KDR</i>Genes with Development and Metastasing of Non-Small Cell Lung Cancer
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作者 А. N. Shchayuk E. V. Krupnova +3 位作者 M. N. Shapetska A. P. Mikhalenka N. V. Chebotareva A. V. Kilchevsky 《Journal of Cancer Therapy》 2018年第9期714-728,共15页
Vascular endothelial growth factor (VEGF) is one of the most important and specific factors affecting angiogenesis in tumor development. VEGFR2 is a receptor encoded by the KDR gene. VEGF and VEGFR2 transmit a signal ... Vascular endothelial growth factor (VEGF) is one of the most important and specific factors affecting angiogenesis in tumor development. VEGFR2 is a receptor encoded by the KDR gene. VEGF and VEGFR2 transmit a signal to intracellular tyrosine kinase cascades. Polymorphic variants of the VEGF and KDR genes significantly influence the expression levels of the endothelial growth factor and its receptor, which leads to a change in the activation of angiogenesis in oncopathological processes. In this study, the relationship between the polymorphic variants rs2010963, rs699947 and rs3025039 of the VEGF gene and rs1870377 and rs2071559 of the KDR gene was analyzed with the development of a specific histological type of non-small cell lung cancer and its clinical and morphological characteristics. It was established that the development of squamous cell carcinoma is associated with -634CC genotype of the VEGF gene and the genotypes containing -2578A allele of the VEGF gene reduce the likelihood of this cancer type development. The development of adenocarcinoma is associated with +936CC VEGF/1719TT KDR and +936CT VEGF/1719TT KDR combinations. In women with non-small cell lung cancer, -634GC genotype of the VEGF gene is associated with a greater degree of the primary lesion spread. Genotype -2578СС of the VEGF gene is associated with a higher degree of the primary tumor spread in the general group of patients and with regional metastases in women. Haplotypes -634G/-2578C/+936C are risky for the occurrence of metastases in regional lymph nodes in women. 展开更多
关键词 Non-Small Cell Lung Cancer Angiogenesis Vascular Endothelial Growth Factor VEGF gene POLYMORPHISM kdr gene POLYMORPHISM
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重庆市中华按蚊溴氰菊酯抗性与kdr基因突变的关系 被引量:3
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作者 付凤洋 陈斌 +4 位作者 钟代斌 孟凤霞 闫振天 何正波 闫桂云 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2013年第1期25-30,共6页
摘要中华按蚊是我国的主要传疟媒介之一。近年来我国不同地区的蚊虫抗药性监测数据显示,多种媒介蚊虫对拟除虫菊酯杀虫剂产生了不同程度的抗药性。为了解重庆市中华按蚊对拟除虫菊酯杀虫剂抗性水平及其与kdr基因突变的关系,我们于2011... 摘要中华按蚊是我国的主要传疟媒介之一。近年来我国不同地区的蚊虫抗药性监测数据显示,多种媒介蚊虫对拟除虫菊酯杀虫剂产生了不同程度的抗药性。为了解重庆市中华按蚊对拟除虫菊酯杀虫剂抗性水平及其与kdr基因突变的关系,我们于2011年7~9月采用WHO标准区分剂量法对重庆市璧山县和秀山县的中华按蚊做了抗药性生物测定,通过测序检测了钠离子通道IIS6节段kdr基因突变。生物测定结果显示璧山县种群死亡率为32.72%,秀山县种群为12.62%,比1992和2001年抗性水平(死亡率分别为80.72%、76.92%)明显提高。测序得到325bp的kdr片段,在L1014位点有‘兀'.I'、TGT突变。突变统计显示,璧山县种群基因突变频率为7.23%,秀山县种群为68.60%,两个群体的基因突变与抗药性的关联未达显著水平,表明这两个中华按蚊种群L1014位点的rI’rI'T和TGT突变与抗药性表型间无关联。中华按蚊抗药性分子机理需要进一步扩大研究种群,检测其他突变位点以及相关代谢酶的活性。 展开更多
关键词 重庆市 中华按蚊 溴氰菊酯 抗药性 kdr基因
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KDR基因多态性的杰出有氧耐力表型与运动应激诱导的循环microRNA差异表达谱的关联研究 被引量:3
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作者 许英樱 段立公 徐思 《天津体育学院学报》 CAS CSSCI 北大核心 2015年第2期121-126,共6页
目的:分析KDR基因SNP/rs1870377的A/A基因型的杰出有氧耐力表型与训练诱导的循环mi RNA表达特征的关联。方法:试验对象为33名现役国家级耐力项目男性运动员和58名体育教育专业男性大学生(二级运动员),均为汉族。递增负荷法检测最大摄氧... 目的:分析KDR基因SNP/rs1870377的A/A基因型的杰出有氧耐力表型与训练诱导的循环mi RNA表达特征的关联。方法:试验对象为33名现役国家级耐力项目男性运动员和58名体育教育专业男性大学生(二级运动员),均为汉族。递增负荷法检测最大摄氧量、个体乳酸阈;mi RNAarray及q RT-PCR检测训练诱导的c-mi RNA表达谱,Taqman法解析KDR基因SNP/rs1870377基因型,分析优势基因型及其杰出耐力表型与训练诱导的c-mi RNA表达特征的关联。结果:A/A基因型的杰出耐力表型差异表达17条c-mi RNA,9条上调,8条下调;mi RNA同步调控AMPK、p53、PPAR、MAPK、m TOR等信号通路多个基因表达。结论:差异表达的mi RNA的调控作用同步上调AMPK-PGC-1α通路和p53通路功能,促进线粒体合成和有氧代谢能力,在A/A基因型上调VEGF通路活性增强心肌/骨骼肌供血条件下进一步提高有氧代谢供能效率,对杰出耐力表型的形成具有促进作用;mi RNA的调控作用与rs1870377的A/A基因型的杰出有氧耐力表型存在关联,二者可作为预测有氧耐力发展潜力的表观遗传学分子标记,联合应用于运动选材。 展开更多
关键词 杰出有氧耐力表型 血管内皮生长因子受体2 单核苷酸多态性 运动应激 循环micro RNA
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腺病毒介导的KDR启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用 被引量:4
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作者 朱忠政 殷正丰 +2 位作者 吴宗娣 张柏和 吴孟超 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第4期243-247,共5页
目的 :研究腺病毒介导的KDR启动子 胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用。方法 :应用PCR克隆出人KDR基因启动子序列 - 2 2 5bp~ +12 7bp ,以AdEasysystem为载体 ,构建携带受KDR启动子或CMV启动子调控tk基因表达的 2种重组腺... 目的 :研究腺病毒介导的KDR启动子 胸苷激酶系统对血管内皮细胞的选择性杀伤作用。方法 :应用PCR克隆出人KDR基因启动子序列 - 2 2 5bp~ +12 7bp ,以AdEasysystem为载体 ,构建携带受KDR启动子或CMV启动子调控tk基因表达的 2种重组腺病毒质粒 pAdKDR tk和 pAdCMV tk ,在 2 93细胞中包装、扩增后 ,体外感染表达KDR的脐静脉血管内皮细胞系HUVEC和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2 ,并给予不同浓度的丙氧鸟苷 (GCV)处理 ,5d后收集存活细胞并计数。结果 :产生的病毒滴度均为 5× 10 9pfu/ml。在MOI为 10 0、GCV为 5 0 μg/ml条件下 ,AdKDR tk转染HUVEC后细胞生存率下降 (31 49%± 6 .42 % ) ,AdKDR tk转染HepG2后细胞生存率为 76 .5 7%± 3.49% ,而转染AdCMV tk的 2细胞系生存率均显著下降 ,细胞生存率分别为 2 2 .2 4%± 3.77% (HUVEC)和 2 6 .5 3%± 6 .84% (HepG2 )。 结论 :KDR基因启动子可调控HSV tk在血管内皮细胞中特异性表达 ,为进一步开展靶向肿瘤血管内皮的自杀基因治疗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肿瘤 血管内皮细胞 kdr启动子 自杀基因治疗 腺病毒 胸苷激酶系统
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KDR启动子启动双自杀基因对LOVO细胞的杀伤作用 被引量:4
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作者 刘志毅 宋燕 +3 位作者 武洪斌 谢忠士 李亚刚 赵辉 《中国实验诊断学》 2008年第1期50-53,共4页
目的探讨KDR启动子双自杀基因体系对结肠癌LOVO细胞的抑制作用。方法分别以重组腺病毒pAdEasy-KDR-CDglyTK、pAdEasy-CDglyTK转染LOVO细胞和未经转染的转染LOVO细胞,分别给予不同浓度5-FC、GCV、5-FC+GCV,观察对细胞的抑制作用,用MTT法... 目的探讨KDR启动子双自杀基因体系对结肠癌LOVO细胞的抑制作用。方法分别以重组腺病毒pAdEasy-KDR-CDglyTK、pAdEasy-CDglyTK转染LOVO细胞和未经转染的转染LOVO细胞,分别给予不同浓度5-FC、GCV、5-FC+GCV,观察对细胞的抑制作用,用MTT法观察杀伤效应。结果含有pAdEasy-KDR-CDglyTK、pAdEasy-CDglyTK对LOVO细胞有明显的杀伤作用(P<0.01);携带pAdEasy-KDR-CDglyTK组较其他两组生存率明显降低(P<0.01);联合用药生存率明显低于单一用药(P<0.01)。并且具有明显的旁观者效应。结论双自杀基因对LOVO细胞具有明显的抑制作用,联合用药优于单独用药,携带KDR启动子的双自杀基因有更强的抑制作用及旁观者效应。 展开更多
关键词 kdr启动子 自杀基因 LOVO细胞
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KDR启动子驱动双自杀基因诱导胃癌细胞凋亡的实验研究 被引量:1
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作者 李强 黄宗海 +3 位作者 苏国强 俞金龙 厉周 周光军 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期969-971,共3页
目的探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对胃癌细胞凋亡的诱导作用。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV和(或)5-FC,观察该体系对SCG7901细胞的杀伤效... 目的探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对胃癌细胞凋亡的诱导作用。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV和(或)5-FC,观察该体系对SCG7901细胞的杀伤效应。分别应用透射电镜、Hoechest33258/PI染色、流式细胞仪观察细胞超微结构、细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体转染后,95%以上SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达。表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感(P<0·01)。两种前药联合应用优于任一前药单独应用的疗效(P<0·01)。流式细胞术检测表明该体系可抑制SCG7901细胞DNA的合成,表现为S期细胞比例增高及G2期细胞减少。同时,Hoechest33258/PI染色和电镜下可见SCG7901有凋亡改变。结论KDR启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并且该体系可以诱导胃癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 胃肿瘤 kdr启动子 自杀基因治疗 腺病毒
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KDR启动子驱动双自杀基因靶向杀伤人胃癌细胞的作用 被引量:2
7
作者 李强 黄宗海 +3 位作者 俞金龙 苏国强 厉周 周光军 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第31期2997-3001,共5页
目的:探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的双自杀基因体系对人胃癌细胞SCG7901的靶向杀伤作用.方法:应用重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染实验组SCG7901细胞株和对照组HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-flu... 目的:探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的双自杀基因体系对人胃癌细胞SCG7901的靶向杀伤作用.方法:应用重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染实验组SCG7901细胞株和对照组HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞杀伤效应及其旁观者效应.结果:携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SCG7901和未转染SCG7901的细胞在细胞生长方面无显著性差异(t=0.224,P=0.823).已转染腺病毒的HepG2细胞和未转染HepG2的细胞在细胞生长方面也无显著性差异(t=0.120,P=0.904).在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性,SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性(F=109.43,P=0.000).融合基因的疗效优于单一自杀基因(F=162.22,P=0.000).将感染腺病毒细胞与未感染细胞以不同比例混和培养,观察到该体系明显的旁观者效应.结论:KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并存在旁观者效应. 展开更多
关键词 人胃癌细胞 kdr启动子 自杀基因治疗 腺病毒 旁观者效应
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AdKDR-CDglyTK融合基因系统对胃癌MGC-803细胞体的外杀伤作用 被引量:1
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作者 周广军 黄宗海 +2 位作者 俞金龙 厉周 苏国强 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期402-405,共4页
目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子第二受体,亦即酪氨酸激酶受体(kinase domain-containing receptor,KDR) 启动子驱动的CDglyTK融合基因体系对人胃癌细胞株MGC-803的杀伤作用。方法将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK 在293细胞内包装、扩增... 目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子第二受体,亦即酪氨酸激酶受体(kinase domain-containing receptor,KDR) 启动子驱动的CDglyTK融合基因体系对人胃癌细胞株MGC-803的杀伤作用。方法将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK 在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的MGC-803细胞株,并给予不同浓度的前药5-FC和/或更昔洛韦,观察该体系对MGC-803细胞株的杀伤效应及其旁观者效应;并以流式细胞仪检测细胞周期的变化,电镜观察细胞的病变。结果所得病毒滴度为2.0×1012pfu/ml。MGC-803细胞株感染率随腺病毒滴度的递增而增加。融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P<0.001)。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养,观察到该体系明显的旁观者效应。流式细胞术检测表明该体系抑制MGC-803细胞DNA的合成,表现为G1期细胞比率增多及S期细胞减少(P<0.001)。同时,电镜下可见MGC-803细胞有凋亡和坏死改变。结论腺病毒介导KDR启动子驱动的CDglyTK融合基因体系可以有效地杀伤人胃癌细胞。 展开更多
关键词 胃肿瘤 kdr启动子 自杀基因治疗 腺病毒
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KDR启动子驱动的双自杀基因对人结肠癌细胞的特异性杀伤作用 被引量:1
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作者 王朝阳 黄宗海 +3 位作者 李强 姚晓军 俞金龙 历周 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期224-227,231,共5页
目的探讨腺病毒介导的KDR启动子驱动的双自杀基因系统CDglyTK对人结肠癌细胞SW480的特异性杀伤作用。方法用腺病毒AdKDR-CDglyTK感染表达KDR的SW480细胞和不表达KDR的LS174T细胞,观察其感染效率并以RT-PCR方法检测重组腺病毒及转基因细... 目的探讨腺病毒介导的KDR启动子驱动的双自杀基因系统CDglyTK对人结肠癌细胞SW480的特异性杀伤作用。方法用腺病毒AdKDR-CDglyTK感染表达KDR的SW480细胞和不表达KDR的LS174T细胞,观察其感染效率并以RT-PCR方法检测重组腺病毒及转基因细胞CDglyTK的表达,然后给予不同浓度的前药5-FC及GCV处理,MTT法检测该系统对不同细胞株的杀伤效应和旁观者效应;用流式细胞术观察细胞内DNA含量和细胞周期的变化。结果携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SW480和LS174T细胞中有GFP表达。RT-PCR检测发现SW480细胞有目的基因的表达,而LS174T细胞无表达。在前药应用下,已转染腺病毒的SW480和LS174T细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SW480细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.01)。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同比例混合培养,观察到该系统有明显的旁观者效应。用流式细胞仪测定给药组出现典型的凋亡峰,细胞周期显示治疗组细胞G0-G1期比率增多,S期细胞减少。结论KDR启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人结肠癌SW480细胞,抑制其增殖并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 人结肠癌细胞 kdr启动子 自杀基因 腺病毒
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重组腺病毒介导的KDR-CDglyTK融合基因系统对胃癌细胞增值的影响 被引量:1
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作者 李强 黄宗海 +2 位作者 俞金龙 苏国强 厉周 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期69-71,74,共4页
目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人胃癌细胞SCG7901增值的影响。方法重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和对照组不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-... 目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人胃癌细胞SCG7901增值的影响。方法重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和对照组不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞生长增值的影响。结果携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达。已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞同未转染的各自细胞在细胞生长方面无显著性差异(P>0.05)。在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感(P<0.01)。融合基因的疗效优于单一自杀基因(P<0.01)。结论KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,抑制其增值。 展开更多
关键词 人胃癌细胞 kdr启动子 自杀基因治疗 腺病毒
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pAdKDR/CD/TK双自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤作用的试验研究 被引量:1
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作者 谷洋 刘志毅 +2 位作者 金虎 刘明 孙铁梁 《中国实验诊断学》 2017年第1期132-135,共4页
目的探讨含KDR启动子的双自杀基因CD/TK对肝癌HepG2细胞的杀伤作用。方法观察不同前药对HepG2细胞、血管内皮细胞ECV304和LST174细胞的杀伤作用,评估KDR启动子的靶向杀伤作用。观察不同前药对转染不同自杀基因的HepG2细胞的杀伤作用,及... 目的探讨含KDR启动子的双自杀基因CD/TK对肝癌HepG2细胞的杀伤作用。方法观察不同前药对HepG2细胞、血管内皮细胞ECV304和LST174细胞的杀伤作用,评估KDR启动子的靶向杀伤作用。观察不同前药对转染不同自杀基因的HepG2细胞的杀伤作用,及旁观者效应。结果转染腺病毒的HepG2细胞及血管内皮ECV304细胞对前药具有较高的敏感性,而感染腺病毒的LST174细胞对前药不敏感(P<0.05)。当转染细胞混合比例为50%时,应用前药后,转染CD/TK,CD,TK的HepG2细胞生存率分别为11.8±1.2%、41.3±3.7%、43.1±2.3%(P<0.05)。结论含KDR启动子的双自杀基因CD/TK对肝癌HepG2细胞具有高度靶向杀伤作用;联合用药对转染双自杀基因的肝癌HepG2细胞具有协调增强杀伤作用。 展开更多
关键词 双自杀基因 kdr启动子 肝癌细胞 基因
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KDR介导的双自杀基因重组腺病毒对ECV304细胞增殖活性、细胞周期及凋亡的影响 被引量:1
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作者 苏国强 黄宗海 +5 位作者 俞金龙 厉周 范应方 宋慧娟 王蔚 张进华 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期517-520,共4页
目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人脐血管内皮细胞株ECV304的增殖活性、细胞周期及凋亡的影响。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的ECV304细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的... 目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人脐血管内皮细胞株ECV304的增殖活性、细胞周期及凋亡的影响。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的ECV304细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对ECV304细胞的杀伤效应及其旁观者效应;并以流式细胞仪检测细胞周期的变化,电镜观察细胞的病变。结果重组腺病毒对ECV304细胞及对照组LS174T细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的递增而增加,当MOI为200时,所有细胞株均达约100%感染。以MOI为100的重组体分别感染各细胞株表现出对前药的不同敏感性:表达KDR的ECV304细胞对前药的具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P均<0.001)。融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P均<0.001)。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同混合培养,观察到该体系明显的旁观者效应。流式细胞术检测表明该体系抑制ECV304细胞DNA的合成,表现为S期细胞比率增多及G1期细胞减少(P均<0.001)。同时,电镜下可见ECV304有凋亡和坏死改变。结论KDR基因启动子可调控融合基因体系选择性杀伤人血管内皮细胞,其机制与细胞周期阻滞、凋亡及坏死有关。 展开更多
关键词 血管内皮细胞 kdr启动子 自杀基因治疗 腺病毒
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转录靶向性KDR启动子调控双自杀基因系统对人大细胞肺癌细胞L9981的杀伤作用 被引量:1
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作者 车国卫 刘伦旭 +6 位作者 周清华 王艳萍 朱文 付军科 孙江涛 王允 陈晓禾 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第6期530-534,共5页
背景与目的研究KDR启动子转录调控双自杀基因系统(CDglyTK)对人大细胞肺癌细胞L9981的杀伤作用。方法应用分子生物学技术克隆KDR基因的启动子KDRp,构建KDR启动子调控的双自杀基因(CDglyTK)真核表达质粒pcDNA3-KDRp-CdglyTK。并将其导入L... 背景与目的研究KDR启动子转录调控双自杀基因系统(CDglyTK)对人大细胞肺癌细胞L9981的杀伤作用。方法应用分子生物学技术克隆KDR基因的启动子KDRp,构建KDR启动子调控的双自杀基因(CDglyTK)真核表达质粒pcDNA3-KDRp-CdglyTK。并将其导入L9981和人肝癌细胞HepG2中。给予不同的前药(GCV和/或5-FC)处理后,应用MTT法检测各组细胞的存活率。并应用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期和凋亡。结果成功的克隆KDR启动子和构建pcDNA3-KDRp-CdglyTK质粒。pcDNA3-KDRp-CdglyTK转染后,L9981细胞中均可检测到CD和TKmRNA,而HepG2细胞中则无。联合应用5-FC+GCV处理对转双自杀基因细胞(L9981)的杀伤作用显著高于单独应用5-FC或GCV(P<0.05),且二者显示了良好的药物协同作用。结论KDR基因启动子调控双自杀基因系统可以靶向性杀伤人肺癌细胞。 展开更多
关键词 转录靶向性 kdr启动子 双自杀基因 基因治疗 肺癌
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放疗增强对转染pAdKDR/CD/TK自杀基因系统的SW480大肠癌细胞的杀伤作用 被引量:1
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作者 刘志毅 金虎 +1 位作者 翟春亮 刘明 《中国实验诊断学》 2013年第10期1767-1770,共4页
目的研究γ射线照射对含KDR启动子双自杀基因大肠癌细胞SW480的杀伤协同作用,和自杀基因及前药的放射增敏作用。方法重组腺病毒pAdKDR-TK、pAdKDR-CD和pAdKDR-TK/CD转染SW480细胞,观察γ射线对SW480细胞基因转染率的增强作用和对前药GCV... 目的研究γ射线照射对含KDR启动子双自杀基因大肠癌细胞SW480的杀伤协同作用,和自杀基因及前药的放射增敏作用。方法重组腺病毒pAdKDR-TK、pAdKDR-CD和pAdKDR-TK/CD转染SW480细胞,观察γ射线对SW480细胞基因转染率的增强作用和对前药GCV、5-FC、GCV+5-FC杀伤SW480细胞的放射增敏效应,以及前药GCV、5-FC、GCV+5-FC对γ射线杀伤SW480细胞的协同增效作用。结果转染双自杀基因的大肠癌细胞射线组比对照组转染率有明显升高(P<0.01),γ射线对转染KDR-TK/CD基因的SW480细胞比未转染基因的对照组SW480细胞具有更强的杀伤作用(P<0.001)。结论γ射线照射能明显提高双自杀基因的转染效率,强化了基因治疗的"旁观者效应",自杀基因对γ射线的增敏作用。 展开更多
关键词 kdr启动子 自杀基因 放射治疗 SW480细胞
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腺病毒介导的KDR启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞旁观者效应的实验研究 被引量:1
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作者 朱欠元 李宝金 +1 位作者 郭剑 毛慕华 《中国临床医学》 北大核心 2006年第4期522-524,共3页
目的:研究腺病毒介导的血管内皮因子受体(KDR)启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞的旁观者效应。方法:采用新型腺病毒载体AdEasy系统,构建由KDR启动子调控的、腺病毒介导的、单纯疱疹病毒胸苷酸激酶基因系统(AdK- DR-HSV-tk),在人胚胎... 目的:研究腺病毒介导的血管内皮因子受体(KDR)启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞的旁观者效应。方法:采用新型腺病毒载体AdEasy系统,构建由KDR启动子调控的、腺病毒介导的、单纯疱疹病毒胸苷酸激酶基因系统(AdK- DR-HSV-tk),在人胚胎肾细胞系293细胞中包装、扩增后,体外感染表达KDR的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),建立HUVEC/tk转化细胞株。观察丙氧鸟苷((GCV)对HUVEC、HUVEC/tk细胞的存活率及旁观者效应。结果:从病毒滴度及PCR检查,证实tk基因随病毒的感染已成功地导入293细胞及HUVEC细胞。HUVEC/tk细胞对丙氧鸟苷的敏感性显著高于亲代HUVEC细胞。HUVEC/tk及HUVEC+HUVEC/tk混合细胞还随丙氧鸟苷浓度的增加受到明显的抑制。HUVEC+HUVEC/tk混合细胞的存活率,随HUVEC/tk细胞比例的增加而降低,说明腺病毒介导的KDR启动子-单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷系统不但能杀伤tk+细胞,也能杀伤未导入tk的细胞,存在明显的旁观者效应。结论:腺病毒介导的KDR启动子单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷系统对血管内皮细胞具有明显的杀伤及旁观者效应。 展开更多
关键词 kdr启动子 单纯疱疹病毒胸苷激酶 旁观者效应 血管内皮
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抗KDR单链抗体的构建、表达及生物学活性鉴定 被引量:4
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作者 李容 熊冬生 +4 位作者 许元富 邵晓枫 范冬梅 朱祯平 杨纯正 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期39-42,共4页
目的: 构建并表达抗人血管内皮生长因子受体KDR单链抗体(scFv)蛋白, 并测定其生物学活性。方法: 设计合成抗KDR单抗 (mAb)Ycom1D3VH、VL引物, 通过重叠延伸拼接 (splicingoverlapextensive, SOE)PCR, 在VH 和VL基因间引入柔性短肽(Gly4S... 目的: 构建并表达抗人血管内皮生长因子受体KDR单链抗体(scFv)蛋白, 并测定其生物学活性。方法: 设计合成抗KDR单抗 (mAb)Ycom1D3VH、VL引物, 通过重叠延伸拼接 (splicingoverlapextensive, SOE)PCR, 在VH 和VL基因间引入柔性短肽(Gly4Ser)3, 构建抗KDRscFv基因并进行序列分析。将其克隆入pAYZH原核表达载体, 在大肠杆菌中诱导表达, 并以ELISA及免疫荧光结合实验测定重组蛋白的生物学活性。结果: 序列分析表明, 抗KDRscFv基因的全长为 729bp, 编码 243个氨基酸。将重组体表达产物进行SDS PAGE及Westernblot分析显示, 融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为 30 000, 同预期的结果一致。表达产物主要以不溶性包涵体的形式存在, 表达量占菌体总蛋白的 20%。表达产物经变性、纯化及体外复性后, 纯度达 90%以上。ELISA和竞争性免疫荧光结合实验显示, 重组小分子scFv可与可溶性KDR抗原及表达KDR受体的人脐静脉内皮细胞特异性结合, 保留了亲本mAb的抗原结合活性。结论: 成功地构建了抗KDRscFv基因, 并在大肠杆菌中功能性表达, 为靶向诊断、治疗及进一步基因工程改造奠定了基础。 展开更多
关键词 kdr 血管内皮生长因子 单链抗体 基因表达
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KDR基因和Sema3基因在再障和正常人骨髓基质细胞中的表达
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作者 王震 李扬秋 +5 位作者 吴秀丽 陈少华 杨力建 张洹 朱康儿 韩忠朝 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2004年第4期393-399,共7页
目的 :了解激酶插入区域受体 (kinaseinsertdomainreceptor,KDR)基因和脑信号蛋白Ⅲ(Semaphorin3,Sema3)基因在再生障碍性贫血 (AA)和正常人的骨髓基质细胞 (BMSC)和骨髓造血细胞中的表达情况。方法 :收集 9例AA和 33例正常骨髓标本 ,... 目的 :了解激酶插入区域受体 (kinaseinsertdomainreceptor,KDR)基因和脑信号蛋白Ⅲ(Semaphorin3,Sema3)基因在再生障碍性贫血 (AA)和正常人的骨髓基质细胞 (BMSC)和骨髓造血细胞中的表达情况。方法 :收集 9例AA和 33例正常骨髓标本 ,分离单个核细胞 (MNC)后体外长期培养扩增BMSC ,并收集悬浮细胞 (骨髓细胞 )。RT -PCR -ELISA检测KDR基因和Sema3基因在BM SC和造血细胞中的表达 ,分析表达率 ,并以管家基因 β2 微球蛋白 (β2 M)为内参照进行半定量分析。结果 :KDR基因在正常对照BMSC中的表达率 (97 0 % )明显高于对应的骨髓细胞 (70 8% ,P =0 0 0 7)。KDR基因在AA的BMSC和骨髓细胞中的表达率和表达水平与正常对照比较均无显著差异。Sema3基因在正常BMSC中的表达水平明显低于其对应的骨髓细胞 (P =0 0 35 )。Sema3基因在AA的BMSC和骨髓细胞中的表达率和表达水平与正常对照组比较均无显著差异。KDR基因和Sema3基因的表达水平在正常造血细胞中呈显著正直线相关 (r =0 70 3,P =0 0 0 2 )。结论 :KDR基因在BMSC中的高表达提示其可能在维持造血微环境中有重要作用。Sema3基因在造血细胞中的高表达状态提示其可能具有维持造血细胞生存的作用。 展开更多
关键词 kdr基因 Sema3基因 骨髓基质细胞 再生障碍性贫血
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两种蚊虫钠通道基因kdr突变点附近序列的研究
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作者 江毅民 黄炯烈 吴瑜 《热带医学杂志》 CAS 2004年第3期240-242,共3页
目的分析白纹伊蚊和致倦库蚊钠离子通道基因kdr突变位点附近的核苷酸序列,为进行抗药性监测奠定基础。方法根据文献报道的两种蚊虫钠离子通道基因序列设计引物,分别以白纹伊蚊和致倦库蚊基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得包含击倒抗性突... 目的分析白纹伊蚊和致倦库蚊钠离子通道基因kdr突变位点附近的核苷酸序列,为进行抗药性监测奠定基础。方法根据文献报道的两种蚊虫钠离子通道基因序列设计引物,分别以白纹伊蚊和致倦库蚊基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得包含击倒抗性突变位点和一个内含子的钠通道基因片段,将其核苷酸序列与蚊虫钠通道基因cDNA序列进行比较,确定内含子的位置及序列。结果两种蚊虫的内含子序列变异较大,它们在kdr突变位点附近的序列很保守。结论该内含子序列的变异并不影响用PCR方法检测这两种蚊虫的拟除虫菊酯抗性。 展开更多
关键词 蚊虫 钠通道基因 抗性 内含子
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重组腺病毒介导KDRP-CD/TK基因对大肠癌细胞增殖与凋亡的影响
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作者 苏国强 黄宗海 张思宇 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期173-176,共4页
目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人大肠癌细胞LOVO的增殖活性及凋亡的影响。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的LOVO细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株,观察该体系对LOVO细胞的杀伤效应;并以... 目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人大肠癌细胞LOVO的增殖活性及凋亡的影响。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的LOVO细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株,观察该体系对LOVO细胞的杀伤效应;并以流式细胞仪检测细胞周期的变化,电镜观察细胞的病变。结果重组腺病毒对LOVO细胞及LS174T细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的递增而增加,当MOI为200时,所有细胞株均达约100%感染。以MOI为100的重组体分别感染各细胞株表现出对前药的不同敏感性:表达KDR的LOVO细胞对前药的具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P均<0.001)。融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P均<0.001)。将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同混合培养,观察到该体系明显的旁观者效应。流式细胞术检测表明该体系抑制LOVO细胞DNA的合成,表现为S期阻止。同时,电镜下可见LOVO有凋亡和坏死改变。结论KDR基因启动子可调控融合基因体系选择性杀伤人大肠癌LOVO细胞,其机制与细胞周期阻滞、凋亡及坏死有关。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 kdr启动子 自杀基因治疗 腺病毒
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pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤鼻咽癌肿瘤血管的体内研究
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作者 梁敏志 邱前辉 +4 位作者 杨东辉 陈泽 夏广生 钟兆棠 谭向杲 《广东医学院学报》 2013年第2期130-133,共4页
目的探讨pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤肿瘤血管对鼻咽癌的治疗作用。方法将24只鼻咽癌荷瘤裸鼠随机分成3组,分别于0、1、7d向瘤体内注入重组腺病毒液0.1mL。第2次注射病毒液时,组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ分别腹腔注射pAdKDR-tk/PBS、pAdKDR-tk/... 目的探讨pAdKDR-tk自杀基因系统靶向杀伤肿瘤血管对鼻咽癌的治疗作用。方法将24只鼻咽癌荷瘤裸鼠随机分成3组,分别于0、1、7d向瘤体内注入重组腺病毒液0.1mL。第2次注射病毒液时,组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ分别腹腔注射pAdKDR-tk/PBS、pAdKDR-tk/GCV和pAdCMV-tk/GCV100mg/kg,每天1次,连续10d。观察治疗前后肿瘤体积、病理及微血管密度变化。结果组Ⅲ裸鼠移植肿瘤缩小速度最快,组Ⅱ次之,而组Ⅰ增大。病理检查显示组Ⅱ、Ⅲ肿瘤出现不同程度坏死,坏死灶中心位于病毒液注射部位。Ⅷ因子相关抗原免疫组化检查发现肿瘤血管密度组Ⅱ最低,组Ⅰ最高,两组之间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 pAdKDR-tk自杀基因系统对鼻咽癌肿瘤血管有良好的靶向杀伤效应,从而达到破坏肿瘤细胞的作用。 展开更多
关键词 血管内皮因子受体 自杀基因 鼻咽癌
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