KLF4和KLF5蛋白在不同临床分期胃癌组织中的表达及意义

背景与目的:胃癌的发生、发展及生物学行为受到多个分子信号通路的影响,转录因子是调控这些分子通路的重要因素。而转录因子KLF4(Krüppel-like factors 4)、KLF5(Krüppel-like factors 5)与胃癌相关性的报道比较罕见。因此探讨转录因子KLF4、KLF5对胃癌生物学行为影响的分子机制具有重要的意义。方法:收集158例手术切除的胃溃疡型腺癌组织标本,同时取78例癌旁组织作为对照。应用免疫组织化学SP法检测胃腺癌组织、癌旁组织中转录因子KLF4和KLF5蛋白的表达。结果:158例胃腺癌组织中KLF4的阳性表达率为40.50%,KLF5的阳性表达率为63.93%,KLF4和KLF5的表达与患者性别、年龄及肿瘤位置之间无显著相关性(P>0.05),与肿瘤有无淋巴转移及WHO临床分期之间有显著相关性(P<0.05)。随着临床分期等级的增加,KLF4表达呈现递减趋势,而KLF5表达呈现增加趋势,其表达率与肿瘤临床分期程度显著相关(P<0.05)。结论:胃癌组织中KLF4的低表达和KLF5蛋白高表达可能是胃黏膜恶性转变以及胃癌发生浸润转移的重要生物学标志,检测KLF4和KLF5对预测胃癌浸润转移有重要意义。

山羊Klf4基因克隆、原核表达和His-Klf4融合蛋白纯化

旨在克隆山羊Klf4基因,构建重组质粒pET30a-Klf4,通过原核表达技术获得纯化的His-Klf4融合蛋白。从山羊的生殖脊中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增Klf4基因编码区序列,通过TA克隆构建pMD18-T-Klf4重组质粒。酶切鉴定与测序分析后将Klf4的cDNA亚克隆至pET-30a载体,构建重组质粒pET30a-Klf4。酶切鉴定后将其导入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting检测确认,镍离子金属螯合亲和层析法纯化His-Klf4融合蛋白。结果表明:(1)从山羊生殖脊中克隆了Klf4基因,其开放阅读框由1 434个核苷酸组成,编码478个氨基酸,而且该序列与绵羊的同源性最高,达到98.5%;(2)经过SignalP 4.0在线分析,Klf4的编码蛋白不存在信号肽;(3)经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,重组质粒pET30a-Klf4在大肠杆菌中得以表达;在变性条件下纯化,获得了His-Klf4融合蛋白。

E-cadherin和KLF 4表达对胃癌侵袭转移的作用

观察E-cadherin,Krüppel-like factor 4(KLF4)蛋白在胃癌和正常胃黏膜组织中的表达,分析其与胃癌浸润、转移的关系.应用免疫组织化学SP法检测84例手术切除的胃癌标本及对应正常胃黏膜组织中E-cadherin,KLF4蛋白的表达.各指标之间相关因素的差异性比较采用χ2检验,E-cadherin,KLF4相关性研究采用Spearman相关分析.结果显示,与正常胃组织相比,E-cadherin、KLF4蛋白在胃癌组织中均呈低表达或者缺失(分别42.9%vs.95.24%,8.3%vs 81%,P<0.05).E-cadherin、KLF4蛋白的阳性表达率与组织分级(P<0.05)、肿瘤浸润深度(P<0.05)、淋巴转移(P<0.05)明确相关.Spearman相关分析显示KLF4蛋白与E-cadherin蛋白的表达呈正相关(P<0.05).因此,E-cadherin,KLF4蛋白水平低表达可能与胃癌浸润和转移有关,而联合检测更能有效判断胃癌这一生物学行为.

食管癌组织KLF4和Survivin蛋白表达及其相关性研究

目的:通过对KLF4和Survivin蛋白在食管癌中表达的研究,结合临床病理特征,探讨KLF4和Survivin的临床意义及相关性。方法:应用免疫组织化学SP法检测85例食管癌组织及正常食管黏膜中KLF4和Survivin的表达。结果:KLF4在癌旁正常黏膜阳性表达率为89.4%,食管癌组织为42.3%(P<0.05)。低、中高分化癌的阳性表达率差异有统计学意义,P<0.05;有、无淋巴结转移者的阳性表达率分别为30.4%和56.4%(P<0.05);与肿瘤WHO临床分期之间有统计学意义,P<0.05。随着临床分期等级的增加,KLF4表达呈现递减趋势;与患者的性别、年龄无关(P>0.05)。Survivin在食管癌组织的阳性表达率为53.0%,癌旁正常黏膜为7.1%(P<0.05);低、中高分化癌的阳性表达率无统计学意义,P>0.05;有、无淋巴结转移者的阳性表达率分别为65.2%和38.4%(P<0.05);其表达与肿瘤的临床分期差异有统计学意义,P<0.05,与患者的性别、年龄无关(P>0.05)。Survivin和KLF4在食管癌中的表达呈负相关(r=-0.337,P<0.01)。结论:KLF4低表达及Survivin的过表达与食管癌的发生及其生物学行为密切相关,可作为食管癌诊断及分期预后的客观指标。

KLF4在肿瘤中的研究进展

KLF4为锌指蛋白转录因子，含特异性转录激活区和转录抑制区，体内分布广泛，在不同的肿瘤组织中，通过抑制细胞增殖、调节细胞分化、细胞凋亡和靶基因的表达，发挥着抑制或促进肿瘤形成的双重作用。其机制可能与乙酰化修饰有关。

带有穿膜肽重组PTD-KLF4的制备及活性鉴定

KLF4是Kruppel样转录因子(kruppel-like factors,KLF)家族中的一员,是维持胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)全能性的重要转录因子。蛋白质转导结构域(protein transd uctiondomain,PTD)能够携带大分子进入细胞。为了获得具有穿膜功能的重组KLF4蛋白,利用原核表达载体PKYB表达KLF4与PTD的融合蛋白PTD-KLF4,用Ni柱纯化融合蛋白并作Westernblotting鉴定。利用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记PTD-KLF4检测其穿越中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary,CHO)细胞细胞膜的能力;用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)检测重组融合蛋白PTD-KLF4结合目的DNA的活性。结果表明:重组PTD-KLF4可以成功进入细胞、定位细胞核内,穿膜效率为(22.29±2.1)%。重组融合蛋白PTD-KLF4引起细胞形态变化,并具有与目标DNA序列特异结合的能力。重组PTD-KLF4的制备为外源蛋白诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,IPSCs)奠定基础。

SUMO-TAT-Klf4融合蛋白的原核表达及纯化

Klf4是体细胞诱导成多能干细胞的重要转录因子之一,参与细胞增殖分化。本研究通过将小鼠Klf4基因、穿膜肽TAT以及小分子泛素样修饰蛋白SUMO融合并转入大肠杆菌Rosseta(DE3)中进行表达,经PCR鉴定和酶切验证后,用IPTG诱导后表达出约78 k D的融合蛋白,利用Ni-NTA亲和层析胶纯化获得了高质量的SUMO-TAT-Klf4蛋白,使用Western blotting检测显示特异性良好。本研究成功构建了pET3c-SUMO-TAT-Klf4原核表达载体,有利于获得大量的Klf4蛋白,并以期提高其穿透细胞膜的能力,为后续利用重编程因子融合蛋白诱导体细胞成为iPS细胞奠定基础。

转录因子在前列腺癌细胞中的表达及临床意义

目的探讨转录因子在前列腺癌（PCa）的发生和发展过程中的作用。方法选择2008年1月1日-2011年12月30日郑州人民医院收治的PCa患者139例与良性前列腺增生症（BPH）患者83例，采用荧光定量PCR技术检测组织中c-Myc、Klf4、Nanog、Oct4A及Sox2基因的表达情况，采用传统PCR技术检测组织内特异的Klf4基因剪切体，最后采用免疫组化技术检测一个含有404个前列腺组织样本的组织芯片中Klf4转录因子的表达。结果Nanog、Oct4A及Sox2基因在PCa组织和BPH组织中的表达差异无统计学意义，但c．Myc和Klf4基因在PCa组织中的表达明显高于在BPH组织中的表达。免疫组化检测结果显示，大多数的前列腺上皮细胞也可以表达Klf4蛋白，且与肿瘤是否发生恶性转移无关，但在PCa组织中，Klf4主要定位于胞质内，这与Klf4的一个不同的剪切体Klf4ct的定位一致。结论PCa及BPH组织中皆高表达Klf4蛋白，但恶性肿瘤细胞与正常组织不同的是可检测到一个特异性的定位于胞质内的基因产物Klf4ct蛋白，Klf4蛋白的定位可能与其在肿瘤发生过程中发挥作用具有重要的相关性。