KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2在老年白血病病人中的表达及与预后的相关性研究

目的探讨KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2在白血病病人中的表达及与预后的相关性。方法选择2016年7月至2018年1月收治的老年白血病病人156例作为研究对象,设为观察组,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)67例,急性髓系白血病60例,慢性髓系白血病(CML)29例,所有病人均给予常规方法治疗,随访2年。选择同期健康体检的老年人79例,设为对照组。完成基因组DNA提取,检测KIR2DL4基因分型;采用实时荧光PCR技术测定2组促凋亡基因HtrA2 mRNA水平;对KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2表达与老年白血病病人预后的相关性进行分析。结果2组KIR2DL4基因多态性中2DL4-001、2DL4-005、2DL4-006、2DL4-008、2DL4-0011差异无统计学意义(P>0.05);观察组9A型KIR2DL4高于对照组(P<0.05);10A型KIR2DL4低于对照组(P<0.05)。观察组HtrA2 mRNA水平高于对照组(P<0.05)。随访期间死亡54例,死亡率为34.62%。死亡组2DL4-0011、9A型KIR2DL4检出率均高于存活组(P<0.05),10A型KIR2DL4检出率和HtrA2表达水平低于存活组(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果表明老年白血病病人预后与2DL4-006、9A型KIR2DL4基因多态性及HtrA2表达水平均有关(P<0.05)。结论KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2在老年白血病病人中表达异常,其水平与预后存在相关性。

中国北方汉族人群KIR2DL4等位基因水平多态性的研究

目的了解中国北方汉族人群KIR2DL4等位基因水平的分子遗传多态性。方法采用磁珠法从327人份北方汉族无关个体标本中提取基因组DNA,采用本实验室建立的KIR2DL4测序分型专利技术对KIR2DL4基因的全部编码区(CDS)序列分为4段做特异性PCR扩增后,采用Sanger测序法对扩增产物所涵盖的每个外显子做双向测序。所获得的序列用Assign 4.7分析软件分析每个标本的基因型。结果共检出8种KIR2DL4等位基因,基因频率由高到低分别为KIR2DL4^(+)00102[77.1%(252/327)]、^(+)00501[35.8%(117/327)]、^(+)011[20.2%(66/327)]、^(+)00602[12.5%(41/327)]、^(+)00801[8.6%(28/327)]、^(+)00103[4.9%(16/327)]、^(+)00503[1.5%(5/327)]、^(+)00504[0.9%(3/327)]。能正常膜表达的10A型等位基因(KIR2DL4^(+)00102、^(+)00103、^(+)00501、^(+)00503、^(+)00504、^(+)00602)及存在CDS nt811位置腺嘌呤缺失而不能正常膜表达的9A型等位基因(KIR2DL4^(+)00801、^(+)011)的检出比例分别为97.6%(319/327)及27.8%(91/327),约为3.5∶1。与南方汉族人群相比较,中国北方汉族人群KIR2DL4各等位基因的检出频率无明显差异(P>0.05)。结论所获得的KIR2DL4分子遗传多态性数据可为疾病关联、人类进化等研究提供重要参考。

KIR2DL4基因的多态性与南方汉族白血病的相关性研究

目的探讨南方汉族人群白血病与KIR2DL4等位基因多态性的相关性。方法提取南方汉族急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）（n=283）、急性髓系白血病（acutemyeloid[eukemia，AML）（n=227）、慢性髓系白血病（chronic myeloid leukemia，CMI。）（n=80）患者和306名南方汉族随机正常志愿捐血者的DNA基因组，应用本实验室自行设计的引物对KIR2DL4基因的全部8个外显子进行测序分型，用Assign4．7分析软件判定基因型。用SPSS13．0统计软件分别对检出的每个KIR2DIA等位基因、10A型等位基因和9A型等位基因的检出比例分别进行差异显著性分析，并进行P值校准（Pc）。结果ALL、AML、CMI，患者和正常对照均检出5种等位基因：KIR2DIA＊001、＊005、＊006、＊008、＊011。ALL病例组与对照组的KIR2DI．4＊011等位基因检出比例、10A型KIR2DL4等位基因检出比例的差异有统计学意义（KIR2DL4＊011：OR=1．66，P=0．01；10A型K琥2DIA：OR=0．42，P=0．03），但尸值经过校准后，差异均无统计学意义（Pc≥O．05）。AML、CML病例组分别与对照组检出的各个KIR2DL4等位基因、10A型等位基因和9A型等位基因的检出比例进行比较，组间比较差异均无统计学意义（P〉0．05、Pc〉0．05）。结论南方汉族ALL、AML、CML白血病与KIR2DL4等位基因多态性无显著关联。

南方汉族人群KIR2DL4基因的多态性及五个新等位基因的鉴定

目的研究南方汉族人群KIR2DL4基因的遗传多态性。方法采用自行设计的PCR引物对306名南方汉族无关个体K豫2DL4框架基因的8个外显子进行扩增，之后进行双向测序，用Assign3．5软件分析各样本的等位基因型。对与国际IPD-KIR数据库不完全匹配的样本进行cDNA分子克隆和单倍型测序。结果共检出11种KIR2DL4等位基因，其中KIR2DL4＊00503、＊00504、＊032、＊033、＊034被WHOHLA因子命名委员会KIR分委会正式命名为新等位基因。检出的等位基因及其频率分别为KIR2DL4＊00102（75．5％）、＊00103（8．2％）、＊00501（34．0％）、＊00503（0．7％）、＊00504（0．7％）、＊00602（14．4％）、＊00801（11．4％）、＊011（22．2％）、＊032（0．3％）、＊033（0．3％）和＊034（0．3％）。第7外显子CDSnt811位置正常的10A型等位基因（KIR2DL4＊00102、＊00103、＊00501、＊00503、＊00504、＊00602、＊032、＊033、＊034）和CDSnt811位置缺失腺嘌呤的9A型等位基因（K琥2DL4＊00801、＊011）的检出比例分别为97．0％及33．0％，约为2．9：1。结论获得了南方汉族人群KIR2DL4等位基因分子遗传多态性的基础数据，可为移植、生殖免疫、疾病关联研究及人类进化等提供参考。

淋巴细胞的KIR2DL4基因表达在反复性胚胎停育主动免疫治疗前后的研究

目的检测复发性胚胎停育患者淋巴细胞主动免疫前后KIR2DL4基因的表达的变化,探讨反复性胚胎停育免疫学原因。方法选择2011年6月至2012年6月就诊的2次以上早孕胚胎停育的患者,根据以往有无人工流产和/或者分娩史分为无妊娠史(无人工流产及分娩史)组30例;有妊娠史(有人工流产史及分娩史)组55例;对照组为正常无妊娠史的未孕妇女30例。对研究者进行淋巴细胞主动免疫治疗4个周期后,采用荧光实时定量PCR技术检测治疗前后患者的淋巴细胞的KIR2DL4基因的表达。随访研究者妊娠结局。结果 (1)两组胚胎停育组治疗前KIR2DL4基因表达无妊娠史组为(43.55±12.71×103/ml)、有妊娠史组为(21.48±9.43×103/ml),分别与对照组(55.35±12.68×103/ml)比较,差异有统计学意义(P<0.05);两组胚胎停育组经淋巴细胞主动免疫治疗后KIR2DL4基因的表达分别为(56.76±10.90×103/ml、67.89±11.39×103/ml)与对照组治疗后(70.84±13.47×103/ml)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组胚胎停育组免疫治疗前后比较KIR2DL4基因比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫治疗前有妊娠史胚胎停育组KIR2DL4基因的表达(21.48±9.43×103/ml),与无妊娠史胚胎停育组KIR2DL4基因表达(43.55±12.71×103/ml)比较,差异有统计学意义(P<0.05),主动免疫治疗后差异无统计学意义(P>0.05)。(3)随访结果:两组胚胎停育组免疫治疗结束后,每组妊娠患者中,胚胎停育率分别为21.74%,18.75%;对照组胚胎停育率为20%。胚胎停育率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论淋巴细胞KIR2DL4基因的表达数量异常与反复性胚胎停育有关。