LncRNA-MEG3竞争性结合miR-216a调控KLF9介导血管通透性减缓重症急性胰腺炎肾脏损伤的机制

目的研究LncRNA-MEG3竞争性结合miR-216a调控Kruppel样转录因子(KLF)9介导血管通透性减缓重症急性胰腺炎肾脏损伤的机制。方法选取SD大鼠20只,鼠龄8~12 w,体质量225~312 g,随机分为假手术组与模型组,每组10只。肾上皮细胞实验分为肾损伤组(未转染MEG3)、对照组(转染不相关序列)、转染组(转染MEG3)。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾组织病理形态;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织及肾上皮细胞中LncRNA-MEG3、miR-216a、KLF9水平;流式细胞仪检测肾上皮细胞凋亡情况;Western印迹法检测肾上皮细胞中核因子(NF)-κB、肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白水平;双荧光素酶报告检测LncRNA-MEG3与miR-216a相关性。结果假手术组肾小球结构完整,无明显炎症浸润,模型组肾小球有所损伤,有炎性细胞浸润,可见重症急性胰腺炎肾损伤大鼠模型建立成功。与假手术组肾脏血管通透性(151.22±23.14)μg/g相比,模型组肾血管通透性(376.27±43.14)μg/g明显升高(t=14.54,P<0.001)。与假手术组相比,模型组LncRNA-MEG3、KLF9表达明显升高,miR-216a表达明显降低(P<0.05)。肾损伤组与对照组LncRNA-MEG3、KLF9、miR-216a水平无明显统计学差异(P>0.05),在经过转染LncRNA-MEG3后LncRNA-MEG3、KLF9水平较肾损伤组和对照组明显下降,miR-216a水平明显上升(P<0.05),表明转染成功。肾损伤组上皮细胞凋亡率[(61.34±5.22)%]与对照组[(60.13±5.42)%]无统计学差异(t=0.39,P=0.70),转染组上皮细胞凋亡率[(29.67±2.11)%]明显低于对照组(t=12.83,P<0.05)。肾损伤组与对照组上皮细胞中NF-κB、TNF-α蛋白水平无统计学差异(P<0.05),转染组上皮细胞中NF-κB、TNF-α蛋白水平较对照组明显降低(P<0.05)。转染MEG3后野生型上皮细胞中miR-216a活性明显增加(P<0.05),突变型上皮细胞中miR-216a活性无明显变化(P>0.05),表明miR-216a是MEG3的靶基因。结论LncRNA-MEG3通过调控mir-216a的表达,抑制KLF9活性,降低炎症因子的水平及肾上皮细胞的凋亡,对肾保护作用。

癌组织中KLF9、TFAP4基因表达在非小细胞肺癌患者预后中的应用价值

目的探究癌组织中Kruppel样转录因子9(KLF9)、转录因子激活增强子结合蛋白4(TFAP4)基因表达在非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后中的应用价值。方法选取NSCLC患者94例作为研究对象,检测癌组织及癌旁组织中KLF9、TFAP4 mRNA表达量。并以基因表达量均数为界分为低表达组、高表达组。比较两组年龄、性别、病理类型、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、肿瘤最大径、癌组织中KLF9、TFAP4 mRNA表达量,采用Pearson分析癌组织中KLF9、TFAP4 mRNA与TNM分期、淋巴结转移、分化程度、肿瘤最大径的相关性,采用logistic多元回归方程行多因素分析,采用Kaplan-Meier曲线进行生存分析。结果癌组织KLF9 mRNA表达水平低于癌旁组织,TFAP4 mRNA表达水平高于癌旁组织(P<0.05);KLF9、TFAP4 mRNA高表达组TNM分期、淋巴结转移、分化程度、肿瘤最大径与低表达组相比,差异有统计学意义(P<0.05);KLF9 mRNA与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤最大径呈负相关,与分化程度呈正相关,TFAP4 mRNA与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤最大径呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05);KLF9 mRNA、TFAP4 mRNA高表达与低表达患者生存曲线比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NSCLC患者癌组织中KLF9、TFAP4基因表达与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤最大径、分化程度显著相关,可影响患者预后,靶向KLF9、TFAP4基因可能有助于预后的改善。

卵巢浆液性/黏液性囊腺癌中SP1、KLF9的表达及与HPV16/18感染的相关性研究

目的探讨KLF9、SP1及HPV16/18在卵巢浆液性/黏液性囊腺癌中的表达及临床意义,并进一步探讨三者在浆液性/黏液性卵巢癌发生、发展过程中的作用。方法制作组织芯片并采用免疫组化SP法及分子原位杂交技术检测60例卵巢浆液性/黏液囊腺癌组织及20例卵巢浆液性/黏液性囊腺瘤组织中KLF9、SP1和HPV16/18的表达情况,分析三者与临床病理特征的关系,并检验三者之间的相关性。结果 SP1、KLF9及HPV16/18在卵巢浆液性/黏液性囊腺癌组织中的阳性表达率分别为71.7%(43/60)、63.3%(38/60)、30.0%(18/60),而三者在卵巢浆液性/黏液性囊腺瘤组织中分别为15.0%(3/20)、10.0%(2/20)、0(0/20),差异均有统计学意义(P<0.01)。KLF9表达与各临床病理特征均无关(P>0.05);SP1表达与临床分期有关(P<0.05);HPV16/18表达与分化程度有关(P<0.05)。在卵巢浆液性/黏液性囊腺癌组织中KLF9与SP1的表达呈正相关(r=0.443,P=0.000),HPV16/18与SP1的表达亦呈正相关(r=0.331,P=0.010),KLF9与HPV16/18的表达无相关性(P=0.133)。结论 KLF9、SP1及HPV16/18在卵巢浆液性/黏液性囊腺癌组织中高表达,可能与卵巢浆液性/黏液性囊腺癌的生物学行为有关,在浆液性/黏液性卵巢癌的发生、发展中起重要的促进作用。

MiRNA-570通过靶向和下调KLF9来促进肝癌的增殖

目的:揭示miRNA-570在肝细胞癌进程中的作用及其潜在机制.方法:通过定量实时聚合酶链反应测定肝癌组织和细胞系中的miRNA-570水平.通过双重荧光素酶报告基因测定和Spearman相关性试验探索了miRNA-570和KLF9之间的相互作用.结果:肝癌组织和细胞株中miRNA-570表达上调.miRNA-570在HEPG2细胞中的过表达增强了活力、S期细胞比例,而miRNA-570在SMMC7721细胞中的敲低则呈现相反的趋势.证实KLF9是miRNA-570的直接靶标.肝癌组织中miRNA-570和KLF9的表达水平呈负相关.结论:MiRNA-570通过靶向KLF9刺激肝癌增殖.

KLF9和KLF15在维吾尔族网膜脂肪中的表达及其与炎症相关性分析

目的:检测维吾尔族网膜脂肪组织KLF9及KLF15 m RNA表达水平,分析KLF9、KLF15与炎症信号通路关键因子的相关性。方法:选取维吾尔族个体NC组50例、OB组45例,检测一般资料和生化指标。采集网膜脂肪组织,RT-PCR法检测KLF9、KLF15及NF-κB炎症信号通路关键因子m RNA表达水平。结果:OB组BMI、WC、HC、WHR、TG和LDL显著高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。维吾尔族网膜脂肪组织中,OB组NF-κB、TNF-α和IL-6 m RNA表达水平显著高于NC组(P<0.05),NF-κB m RNA表达与体重和TG显著正相关(P<0.05),TNF-αm RNA表达与TG和TC显著正相关(P<0.05),IL-6 m RNA表达与HC、TG和LDL显著正相关(P<0.05);OB组网膜脂肪组织KLF15 m RNA表达水平显著低于NC组(P<0.05),与BMI、WC、WHR显著负相关(P<0.05),与HDL正相关,与TG负相关。KLF9 m RNA表达水平高于NC组,与NF-κB显著正相关(P<0.01),与IL-6正相关。结论:KLF15可能通过调控脂代谢发挥抗炎作用;肥胖状态下脂代谢紊乱可能间接上调KLF9的表达,而KLF9作为转录激活因子可能通过调控下游炎症因子的转录活性,从而促进炎症因子的表达和释放。

山羊KLF9基因克隆及在组织细胞中的表达

旨在克隆山羊Kruppel样转录因子9(Kruppel-like factor 9,KLF9),阐明其在山羊各组织及其脂肪细胞中的表达模式,为深入探究KLF9基因对山羊肌内脂肪(Intramuscular fat,IMF)沉积的调控作用奠定理论基础。利用胶原酶消化法获得7日龄简州大耳羊羔羊肌内前体脂肪细胞。选成年简州大耳羊与藏山羊各4只,用RT-PCR法克隆山羊KLF9基因,用实时荧光定量PCR方法检测KLF9基因在山羊背最长肌、股二头肌、臂三头肌、皮下脂肪、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织中的相对表达水平及KLF9基因在成脂诱导分化0,2,4,6 d的前脂肪细胞中的表达水平。结果显示,获得山羊KLF9基因全长891 bp,其中包括CDS区735 bp,5'UTR序列86 bp,3'UTR序列70 bp,编码244个氨基酸。山羊KLF9氨基酸序列与藏山羊相似性为99.73%,与牛、猪、人、鼠的相似性高达99.18%~97.54%。组织表达结果显示,简州大耳羊肝脏和皮下脂肪的KLF9基因相对表达量极显著高于其他各个组织(P<0.01);藏山羊肺脏的KLF9基因表达水平极显著高于其他各个组织(P<0.01)。细胞表达检测发现,成脂诱导2 d的KLF9基因前脂肪细胞表达水平极显著高于诱导分化前(P<0.01)。在获得山羊KLF9基因序列基础上,发现了其组织表达模式具有品种特异性,推测其可能在山羊前体脂肪细胞分化早期发挥调控作用。

BTEB/KLF9与基因转录调控

BTEB/KLF9(basic transcription element-binding protein/Krüppel-like transcription factor 9)属于Krüppel样转录因子家族成员之一,是参与真核细胞基因转录调控的锌指蛋白,主要通过羧基末端锌指与靶基因启动子区的GC或GT/CACCbox结合调节靶基因的转录。BTEB/KLF9与其他转录因子、和/或辅助激活/抑制因子相互作用完成对基因转录的调控,在生殖发育、细胞增殖分化、细胞周期调控等方面发挥作用。

KLF9在浸润性乳腺癌细胞中的表达研究

目的观察KLF9在乳腺癌细胞中的表达,探讨其对浸润性的影响。方法采用细胞侵入和迁移实验分离浸润性乳腺癌细胞,抽提RNA,利用实时定量聚合酶链反应检测浸润性和非浸润性乳腺癌细胞KLF9基因表达量,并观察乳腺癌组织和癌旁组织中KLF9表达量及其与细胞贴壁的关系。结果乳腺癌浸润性细胞系中KLF9表达量下调。过表达KLF9使乳腺癌细胞浸润性降低,同时浸润性细胞形态发生变化。KLF9基因在乳腺癌组织中表达下调,且表达水平与细胞贴壁有关。结论 KLF9表达下调与乳腺癌相关,为乳腺癌浸润与迁移的研究提供了基础。

KLF9通过增加氧化应激对心肌细胞缺血损伤的影响

目的探讨Kruppel样转录因子9(KLF9)通过增加氧化应激对心肌细胞缺血损伤的影响。方法将心肌细胞H9c2分为以下两组,正常组:将心肌细胞H9c2放于10%胎牛血清的DMEM、100 U/ml的青霉素和链霉素中培养;缺血组:用无血清代替培养基,添加至10μg/ml转铁蛋白和10μg/ml胰岛素中培养。通过逆转录聚合酶链式反应(Rt-PCR)检测KLF9的mRNA水平,采用免疫印迹(Western blotting)检测KLF9蛋白的表达,对乳酸脱氢酶(LDH)的活性进行测定,MTT法检测心肌细胞活力,应用缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,对活性氧(ROS)进行测定。结果心肌细胞中KLF9 mRNA的表达水平较正常组比较明显增加(P<0.05);心肌细胞中KLF9蛋白水平较正常组比较明显升高(P<0.05);缺血组的心肌细胞LDH的释放能力明显高于正常组(P<0.05),在转染siKLF9#1和siKLF9#2后的缺血组LDH的释放能力较siCtrl中的缺血组相比明显减弱(P均<0.05);缺血组的心肌细胞活力的明显高于正常组(P<0.05),在转染siKLF9#1和siKLF9#2后的缺血组细胞活力较siCtrl中的缺血组相比明显降低(P均<0.05);缺血组的心肌细胞凋亡能力的明显低于正常组(P<0.05),在转染siKLF9#1和siKLF9#2后的缺血组细胞凋亡能力较siCtrl中的缺血组相比明显降低(P均<0.05);缺血组的心肌细胞ROS水平明显低于正常组(P<0.05),在转染siKLF9#1和siKLF9#2后的缺血组细胞ROS水平较siCtrl中的缺血组相比明显降低(P均<0.05)。结论KLF9可增加ROS的水平加重心肌细胞缺血性损伤,靶向KLF9可能有助于维持心肌细胞的活力,减少心肌梗死期间心肌细胞的损伤。

KLF9基因腺病毒载体的构建及其脂肪酸氧化功能

目的:构建Krüppel样转录因子9(KLF9)过表达的腺病毒,初步探讨KLF9在肝脏脂肪酸氧化中的功能。方法:根据分子克隆的原理,构建融合表达3×Flag的KLF9过表达的腺病毒,并在293A细胞中验证KLF9腺病毒感染效率。将融合表达3×Flag的KLF9过表达的腺病毒分别感染肝原代细胞、正常饮食小鼠以及高脂小鼠,通过Q-PCR检测过氧化物酶体增殖物活化受体-γ协同刺激因子PGC 1-α等脂肪酸氧化相关基因的表达情况。结果:Q-PCR以及Western blot结果证明融合表达3×Flag的KLF9过表达腺病毒载体包装成功,通过荧光显微镜观察到感染效率达90%以上。经Q-PCR检测,感染Ad-KLF9的肝原代细胞和肝脏组织中,PGC1-α等脂肪酸氧化相关基因表达明显高于对照组。结论:初步认定KLF9可促进脂肪酸氧化,改善高脂诱导的非酒精性脂肪肝。

KLF9基因腺病毒载体的构建及其抗ROS功能

目的构建及鉴定KLF9基因过表达的腺病毒载体，初步研究KLF9在对抗反应活性氧方而的功能。方法克隆KLF9过表达质粒，定向克隆人穿梭载体pAdTrack—CMV，PmeI酶切线性化，转化E．coli．BJ5183（含腺病毒载体pAdEasy-1）感受态细菌，产生重组腺病毒载体。重组载体经过卡那霉素抗性筛选和限制性内切酶分析确重组后，再用Pac I线性化重组质粒，同收，转染293A细胞，7—12d包装产生病毒颗粒。利用H2O2和过表达KLF9的腺病毒处理体外培养的C57BIJ6J小鼠原代肝脏细胞，实时定量PCR检测KLF9和抗ROS基因（CAT、SOD2和GPx1）的表达。结果H2O2可以刺激C57BIJ6J小鼠原代肝脏细胞KLF9和抗ROS基因的表达上调（P〈0．05）。定虽PCR以及Western blot结果显示成功包装过表达KLF9腺病毒，感染效率达90％以上。过表达KLF9可以上调抗ROS基因的表达水平（P〈0．05）。结论初步认定KLF9基因可参与C57BL/6J小鼠原代肝脏细胞中抗ROS基因的调节。

KLF9在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Krüppel样转录因子9(KLF9)在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义。方法选取63例有完整临床病理资料及随访>5年的石蜡包埋上皮性卵巢癌组织和正常卵巢上皮组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测KLF9 m RNA在两组卵巢组织中的表达,应用免疫组织化学法分析KLF9在两组卵巢中的表达,分析KLF9表达水平与临床病理参数及患者预后的关系。结果 63例卵巢癌组织中,KLF9 m RN为正常上皮组织的(0.44±0.693)倍(P<0.05)。上皮性卵巢癌组织中,KLF9高表达15例(23.8%),低表达48例(76.2%);在正常卵巢组织中,KLF9高表达18例(60%),低表达12例(40%),差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织中KLF9低表达与上皮性卵巢癌患者的临床分期、淋巴结转、腹腔积液相关(P<0.05)。KLF9 m RNA高表达组中位生存时间46.8个月(95%CI:26,83),高于低表达组的32.6个月[(95%CI:12,74),P=0.002]。肿瘤组织中KLF9阳性细胞高表达组的中位生存时间为50.2个月(95%CI:32,84),高于KLF9低表达组的31.1个月[(95%CI:12,79),P=0.001]。多因素COX生存分析表明,KLF9 m RNA和KLF9阳性细胞低表达是影响上皮性卵巢癌预后不良的独立指标[HR=2.64(95%CI:1.14,3.56),P=0.017]和[HR=3.01(95%CI:2.19,4.51),P=0.010]。结论KLF9在上皮性卵巢癌组织中表达下调,与上皮性卵巢癌患者预后不良相关。

miR-26a通过促进KLF9的转录表达抑制胶质瘤侵袭能力

目的探讨microRNA-26a(miR-26a)对Krueppel样因子9(KLF9)的表达和胶质瘤侵袭能力的影响。方法运用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测136例脑胶质瘤组织及65例癌周组织的miR-26a和KLF9表达水平。体外培养SNB19胶质瘤细胞,并分别转染miR-26a mimics和si-KLF9后,命名为miR-26a mimics组和miR-26a-si-KLF9组,另设未处理细胞为对照组。采用qRT-PCR和Western blot检测miR-26a mimics组和对照组中miR-26a和KLF9蛋白的表达水平,并通过荧光素酶试验验证miR-26a与KLF9基因之间的直接调控关系。利用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力。结果与癌周组织相比,qRT-PCR和Western blot结果表明,miR-26a mRNA相对表达量和KLF9蛋白表达水平在Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级胶质瘤中明显降低(P<0.05)。qRT-PCR结果表明,与对照组相比,miR-26a mimics组SNB19细胞中miR-26a和KLF9 mRNA表达量显著增加(P<0.05);Western blot结果显示,miR-26a mimics组KLF9蛋白表达水平显著增加(P<0.05);双荧光素酶实验结果表明,miR-26a显著增强KLF9的转录活性。Transwell结果表明,与对照组相比,miR-26a mimics组与miR-26a-si-KLF9组细胞侵袭能力显著降低(P<0.01);与miR-26a mimics组相比,miR-26a-si-KLF9组细胞侵袭能力明显增强(P<0.05)。结论miR-26a可能通过靶向促进KLF9基因的蛋白表达,抑制胶质瘤细胞的侵袭能力。

过表达KLF9增加GPX4和活性氧(ROS)水平抑制悬浮培养的SKOV3人卵巢癌细胞凋亡

目的探究Kruppel样因子9/谷胱甘肽过氧化物酶4(KLF9/GPX4)信号轴对悬浮培养的卵巢癌细胞凋亡的调控功能和机制。方法通过慢病毒感染在SKOV3细胞过表达和敲低KLF9表达水平,通过实时定量PCR和Western blot法进行验证。采用双荧光素酶报告基因实验验证KLF9对GPX4的转录调控作用,采用流式细胞术检测SKOV3细胞活性氧(ROS)含量及细胞凋亡比率。结果KLF9对GPX4的启动子区域有转录抑制作用。过表达KLF9的SKOV3细胞GPX4表达量增加,ROS水平上升。在悬浮培养条件下,SKOV3细胞ROS水平增加,过表达KLF9抑制SKOV3细胞凋亡,敲低KLF9则促进SKOV3细胞凋亡,与此同时正常的贴壁培养并没有观察到这一现象。结论过表达KLF9增加卵巢癌细胞GPX4和ROS水平,抑制悬浮培养的卵巢癌细胞凋亡。

长链非编码RNA SNHG15通过miR-141-3p/KLF9机制调控鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的:探究长链非编码RNA SNHG15在鼻咽癌中的表达情况,并进一步分析其下游miRNA调控通路,为研究鼻咽癌的分子生物学行为及潜在治疗靶点提供参考。方法:采用PCR检测SNHG15在鼻咽癌临床组织标本及鼻咽癌细胞系中的表达水平。根据临床资料分析SNHG15表达与鼻咽癌患者预后的相关性。采用CCK-8实验、克隆形成实验以及流式细胞仪检测SNHG15对鼻咽癌细胞增殖能力与凋亡情况的影响。通过双荧光素酶实验、Western blot检测SNHG15、与SNHG15结合的miRNA以及潜在下游靶基因Krüppel样因子9(KLF9)之间的调控关系。结果:SNHG15在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中的表达上调,而SNHG15的相对表达量增高也预示着鼻咽癌患者的不良预后。在鼻咽癌细胞系中抑制SNHG15的表达能够显著抑制细胞的增殖能力,并促进鼻咽癌细胞的凋亡。双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR以及Western blot结果显示,在鼻咽癌细胞中SNHG15能够吸附并抑制miR-141-3p,并可能进一步调控转录因子KLF9的功能,从而促进鼻咽癌细胞的增殖。结论:在鼻咽癌中,SNHG15可能通过影响miR-141-3p/KLF9通路促进鼻咽癌细胞的增殖,参与疾病的发生与发展。

转录调节因子KLF9的研究进展

KLF9是锌指蛋白Krüppel样转录因子(Krüppel-like factors,KLFs)家族的重要成员,通过C端的3个C2H2锌指蛋白结构,结合到靶基因启动子区富含GC的区域,调节靶基因的转录,从而参与调节细胞增殖、分化、凋亡和组织器官发育等多个生理过程。本文详细梳理了KLF9在机体代谢、氧化应激、肿瘤的发生发展等多个病理/生理过程中的作用,对近年来发表的KLF9相关文献做一简要概述,为深入解析KLF9的生理功能及其作用机制提供参考。

KLF9通过上调CD36调节肝脏脂代谢

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)的发生和发展与脂肪酸的摄取密切相关。本研究旨在探索Krüppel样转录因子9 (Krüppel-like factor 9, KLF9)对脂肪酸转位酶CD36、肝细胞的脂代谢以及非酒精性脂肪肝的发生和发展所产生的影响。采用高脂饮食构建的高脂模型C57BL/6J小鼠和db/db糖尿病小鼠,检测其肝脏内Klf9和Cd36基因和蛋白表达水平的变化。分离C57BL/6J小鼠原代肝细胞进行体外培养,分别给予Ad-GFP、Ad-Klf9、Ad-shCtrl或Ad-shKlf9处理,然后利用油酸和棕榈酸进行24 h的诱导;同时构建肝脏特异性Klf9基因敲除小鼠,采用Western blot检测KLF9蛋白表达水平的变化,real-time PCR检测Klf9和Cd36 mRNA表达水平的变化,试剂盒测定甘油三酯含量的变化,油红O染色检测脂质含量的变化。结果显示:(1)与对照组相比,高脂饮食诱导的肥胖小鼠或db/db糖尿病小鼠肝脏Klf9的表达显著增加;(2)在小鼠原代肝脏细胞中过量表达Klf9会增加Cd36表达水平,导致细胞脂肪含量增加;(3)相反,在小鼠原代肝脏细胞中敲低Klf9的表达则降低Cd36表达水平,从而减少肝细胞脂肪含量;(4)小鼠肝脏Klf9敲除能降低肝脏Cd36表达,改善高脂饮食诱导的脂肪肝表型。上述结果表明,肝脏KLF9通过促进CD36的表达影响肝脏的脂代谢。

Kruppel样转录因子9在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Kruppel样转录因子9(KLF9)在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义。方法搜集63例具有完整临床病理资料及5年以上随访资料的石蜡包埋上皮性卵巢癌组织及正常卵巢上皮组织,采用荧光定量PCR技术检测KLF9 m RNA在上皮性卵巢癌及正常卵巢组织中的表达水平,应用免疫组化法分析KLF9在上皮性卵巢癌组织和正常卵巢组织的表达情况,分析KLF9表达水平与临床病理参数和患者预后的关系。结果 63例癌组织中KLF9 m RNA的表达值为(0.597±0.332)显著低于正常卵巢组织中KLF9 m RNA的表达(1.354±0.471),差异有统计学意义(P<0.01)。上皮性卵巢癌组织中KLF9高表达15例(23.8%),低表达48例(76.2%);在正常卵巢组织中KLF9高表达18例(60.0%),低表达12例(40.0%),差异有统计学意义(P<0.01)。癌组织中KLF9低表达与上皮性卵巢癌患者的临床分期、淋巴结转移、腹腔积液明显相关(P<0.05)。KLF9 m RNA高表达组中位生存时间46.8个月(95%CI:26~83个月)显著高于低表达组32.6个月(95%CI:12~74个月),差异有统计学意义(P<0.01)。肿瘤组织中KLF9阳性细胞高表达组的中位生存时间为50.2个月(95%CI:32~84个月)明显高于KLF9低表达组31.1个月(95%CI:12~79个月),差异有统计学意义(P<0.01)。Cox多重回归分析表明KLF9 m RNA和KLF9阳性细胞低表达是影响上皮性卵巢癌预后不良的独立指标。结论 KLF9在上皮性卵巢癌组织中表达下调,与上皮性卵巢癌患者预后不良相关。

miR-216a-5p调控胰腺癌细胞凋亡的分子机制研究

[目的]研究miRNA调控胰腺癌细胞SW1990凋亡的潜在分子机制。[方法]通过高通量测序检测人胰腺星状细胞与人胰腺癌组织源细胞中的差异miRNA。在胰腺癌细胞SW1990中过表达差异miRNA后,检测其凋亡水平。通过miRDB在线分析miRNA的靶标后,在胰腺癌细胞SW1990中过表达潜在靶标,检测其凋亡水平。[结果]高通量测序发现有13个miRNA在人胰腺癌组织源细胞中的表达量大于人胰腺星状细胞至少7倍。过表达miR-216a-5p时,胰腺癌细胞SW1990的凋亡水平下降(P <0.05),而敲低miR-216a-5p时,胰腺癌细胞SW1990的凋亡水平上升(P <0.05)。过表达miR-216a-5p后,发现TMEM161B、KLF9、NUFIP1、UPRT、ZFYVE28、AFAP1L2、SSX2IP的m RNA表达水平均降低(P <0.05)。敲低KLF9时胰腺癌细胞SW1990的凋亡水平显著下降(P <0.05)。过表达KLF9后,其凋亡水平上升(P <0.05)。敲低miR-216a-5p后,KLF9的表达水平上升(P <0.05);过表达miR-216a-5p后,KLF9的表达水平下降(P <0.05)。同时,miR-216a-5p靶向KLF9的3’端非编码区(P <0.05)。[结论]miR-216a-5p通过靶向KLF9的3’端非编码区,降解了KLF9的mRNA,随后抑制了KLF9的翻译,最终抑制了胰腺癌细胞SW1990的凋亡。